遗传病的诊断预防治疗

基因治疗的临床应用
❖ 乙型血友病
薛京伦 (复旦大学) 反转录病毒载体 1991, 皮肤成纤维细胞 Factor IX: 5%
存在的问题及解决方法
❖ 导入基因的持续表达 ❖ 导入基因的高效表达 ❖ 安全性问题
思考题： 遗传病的诊断可从哪些方面入手？ 以酶和蛋白质的分析为例，简述基因产物分析的基本过程。 常用基因诊断的技术有哪些？简述PCR的原理及过程。 基因治疗中目的基因的转移方法有哪些？原理如何？ 基因治疗中存在的问题及解决方法？
上海：1981～1987年对284,396名新生儿进行 PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯 丙氨酸血症4名。
第五节 基因诊断
▪ 基因诊断的优点
不受细胞类型限制，不考虑基因表达与否；而生化检查 必须在基因表达后方可实行。
▪ 概念
即利用DNA重组技术 在分子水平上检测人 类遗传病的基因缺陷 以诊断遗传病
遗传病的诊断预防治疗
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遗传病的诊断
遗传病的诊断：
▪植入前诊断 ▪产前诊断 ▪症状前诊断 ▪现症病人诊断
第一节 病史、症状和体征
w 一、病史
w 1、家族史：准确性，全面性
w 2、婚姻史：婚龄、次数、配偶、近亲
基因治疗（gene therapy）是指将外源 正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿 因基因缺陷和异常引起的疾病，以达 到治疗目的。
基因治疗的基本方式
❖ 体细胞基因治疗：使患者症状消失或得 到缓解，但有害基因仍能传给后代。
基因治疗的基本方式
❖ 体细胞基因治疗：使患者症状消失或得 到缓解，但有害基因仍能传给后代。
基因治疗的临床应用
Ashanti was the first patient to be treated with gene therapy.
Ashanti de Silva
❖ Injections repeated 7 times in first 10.5 months ❖ ADA: 1% 25%
②DNA病毒介导载体：DNA病毒包括腺病毒、 SV40、牛乳头瘤病毒、疱疹病毒等
基因治疗的临床应用
NIH
RAC
FDA HGTS
地方伦理小组
地方生物 安全小组
临床基因治疗方案
考虑治疗程序的特点， 用于基因转移的生物制品的 产品质量控制和鉴定
考虑治疗方案对受治患 者和大众的安全性，对患者 预期疗效和潜在危险相比较
一 基因诊断的原理
w 核酸分子杂交：互补核酸序列可在一定
w
条件下特异结合成双链。
w 必要条件：特异探针
w 一、基因探针：
w 目的基因互补序列
w 探针来源：基因组探针
w
逆转录cDNA探针
w
人工合成寡核苷酸探针
二 常用基因诊断技术
Southern印迹杂交
-
+
RFLP连锁分析
镰状细胞贫血(HbS)： 第5～7位密码子
❖ 生殖细胞基因治疗：可根治遗传病，使 有害基因不再在人群中散布。
策略
基因置换（gene replacement）
基因修正（gene correction）
基因修饰（gene augmentation）又 称基因添加
基因失活（gene inactivation）
“自杀基因” 疗法
“自杀基因” 疗法
w 单链构象多态性分析（SSCP）
w 碱 基微小差异——DNA构象差异—— w 电泳迁移率差异——灵敏检出突变
ab
12 345
1：正常人 2,4,5：纯合体患者 3：杂合体(2的弟弟) 左为泳动变位模式：a 正常人；b 纯合体患者
遗传病的治疗
w 一、手术疗法：切除、修补
替换病损组织或器官
w 二、药物疗法：补其所缺
感谢您的聆 听
共同学习相互提高
w
去其所余
药物治疗
❖ 出生前治疗
羊水中甲基丙二酸含量增高，胎儿可能患甲基 丙二酸症，会引起新生儿发育迟缓和酸中毒，应在 出生前和出生后给母体和患儿注射大量VB12。
药物治疗
❖ 症状前治疗
患儿甲状腺功能低下，应给予甲状腺素终 生服用，以防患儿智能和体格发育障碍。
w三、饮食疗法 w禁其所忌 w四、基因治疗
w
及表型相似遗传病。
w 二、注意事项：
w 1、系谱的系统性、完整性和可靠性
w a、三代以上； b、有关人员，尤其关键人员逐个查询； c、有否近亲婚配； d、有无死胎、流产史； e、不 合作，假情况； f、必要时实验室，辅助器械检查。
w 2、延迟显性、外显不全不能误认为隐性
w 3、新基因突变不能误认为隐性
w 3、生育史：育龄、子女数及健康状况、
w
流产、死产和早产史（如异常，了
w
解产伤、窒息、病毒、致畸剂等）
w 二、症状和体征
w 相同性
w 特异性：外貌、身体发育、体重增长、
wenku.baidu.com
w
智力增进、性发育、肌张力、
w
哭声… …
w 加强诊断：实验室检查；辅助器械检查.
第二节 系谱分析
w 一、目的：区分遗传方式、遗传异质性、
w
3、家族中已发现染色体异常或先天畸
w
形个体；
w
4、34岁以上高龄孕妇；
w
5、多发性流产妇女及其丈夫；
w
6、原发闭经和男女性不孕症者；
w
7、两性内外生殖器畸形者
第四节 基因产物分析
酶和蛋白质的分析
生物化学检查
苯丙酮尿症, PKUⅠ
酶活性检查
PAH
肝脏
血液滤片法
FeCl3显色反应
苯丙酮酸,绿色
尿样
“自杀基因” 疗法
“自杀基因” 疗法
目的基因的转移方法
❖ 物理方法 ❖ 化学方法 ❖ 膜融合法 ❖ 受体载体转移法 ❖ 同源重组法(homologous recombination) ❖ 病毒介导转移法
①反转录病毒载体 最常用于人类的是莫洛尼（Mooney）鼠白血病病 毒（murine leukemia virus;Mo-MLV）
w 4、显、隐性相对性
w 例如：HbS 临床水平：AR
w
细胞水平：中间型显性
w
分子水平：共显性
第三节 细胞遗传学检查
X染色体 Y染色体 13号染色体 18号染色体 21号染色体
细胞遗传学检查
13号染色体
21号染色体
w 指征：1、智能发育不全、生长迟缓或伴有其
w
他先天畸形者；
w
2、夫妇之一有染色体异常；
MstⅡ: CCTNAGG
A: CCTGAGGAG S: CCTGTGGAG
AA AS SS 1.40 Kb
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ASO斑点杂交
1986年，胡流清等基于点突变原理，用 寡核苷酸探针进行基因诊断。
PKU，AR
正常探针 突变探针
wPCR
w变性（92-95；1） w复性（40-60；1） w延伸（72；1.5）