草莓根腐病的药剂防治效果
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理学 。 E - mail: swhx2@163. com。
缠绕和穿透等步骤的真菌寄生过程中 ,木霉分泌产生的一系 列细胞壁降解酶 ,如葡聚糖酶 、几丁质酶 、纤维素酶 、蛋白酶等 起着重要的作用 ,其中几丁质酶尤为重要 [2 ] 。筛选出高效的 产几丁质酶菌株 ,优化其发酵产酶条件并分离出发酵液中的 几丁质酶 ,或直接利用液体发酵液来防治危害农作物的病原 菌 ,从而减少营养物质消耗 ,对实现木霉的生物防治具有重要 的意义 。哈茨木霉 H - 13突变株是笔者所在实验室经过 N + 束注入而筛选出的具有促进作物生长和生物防治双重功效的 木霉菌株 [ 3 - 5 ] ,在液体发酵培养基中添加适量几丁质可诱导 发酵液中几丁质酶和纤维素酶的合成 。本研究拟在实验室前 期工作的基础上 ,对其发酵产酶条件进行进一步优化 ,探究该
0级 ,无病斑 ; 1级 , 0% <病斑面积占总面积 ( x ) ≤5% ; 3级 , 5% < x ≤15% ; 5 级 , 15% < x ≤25% ; 7 级 , 25% < x ≤ 50% ; 9 级 , x > 50%。根据病级计算病情指数 : 病情指数 = ∑ (各级病株数 ×各级级数 ) / (调查总株数 ×9 ) ×100; 发病 率 =发病株数 /调查总株数 ×100% ;防治效果 = (对照区病 情指数 - 处理区病情指数 ) /对照区病情指数 ×100% [4 ] 。
27. 7
77. 0
供试药剂对草莓根腐病都有一定的防治效果 ,其中以 10%苯 醚 甲 环 唑 1 500 倍 液 的 防 效 最 好 , 平 均 防 效 达 到 75. 6%。75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液平均防效次之 ,为 70. 4%。50%多菌灵可湿性粉剂 500 倍液平均防效最差 ,仅 为 59. 3% (表 3) 。
[ 2 ]赵秀娟 ,王树洞 ,张凤巧 ,等. 草莓根腐病研究进展 [ J ]. 中国农 学通报 , 2006, 22 ( 8) : 419 - 423.
[ 3 ]张艳秋 ,刘 伟 , 胡长效. 草莓根腐病的发生规律与综合防治 [ J ]. 植保技术与推广 , 2003, 23 (1) : 14 - 16.
收稿日期 : 2010 - 09 - 08 基金项目 :国家“863”计划 (编号 : 2003AA241171) 。 作者简介 :魏练平 (1981—) ,女 ,硕士 ,讲师 ,研究方向为生物化学与
分子生物学及天然产物 。 E - mail: wlp ingky@163. com。 通信作者 :蒋立科 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向为生物化学与生物物
魏练平 , 李明江 , 王 耸 , 蒋立科
(安徽农业大学生命科学学院 ,安徽合肥 230036)
摘要 : 利用正交试验对哈茨木霉菌株 H - 13的液体发酵条件进行了优化 ,通过中试发酵与小试发酵的对比探讨 了该工艺产业化的可行性 ,并对木霉发酵液酶活的保存条件进行了研究 。结果表明 ,最佳产酶发酵条件为温度 28 ℃, 发酵时间 72 h,起始 pH值 7。在此条件下进行中试发酵 ,可获得 26 L 发酵原液 ,其几丁质酶活力为 256 U /mL ,纤维素 酶活力为 482 U /mL。与小式发酵相比 ,两者在发酵程度 、产孢量以及酶活方面均接近 ,表明该工艺稳定性好 ,可产业 化 。发酵产物酶活稳定性研究结果表明 ,添加 4 g/L 苯甲酸钠可有效减少发酵液保存过程中的酶活损失 ,在 60 d以 内 ,发酵原液在低温情况下的几丁质酶活能保存 88. 36%左右 ,纤维素酶活也能保存 70. 67%以上 。 关键词 : 哈茨木霉 ; 液体发酵 ; 几丁质酶 ; 纤维素酶 中图分类号 : Q55 文献标志码 : A 文章编号 : 1002 - 1302 (2011) 04 - 0132 - 04
试验设 4个处理 : (1) 10% 苯醚甲环唑水分散粒剂 1 500 倍液 ; (2) 75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液 ; ( 3) 50%多菌灵 可湿性粉剂 500倍液 ; (4)清水 (CK) 。每处理重复 3次 ,每品 种每重复盆栽草莓苗 20棵 。 1. 4 病原菌分生孢子悬浮液的制备
将病原菌在 PDA 培养基上培养 ,待产生大量白色孢子团 时用灭菌水将其洗下 ,将培养好的病原菌悬浮液经 2层纱布 过滤 ,在显微镜下采用血球计数法计数孢子数 ,配成浓度为 1 ×105 个 /mL的孢子悬浮液 。 1. 5 试验方法
选取生长较为一致的 2～3叶期的草莓苗 ,种植于黑色塑
收稿日期 : 2010 - 09 - 13 作者简介 :许 博 (1981—) ,女 ,江苏丰县人 ,硕士 ,从事作物栽培技
(下转第 132页 )
— 132 —
江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期
魏练平 ,李明江 ,王 耸 ,等. 哈茨木霉 H - 13产几丁质酶与纤维素酶液体发酵工艺的研究 [ J ]. 江苏农业科学 , 2011, 39 (4) : 132 - 135.
哈茨木霉 H - 13产几丁质酶与纤维素酶 液体发酵工艺的研究
草莓作为一种栽培周期短 、结果早 、见效快的经济作物 , 近几年来在我国取得了迅猛发展 。由于草莓的栽培技术要求 较高 ,产区相对固定 ,连年大棚种植 ,除导致土壤肥力和理化 性质的恶化外 ,还引起病害种类和数量的逐年增多 ,危害程度 不断加重 ,对草莓产量和品质造成重大的损失 。草莓根腐病 是近几年温室草莓生产上大面积发生的一种根部病害 。植株 发病后 ,下部老叶叶缘变紫红色或紫褐色 ,逐渐向上扩展 ,全 株萎蔫或枯死 [1 ] 。根腐病发生后可以对草莓生产造成毁灭 性的危害 。虽然国内外对草莓根腐病已有报道 [2 - 3 ] ,但对草 莓红中柱根腐病的系统研究报道较少 。本试验选取 4个草莓 品种和 3种低毒化学杀菌剂对根腐病进行盆栽防治试验 ,希 望从中筛选出抗根腐病强的草莓品种及防治草莓根腐病的理 想药剂 。
[ 4 ]赵密珍. 草莓种质资源描述规范和数据标准 [M ]. 北京 :中国农 业出版社 , 2006: 78 - 79.
50 %多菌灵 500倍液 59. 6 60. 1 64. 0 53. 6 59. 3
试验结果还显示 ,药剂防治效果还受不同草莓品种的影 响 ,其中 75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液受品种影响最大 , 防效最大差值达 11. 3百分点 , 10%苯醚甲环唑 1 500倍液与
50%多菌灵可湿性粉剂 500倍液受品种影响相对较小 ,防效 最大差值分别为 10. 1和 10. 4百分点 (表 3) 。这也进一步说 明了不同草莓品种对根腐病的抗性存在差异 ,本试验中以法 兰地抗性最好 。
2 结果与分析
病情指数越高说明病害越重 ,清水对照的病情指数反映 4个草莓品种对根腐病的抗性区别 。由表 1中 4个草莓品种 对 3种药剂防治后的病情指数看出 , 10%苯醚甲环唑 1 500 倍液防治区 ,法兰地的病指最低 ,丰香最高 ,明宝和红颊相近 。 75%百菌清和 50%多菌灵防治后 ,病情指数也是法兰地最 低 ,丰香最高 。但清水对照的病情指数最高的是红颊 ,其次是 明宝和丰香 。说明在清水对照中 ,法兰地对根腐病的抗性最 强 ,同时对药的敏感性也是最强的 。由表 2可见 ,药剂防治时 发病率最低的均为品种法兰地 。
木霉菌 ( Trichoderm a spp. )是一类普遍存在并具有重要 经济意义的生防益菌 ,早在 1934年 ,W eindling即发现木素木 霉 ( Trichoderm a lignorum )可以寄生于多种植物病原真菌内 , 并建议将该菌用于植物土传病害的生物防治 [1 ] 。真菌内部 寄生是木霉主要拮抗机制之一 ,在包括趋向生长 、识别 、接触 、
33. 3
46. 6
46. 6
100
表 3 3种药剂对草莓根腐病的防治效果
草莓 品种
明宝 法兰地 丰香 红颊 平均
10%苯醚甲环 唑 1 500倍液
75. 13 81. 2 75. 0 71. 1 75. 6
防治效果 ( % )
75 %百菌清 800 倍液 68. 6 77. 3 69. 7 66. 0 70. 4
表 1 4个草莓品种药剂防治后的病情指数
病情指数
草莓品种 10%苯醚甲环 唑 1 500倍液
75%百菌清 800倍液
50%多菌灵 500倍液
CK
明宝
18. 5
23Fra Baidu bibliotek 3
30. 0
74. 4
法兰地
12. 5
15. 1
26. 6
66. 8
丰香
20. 7
24. 4
33. 3
71. 8
红颊
19. 2
23. 3
术研究 。 E - mail: xubo - wei@163. com。
料盆中 ,缓苗 。采用伤根接种 ,用小刀在植株根部附近划入土 壤中 ,使植株一部分根系受伤 ,然后将菌悬液从小刀划入土壤 的孔隙处注入土壤中 ,每株注射 50 mL。培养 10 d后注射等 量化学药剂 ,以灌等量清水作对照 。病情调查从接种后 5 d 开始 ,连续 5 d调查小区内所有草莓苗的发病情况 。 1. 6 病情分级标准及计算方法
3 小结
目前用化学药剂防治草莓真菌病害是最为简便有效的措 施 。本试验 4个品种中以法兰地对根腐病的抗性最强 ,其次 是丰香 ,再次是明宝 、红颊 。药剂筛选结果 ,以 10%苯醚甲环 唑水分散粒剂 1 500倍液防治效果最佳 。
参考文献 :
[ 1 ]杨艳荣 ,刘传峰. 草莓炭疽病和根腐病的发生与防治 [ J ]. 吉林 蔬菜 , 2009 ( 1) : 38 - 39.
江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期 许 博. 草莓根腐病的药剂防治效果 [ J ]. 江苏农业科学 , 2011, 39 (4) : 131 - 132.
— 131 —
草莓根腐病的药剂防治效果
许 博
(江苏省农业科学院农业资源与环境研究所 ,江苏南京 210014)
摘要 : 草莓品种对根腐病抗性强弱顺序为法兰地 >丰香 >明宝 >红颊 。不同药剂对草莓根腐病都具有一定的防 治效果 ,其中以 10%苯醚甲环唑水分散粒剂 1 500倍液处理的防效最好 ,达到 75. 6% ; 75%百菌清可湿性粉剂 800倍 液处理防效次之 ,为 70. 4% ; 50%多菌灵可湿性粉剂 500倍液处理防效较差 ,仅为 59. 3%。 关键词 : 草莓 ; 根腐病 ; 病情指数 ; 防治效果 中图分类号 : S436. 68 + 4 文献标志码 : A 文章编号 : 1002 - 1302 (2011) 04 - 0131 - 01
(上接第 131页 ) 表 2 4个草莓品种施药后的发病率
发病率 ( % ) 草莓
品种 10%苯醚甲环 75%百菌清 50%多菌灵
唑 1 500倍液 800倍液
500倍液
CK
明宝
33. 3
46. 6
46. 6
100
法兰地
20. 0
23. 3
40. 0
100
丰香
40. 0
50. 0
50. 0
100
红颊
1 材料与方法
1. 1 试验品种 供试草莓品种有明宝 、红颊 、丰香 、法兰地 。
1. 2 供试药剂 供试药剂有 50%多菌灵可湿性粉剂 (北京中农科技投资
有限公司产 ) 、75%百菌清可湿性粉剂 (广东惠州市中讯化工 有限公司产 ) 、10%苯醚甲环唑水分散粒剂 (广东惠州市中讯 化工有限公司产 ) 。 1. 3 试验设计
缠绕和穿透等步骤的真菌寄生过程中 ,木霉分泌产生的一系 列细胞壁降解酶 ,如葡聚糖酶 、几丁质酶 、纤维素酶 、蛋白酶等 起着重要的作用 ,其中几丁质酶尤为重要 [2 ] 。筛选出高效的 产几丁质酶菌株 ,优化其发酵产酶条件并分离出发酵液中的 几丁质酶 ,或直接利用液体发酵液来防治危害农作物的病原 菌 ,从而减少营养物质消耗 ,对实现木霉的生物防治具有重要 的意义 。哈茨木霉 H - 13突变株是笔者所在实验室经过 N + 束注入而筛选出的具有促进作物生长和生物防治双重功效的 木霉菌株 [ 3 - 5 ] ,在液体发酵培养基中添加适量几丁质可诱导 发酵液中几丁质酶和纤维素酶的合成 。本研究拟在实验室前 期工作的基础上 ,对其发酵产酶条件进行进一步优化 ,探究该
0级 ,无病斑 ; 1级 , 0% <病斑面积占总面积 ( x ) ≤5% ; 3级 , 5% < x ≤15% ; 5 级 , 15% < x ≤25% ; 7 级 , 25% < x ≤ 50% ; 9 级 , x > 50%。根据病级计算病情指数 : 病情指数 = ∑ (各级病株数 ×各级级数 ) / (调查总株数 ×9 ) ×100; 发病 率 =发病株数 /调查总株数 ×100% ;防治效果 = (对照区病 情指数 - 处理区病情指数 ) /对照区病情指数 ×100% [4 ] 。
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77. 0
供试药剂对草莓根腐病都有一定的防治效果 ,其中以 10%苯 醚 甲 环 唑 1 500 倍 液 的 防 效 最 好 , 平 均 防 效 达 到 75. 6%。75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液平均防效次之 ,为 70. 4%。50%多菌灵可湿性粉剂 500 倍液平均防效最差 ,仅 为 59. 3% (表 3) 。
[ 2 ]赵秀娟 ,王树洞 ,张凤巧 ,等. 草莓根腐病研究进展 [ J ]. 中国农 学通报 , 2006, 22 ( 8) : 419 - 423.
[ 3 ]张艳秋 ,刘 伟 , 胡长效. 草莓根腐病的发生规律与综合防治 [ J ]. 植保技术与推广 , 2003, 23 (1) : 14 - 16.
收稿日期 : 2010 - 09 - 08 基金项目 :国家“863”计划 (编号 : 2003AA241171) 。 作者简介 :魏练平 (1981—) ,女 ,硕士 ,讲师 ,研究方向为生物化学与
分子生物学及天然产物 。 E - mail: wlp ingky@163. com。 通信作者 :蒋立科 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向为生物化学与生物物
魏练平 , 李明江 , 王 耸 , 蒋立科
(安徽农业大学生命科学学院 ,安徽合肥 230036)
摘要 : 利用正交试验对哈茨木霉菌株 H - 13的液体发酵条件进行了优化 ,通过中试发酵与小试发酵的对比探讨 了该工艺产业化的可行性 ,并对木霉发酵液酶活的保存条件进行了研究 。结果表明 ,最佳产酶发酵条件为温度 28 ℃, 发酵时间 72 h,起始 pH值 7。在此条件下进行中试发酵 ,可获得 26 L 发酵原液 ,其几丁质酶活力为 256 U /mL ,纤维素 酶活力为 482 U /mL。与小式发酵相比 ,两者在发酵程度 、产孢量以及酶活方面均接近 ,表明该工艺稳定性好 ,可产业 化 。发酵产物酶活稳定性研究结果表明 ,添加 4 g/L 苯甲酸钠可有效减少发酵液保存过程中的酶活损失 ,在 60 d以 内 ,发酵原液在低温情况下的几丁质酶活能保存 88. 36%左右 ,纤维素酶活也能保存 70. 67%以上 。 关键词 : 哈茨木霉 ; 液体发酵 ; 几丁质酶 ; 纤维素酶 中图分类号 : Q55 文献标志码 : A 文章编号 : 1002 - 1302 (2011) 04 - 0132 - 04
试验设 4个处理 : (1) 10% 苯醚甲环唑水分散粒剂 1 500 倍液 ; (2) 75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液 ; ( 3) 50%多菌灵 可湿性粉剂 500倍液 ; (4)清水 (CK) 。每处理重复 3次 ,每品 种每重复盆栽草莓苗 20棵 。 1. 4 病原菌分生孢子悬浮液的制备
将病原菌在 PDA 培养基上培养 ,待产生大量白色孢子团 时用灭菌水将其洗下 ,将培养好的病原菌悬浮液经 2层纱布 过滤 ,在显微镜下采用血球计数法计数孢子数 ,配成浓度为 1 ×105 个 /mL的孢子悬浮液 。 1. 5 试验方法
选取生长较为一致的 2～3叶期的草莓苗 ,种植于黑色塑
收稿日期 : 2010 - 09 - 13 作者简介 :许 博 (1981—) ,女 ,江苏丰县人 ,硕士 ,从事作物栽培技
(下转第 132页 )
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江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期
魏练平 ,李明江 ,王 耸 ,等. 哈茨木霉 H - 13产几丁质酶与纤维素酶液体发酵工艺的研究 [ J ]. 江苏农业科学 , 2011, 39 (4) : 132 - 135.
哈茨木霉 H - 13产几丁质酶与纤维素酶 液体发酵工艺的研究
草莓作为一种栽培周期短 、结果早 、见效快的经济作物 , 近几年来在我国取得了迅猛发展 。由于草莓的栽培技术要求 较高 ,产区相对固定 ,连年大棚种植 ,除导致土壤肥力和理化 性质的恶化外 ,还引起病害种类和数量的逐年增多 ,危害程度 不断加重 ,对草莓产量和品质造成重大的损失 。草莓根腐病 是近几年温室草莓生产上大面积发生的一种根部病害 。植株 发病后 ,下部老叶叶缘变紫红色或紫褐色 ,逐渐向上扩展 ,全 株萎蔫或枯死 [1 ] 。根腐病发生后可以对草莓生产造成毁灭 性的危害 。虽然国内外对草莓根腐病已有报道 [2 - 3 ] ,但对草 莓红中柱根腐病的系统研究报道较少 。本试验选取 4个草莓 品种和 3种低毒化学杀菌剂对根腐病进行盆栽防治试验 ,希 望从中筛选出抗根腐病强的草莓品种及防治草莓根腐病的理 想药剂 。
[ 4 ]赵密珍. 草莓种质资源描述规范和数据标准 [M ]. 北京 :中国农 业出版社 , 2006: 78 - 79.
50 %多菌灵 500倍液 59. 6 60. 1 64. 0 53. 6 59. 3
试验结果还显示 ,药剂防治效果还受不同草莓品种的影 响 ,其中 75%百菌清可湿性粉剂 800 倍液受品种影响最大 , 防效最大差值达 11. 3百分点 , 10%苯醚甲环唑 1 500倍液与
50%多菌灵可湿性粉剂 500倍液受品种影响相对较小 ,防效 最大差值分别为 10. 1和 10. 4百分点 (表 3) 。这也进一步说 明了不同草莓品种对根腐病的抗性存在差异 ,本试验中以法 兰地抗性最好 。
2 结果与分析
病情指数越高说明病害越重 ,清水对照的病情指数反映 4个草莓品种对根腐病的抗性区别 。由表 1中 4个草莓品种 对 3种药剂防治后的病情指数看出 , 10%苯醚甲环唑 1 500 倍液防治区 ,法兰地的病指最低 ,丰香最高 ,明宝和红颊相近 。 75%百菌清和 50%多菌灵防治后 ,病情指数也是法兰地最 低 ,丰香最高 。但清水对照的病情指数最高的是红颊 ,其次是 明宝和丰香 。说明在清水对照中 ,法兰地对根腐病的抗性最 强 ,同时对药的敏感性也是最强的 。由表 2可见 ,药剂防治时 发病率最低的均为品种法兰地 。
木霉菌 ( Trichoderm a spp. )是一类普遍存在并具有重要 经济意义的生防益菌 ,早在 1934年 ,W eindling即发现木素木 霉 ( Trichoderm a lignorum )可以寄生于多种植物病原真菌内 , 并建议将该菌用于植物土传病害的生物防治 [1 ] 。真菌内部 寄生是木霉主要拮抗机制之一 ,在包括趋向生长 、识别 、接触 、
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表 3 3种药剂对草莓根腐病的防治效果
草莓 品种
明宝 法兰地 丰香 红颊 平均
10%苯醚甲环 唑 1 500倍液
75. 13 81. 2 75. 0 71. 1 75. 6
防治效果 ( % )
75 %百菌清 800 倍液 68. 6 77. 3 69. 7 66. 0 70. 4
表 1 4个草莓品种药剂防治后的病情指数
病情指数
草莓品种 10%苯醚甲环 唑 1 500倍液
75%百菌清 800倍液
50%多菌灵 500倍液
CK
明宝
18. 5
23Fra Baidu bibliotek 3
30. 0
74. 4
法兰地
12. 5
15. 1
26. 6
66. 8
丰香
20. 7
24. 4
33. 3
71. 8
红颊
19. 2
23. 3
术研究 。 E - mail: xubo - wei@163. com。
料盆中 ,缓苗 。采用伤根接种 ,用小刀在植株根部附近划入土 壤中 ,使植株一部分根系受伤 ,然后将菌悬液从小刀划入土壤 的孔隙处注入土壤中 ,每株注射 50 mL。培养 10 d后注射等 量化学药剂 ,以灌等量清水作对照 。病情调查从接种后 5 d 开始 ,连续 5 d调查小区内所有草莓苗的发病情况 。 1. 6 病情分级标准及计算方法
3 小结
目前用化学药剂防治草莓真菌病害是最为简便有效的措 施 。本试验 4个品种中以法兰地对根腐病的抗性最强 ,其次 是丰香 ,再次是明宝 、红颊 。药剂筛选结果 ,以 10%苯醚甲环 唑水分散粒剂 1 500倍液防治效果最佳 。
参考文献 :
[ 1 ]杨艳荣 ,刘传峰. 草莓炭疽病和根腐病的发生与防治 [ J ]. 吉林 蔬菜 , 2009 ( 1) : 38 - 39.
江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期 许 博. 草莓根腐病的药剂防治效果 [ J ]. 江苏农业科学 , 2011, 39 (4) : 131 - 132.
— 131 —
草莓根腐病的药剂防治效果
许 博
(江苏省农业科学院农业资源与环境研究所 ,江苏南京 210014)
摘要 : 草莓品种对根腐病抗性强弱顺序为法兰地 >丰香 >明宝 >红颊 。不同药剂对草莓根腐病都具有一定的防 治效果 ,其中以 10%苯醚甲环唑水分散粒剂 1 500倍液处理的防效最好 ,达到 75. 6% ; 75%百菌清可湿性粉剂 800倍 液处理防效次之 ,为 70. 4% ; 50%多菌灵可湿性粉剂 500倍液处理防效较差 ,仅为 59. 3%。 关键词 : 草莓 ; 根腐病 ; 病情指数 ; 防治效果 中图分类号 : S436. 68 + 4 文献标志码 : A 文章编号 : 1002 - 1302 (2011) 04 - 0131 - 01
(上接第 131页 ) 表 2 4个草莓品种施药后的发病率
发病率 ( % ) 草莓
品种 10%苯醚甲环 75%百菌清 50%多菌灵
唑 1 500倍液 800倍液
500倍液
CK
明宝
33. 3
46. 6
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法兰地
20. 0
23. 3
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丰香
40. 0
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红颊
1 材料与方法
1. 1 试验品种 供试草莓品种有明宝 、红颊 、丰香 、法兰地 。
1. 2 供试药剂 供试药剂有 50%多菌灵可湿性粉剂 (北京中农科技投资
有限公司产 ) 、75%百菌清可湿性粉剂 (广东惠州市中讯化工 有限公司产 ) 、10%苯醚甲环唑水分散粒剂 (广东惠州市中讯 化工有限公司产 ) 。 1. 3 试验设计