植物组织过氧化氢含量的测定

配制100ml 、100umol/L 的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧化氢原液请写出

计

算

过

程

。

答：首先计算其摩尔浓度：

若30%为其质量百分数

双氧水30%浓度的试剂（上海国药集团出品），室温时实测密度为：1,122

g/L ，所以，1L 30%含量的双氧水中过氧化氢含量为：1122g/L ×1L×30%=337g

又H 2O 2的分子量为，那么1L 30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为：337/=

mol/L .

100ml ×10-3

×100 umol/L ×10-6

= mol/L ×V

V=10-6

L=1 ul

若30%为体积分数

100% H 2O 2密度是1,440 g/L, 30 ml H 2O 2的质量为1440 g/L ×30 ml ×10-3

=，30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为：= mol/L .

100ml ×10-3

×100 umol/L ×10-6

= mol/L ×V

V=×10-7

L= ul

植物组织中过氧化氢含量测定

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H 2O 2发生累积。H 2O 2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H 2O 2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H 2O 2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。

【原理】

H 2O 2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H ２SO 4溶解后，在415nm 波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H 2O 2浓度呈线性关系。

【仪器和用具】

研钵；移液管×2支，5ml ×1支；容量瓶10ml ×7个，离心管5ml ×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】 100μmol/L H 2O 2丙酮试剂：取30%分析纯H 2O 2 57μl ，溶于100ml ，再稀释100倍；2mol/L 硫酸；5%（W/V ）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

【方法】

1.制作标准曲线：取10ml 离心管7支，顺序编号，并按表加入试剂。

测定H 2O 2浓度标准曲线配置表

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml 容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm 波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2g ，按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min 下离心10min ，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml ，按表1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后5000rpm/min 离心10min ，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol 硫酸5ml ，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算：

植物组织中

H 2O 2含量(μmol/g Fw)= C Vt

FW V ⨯⨯1

式中 C —标准曲线上查得样品中H 2O 2浓度（μmol ）； V t —样品提取液总体积（ml ）；

V 1—测定时用样品提取液体积（ml ）； FW —植物组织鲜重（g ）。

得出标准曲线如下图：

测定所得样品的吸光度为，带入得，考虑到称取鲜重 代入公式含量为H 2O 2 =μmol/g Fw 。 注意事项

1、离心机离心时应该先配平。

2、加试剂的顺序一定不可以错。

3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。

4、注意所用H 2O 2 的浓度。