微生物基础实验培训
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管、三角瓶等容器进行灭菌。 注意：固体培养基约为试管高度的1/5 灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养 基以试管高度的1/3为宜。灭菌后垂直待凝。
熟悉培养基制备与灭菌技术
P231.三试平角管皿瓶包包扎扎
熟悉培养基制备与灭菌技术
P23456781.装加排升保降开料盖冷压锅水空取气料
平板划线与细菌数量计数
③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。 将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4） ，此为三区。
④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连 续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐 稀释的目的。
平板划线与细菌数量计数
平板划线与细菌数量计数
单菌落再培养——液体培养基 在超净工作台上，酒精灯火焰
10-15cm范围内，手持灭菌后试管装 有液体培养基，试管口与桌面成45oC 角。
将灼烧过的接种环冷却后，挑 取单个菌落，在液体培养基里搅拌数 次。
将接种后的培养基至于恒温摇 床内培养。
平板划线与细菌数量计数
细菌数量计算 在超净工作台上，酒精灯火焰10-15cm范围，取液
4.如果配置固体培养基，需要将琼脂先添加到已溶解 的药品中，再加热溶化。
熟悉培养基制备与灭菌技术
5.通常，配置一升培养基需要添加200微升NaOH。对于有些 要求pH值较精确的微生物，培养基的pH可用酸度计控制 调节。
熟悉培养基制备与灭菌技术
6.分装 1）涂平板的固体培养基可直接用大试剂瓶灭菌。 2）根据实验要求，可将配置的完全溶解的培养基分装入试
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验原理
• 由人工配制适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的 混合养料称为培养基。含有碳源、氮源、能源、无 机盐、生长因子和水等物质。 按物理状态可分为液体、半固体和固体三类。
• 加热密封锅体内的水，让水蒸气压力升高，提高锅 内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。
熟悉培养基制备与灭菌技术
平板划线与细菌数量计数
（4）分离划线接种细菌 ①左手持琼脂平板培养基，尽量使之直立以免空气中
的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼 脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板 的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面 呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑 动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残 留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭 菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5 ），此视为二区。
注意：灭菌时，瓶盖不能 拧紧以免灭菌结束形成 负压后打不开
ຫໍສະໝຸດ Baidu
0.1
0.15
压力表
0.2 0.05
0
0.25
℃ MPa
熟悉培养基制备与灭菌技术
PP21.倒.摆平斜板面
倒平板的过程靠近酒 精灯（10-15cm 范 围），倒完后迅速 将培养皿盖上，待 冷却凝固后，将培 养皿翻转放置于台 上，待用；
15-20mL，2-3mm高
平板划线与细菌数量计数
平板划线与细菌数量计数
（3）取菌种 左手持装有菌液的试管，用持有接种环的右手
手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰 2~3次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的 位置。
平板划线与细菌数量计数
实验原理
1. 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀 释而获得单菌落的方法。
2. 菌落形成单位(CFU，Colony-Forming Units)指单位 体积中的活菌个数。在活菌培养计数时，由单个菌 体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖 所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌 的数量。
平板划线与细菌数量计数
（1）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、
接种者姓名、日期等。
平板划线与细菌数量计数
（2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放
置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于 火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧 灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快 速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。 然后将接种环移开火焰，待其冷却。
若暂时不需要使 用，则用封口膜缠 绕后翻转放置于4℃ 冰箱，待用。
将灭菌好倒的入另试量外管为一如1只5图-2手放0m拿置L起，三2凝-3角固m瓶后m高即成斜面
平板划线与细菌数量计数
实验目的
1. 正确使用接种环 2. 熟悉在无菌环境下转移与重新培养 3. 熟悉划平板技术 4. 熟悉细菌数量计数的方法 5. 了解细菌长期保存技术
微生物学实验基础培训 laboratory Exercises in
Microbiology
内容纲要
• 了解配制培养基的基本原理，掌握配制的一般方法 与步骤
• 学习掌握高压蒸汽灭菌的操作方法 • 学习平板划线与接种等操作手法
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验目的
1.熟悉牛肉膏蛋白胨固体培养基的主要成分 2.液体与固体培养基的配置与灭菌 3.灭菌后固体培养基的分装 4.熟悉器皿与液体灭菌技术 5.熟悉高压灭菌锅的操作
实验材料
1.实验材料 高压灭菌锅；玻璃培养皿；玻璃试管，试管架；三角 瓶；称重纸；电子天平；水浴锅；铝箔纸；磁力搅拌 器；
2.实验药品
牛肉膏；蛋白胨；NaCl；琼脂（仅在配置固体培养基 时添加）；去离子水
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验步骤
1.培养基成分 1升培养基：5g 牛肉膏,10g 蛋白胨;5g NaCl 15g 琼脂(仅在配置固体培养基时添加);去离子水
2.按培养基配方比例依次准确称取牛肉膏，蛋白胨， NaCl加入烧杯中(固体培养基还需要加入琼脂)。
注意：蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速，另外称药品时 严防药品混杂。
熟悉培养基制备与灭菌技术
3.在上述烧杯、三角瓶中加入少于所需要的室温去离 子水，放置于磁力搅拌器上搅拌，代药品完全溶解 后补充水分到所需的总体积。
体菌液1mL并稀释四次，每次稀释10倍（如图）。 取每个稀释后的液体菌液1mL或100微升滴于平板上，
涂匀后过夜培养。 根据可见菌落数量计算原菌液细菌数量。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养 基以试管高度的1/3为宜。灭菌后垂直待凝。
熟悉培养基制备与灭菌技术
P231.三试平角管皿瓶包包扎扎
熟悉培养基制备与灭菌技术
P23456781.装加排升保降开料盖冷压锅水空取气料
平板划线与细菌数量计数
③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。 将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4） ，此为三区。
④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连 续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐 稀释的目的。
平板划线与细菌数量计数
平板划线与细菌数量计数
单菌落再培养——液体培养基 在超净工作台上，酒精灯火焰
10-15cm范围内，手持灭菌后试管装 有液体培养基，试管口与桌面成45oC 角。
将灼烧过的接种环冷却后，挑 取单个菌落，在液体培养基里搅拌数 次。
将接种后的培养基至于恒温摇 床内培养。
平板划线与细菌数量计数
细菌数量计算 在超净工作台上，酒精灯火焰10-15cm范围，取液
4.如果配置固体培养基，需要将琼脂先添加到已溶解 的药品中，再加热溶化。
熟悉培养基制备与灭菌技术
5.通常，配置一升培养基需要添加200微升NaOH。对于有些 要求pH值较精确的微生物，培养基的pH可用酸度计控制 调节。
熟悉培养基制备与灭菌技术
6.分装 1）涂平板的固体培养基可直接用大试剂瓶灭菌。 2）根据实验要求，可将配置的完全溶解的培养基分装入试
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验原理
• 由人工配制适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的 混合养料称为培养基。含有碳源、氮源、能源、无 机盐、生长因子和水等物质。 按物理状态可分为液体、半固体和固体三类。
• 加热密封锅体内的水，让水蒸气压力升高，提高锅 内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。
熟悉培养基制备与灭菌技术
平板划线与细菌数量计数
（4）分离划线接种细菌 ①左手持琼脂平板培养基，尽量使之直立以免空气中
的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼 脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板 的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面 呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑 动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残 留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭 菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5 ），此视为二区。
注意：灭菌时，瓶盖不能 拧紧以免灭菌结束形成 负压后打不开
ຫໍສະໝຸດ Baidu
0.1
0.15
压力表
0.2 0.05
0
0.25
℃ MPa
熟悉培养基制备与灭菌技术
PP21.倒.摆平斜板面
倒平板的过程靠近酒 精灯（10-15cm 范 围），倒完后迅速 将培养皿盖上，待 冷却凝固后，将培 养皿翻转放置于台 上，待用；
15-20mL，2-3mm高
平板划线与细菌数量计数
平板划线与细菌数量计数
（3）取菌种 左手持装有菌液的试管，用持有接种环的右手
手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰 2~3次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的 位置。
平板划线与细菌数量计数
实验原理
1. 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀 释而获得单菌落的方法。
2. 菌落形成单位(CFU，Colony-Forming Units)指单位 体积中的活菌个数。在活菌培养计数时，由单个菌 体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖 所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌 的数量。
平板划线与细菌数量计数
（1）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、
接种者姓名、日期等。
平板划线与细菌数量计数
（2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放
置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于 火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧 灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快 速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。 然后将接种环移开火焰，待其冷却。
若暂时不需要使 用，则用封口膜缠 绕后翻转放置于4℃ 冰箱，待用。
将灭菌好倒的入另试量外管为一如1只5图-2手放0m拿置L起，三2凝-3角固m瓶后m高即成斜面
平板划线与细菌数量计数
实验目的
1. 正确使用接种环 2. 熟悉在无菌环境下转移与重新培养 3. 熟悉划平板技术 4. 熟悉细菌数量计数的方法 5. 了解细菌长期保存技术
微生物学实验基础培训 laboratory Exercises in
Microbiology
内容纲要
• 了解配制培养基的基本原理，掌握配制的一般方法 与步骤
• 学习掌握高压蒸汽灭菌的操作方法 • 学习平板划线与接种等操作手法
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验目的
1.熟悉牛肉膏蛋白胨固体培养基的主要成分 2.液体与固体培养基的配置与灭菌 3.灭菌后固体培养基的分装 4.熟悉器皿与液体灭菌技术 5.熟悉高压灭菌锅的操作
实验材料
1.实验材料 高压灭菌锅；玻璃培养皿；玻璃试管，试管架；三角 瓶；称重纸；电子天平；水浴锅；铝箔纸；磁力搅拌 器；
2.实验药品
牛肉膏；蛋白胨；NaCl；琼脂（仅在配置固体培养基 时添加）；去离子水
熟悉培养基制备与灭菌技术
实验步骤
1.培养基成分 1升培养基：5g 牛肉膏,10g 蛋白胨;5g NaCl 15g 琼脂(仅在配置固体培养基时添加);去离子水
2.按培养基配方比例依次准确称取牛肉膏，蛋白胨， NaCl加入烧杯中(固体培养基还需要加入琼脂)。
注意：蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速，另外称药品时 严防药品混杂。
熟悉培养基制备与灭菌技术
3.在上述烧杯、三角瓶中加入少于所需要的室温去离 子水，放置于磁力搅拌器上搅拌，代药品完全溶解 后补充水分到所需的总体积。
体菌液1mL并稀释四次，每次稀释10倍（如图）。 取每个稀释后的液体菌液1mL或100微升滴于平板上，
涂匀后过夜培养。 根据可见菌落数量计算原菌液细菌数量。