遗传性痉挛性截瘫患者致病基因突变特征和其与临床表型的关系
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和７６／２９。 结论
（ｉ）首次在国内外报道ｓｐａｓｔｉｎ基因上的１６１６＋１９—ｔ杂合突变。 （２）提示ａｔｌａｓｔｉｎ基因型在中国人中可能少见，其突变频率可能存在一定
的种族差异。
（３）报道ＮＩＰＡＩ基因上的已知杂合突变ｃ．３１６Ｇ＞Ａ，提示为一突变热点； ＮＩＰＡＩ基因型在中国人中可能少见，其突变频率与国外报道的基本一致。 （４）首次在国内开展ＲＥＥＰＩ基因突变分析，提示ＲＥＥＰＩ基因型在中国人中 可能少见，其突变频率可能存在一定的种族差异。
ｐａｒａｐｌｅｇｉａ（ＨＳＰ）ａｎｄ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｂａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ
ｔｈｅ ＭＪＤ ｇｅｎｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｂｏｖｅ ａｎｄ ａｓｃｅｒｔａｉｎ
ｔｈｅ ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐｌｅｇｉａ ｓｕｂｔｙｐｅ ｏｆ ＭＪＤ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｃｏｍｂｉｎｅｄ、析ｔｌｌ ｍｅａｎｓ
ｄｉｒｅｃｔ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＭＪＤ
ａｓ
ｇｅｎｅ
ｗｅｌｌ
ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ａｂｏｖｅ ｗｅｒｅ ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ ｂｙ
ａｓ
ｏｆ Ａｇｒｏｓｅ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
Ｐｏｌｙａｅｒｙｌａｍｉｄｅ Ｇｅｌ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ
Ｔｏ ｄｅｔｅＣｔ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｐａｓｔｉｎ，ａｔｌａｓｔｉｎ，ＮＩＰＡｌ ａｎｄ ＲＥＥＰｌ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｓｐａｓｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｌｉＳＰ．Ｔｏ
ｓｃｒｅｅｎ
患者的ｇＤＮＡ进行ｓｐａｓｔＪｎ、ａｔｌａｓｔｉｎ和ＮＩＰＡＩ基因的突变筛查，并对２４
例ＨＳＰ家系的先证者进一步直接测序行以上３个基因的ＤＮＡ序列分析：另 外直接应用测序方法筛查以上全部患者的ＲＥＥＰＩ基因突变。采用ＰＣＲ扩增 后产物分别进行２％琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）电泳的
方法检测上述患者的ＭＪＤ基因，条带异常的行测序证实。
福建医科大学博士研究生学位论文
遗传性痉挛性截瘫患者致病基因突变特征 及其与临床表型的关系
摘 要
目的筛查并分析１９９６年至２００８年我院神经内科所收集的来自全国的２４例遗传 性痉挛性截瘫（ＨＳＰ）家系的先证者和３２例散发性ＨＳＰ患者ｓｐａｓｔｉｎ、 ａｔｌａｓｔｉｎ、ＮＩＰＡＩ和ＲＥＥＰｌ基因的突变，了解中国人这四个基因的突变特点 和基因型一表型关系，为该病的基因诊断奠定基础。进一步对以上患者行ＭＪＤ 基因的筛查研究，明确是否存在Ｍ３Ｄ的痉挛性截瘫亚型。 方法联合应用变性高效液相色谱分析（ＤＨＰＬＣ）和ＤＮＡ序列分析方法对以上ＨＳＰ
ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ｆｒｏｍ ２４ ＨＳＰ ｆａｍｉｌｉｅｓ ａｎｄ ３２ ｓｐｏｒａｄｉｃ ｃａｓｅｓ．Ｔｈｅｎ ｓｐａｓｔｉｎ， ａｔｌａｓｔｉｎ ａｎｄ ＮＩＰＡｌ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ２４ ｉｎｄｅｘｅｓ，ｗｈｉｌｅ ＲＥＥＰ １ ｇｅｎｅ ｏｆ ａｌｌ ５６ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｆｆｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
福建医科大学博士研究生学位论文
（５）发现了以上４个基因的大量多态，丰富了其多态库；但突变在本组ＨＳＰ 患者中较少见，需要继续筛查ＨＳＰ的其他基因。 （６）４例临床诊断ＨＳＰ的患者通过基因诊断可以确诊为ＭＪＤ，证实了ＨＳＰ和 ＳＣＡｓ临床表现的复杂性和基因诊断的意义。 （７）ＤＨＰＬＣ结合ＤＮＡ序列分析是一种有效、经济的筛查突变的方法。 关键词：遗传性痉挛性截瘫，ｓｐａｓｔｉｎ基因，ａｔｌａｓｔｉｎ基因，ＮＩＰＡｌ基因，ＲＥＥＰｌ 基因，交性高效液相色谱分析，ＤＮＡ序列分析，突变，多态，脊髓小脑 性共济失调，ＭＪＤ病，ＡＴＸＮ３基因；ＣＡＧ重复
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结果在１个ＡＤ—ＨＳＰ家系中发现１个位于ｓｐａｓｔｉｎ基因上的１６１６＋１９—ｔ杂合突 变，是一个新型突变；未发现ａｔｌａｓｔｉｎ基因突变；在１个ＡＤ—ＨＳＰ家系中 发现１个位于ＮＩＰＡＩ基因上的Ｃ．３１６Ｇ＞Ａ杂合突变，是一个已知突变；未发 现ＳＰＧ３１基因突变。此外，我们还发现８种ｓｐａｓｔｉｎ基因多态、１０种ａｔｌａｓｔｉｎ 基因多态、１种ＮＩＰＡＩ基因多态，还有５种ＲＥＥＰＩ基因多态。另外我们发现 ４个家系存在ＭＪＤ基因变异，大片段ＣＡＧ重复数分别为８０／２８、８６／２８、８３／３３
ｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｉｎ
ｉｎ ａｌｌ ｃａｓｅｓ；Ａ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ＮＩＰＡｌ ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｗａｓ
Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｐａｓｔｉｎ，ａｔｌａｓｔｉｎ ａｎｄ ＮＩＰＡ １ ｇｅｎｅ，ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ａｎｄ
ＤＨＰＬＣ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｉｎ ５６ ｕｎｒｅｌａｔｅｄ ＨＳＰ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ
福建医科大学博士研究生学位论文
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ
Ｍｕｔａｔｉｏｎ
ａｓ
ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ－ｃａｕｓｉｎｇ
Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ
Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ Ｓｐａｓｔｉｃ Ｐａｒａｐｌｅｇｉａ ａｎｄ ｉｔｓ
Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ
ｐｒｏｃｅｅｄｅｄ，
ａｎｄ ｔｈｅｎ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｔｈｅｍ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．
Ｏｎｅ ｎｏｖｅｌ ｍｕｔａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｓｐａｓｔｉｎ
ｇｅｎｅ Ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ（１ ６ １ ６＋１ｇ＞０
ｉｎ
ｏｎｅ
ａｕｔｏｓｏｍａｌ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｆａｍｉｌｙ；ｎｏ ｄｉｓｅａｓｅ ｃａｕｓｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｔｌａｓｔｉｎ ｇｅｎｅ Ｗａｓ
（ｉ）首次在国内外报道ｓｐａｓｔｉｎ基因上的１６１６＋１９—ｔ杂合突变。 （２）提示ａｔｌａｓｔｉｎ基因型在中国人中可能少见，其突变频率可能存在一定
的种族差异。
（３）报道ＮＩＰＡＩ基因上的已知杂合突变ｃ．３１６Ｇ＞Ａ，提示为一突变热点； ＮＩＰＡＩ基因型在中国人中可能少见，其突变频率与国外报道的基本一致。 （４）首次在国内开展ＲＥＥＰＩ基因突变分析，提示ＲＥＥＰＩ基因型在中国人中 可能少见，其突变频率可能存在一定的种族差异。
ｐａｒａｐｌｅｇｉａ（ＨＳＰ）ａｎｄ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｂａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ
ｔｈｅ ＭＪＤ ｇｅｎｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｂｏｖｅ ａｎｄ ａｓｃｅｒｔａｉｎ
ｔｈｅ ｓｐａｓｔｉｃ ｐａｒａｐｌｅｇｉａ ｓｕｂｔｙｐｅ ｏｆ ＭＪＤ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｃｏｍｂｉｎｅｄ、析ｔｌｌ ｍｅａｎｓ
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ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＭＪＤ
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ｇｅｎｅ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ
Ｔｏ ｄｅｔｅＣｔ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｐａｓｔｉｎ，ａｔｌａｓｔｉｎ，ＮＩＰＡｌ ａｎｄ ＲＥＥＰｌ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｓｐａｓｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｌｉＳＰ．Ｔｏ
ｓｃｒｅｅｎ
患者的ｇＤＮＡ进行ｓｐａｓｔＪｎ、ａｔｌａｓｔｉｎ和ＮＩＰＡＩ基因的突变筛查，并对２４
例ＨＳＰ家系的先证者进一步直接测序行以上３个基因的ＤＮＡ序列分析：另 外直接应用测序方法筛查以上全部患者的ＲＥＥＰＩ基因突变。采用ＰＣＲ扩增 后产物分别进行２％琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）电泳的
方法检测上述患者的ＭＪＤ基因，条带异常的行测序证实。
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遗传性痉挛性截瘫患者致病基因突变特征 及其与临床表型的关系
摘 要
目的筛查并分析１９９６年至２００８年我院神经内科所收集的来自全国的２４例遗传 性痉挛性截瘫（ＨＳＰ）家系的先证者和３２例散发性ＨＳＰ患者ｓｐａｓｔｉｎ、 ａｔｌａｓｔｉｎ、ＮＩＰＡＩ和ＲＥＥＰｌ基因的突变，了解中国人这四个基因的突变特点 和基因型一表型关系，为该病的基因诊断奠定基础。进一步对以上患者行ＭＪＤ 基因的筛查研究，明确是否存在Ｍ３Ｄ的痉挛性截瘫亚型。 方法联合应用变性高效液相色谱分析（ＤＨＰＬＣ）和ＤＮＡ序列分析方法对以上ＨＳＰ
ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ｆｒｏｍ ２４ ＨＳＰ ｆａｍｉｌｉｅｓ ａｎｄ ３２ ｓｐｏｒａｄｉｃ ｃａｓｅｓ．Ｔｈｅｎ ｓｐａｓｔｉｎ， ａｔｌａｓｔｉｎ ａｎｄ ＮＩＰＡｌ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ２４ ｉｎｄｅｘｅｓ，ｗｈｉｌｅ ＲＥＥＰ １ ｇｅｎｅ ｏｆ ａｌｌ ５６ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｆｆｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
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（５）发现了以上４个基因的大量多态，丰富了其多态库；但突变在本组ＨＳＰ 患者中较少见，需要继续筛查ＨＳＰ的其他基因。 （６）４例临床诊断ＨＳＰ的患者通过基因诊断可以确诊为ＭＪＤ，证实了ＨＳＰ和 ＳＣＡｓ临床表现的复杂性和基因诊断的意义。 （７）ＤＨＰＬＣ结合ＤＮＡ序列分析是一种有效、经济的筛查突变的方法。 关键词：遗传性痉挛性截瘫，ｓｐａｓｔｉｎ基因，ａｔｌａｓｔｉｎ基因，ＮＩＰＡｌ基因，ＲＥＥＰｌ 基因，交性高效液相色谱分析，ＤＮＡ序列分析，突变，多态，脊髓小脑 性共济失调，ＭＪＤ病，ＡＴＸＮ３基因；ＣＡＧ重复
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结果在１个ＡＤ—ＨＳＰ家系中发现１个位于ｓｐａｓｔｉｎ基因上的１６１６＋１９—ｔ杂合突 变，是一个新型突变；未发现ａｔｌａｓｔｉｎ基因突变；在１个ＡＤ—ＨＳＰ家系中 发现１个位于ＮＩＰＡＩ基因上的Ｃ．３１６Ｇ＞Ａ杂合突变，是一个已知突变；未发 现ＳＰＧ３１基因突变。此外，我们还发现８种ｓｐａｓｔｉｎ基因多态、１０种ａｔｌａｓｔｉｎ 基因多态、１种ＮＩＰＡＩ基因多态，还有５种ＲＥＥＰＩ基因多态。另外我们发现 ４个家系存在ＭＪＤ基因变异，大片段ＣＡＧ重复数分别为８０／２８、８６／２８、８３／３３
ｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｉｎ
ｉｎ ａｌｌ ｃａｓｅｓ；Ａ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ＮＩＰＡｌ ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｗａｓ
Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｐａｓｔｉｎ，ａｔｌａｓｔｉｎ ａｎｄ ＮＩＰＡ １ ｇｅｎｅ，ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
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ａｎｄ
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Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ
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ａｎｄ ｔｈｅｎ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｕｌｔｓ
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