六种不同品牌植酸酶耐热性能的评价(修改稿)

六种不同品牌植酸酶耐热性能的评价

徐雪梅*文建军焦玉燕韩美丽崔珊王伟张帅田兴尹佳佳

（潍坊康地恩生物科技有限公司，山东高密261500）

摘要：植酸酶对于有效释放饲料中的植酸磷有着重要的意义，目前国内外对植酸酶的研究已经从基础的理论研究向应用研究发展，从天然获取向基因工程发展，本文通过对目前市面上销售的6个品牌的耐高温植酸酶进行实验室湿热试验、饲料制粒试验，研究这6个经过高温处理后植酸酶的湿热酶活存留率和制粒酶活存留率，结果表明：国外品牌F耐温效果最优，国内品牌A可与之媲美，85℃饲料制粒仍可保留85.92%，显著高于除国外品牌F的其他各品牌植酸酶；另外，实验室湿热对于饲料实际制粒耐热结果具有一定指导意义。

关键词：植酸酶；耐热；存留率

Abstract：Phytase plays an important role in the feed for the effective release of phytate, the research of phytase has evolved from basic theoretical research to applied research and development, access to genetic engineering from natural development. In this paper, we will test six brands of high temperature resistant phytase on heat resistance performance including the laboratory test and feed pelleting trials, studying this 6 phytase activity after heat treatment retention rate, the results showed that: Brand F is the better than other brands , Brand A has the similar effects, 85 ℃feed pelleting retains 85.92%, significantly higher than other brands in addition to brand F. In addition, laboratory humid heat for feed pelleting actual results with certain guiding significance.

Key words: Phytase; temperature resistant; retention

植酸作为一种抗营养因子，一直限制着生物、医药、饲料、环保等相关行业的发展，而随着植酸酶的研究及发展，相应的问题得到改善和解决，特别是饲料行业，在单胃动物饲粮中采用植酸酶部分替代无机磷，既可以降低成本，又可以减少粪便中磷的排放，减少其对环境的污染（Denbow等，1995；Radcliffe，1998；贺建华，2005）。

随着集约化养殖的发展，饲料厂的大规模兴建，饲料生产技术的不断改进，颗粒饲料所占的比例也随之加大，目前市售植酸酶一部分以液体形式后喷涂于制粒后饲料上（邹大琼等，2012；李富伟等，2008），但是，后喷涂存在喷涂不均、喷头易堵等情况，大多数植酸酶仍

通讯作者：徐雪梅，E-mail：xuxm@

要经历饲料制粒过程，而饲料制粒的高温蒸汽作用下，酶容易失活（张常明等，2008），故酶的耐热性能评价成为考察植酸酶品质的一个主要标准。

本试验对市售的几种植酸酶的湿热酶活存留率和制粒酶活存留率进行分析，探讨各品牌植酸酶的耐热性能。

1.材料与方法

1.1植酸酶

收集市面上销售的6种主打品牌植酸酶样品，其中包括国内四个品牌A、B、C、D，国外两个品牌E、F。

1.2主要仪器设备

恒温水浴锅、离心机、烘箱、pH计、分析天平、容量瓶、烧杯、试管、电炉、移液枪、秒表，分光光度计等。

1.3植酸酶活性检测方法

按GB/T 18634-2009的方法进行酶活测定。样品在植酸钠浓度为5.0mmol/L、温度37℃、pH 5.50的条件下，每分钟从植酸钠中释放1μmol无机磷，即为1个植酸酶活性单位，以U 表示。

1.4耐热性（湿热）

准确称取1g植酸酶样品溶解于100ml保护液（2%葡萄糖、2%牛肉膏、2%蛋白胨、pH5.5乙酸-乙酸钠缓冲液）中，制成植酸酶酶液。分别另取9ml保护液在35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃的温度条件下预热10min，加入1ml酶液，迅速摇匀，在相应的温度下反应10min，取出后迅速放入冷水中，在按GB/T 18634-2009方法测定酶活。

1.5饲料制粒后植酸酶样品检测方法

在饲料加工过程中对6种样品分别取混合后、调质后、成品阶段样品各10个，测定酶活并计算湿热酶活存留率和制粒酶活存留率。

制粒条件：制粒温度：85℃；制粒时间：30s；湿度：16-18%；蒸汽压力：0.28MPa；环模压缩比7:1。

称取样品20g，溶解于100ml缓冲液（0.05%Triton X-100，0.05%牛血清蛋白，pH5.5、0.25mol/L乙酸钠溶液）中，磁力搅拌下溶解1h，12000rpm离心3min，取上清、稀释至适

当倍数后测定酶活。酶活检测方法采用GB/T 18634-2009。

1.6数据统计与分析方法

采用SPSS18.0统计分析软件进行分析，实验结果采用平均值±标准差表示。

2.试验结果与分析

2.1不同植酸酶酶样湿热耐受结果比较

试验选用的四种国内植酸酶和两种国外植酸酶在湿热条件下，酶活存留率结果如图1所示。从试验结果可以看出，A、C、F组在75℃条件下，酶活存留率在80%以上；80℃是A、F组酶活存留率在仍能保有50%以上。试验组B、D组耐温效果极差，65℃酶活基本为0，国外品牌E组耐温效果也不够理想。

由以上结果可得出参考结论：如果制粒温度在75℃左右时，可以选择国内品牌A、国内品牌C、国外品牌F植酸酶作为首选植酸酶品种，当制粒温度在80~85℃左右时，可选择国外品牌F植酸酶，或者国内品牌A植酸酶，但是建议国内品牌A按照添加标准添加，理论及实际上应该高于国外品牌F的添加量。

以上结果为实验室水浴结果，根据目前饲用酶制剂检测方法，有一定的代表性和实际应用效果，但是仍然存在局限性，所以，具体植酸酶耐热性能仍以饲料制粒结果为主要依据。

图1不同植酸酶酶样湿热耐受性

2.2不同植酸酶酶样饲料制粒存留率分析

不同品牌植酸酶制粒存留率结果见表1，由表1可知，国内品牌A和国外品牌F植酸酶为耐高温植酸酶，85℃高温制粒后仍能分别留存85.92%和93.14%，显著高于其他各组（p ＜0.05），这与实验室水浴检测植酸酶耐温性能趋势一致，但是，从表2中可以看出，国外