检疫性细菌病害

梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖，一个细 胞在条件适宜时，３天内在寄主植物组织中 能达到109细胞，每个细胞都是一个侵染源， 感染寄主而引起病害的发展。除蛋白酶外， 病菌不产任何有助于侵入寄主的酶，主要是 在环境条件适宜时，通过胞间组织侵入薄壁 组织的病菌产生胞外多糖。胞外多糖在病害 发展过程中起重要的作用，其是菌脓的重要 成份。菌脓的理化性质随湿度变化而变化， 干时皱、硬，大时膨胀易被雨水扩散，中等 湿度的菌脓粘易被昆虫、风传播。
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① ② ③ ④
症状：侵害花、果实、枝条和叶片。 花:侵染后变深褐色，枯萎。 叶片:从叶缘沿叶脉扩展，先呈水浸状，后黑褐色。 嫩稍:先水浸状，后褐色至黑色，向下弯曲，呈鱼钩状。 果实：病部褐色凹陷，扩展到全果，潮湿时病部生粘稠的 细菌溢，初乳白色，后红褐色。 ⑤ 病枝:叶片凋萎，幼果僵化，但病叶病果不脱落，远望似 火烧状，故称火疫病。 ⑥ 伤口：初期水浸状，后下陷，呈溃疡斑，病健交界处产生 龟裂纹，韧皮部红褐色，有黏液状菌脓。 严重时，病害从嫩稍很快扩展到枝条、主干，直至根部，全 株死亡。
传播途径 ① 近距离传播：雨水是果园短距离传播的主 要因子，其次风亦是中短距离传播的重要 因子，往往在沿着盛行风的方向，病原菌 以单个菌丝、菌脓或菌丝束被风携带到较 远距离。除次之外，昆虫对病菌的传播扩 散起一定的作用。传病昆虫包括蜜蜂在内 有77个属的100多种昆虫，其中密蜂的传 病距离约为200 ~ 400 m 。 ② 远距离传播：主要是感病寄主繁殖材料， 包括种苗、接穗、砧木、水果、被污染的 运输工具、候鸟等。
4.致病性实验 梨火疫病菌致病性试验可用梨 片或梨嫩枝测定，亦可用烟草过敏反映检 查。NA上培养48小时的细菌配成108 cells /ml的悬液，注入烟草叶片或接种于1cm厚 梨片、或针刺接种于１丈长的巴黎枝条， 28℃下培养，一般10~12小时后，烟草注射 区出现白色坏死斑。1~3天后，梨片或枝条 上出现白色菌脓，则可确诊。 5.血清学检验：免疫荧光、ELISA、ODD和凝 集实验 6.分子生物学方法：核酸探针和PCR技术
玉米细菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn
分布：1889年纽约首先报道，现已20多个 国家。分布于美国、加拿大、墨西哥、越南、 泰国、马来西亚、前苏联、波兰、瑞士、意 大利、前南斯拉夫、罗马尼亚、希腊、、哥 斯达黎加、波多黎各、圭亚那、秘鲁、巴西。
寄主植物 主要是甜玉米，也侵染马齿玉米、粉质玉 米、硬粒玉米和爆裂玉米。 危害： 维管束病害、毁灭性病害。
病原菌： 学名：Erwinia amylovora（Burrill）Winslow 异名： Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovorus (Burrill) Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill) Chester 分类地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌门 (Gracilicutes),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)欧文 氏菌属(Erwinia)解淀粉欧文氏菌
检疫和防治 1.严格检疫，禁止从疫区引入蔷薇科仁果类果 树树苗。 2.剪除病梢病枝。 3.药剂防治：120mg/kg链霉素喷雾，或花期 用波尔多液喷雾防治，效果很好。 4.种植抗病品种： 5.避免在低洼易涝地定植。芽前刮除发病树皮， 在生长季节每隔7天检查1次各种发病新梢和组织， 发现后及时剪除。对因各种农事操作造成的伤口 都要进行涂药保护等。
• 直接检测：直观检验和生长检验 • 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测
1、活菌检测
• 分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴 别培养基分离纯化得到的细菌 • 浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感 病植物，观测发病情况。 例如：浙江大学等在1％灭菌水琼脂中加 75×10－6的苯并咪唑，做平板，加感病植物 叶片，针刺＋摩擦接种，培养（光、温、湿 度），短期获得症状。主要应用于水稻细菌 性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测。
（4）病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞， 或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向 中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。 （5）损伤枯萎和砧木枯萎：这二种比较特殊，前者 主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实 很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL26、 EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接 穗在这些砧木上发病后引起，最终成溃疡带而杀 死树体。
（2）溃疡枯萎：是指前一季越冬溃疡边缘的病菌重新 复活的结果。初症是在复活的溃疡附近的健康树皮组 织上出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现 褐色条斑，随后病菌侵入附近繁殖枝内部并引起萎蔫 死亡。这些枝条特别是嫩枝与下面谈及的枝枯萎有明 显区别，即在萎蔫之前枝尖芽褪色（黄至桔黄色）。 （3）枝枯萎：细菌直接侵入前 1～3叶的枝尖，然后杀 死整个枝条及支持枝。初症是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪 色，象拐杖状。条件适宜时，几天内可移动15～30cm， 造成整枝死亡，病枝、枝皮、叶通常变黑。潮湿时，枝 条上出现菌脓。后期，终芽前出现的枝枯萎一般不会萎 蔫，且仅在枝最上部出现坏死。随着病菌不断深入，并 侵染主干，皮层收缩，下陷，形成溃疡斑。
分布：
1878年首先由burrill描述，在纽约发生， 后由Erwin命名，是第一个被确定的植 物细菌病害。主要分布于北美洲于西 北欧，中欧、地中海、东南欧及大洋 州和亚洲也有分布。大约40多个国家。
梨火疫病的地理分布
寄主： 梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹 果、山楂、木旬子、李等４０多个属220多 种植物，大部分属蔷薇科Pomoideae亚科。 危害性： 仁果类果树的一种毁灭性病害。一棵多年 生的梨和苹果树发病后可在几星期内死亡
2.免疫吸附分离法
• 原理：接合血清学与平板分离技术，利用 与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细 菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目 标细菌转移或释放到培养基上生长。 • 方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸 附稀释培养法 平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：
常用溶入丙酮的硝酸纤 维素或指甲油作包被
症状：整个生育期都可危害，以开花期症 状最明显。早期症状表现为植株矮化，萎蔫， 雄穗退色早枯，叶片边缘产生波纹状不规则 病斑，初期水浸状，黄色，与叶脉平行，贯 穿全叶，宽1～10mm，严重时病叶萎蔫死亡。 生长后期，叶片产生许多小病斑，结合成大 块，火烧状干枯死亡。髓部有空腔，导管被 黄色黏液阻塞，萎蔫植株的下部切口有黄色 细菌溢脓。果穗的菌脓可通过内层包叶的气 孔渗出，籽粒表面沾满细菌菌脓，病籽粒变 形、皱缩和变色。
发病规律： 病菌在病株病疤边缘组织处越冬，挂在树 上的病果也是越冬场所，如果冬季温和， 病菌还能在病株树皮上度过，来年早春病 菌在上年的溃疡处迅速繁殖，遇到潮湿、 温和的天气，从病部渗出大量乳白色粘稠 状的细菌分泌物，即为当年的初侵染源， 通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间 操作将病菌传给健株。病菌亦通过伤口、 自然孔口（气孔、蜜腺、水孔）、花侵入 寄主组织，有一定损伤的花、叶、幼果和 茂盛的嫩枝最易感病。
形态特征：直杆菌，有荚膜，周生鞭毛，能运动， 大小为0.9-1.8× 0.6-1.5µ m，多数单生，有时成双 或短时间内3-4个呈链状。革兰氏染色阴性。在蔗 糖培养基上27℃下培养3d，菌落直径3～4mm，白 色至奶油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑， 边缘整齐，中心绒环状。
生物学特性：兼性厌氧，过氧化物酶阳性， 氧化酶阴性，好气条件下利用葡萄糖产酸不 产气，厌氧条件产酸缓慢。明胶碟形液化缓 慢。不产生硫化氢，不利用丙二酸盐。葡萄 糖酸盐氧化和七叶苷水解不稳定。氯化钠浓 度高于2％以上时生长延缓，至6％－7%时 则完全抑制。 抗青霉素，对氯霉素、链霉 素和土霉素敏感。 细菌生长的温度范围6～37 ℃，最适温 度25～27.5℃，致死温度45～50℃，10 min， 最适酸碱度为PH6.0。
5.血清学检验
• 原理： • 方法：酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫 荧光抗体法 • 免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧 光黄或罗丹明）与抗体以化学方法接合，再 与抗体反应，形成有荧光标记的抗体—抗原 复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色 荧光。
梨火疫病 Fire blight of pear
洗涤液使用包被缓冲液
3.噬菌体检验
• 原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞， 在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变 清，在固体平板上培养，则出现许多边缘 整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专 化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类。
4.非活菌检测
• 非活菌检测的方法很多，下表是检测病原 细菌常用的一些方法，前9种血清学方法， 均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定， 又能直接用于病种或病株，甚至是无症感 染组织的检测。
第六章 检疫性细菌病害
植物检疫性病原细菌的检验方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米细菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn 柑橘黄龙病 Citrus Yellow shoot 椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing
复习思考题
植物病原细菌检疫检验技术
梨火疫病的远距离传播
发生条件： 受伤的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。 经冰雹袭击，病害蔓延更加迅速。较高气 温（18～24℃）和较高的湿度（70％以上） 有利于病菌侵染。
检验方法： 1.产地检验： 2.症状观察：梨火疫病的症状很典型，是鉴 定的重要方法，但必须与其他症状相似的 梨梢枯病区分开。梨梢枯病仅限于危害花 器、叶片和嫩梢，不危害枝条和茎干，病 部无细菌溢脓，叶片上最初为深褐色斑点， 周围有红色晕圈，枯死的病叶不会长期挂 在树上
Necrotic lesions on mature leaves; second phase of Stewart's wilt disease.
病原菌：玉米细菌性枯萎病菌 学名 Pantoea stewartii (Smith) Mertaert et al. 异名 Erwinia stewartii (Smith) Dye；Pseudomonas stewartii Smith; Apalnobacter stewartii (Smith) McCulloch; Bacillus stewartii (Smith) Holland; Bacterium stewartii( Smith) Smith; Phytomonas stewartii (Smith) Bergye et al; Pseudobacterium stewartii (Smith) Hrasil’nikov,1949; Xanthomomas stewartii (Smith) Dowson 英文名 Stewart’s bacterial wilt of corn 分类地位 原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌门 (Gracilicutes)，肠杆菌科(Enterobacteri-aceae)，泛菌 属(Pantoea)
3.分离培养 可采用选择性培养基和鉴别性培养基进 行。 MS培养基 菌落为红橙色，背景为兰绿色。 配方：琼脂20g，甘露醇10g， L-天门冬酰胺3g， 牛胆酸钠2.5g，磷酸氢二钾2.0g，烟酸0.5g， MgSO4· 7H2O0.2g，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七 烷基钠0.1ml，0.5%溴麝香草酚兰水溶液9ml， 0.5%中性红2.5ml，蒸馏水970ml，pH7.3灭菌后加 1%放线菌酮5ml，1%硝酸铯水溶液1.75ml。 CG培养基 在29℃培养48小时后形成典型的 火山口状菌落。配方：水380ml，蔗糖160g，营养 琼脂12g，结晶紫0.8ml（1%乙醇溶液），0.1%放 线菌酮20ml。
Advanced fire blight on fruit - note bacterial ooze on fruit.
Fireblight in nursery stock
主要鉴定特征： 梨火疫病最典型的症状是花、果实和叶片受火 疫病菌侵害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一 般，但仍挂在树上不落，故此得名。目前国际上 将其症状据受侵害的部位，分成５个阶段。 （1）花枯萎：侵染开放的花引起花枯萎。一般发生于 早春，病菌直接从花器侵入，初为水渍状斑，花基部 或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇中 其它的花；在温暧潮湿条件下，花梗上有菌脓渗出。 随着枯萎发展，花梗、花等变褐至黑褐色，条件适宜 时可继续侵染杀死小枝并形成小溃疡斑。