中药单体华蟾素抗人结肠癌细胞作用和机制研究

中药单体华蟾素抗人结肠癌细胞作用和机制研究

研究目标:观察中药单体华蟾素(Cinobufagin,简称为CBG)抗结肠癌(Colon cancer)细胞作用,明确其作用机制。研究方法和内容:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞集落试验(Clonogenicity assay)、Brd U酶联免疫吸附测定(ELISA)检测华蟾素处理不同时间后,对结肠癌细胞存活及细胞增殖的影响;TUNEL细胞核

染色方法、Annexin V-碘化丙啶(PI)流式细胞仪(FACS)法,及Histone-DNA ELISA 法、检测华蟾素对结肠癌细胞凋亡的作用;碘化吡啶(PI)流式细胞仪法观察CBG 干预后结肠癌细胞周期的变化;运用免疫印迹(Western blot)方法检测CBG干预后结肠癌细胞内质网应激(ER应激)、m TOR复合物1(m TORC1)等信号通路水平

的活化水平;导入持续活化的S6K1质粒(CA-S6K1),观察药物干预后CBG体外抗结肠癌细胞活性的变化;建立裸鼠荷瘤模型,观察CBG在体抗结肠癌细胞的活性。

研究结果:CBG显著抑制人结肠癌细胞及原代人结肠癌细胞的存活和增殖。

CBG对正常人结肠上皮细胞无显著毒性作用。

CBG诱导结人结肠癌细胞凋亡,并导致结肠癌细胞周期G2-M期阻滞。CBG激活结肠癌细胞内ER应激通路。

使用内质网应激抑制剂(Salubrina),caspase-12抑制剂(z ATADfmk)或CHOP 沉默(通过目的性sh RNAs)的方法能够明显的减弱CBG诱导的结肠癌细胞的死亡

和凋亡。CBG抑制结肠癌细胞内m T ORC1的活化,而导入持续活化的S6K1质粒抑制CBG诱导的抗增殖作用。

CBG腹腔注射抑制裸鼠中HCT-116皮下移植瘤生长。分析肿瘤组织发现,CBG 干预的瘤组织中存在CHOP上调和m TORC1失活。

研究结论:CBG具有显著的体外及在体抗结肠癌细胞作用,其作用机制可能

和其激活ER应激和抑制m TORC1有关。