大鼠脂肪供肝肝移植模型的建立解析

万方数据
・２４２２・
主堡塞验处型苤查垫！ｉ生！！旦箜！！鲞箜！！塑ｇ地！』垦狸！！垡：Ｑ！！！！竺！Ｑ！！，！！！：！！：堕！：！Ｑ
ｌｙ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ＡＬＴ ｌｅｖｅｌ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ（Ｆ＝３３．９，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＴＢＩＬ ｏｎ ｄａｙ １ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ（２７．０±３．７），（４８．５．４－７．５）ａｎｄ（５９．０±１１．５）¨ｍｏＬ／Ｌ，ｒｅ． ｓｐｅｅｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＴＢＩＬ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ＭＦＬ ａｎｄ ＳＦＬ ｇｒｏｕｐｓ．Ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＤＡ ａｎｄ ＴＮＦ—Ｏｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ７
ｔｅｒ
６
ａｎｄ １０ ｗｅｅｋｓ ｈ Ｊｉｇｈ—ｆａｔ ｆｅｅｄｉｎｇ．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＡＬＴ
ｏｎ
ｄａｙ １ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｆ ６１４．５±
７０．６），（１ １７７．５±１５０．９）ａｎｄ（１ ４７６．５±２１１．５）Ｕ／Ｌ
ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ，ＭＬＦ ａｎｄ ＳＬＦ ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ－
ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ｔｏｔａｌ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ（ＴＢＩＬ）ａｎｄ ｔＩｌｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）， ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ８ ｒａｔｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ
ｋｅｐｔ ｆｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄａｔａ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｙ ＡＮＯＶＡ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ＬＳＤ ｔｅｓｔｓ．Ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒ— ｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｇ—ｒａｎｋ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｍｏｄｅｒａｔｅ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｄｅｇｒｅｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆ－
ｃａｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
ｂｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｅｓｔａｂ．
１ｉｓｈｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｄｉｅｔ ｆｅｅｄｉｎｇ，ｗｈｉｃｈ ｓｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｅ— ｉｎｇ，ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ
３．标本收集和检测指标：（１）３组大鼠术后１ ｄ各 取４只大鼠，１０％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后，从肝 下下腔静脉取血，并取肝脏组织标本。３组各剩余的８ 只大鼠观察术后生存情况。（２）血清指标：全自动化
学分析仪酶法测定各组大鼠肝移植术后血清谷丙转氨
供肝，对于这类边缘性供肝，用还是不用是很多移植外 科医生的两难选择。与正常的肝脏比较，脂肪肝对缺
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３０， Ｃｈｉｎａ（Ｚｈａｎｇ ＹＣ，Ｔａｎｇ Ｈ，Ｙａｏ Ｊ，Ｚｅｎｇ ＫＮ，Ｙａｎｇ Ｙ，Ｃｈｅｎ ＧＨ）；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓ“ｒｇｅ可，ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３０，Ｃｈｉｎａ（Ｘｕ ＳＬ）；Ｂｉｏ—ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ，ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３０，Ｃｈｉｎａ（Ｃｈｅｎｇ ＪＴ， Ｚｈａｎｇ Ｑ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：№昭№ｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｙｙｓｙｓｕ＠１６３．ｅｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｗｅ ｔｒｙ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｒａｔ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ
ａ
ｎｏｖｅｌ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｈｕｉ，Ｘｕ Ｓｈｉｌｅｉ，Ｃｈｅｎｇ
ｎｏｎａｉｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｇｒａｆｔ Ｋａｉｎｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ
Ｙｉｎｇｃａｉ，死ｎｇ
Ｊｉｎｔａｏ，Ｙａｏ胁，ｚｅ凡ｇ
Ｑｉ，％昭№昭，
Ｃｈｅｎ Ｇｕｉｈｕａ Ｌｉｖｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ
ｒａｔｓ（７／８）ｓｕｒｖｉｖｅｄ ｆｏｒ （１／８）ｉｎ ＳＬＦ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅ
ｒａｔｓ
ｏｖｅｒ
ｏｎｅ
ｗａｓ
ｗｅｅｋ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｈｉｌｅ ｏｎｌｙ ３ ｒａｔｓ（３／８）ｉｎ ＭＬＦ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ １ ｒａｔｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ Ｔｈｅ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ
Ｃｉｔｙ（１５８１０００７６，２０１４０００００００１—３）
临床肝移植发展历史已超过５０年，但供肝短缺的
０．５）ｍｉｎ，冷缺血时问为（７０ ４－１３）ｍｉｎ，无肝期时间为 （１７±５）ｍｉｎ。
难题一直无法解决。为了增加供肝来源，活体肝移植、 劈裂式肝移植、多米诺肝移植和边缘性供肝等策略被
广泛采用¨引。’脂肪供肝是临床最常见的一种边缘性
ｓｉｍｉｌａｒ
ｔｏ
ｔｈｅ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｈｕａｎ，ａｎｄ
ｔｏ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ
ｔｈｅ ｇｒａｆｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｆｔｅｒ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ－
ｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｒａｔｓ，ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ ｆｒｏｍ ４０ ｔｏ ５０ ｇ，ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｈｉｇｈ— ｆａｔ ｄｉｅｔ ｆｅｅｄｉｎｇ．Ｌｅｗｉｓ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔ ｃｈｏｗ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｃｈｏｗ ｉｎ ｍｏｄｅｒａｔｅ ｆａｔｔｙ
主堡塞堕２Ｅ型苤盛！！！！生！！旦筮！！鲞筮！！塑堡！也』垦翌！！垡：Ｑ！堕！笪！！！鱼：！！！：！！：盟！：！！
・２４２１・
・动物模型・
大鼠脂肪供肝肝移植模型的建立
张英才 唐晖许世磊
程锦涛姚嘉
曾凯宁
张琪杨扬
陈规划
作者单位：５１０６３０广州，中山大学附属第三医院肝移植科（张英才、唐晖、姚嘉、
曾凯宁、杨扬、陈规划），普通外科（许世磊），生物治疗中心（程锦涛、张琪） 通信作者：杨扬，Ｅｍａｉｌ：ｙｙｓｙｓｕ＠１６３．ｃｏｒｎ
ＬｅｗБайду номын сангаасｓ
ｌｉｖｅｒ（ＭＦＬ）ｇｒｏｕｐ ｆｏｒ ６ ｗｅｅｋｓ，ａｎｄ ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｃｈｏｗ ｉｎ ｓｅｖｅｒｅ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ（ＳＦＬ）ｇｒｏｕｐ ｆｏｒ １０ ｔｉｖｅｌｙ．Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）ｒａｔｓ，８—１０ ｗｅｅｋｓ ｏｆ ａｇｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｉｎｇ ２５０—３５０ ｇ，ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ
ｗｅｅｋｓ ｒｅｓｐｅｃ－
ａｓ
ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ．
Ａｌｌ ａｎｉｍａｌｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｆｒｅｅ ａｃｃｅｓｓ ｔｏ ｗａｔｅｒ．Ａｆｔｅｒ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｒａｔｓ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔ ｃｈｏｗ．Ｆｏｕｒ ｒａｔｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｐｕｔ ｔｏ ｄｅａｔｈ ｏｎ ｄａｙ １ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ａｌａｎｉｎｅ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）一ｄ ｉｎ ｇｒａｆｔｅｄ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．１０．０５３ 【摘要】 目的建立一种模拟人脂肪供肝的大鼠模型，评估其行肝移植术后的效果。方法
通过高脂饲料饮食建立大鼠中重度脂肪肝模型，采用Ｌｅｗｉｓ大鼠作为脂肪肝供体，３６只Ｌｅｗｉｓ大鼠， 体重为４０—５０ ｇ，随机分为对照组、中度脂肪肝组和重度脂肪肝组，各１２只。Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）大 鼠做为受体，利用改良的“二袖套法”进行大鼠原位肝移植手术。各组于术后１ ｄ均取４只大鼠，留 取血清和肝脏标本检测血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、总胆红素（ＴＢＩＬ）的水平，移植肝组织丙二醛 （ＭＤＡ）、肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ一仅）的水平，观察各组其余的８只大鼠术后生存情况。３组大鼠计数 资料的多重比较采用单向方差分析，大鼠生存分析的比较采用Ｋａｐ｜ａｎ－Ｍｅｉｅｒ法和Ｌｏｇ－ｒａｎｋ检验。结 果经过６周和１０周的高脂饲料喂养后，Ｌｅｗｉｓ大鼠肝细胞的脂肪变程度分别达到中度和重度脂肪 肝的水平。２对照组、中度脂肪肝组和重度脂肪肝组肝移植术后１ ｄ的ＡＬＴ分别为（６１４．５±７０．６）、 （。１ １７７．５±１５０．９）、（１ ４７６．５±２１１．５）Ｕ／Ｌ，３组间两两比较差异有统计学意义（Ｆ＝３３．９，Ｐ＜０．０１）。 ＴＢＩＬ分别为（２７．０±３．７）、（４８．５±７．５）、（５９．０±１１．５）¨ｍｏＬ／Ｌ，与对照组比较，中度和重度脂肪肝 组ＴＢＩＬ水平明显升高，３组间两两比较差异有统计学意义（Ｆ＝１５．７，Ｐ＜０．０１）。肝组织ＭＤＡ和 ＴＮＦ—Ｏｔ水平也观察到类似的结果。３组大鼠肝移植术后１周的生存率分别为８７．５％（７／８）、３７．５％ （３／８）和１２．５％（１／８）。结论高脂饲料喂养大鼠可较好地模拟人脂肪肝的发展过程，为临床脂肪 供肝肝移植提供一种较好的动物研究模型。
究离不开相应的动物模型实验，本研究旨在建立一种
湿肝，低温下制成１０％肝匀浆，离心后取上清液
０．１
最大限度模拟人脂肪肝的大鼠模型，并评估其肝移植 术后的效果，为后期的临床脂肪供肝肝移植相关研究
血再灌注损伤更为敏感，移植术后原发性肝无功能和 胆道并发症的发生率明显升高。如何预防和减少脂肪
酶（ＡＬＴ）和总胆红素（ＴＢＩＬ）的水平。（３）氧化损伤指 标：按试剂盒说明采用硫代巴比妥酸法测丙二醛
（ＭＤＡ）含量。（４）肝组织细胞因子：每只大鼠取０．５
ｇ
供肝移植术后的缺血再灌注损伤和免疫损伤，提高脂 肪供肝的利用率是肝移植的研究热点之一。而这些研
【关键词】非酒精性脂肪肝；大鼠；肝移植
基金项目：国家自然科学基金（８１３７０５７５、８１５７０５９３）；广东省自然科学基金研究团队项目 （２０１５Ａ０３０３１２０１３）；广州市科技计划健康医疗协同创新重大专项（１５８１０００７６、２０１４０００００００１－３）
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ
Ｚｈａｎｇ
ａｎ
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
ｉｄｅａｌ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ； Ｒａｔ；Ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（８１３７０５７５、８１５７０５９３）；Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（２０１５Ａ０３０３ １２０１３）；Ｓｃｉ—ｔｅｃｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ