有机荧光探针及其生物学研究中的应用
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PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进 程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法
常用的探针：TaqMan荧光探针 ，SYBR荧光染料
二：荧光原位杂交 ：荧光原位杂交技术原理是将DNA探针
用生物素和毛地黄毒苷等荧光染料标记，然后将标记的探针直接原位杂 交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与 探针分子特异结合，通过荧光杂交信号来检测DNA序列在染色体或DNA 纤维上的定位、定性、相对定量分析。
细胞表面特征的检测: 细胞表面通常表达大Biblioteka Baidu的分子，如：CD分
子，细胞因子受体等分子，这些分子在不同的细胞表达的种类和数量是 不同的，从而不同的细胞有着不同的表面分子表达谱，因此可以用相应 的有机荧光探针对细胞表面的分子进行标记，或者用细胞表面的分子的 单克隆抗体的荧光探针进行标记，从而实现对细胞表面特征的检测。如 NK细胞表面的CD56分子，T细胞表面的CD3分子，CD40L分子等
PH值测定：Xiaojun
Peng 研究组设计合成了 一个BODIPY类pH荧光 探针，该探针具有很好 的化学稳定性，检测范 围为pH7.6一9.4, 荧光强 度随pH变化15倍之多， 而且有很好的水溶性，
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2.免疫学应用
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• 免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，将已知的抗原或者抗 体标记上荧光探针，再用这种带有荧光探针的抗原或者抗体作为分子 探针去检测组织内的抗体或者抗原，然后用相应的荧光采集器检测荧 光，从而确定抗原或者抗体的位置，性质，甚至可以辅以定量检测技 术，定量检测抗原或者抗体。
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• 以上概述了部分类型的有机荧光探针及在生物 学研究中的应用情况，其实它的应用远不止于此。 随着荧光探针技术的不断发展和完善,必然会给目 前较为热门的基因组学、蛋白质组学、生物芯片以 及等药物作用机制等领域带来新的发展契机,提供 非常有价值的方法和信息。
谢谢各位
0944001陈荣 0944002黄洋洋 0944003洪珍英 0944004蒋潇楠
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有机荧光探针及其生物学研究中的应用
金属离子检测、PH值测定 免疫学应用 核酸检测 细胞学应用
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1.金属离子检测、PH值测定
金属离子检测:以Cd2+荧光探针为例。Xiaojun
Peng研究组合成了一个能专识别Cd2+离子的荧光探 针，该探针具有较好的细胞穿透性，并且首次被应用 于活体细胞内Cd2+的检测，其机理为分内电荷转移 机理(IcT)。探针的最大发射波长为656nm与Cd2+络 合后蓝移至597nln，而Zn2+及其它金属离子没有干 扰
4.细胞学应用
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• 荧光探针是一种极好的生物分子传感器,具备灵敏度高反应时间迅速等
特点，特别是在检测小分子等方面，近年来在细胞学检测中应用十分
广泛。
细胞凋亡的检测 : 活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，
水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。 在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的 AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定 caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度
。目前最为常用的有机荧光探针为异硫氰酸荧光素（FITC），橙黄色，性 质稳定，可保存两年以上，最大吸收光谱为490-495nm，最大发射光 谱为520-530nm，
3.核酸检测
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• 近年来，随着分子生物学的飞速发展，有机荧光探针在核酸的检测中 发挥着重要的作用。
一：荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在
常用的探针：TaqMan荧光探针 ，SYBR荧光染料
二：荧光原位杂交 ：荧光原位杂交技术原理是将DNA探针
用生物素和毛地黄毒苷等荧光染料标记，然后将标记的探针直接原位杂 交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与 探针分子特异结合，通过荧光杂交信号来检测DNA序列在染色体或DNA 纤维上的定位、定性、相对定量分析。
细胞表面特征的检测: 细胞表面通常表达大Biblioteka Baidu的分子，如：CD分
子，细胞因子受体等分子，这些分子在不同的细胞表达的种类和数量是 不同的，从而不同的细胞有着不同的表面分子表达谱，因此可以用相应 的有机荧光探针对细胞表面的分子进行标记，或者用细胞表面的分子的 单克隆抗体的荧光探针进行标记，从而实现对细胞表面特征的检测。如 NK细胞表面的CD56分子，T细胞表面的CD3分子，CD40L分子等
PH值测定：Xiaojun
Peng 研究组设计合成了 一个BODIPY类pH荧光 探针，该探针具有很好 的化学稳定性，检测范 围为pH7.6一9.4, 荧光强 度随pH变化15倍之多， 而且有很好的水溶性，
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2.免疫学应用
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• 免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，将已知的抗原或者抗 体标记上荧光探针，再用这种带有荧光探针的抗原或者抗体作为分子 探针去检测组织内的抗体或者抗原，然后用相应的荧光采集器检测荧 光，从而确定抗原或者抗体的位置，性质，甚至可以辅以定量检测技 术，定量检测抗原或者抗体。
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• 以上概述了部分类型的有机荧光探针及在生物 学研究中的应用情况，其实它的应用远不止于此。 随着荧光探针技术的不断发展和完善,必然会给目 前较为热门的基因组学、蛋白质组学、生物芯片以 及等药物作用机制等领域带来新的发展契机,提供 非常有价值的方法和信息。
谢谢各位
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金属离子检测、PH值测定 免疫学应用 核酸检测 细胞学应用
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1.金属离子检测、PH值测定
金属离子检测:以Cd2+荧光探针为例。Xiaojun
Peng研究组合成了一个能专识别Cd2+离子的荧光探 针，该探针具有较好的细胞穿透性，并且首次被应用 于活体细胞内Cd2+的检测，其机理为分内电荷转移 机理(IcT)。探针的最大发射波长为656nm与Cd2+络 合后蓝移至597nln，而Zn2+及其它金属离子没有干 扰
4.细胞学应用
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• 荧光探针是一种极好的生物分子传感器,具备灵敏度高反应时间迅速等
特点，特别是在检测小分子等方面，近年来在细胞学检测中应用十分
广泛。
细胞凋亡的检测 : 活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，
水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。 在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的 AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定 caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度
。目前最为常用的有机荧光探针为异硫氰酸荧光素（FITC），橙黄色，性 质稳定，可保存两年以上，最大吸收光谱为490-495nm，最大发射光 谱为520-530nm，
3.核酸检测
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• 近年来，随着分子生物学的飞速发展，有机荧光探针在核酸的检测中 发挥着重要的作用。
一：荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术，是指在