马铃薯茎尖组织培养

马铃薯茎尖组织培养
催芽：
市售马铃薯，放入恒温培养箱于24℃下进行为期一周的催芽培养
芽尖的切取及接种：
从马铃薯上取生长健壮的芽，自来水冲洗5 min，置于5％的次氯酸钠溶液浸泡15 min，再于75％的酒精中浸泡20 s，然后用无菌水冲洗3-5次，迅速在40倍体视显微镜下切取合适长度的茎尖，接种于诱导分化培养基上。

(在现有培养条件下，茎尖切取控制长度在1.0-1.5mm，带有3～4个叶原基可以取得成活率与不带毒的相对平衡。

) 将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上，加几滴蒸馏水保持吸水纸湿润。

每次消毒的芽不要太多，以防放置时间过长，茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。

在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟，然后关闭紫外线灯，打开风机。

实验前换专用服装，双手用75％酒精擦拭消毒，取消毒处理过的芽，以无菌镊子固定，在30一40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。

用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织，暴露出顶端圆滑的生长点，用解剖针切取0．1～o．3mm，带有1～2个叶原基。

茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织，解剖镜光源要用冷光源照明。

切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上，切面接触琼脂，置于培养室进行离体培养。

外植体的培养：
将接种好的培养皿用封口膜封好，置于恒温光照箱中进行培养，培养条件为28℃，空气相对湿度70%，每天光照16h，光照强度>2000 Ix。

形成团状的愈伤组织后，继续培养至根、芽分化后，及时移植于三角瓶中培养。

基础培养基：
采用MS培养基。

植物激素使用的浓度很低．因此，预先配置成500 mg／L浓度的溶液，由于植物激素太多不溶于水，另外有些激素在水中不稳定，因此有着较特殊的配置方法，具体如下：IAA从和NAA先用少量95％乙醇溶解，再用蒸馏水定容至规定体积。

2，4-D先用2 mol ／L的NaOH溶液充分溶解，然后用蒸馏水缓慢定容。

KT及6-BA先用l mol／L的HCl溶解后再用蒸馏水定容。

GA3的水溶液稳定性较差，一般用95％乙醇溶解后备用。

诱导培养基组分：MS+ KT0.5mg／L+ NAA 0.1mg/L + GA3 0.2mg/L(多组比较选择得到)
参考文献：
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【5】王会志. 马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点[J]. 吉林农业, 2010 (9): 73-73.
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