固定化酶法制备葡萄糖酸钙的研究
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油 脂 自动 氧 化 是 自由基 链 反 应 ，而 自 由基 的 高 反
应活性可 导致机体损伤 、细胞破坏 、人 体衰老等 。油 脂氧 化 过程 中产 生的过 氧 化脂 质 ， 能导 致食 品 的外 观 、质 地和 营 养质 量变 劣 ，甚 至会 产 生 致突 变 物质
。
［］ Ｂ ｎｉ ＦＳｒｉ ＪＪＴ ｅｆｒｉ ｒｄ ｃｎ ｂｌｙｏ ｌｓ Ｆ ＡＰ ２ ｅ ｚｅ ，ｔ ｎ ． ｈ ｅｒ ｅｕ ｉｇａｉｔ ｆ ａｍａ（Ｒ ） Ｉ ａ ｃ ｉ ｐ ａ ａｕ ｅｏ ’ ｎｉｘｄ ｎ ｏ ｒ：ｈ Ｒ ｓａ ［］ Ａ ａ ｓａｍｅｓ ｒ Ｐ ａ ｔ ｉａ ｔ ｗｅ’ ｔｅＦ ＡＰ ａｓｙＪ． ｎ ｌ ｏ ｐ ’ Ｂｉｃｅ １９ ， ３ （）７ —６ ｏｈ ｍ， ９ ６ ２ ９ １： ０７ ． 【】 Ｒ ， ｅｅ ｍｉ Ｐ ｏｇ ｅｔＡ， ｔ １Ａ ｔ ｘｄｎ ｃｉｉ ｐ ｌｉｇ ３ ｅＲ Ｐ ｌ ｇ ｒｅｇｎｅ ｅ ａ． ｎｉ ｉａｔ ｔ ｔ ａ ｐｙｎ ｌ Ｎ， ｏ ａ ｖｙ
艺较 复
。固定化酶 法通过 简单 过滤 即可重复使 液 ，再 加 Ｈ０ ） ，ＮＡ 。 计算 相 对 酶 活性 。 ２ ，
用 ， 不 仅 降 低 了 生 产 成本 ， 而 且 引 入 杂 质 少 ， 提 高 了 ３ 结果
． Ｇ０Ｄ和 Ｉ ＡＴ的 回 收 率 Ｃ 产 品 纯度 。 本 文研 究 用 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧化 ３１ Ｉ
作 者简介 ：杜婵娟 （ ９４ ），女，广西南 宁人 ，硕士研究生 ，研究 方向为微生物生物技术 ，Ｅ ｍａ ：８ ６ ９ ７ ｑｃ ｍ １８ 一 ｉ７ ９ ０ ８＠ｑ ． １ ｏ
通 讯 作 者 ：谢 庆 武 （ ９ ９ ） ， 男 ， 副研 究 员 ， ＥｍａｌＸＱ ＠ ｇｕｅ ｕｃ １５一 — ｉ ： Ｗ ｘ． ． ｄ ａ
生产葡萄糖酸钙的方法有发酵法 、化学法和酶法 ，其 固定化酶），１０ ３ ２ ０％ Ｈ０ ，２ ２２ ８℃振荡反应４ ｎ ｍｉ，
中发 酵 法 使 用 较 为 普 遍 ，但 是 生 产 成 本 较 高 ，纯 化 工 Ｊ ６ ０ｇ ３ ０ Ｌ ８％ Ｈ Ｓ ４ Ｈ ２Ｏ 终止反应 （ 照管先） Ｈ Ｓ ４ 对 Ｊ ２Ｏ 溶 Ｈ
ｉ ｍｍｏ ｉｚ ｄｇｕ ｏｅ ｘｄｓ Ｉ Ｏ ａｄｔｅｉ ｂｌ ｅ ｌｃ ｓ ｉａｅ（ Ｄ） ｎ ｉ ｏ Ｇ ｈ ｍｍｏ ｉｚｄｃｔｌ ｅ（ Ａ ） ｅｅｕｅ ａ ｌ ｅ ｈ ｒｄ ｃ ｏ ｆ ｂｌ ｅ ａ ａ Ｉ Ｔ ｗ ｒ ｓｄｔ ｃｔ ｙ ｅ ｏ ｕｔ ｎｏ ｉ ａｓ Ｃ ｏ ａｚｔ ｐ ｉ
氢 酶制备葡萄糖酸钙的方法 ，以探索一种纯度 高、成 本低 的葡萄糖酸钙 生产方法 。
１材 料
分别取５ ０ ５ Ｏ ５ｍ 活化壳聚糖载体 ， ，１ ，１ ，２ ，２ ｇ 再 分别 加入 ５ ０ ｇ 粗 酶液 ，反应 结束后 分别测 定上 ０ Ｌ 清 液和 固定 化酶 的酶 活性 ，结 果表 明 ，壳聚糖 载体
Ｐｒ ｐａ ａ ｉ ｎ Ｓ ｕ ｎ Ｃａ ｃｕｍ ｌ ｃ ｎａ ｅｂｙＩ ｍ ｏ ｌ ｅ ｚ ｍ ｅ ｅ ｒ ｔｏ ｔ ｄｙｏ ｌｉ Ｇ ｕ ｏ ｔ ｍ ｂｉ ｚ ｄ Ｅｎ ｙ ｉ ｓ
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［】 阚建 全 ． 品化 学 【 ． 京 ： Ｎ￣ ，大 学 出版 社 ，２ ０ ： １１１２ ５ 食 ＭＪ北 中 ｔ ｋ ０２ ２ —２ ．
【］ Ｙ ｎ ， ｉ Ｌ Ｋ， ｔ １ Ｓ ｎ ｒ ｉ ｉ ｎｉｘ ｄ ｎ ｃｉｉ ｅ ６ ａ ｇＷ Ｊ Ｌ Ｄ ｉ ｅ ． ｙ ｅｇｓ ｃａ ｔ ｉ ａ ｔ ｔ ｔ ｓ Ｊ ａ ｔ ｏ ａ ｖｉ ｏ ｉｈ ｒｄｔ ｎ ｌ ｈ ｎ ｓ ｅｂ ｐ ｉ ［ ． ｉｌ ｈ ｒ Ｂ ｌ ２ ０ ， ｆ ｇ ｔ ａ ｉ ｏ ａ ｉｅ ｅｈ ｒ ａｒ Ｊ Ｂ ｏ ａ ｍ ｕｌ ０ ９ ｅ ｔ ｉ Ｃ ｓ］ Ｐ ，
力 、清 除ＡＢＴ 由基 能 力 以及 油 脂 抗 氧 化 试 验 其 中 Ｓ自
品 科 学 ，２ ０ ，２ （ １ ： ８ 培６ ０８ ９ １） ４
筛 选 效 果 较 好 的 段 。结 果 表 明 白芍 提 取 物 的 不 同极 性 段 物 质 均 具 有 抗 氧 化 活 性 ， 其 中 乙酸 乙 酯 极 性 段 物 质
ａ ｍｐ ｏ ｅ ｎ ｉ ｒ ｖ ｄＡＢＴ ａ ｉａ ａ ｉｎ ｄ ｃ ｌ ｒ ａｉ ｎ ａ ｓ ｙ Ｊ． ｒ ｅ Ｓ ｒ ｄ ｃ ｌｃ ｔ ｅ ｏ ｏ ｉ ｔ ｓ ａ ［］ Ｆ ｅ ｏ ｚ ｏ Ｒ ｄｃ ｏ Ｍｅ ， ９ ９ ２ （ —Ｏ ： ２ １ １ ３ ． ａ ｉ Ｂｉｌ ｄ １ ９ ， ６９ １ ） １ ３ — ２ ７
食 品与药 品
Ｆ ｏ ｎ ｕ ｏ ｄａ ｄＤｒｇ
２ １ 年第 １ 卷第 ０ 期 ０１ ３ ９
３５ ２
固定 化酶 法 制 备 葡 萄糖 酸 钙 的研 究
杜 婵 娟 ，李 永 恒 ，谢 庆 武
（ 西大 学生命科学与技术 学院，广西 南 宁 ５００ ） 广 ３ ０ ４
摘 要 ：目的 用 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 制 备 葡 萄 糖 酸 钙 。方 法 将 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 共 价 同 定 到 经 戊 二 醛 预 处 理 的 壳 聚 糖 上 ，用 所 得 固 定 化 酶 催 化 葡 萄 糖 转 化 为 葡 萄 糖 酸 钙 。结 果 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 的 回 收 率 分 别 为 Baidu Nhomakorabea
ｂｅｌｗ ｅ． ｏ ｒ
Ｋ ｅ ｏ ｄｓ ｉ ｙＷ ｒ ： ｍｍ ｏ ｉｉａｉ ｎ ｇｌｃ ｓ ｘ ｄ ｓ ； ａ ａａ ｅ ｃ ｌ ｉｍ ｌ ｃ ｎ ｔ ｂ ｌ ｔｏ ； ｕ ｏ ｅｏ ｉ ａ ｅ ｃ ｔｌ ｓ ； ａｃ ｕ ｇ ｕ ｏ ａ ｅ ｚ
收 稿 日期 ： ２ １－４Ｏ ０ １０ ．１
和Ｃ Ｔ Ａ 的黑曲霉菌株 中提取 ，其他试剂均为分析纯 。
２ 方 法 ２１ ＧＯＤ和 ＣＡ 粗 酶液 的制 备 ． Ｔ
葡 萄糖 氧化酶 （ ｌｃ ｓ ｘｄｓ ，Ｏ Ｄ）和过氧 分别为 １ 和 １ 以上时 ，Ｉ Ｏ ｇｕ ｏｅｏ ｉａｅ Ｏ ０ｍｇ ５ｍｇ Ｇ Ｄ和Ｉ Ａ 的回收率 Ｃ Ｔ
化 氢 酶 （ａＭａｅ Ｃ Ｔ 从 本 实 验 室 保 藏 的 产 ＧＯ 都 已较 高 且 基 本 稳 定 。综 合 考 虑 这 ２ 酶 的 固 定 化 效 ｃｔ ｓ ， Ａ ＞ Ｄ 种
３ （ ） １ ２１１ ２６ ２６： ０ —０
表现 出最强 的总还 原能力 、ＡＢ Ｓ 自由基 清除能 力和 Ｔ
３６ ２
食 品与 药 品
Ｆ ｏ ｎ ｒ ｇ ｏ ｄａ ｄＤ ｕ
２ １ 年 第 １ 卷 第 ０ 期 ０１ ３ ９
葡 萄糖 酸 钙 的 用 途 非 常 广 泛 。作 为 药 物 ，可 降低 葡 萄 糖 含 量 ，计 算 相对 酶 活性 。 毛 细 血 管 渗 透 性 ，维 持 神 经 与 肌 肉 的正 常 兴 奋 性 ，加 固 定 化 酶 回 收 率 （ ）＝ （ 定 化 酶 总 活 性 ／ ％ 固 游
本 研 究 室 前 期 的 实 验 研 究 表 明 ， 白芍 具 有 较 强
的 自 由 基 清 除 的 能 力 。 本 研 究 以 此 为 基 础 ， 将 白芍
提 取 物 分 为 极 性 不 同 的 ５ 物 质 ，通 过 测 定 总 还 原 能 ［］ 黄 科 礼 ，黄 儒 强 ．Ｉ 子 提 取 物 对 油 月抗 氧 化 作 用 的研 究 ［Ｊ食 段 ４ 【稔 Ｊ 旨 Ｊ．
其次为氯仿段 、正丁醇段 ， 水段和石油醚 段表现 出的 抗动植物油脂氧化 能力。
抗 氧 化 能力 相 似 ，最 弱 。
４ 讨 论
参 考 文 献
［］ 苏 玮 ，郭 群 ． １ 白芍 的现 代 药 理 研 究 概 况 ［Ｊ中 医 药 信 息 ， １９ ， Ｊ＿ ９ ６
１ （０ ３ ０ ４） ： ９ ｌ ． 一 １
ｏ ｉａ ｅ （ ｘ ｄ ｓ ＧＯＤ）ａ ｄ ｃ ｔｌｓ ｎ ａａａ ｅ（Ｃ ）ｗｅｅ ｃ ｖ ｌｎ ｌ ｍｍｏ ｉ ｚ ｄ ｏ ｌｔｒ ｌｅ ｙ ｅｐ ｅｒ ａｅ ｈｔ ｓｎ Ｔ ｅ ＡＴ ｒ ｏ ａｅ ｔ ｉ ｙ ｂ ｌ ｅ ｎ ｇｕ ａａｄ ｈ ｄ — ｒｔｅ ｔｄ ｃ ｉ ａ ． ｈ ｉ ｏ
８． ６９％和５ ． ４３％；反复用该 固定化 酶制备葡萄糖酸钙４ 次后 ，其酶活 性还 分别剩余２ ． ６５％和２ １％。结 论 用 同定化酶法制备
葡 萄糖 酸 钙 ，可 提 高 产 品 纯度 ， 降 低 成 本 。
关键 词：固定化 ；葡萄糖氧 化酶；过氧化氢酶 ；葡 萄糖酸钙
中 图 分 类 号 ：Ｒ ７ ． ９９ ５ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章编 号 ： １ ７ ．７ Ｘ （０ １ ９０ ２ —３ ６ ２９ ９ ２ １ ）０ －３ ５０
强 心 肌 收 缩 力 ，促 进 骨 骼 和 牙 齿 钙 化 ；作 为 食 品添 加 离 酶 总 活 性 ） ×１ ０％ ０ 剂 ， 可 用 作 缓 冲 剂 、 固 化 剂 、 螯 合 剂 、 营 养 增 补 剂 ２４２ Ａ 活 性 测 定 参 考 杨 兰 芳 ［的方 法 。取 ９ ０ｇ ． Ｃ Ｔ ． ４ ０ Ｌ 等 ，还 可 添 加 至 饮 料 、谷 类 和 谷 类 制 品 中 。 目前 国 内 ｐ ．，０２ｍｏ Ｌ 酸 缓冲 液 ， １０ｇ 酶 液 （ 适 量 Ｈ ７８ ． ｌ磷 ／ ０ Ｌ 或
油 脂 自动 氧 化 是 自由基 链 反 应 ，而 自 由基 的 高 反
应活性可 导致机体损伤 、细胞破坏 、人 体衰老等 。油 脂氧 化 过程 中产 生的过 氧 化脂 质 ， 能导 致食 品 的外 观 、质 地和 营 养质 量变 劣 ，甚 至会 产 生 致突 变 物质
。
［］ Ｂ ｎｉ ＦＳｒｉ ＪＪＴ ｅｆｒｉ ｒｄ ｃｎ ｂｌｙｏ ｌｓ Ｆ ＡＰ ２ ｅ ｚｅ ，ｔ ｎ ． ｈ ｅｒ ｅｕ ｉｇａｉｔ ｆ ａｍａ（Ｒ ） Ｉ ａ ｃ ｉ ｐ ａ ａｕ ｅｏ ’ ｎｉｘｄ ｎ ｏ ｒ：ｈ Ｒ ｓａ ［］ Ａ ａ ｓａｍｅｓ ｒ Ｐ ａ ｔ ｉａ ｔ ｗｅ’ ｔｅＦ ＡＰ ａｓｙＪ． ｎ ｌ ｏ ｐ ’ Ｂｉｃｅ １９ ， ３ （）７ —６ ｏｈ ｍ， ９ ６ ２ ９ １： ０７ ． 【】 Ｒ ， ｅｅ ｍｉ Ｐ ｏｇ ｅｔＡ， ｔ １Ａ ｔ ｘｄｎ ｃｉｉ ｐ ｌｉｇ ３ ｅＲ Ｐ ｌ ｇ ｒｅｇｎｅ ｅ ａ． ｎｉ ｉａｔ ｔ ｔ ａ ｐｙｎ ｌ Ｎ， ｏ ａ ｖｙ
艺较 复
。固定化酶 法通过 简单 过滤 即可重复使 液 ，再 加 Ｈ０ ） ，ＮＡ 。 计算 相 对 酶 活性 。 ２ ，
用 ， 不 仅 降 低 了 生 产 成本 ， 而 且 引 入 杂 质 少 ， 提 高 了 ３ 结果
． Ｇ０Ｄ和 Ｉ ＡＴ的 回 收 率 Ｃ 产 品 纯度 。 本 文研 究 用 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧化 ３１ Ｉ
作 者简介 ：杜婵娟 （ ９４ ），女，广西南 宁人 ，硕士研究生 ，研究 方向为微生物生物技术 ，Ｅ ｍａ ：８ ６ ９ ７ ｑｃ ｍ １８ 一 ｉ７ ９ ０ ８＠ｑ ． １ ｏ
通 讯 作 者 ：谢 庆 武 （ ９ ９ ） ， 男 ， 副研 究 员 ， ＥｍａｌＸＱ ＠ ｇｕｅ ｕｃ １５一 — ｉ ： Ｗ ｘ． ． ｄ ａ
生产葡萄糖酸钙的方法有发酵法 、化学法和酶法 ，其 固定化酶），１０ ３ ２ ０％ Ｈ０ ，２ ２２ ８℃振荡反应４ ｎ ｍｉ，
中发 酵 法 使 用 较 为 普 遍 ，但 是 生 产 成 本 较 高 ，纯 化 工 Ｊ ６ ０ｇ ３ ０ Ｌ ８％ Ｈ Ｓ ４ Ｈ ２Ｏ 终止反应 （ 照管先） Ｈ Ｓ ４ 对 Ｊ ２Ｏ 溶 Ｈ
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氢 酶制备葡萄糖酸钙的方法 ，以探索一种纯度 高、成 本低 的葡萄糖酸钙 生产方法 。
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分别取５ ０ ５ Ｏ ５ｍ 活化壳聚糖载体 ， ，１ ，１ ，２ ，２ ｇ 再 分别 加入 ５ ０ ｇ 粗 酶液 ，反应 结束后 分别测 定上 ０ Ｌ 清 液和 固定 化酶 的酶 活性 ，结 果表 明 ，壳聚糖 载体
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品 科 学 ，２ ０ ，２ （ １ ： ８ 培６ ０８ ９ １） ４
筛 选 效 果 较 好 的 段 。结 果 表 明 白芍 提 取 物 的 不 同极 性 段 物 质 均 具 有 抗 氧 化 活 性 ， 其 中 乙酸 乙 酯 极 性 段 物 质
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食 品与药 品
Ｆ ｏ ｎ ｕ ｏ ｄａ ｄＤｒｇ
２ １ 年第 １ 卷第 ０ 期 ０１ ３ ９
３５ ２
固定 化酶 法 制 备 葡 萄糖 酸 钙 的研 究
杜 婵 娟 ，李 永 恒 ，谢 庆 武
（ 西大 学生命科学与技术 学院，广西 南 宁 ５００ ） 广 ３ ０ ４
摘 要 ：目的 用 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 制 备 葡 萄 糖 酸 钙 。方 法 将 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 共 价 同 定 到 经 戊 二 醛 预 处 理 的 壳 聚 糖 上 ，用 所 得 固 定 化 酶 催 化 葡 萄 糖 转 化 为 葡 萄 糖 酸 钙 。结 果 固 定 化 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 的 回 收 率 分 别 为 Baidu Nhomakorabea
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和Ｃ Ｔ Ａ 的黑曲霉菌株 中提取 ，其他试剂均为分析纯 。
２ 方 法 ２１ ＧＯＤ和 ＣＡ 粗 酶液 的制 备 ． Ｔ
葡 萄糖 氧化酶 （ ｌｃ ｓ ｘｄｓ ，Ｏ Ｄ）和过氧 分别为 １ 和 １ 以上时 ，Ｉ Ｏ ｇｕ ｏｅｏ ｉａｅ Ｏ ０ｍｇ ５ｍｇ Ｇ Ｄ和Ｉ Ａ 的回收率 Ｃ Ｔ
化 氢 酶 （ａＭａｅ Ｃ Ｔ 从 本 实 验 室 保 藏 的 产 ＧＯ 都 已较 高 且 基 本 稳 定 。综 合 考 虑 这 ２ 酶 的 固 定 化 效 ｃｔ ｓ ， Ａ ＞ Ｄ 种
３ （ ） １ ２１１ ２６ ２６： ０ —０
表现 出最强 的总还 原能力 、ＡＢ Ｓ 自由基 清除能 力和 Ｔ
３６ ２
食 品与 药 品
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２ １ 年 第 １ 卷 第 ０ 期 ０１ ３ ９
葡 萄糖 酸 钙 的 用 途 非 常 广 泛 。作 为 药 物 ，可 降低 葡 萄 糖 含 量 ，计 算 相对 酶 活性 。 毛 细 血 管 渗 透 性 ，维 持 神 经 与 肌 肉 的正 常 兴 奋 性 ，加 固 定 化 酶 回 收 率 （ ）＝ （ 定 化 酶 总 活 性 ／ ％ 固 游
本 研 究 室 前 期 的 实 验 研 究 表 明 ， 白芍 具 有 较 强
的 自 由 基 清 除 的 能 力 。 本 研 究 以 此 为 基 础 ， 将 白芍
提 取 物 分 为 极 性 不 同 的 ５ 物 质 ，通 过 测 定 总 还 原 能 ［］ 黄 科 礼 ，黄 儒 强 ．Ｉ 子 提 取 物 对 油 月抗 氧 化 作 用 的研 究 ［Ｊ食 段 ４ 【稔 Ｊ 旨 Ｊ．
其次为氯仿段 、正丁醇段 ， 水段和石油醚 段表现 出的 抗动植物油脂氧化 能力。
抗 氧 化 能力 相 似 ，最 弱 。
４ 讨 论
参 考 文 献
［］ 苏 玮 ，郭 群 ． １ 白芍 的现 代 药 理 研 究 概 况 ［Ｊ中 医 药 信 息 ， １９ ， Ｊ＿ ９ ６
１ （０ ３ ０ ４） ： ９ ｌ ． 一 １
ｏ ｉａ ｅ （ ｘ ｄ ｓ ＧＯＤ）ａ ｄ ｃ ｔｌｓ ｎ ａａａ ｅ（Ｃ ）ｗｅｅ ｃ ｖ ｌｎ ｌ ｍｍｏ ｉ ｚ ｄ ｏ ｌｔｒ ｌｅ ｙ ｅｐ ｅｒ ａｅ ｈｔ ｓｎ Ｔ ｅ ＡＴ ｒ ｏ ａｅ ｔ ｉ ｙ ｂ ｌ ｅ ｎ ｇｕ ａａｄ ｈ ｄ — ｒｔｅ ｔｄ ｃ ｉ ａ ． ｈ ｉ ｏ
８． ６９％和５ ． ４３％；反复用该 固定化 酶制备葡萄糖酸钙４ 次后 ，其酶活 性还 分别剩余２ ． ６５％和２ １％。结 论 用 同定化酶法制备
葡 萄糖 酸 钙 ，可 提 高 产 品 纯度 ， 降 低 成 本 。
关键 词：固定化 ；葡萄糖氧 化酶；过氧化氢酶 ；葡 萄糖酸钙
中 图 分 类 号 ：Ｒ ７ ． ９９ ５ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章编 号 ： １ ７ ．７ Ｘ （０ １ ９０ ２ —３ ６ ２９ ９ ２ １ ）０ －３ ５０
强 心 肌 收 缩 力 ，促 进 骨 骼 和 牙 齿 钙 化 ；作 为 食 品添 加 离 酶 总 活 性 ） ×１ ０％ ０ 剂 ， 可 用 作 缓 冲 剂 、 固 化 剂 、 螯 合 剂 、 营 养 增 补 剂 ２４２ Ａ 活 性 测 定 参 考 杨 兰 芳 ［的方 法 。取 ９ ０ｇ ． Ｃ Ｔ ． ４ ０ Ｌ 等 ，还 可 添 加 至 饮 料 、谷 类 和 谷 类 制 品 中 。 目前 国 内 ｐ ．，０２ｍｏ Ｌ 酸 缓冲 液 ， １０ｇ 酶 液 （ 适 量 Ｈ ７８ ． ｌ磷 ／ ０ Ｌ 或