第三章 原核生物的基因表达调控

2. 操纵子的基本组成
乳糖操纵子模型已被许多研究实验所证 实，对其有了更深入的认识，并且发现其他 原核生物基因调控也有类似的操纵子组织， 操纵子是原核基因表达调控的一种重要的组 织形式，大肠杆菌的基因多数以操纵子的形 式组成基因表达调控的单元。
下面就以乳糖操纵子为例子说明操纵子 的最基本的组成元件（elements）。
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因为细菌mRNA在形成过程中与核糖体混合在一 起，所以，细菌的转录与翻译过程几乎发生在同一时 间间隔内，转录与翻译相耦联（coupled transcription and translation）。 • 真核生物中，转录产物（primary transcript） 只有从核内运转到核外，才能被核糖体翻译成蛋白质。
色氨酸启动子（Trp）
• 色氨酸启动子（ Trp）的阻遏蛋白在有色氨 酸时，二者结合，阻遏蛋白变构激活而与 启动子结合，阻止RNA聚合酶的转录。无 色氨酸时，阻遏解除，因β-吲哚丙烯酸是色 氨酸的竞争性抑制剂，常用作诱导剂，诱 发色氨酸启动子转录。同时，衰减子对Trp 转录也有调节作用。
乳糖启动子（Lac）
转录起始第一个碱基（通常标记位置为+1） 最常见的是A；在-10bp附近有TATAAT一组共 有序列，因为这段共有序列是Pribnow首先发 现的，称为Pribnow盒（Pribnow box）；在35bp处又有TTGACA一组共有序列。
不同的启动子序列不同，与RNA聚合酶的亲 和力不同、启动转录的频率高低不同，即不同 的启动子起动基因转录的强弱不同，例如：PL、 PR、PT7属强启动子，而Plac则是较弱的启动子。
用RNA聚合酶与分离的一段 DNA双链混合， 再加入外切核酸酶去水解 DNA，结果只有被RNA 聚合酶识别结合而被保护的那段DNA不被水解， 由此可以测出启动子的范围及其序列。
虽然不同的启动子序列有所不同，但比较 已经研究过的上百种原核生物的启动子的序列， 发现有一些共同的规律，它们一般长40-60bp， 含 A-T bp 较多，某些段落很相似的，有保守性， 称为共有性序列(consensus sequences)。 启动子一般可分为识别 (R ， recognition) 、 结合(B，binding)和起始(I，initiation)三个 区段。
细菌能随环境的变化，迅速改变某 些基因表达的状态，这就是很好的基因 表达调控的实验模型。人们就是从研究 这种现象开始，打开认识基因表达调控 分子机理的窗口的。
1.操纵子的提出
大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、 阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖，当培养基中 含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先利用葡萄糖， 当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间的 适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖 增长。
• 无乳糖时，调节基因（I）产生阻遏蛋白与 操纵基因结合，阻止RNA聚合酶结合进而 阻止转录；有乳糖时，乳糖能与阻遏蛋白 结合，使其变构解离而行使转录功能。
（三） 原核基因表达调控的特点与方式
基因表达调控主要表现在以下两方面：
• 1．转录水平上的调控（transcriptional regulation）； • 2．转录后水平上的调控（post-transcriptional regulation），包括 • ① mRNA加工成熟水平上的调控 • （differential processing of RNA transcript）； • ② 翻译水平上的调控
翻译起始密码，因而同一个核糖体能沿此转 录生成的多顺反子（polycistron）mRNA移动， 在翻译合成了上一个基因编码的蛋白质后， 不从mRNA上掉下来而继续沿mRNA移动合成下 一个基因编码的蛋白质，一气依次合成这基 因群所编码所有的蛋白质。
(2) 启动子
启动子(promoter, P)是指能被RNA聚合酶 识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。操 纵子至少有一个启动子，一般在第一个结构基 因5＇侧上游，控制整个结构基因群的转录。
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即使是内环境保持稳定的高等哺乳类，也经常要变动基因的表达来适应环境，例如 与适宜温度下生活相比较，在冷或热环境下适应生活的动物，其肝脏合成的蛋白质图 谱就有明显的不同。
• 所以，基因表达调控是生物适应环境Biblioteka Baidu存的必需。
（二）基因表达的模式
• 生物体内的基因调控各不相同，基因表达随环境变化的情 况，可以大致把基因表达分成两类： • ①组成性表达(constitutive expression) 指不大受环境 变动而变化的一类基因表达。
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（一）基因表达调控的意义
• 基因组(genome) 是指含有一个生物体生存、发育、活动 和繁殖所需要的全部遗传信息的整套核酸。 • 但生物基因组的遗传信息并不是同时全部都表达出来的，大肠杆
菌基因组含有约4000个基因，一般情况下只有5－10%在高水平转录状 态，其它基因有的处于较低水平的表达，有的就暂时不表达。
至少在第一个结构基因5’侧具有核糖体 结合位点(ribosome binding site, RBS)， 因而当这段含多个结构基因的DNA被转录成多 顺反子 mRNA ，就能被核糖体所识别结合、并 起始翻译。核糖体沿 mRNA 移动，在合成完第 一个编码的多肽后，核糖体可以不脱离 mRNA 而继续翻译合成下一个基因编码的多肽，直 至合成完这条多顺反子 mRNA 所编码的全部多 肽。
ａ基因长825bp，编码275氨基酸、分子量
为 32,000的转乙酰基酶，以二聚体活性形式 催化半乳糖的乙酰化。
ｚ 基因 5’侧具有大肠杆菌核糖体识别结
合位点（RBS）特征的Shine-Dalgarno(SD)序 列，因而当乳糖操纵子开放时，核糖体能结 合在转录产生的mRNA上。 由于ｚ、ｙ、ａ三个基因头尾相接，上 一个基因的翻译终止密码靠近下一个基因的
• ②适应性表达(adaptive expression)指环境的变化容易使其表 达水平变动的一类基因表达。 • 应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导(induction)，
这类基因被称为可诱导的基因(inducible gene)；
• 相反，随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏 (repression)，相应的基因被称为可阻遏的基因(repressible gene)。
(1) 结构基因群
操纵子中被调控的编码蛋白质的基因可 称为结构基因(structural gene, SG)。一个 操纵子中含有2个以上的结构基因，多的可达 十几个。每个结构基因是一个连续的开放阅 读框(open reading frame), 5’端有起始密 码ATG，3’端有终止密码TAA、TGA或TAG。各 结构基因头尾衔接、串连排列，组成结构基 因群。
• （differential translation of mRNA）。
• 原核生物中，营养状况（nutritional status） 和环境因素（environmental factor）对基因 表达起着举足轻重的影响。 • 真核生物尤其是高等真核生物中，激素水平 （hormone level）和发育阶段 （developmental stage）是基因表达调控的 最主要手段，营养和环境因素的影响力大为下 降。 • 在转录水平上对基因表达的调控决定于DNA的 结构、RNA聚合酶的功能、蛋白因子及其他小 分子配基的相互作用。
• • 不同组织细胞中不仅表达的基因数量不相同，而且基因表 达的强度和种类也各不相同，这就是基因表达的组织特异 性(tissue specificity)。 • 例如肝细胞中涉及编码鸟氨酸循环酶类的基因表达水平高于其它
组织细胞，合成的某些酶(如精氨酸酶)为肝脏所特有；胰岛β 细胞合 成胰岛素；甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)专一分泌降血钙素等。
• 其中某些基因表达产物是细胞或生物体整个生命过程中都持续需要而 必不可少的，这类基因可称为看家基因 (housekeeping gene)，这些 基因中不少是在生物个体其它组织细胞、甚至在同一物种的细胞中都 是持续表达的，可以看成是细胞基本的基因表达。 • 组成性基因表达也不是一成不变的，其表达强弱也是受一定机制调控 的。
二、 操纵子学说
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法国巴斯德研究院的Francois Jacob与Jacques
Monod于1960年在法国科学院院报(Proceeding of the
French Academy of Sciences)上发表了一篇论文，提出乳糖 代谢中的两个基因被一靠近它们的遗传因子所调节。这二个基
因为β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)和半乳糖苷透过酶
原核生物的基因表达调控
一、原核生物基因表达调控概述
• 基因表达(gene expression) 是指储存遗传信息的基因 经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基 因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质 的过程。 既然从DNA 到蛋白质的过程称为基因表达，对这个过 程的调节就称为基因表达调控（gene regulation 或gene control ）。基因表达调控是现阶段分子生物学研究的中 心课题。
大肠杆菌利用乳糖至少需要两个酶：促使 乳糖进入细菌的半乳糖透过酶(lactose permease)和催化乳糖分解第一步的 －半乳糖 苷酶( -galactosidase)。
在环境中没有乳糖或其他 - 半乳糖苷时， 大肠杆菌合成 -半乳糖苷酶量极少，加入乳糖 2-3 分钟后，细菌大量合成 - 半乳糖苷酶，其 量可提高千倍以上，在以乳糖作为唯一碳源时， 菌体内的 -半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量 的3%。
• 改变基因表达的情况以适应环境，在原核生物、单细胞生物中尤其显 得突出和重要，因为细胞的生存环境经常会有剧烈的变化。
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例如：周围有充足的葡萄糖，细菌就可以利用葡萄糖作能源和碳源，不必更多去合 成利用其它糖类的酶类，当外界没有葡萄糖时，细菌就要适应环境中存在的其它糖类 (如乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等)，开放能利用这些糖的酶类基因，以满足生长的需要。
在上述二阶段生长细菌利用乳糖再次繁殖前， 也能测出细菌中 -半乳糖苷酶活性显著增高的 过程。
这种典型的诱导现象，是研究基因表达调控极 好的模型。针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象， 法国的 Jocob 和 Monod 等人做了一系列遗传学和 生化学研究实验 ，于 1961 年提出乳糖操纵子 （lac operon）学说。
• 细胞分化发育的不同时期，基因表达的情况是不相同的， 这就是基因表达的阶段特异性(stagespecificity)。 • 一个受精卵含有发育成一个成熟个体的全部遗传信息，在个体发
育分化的各个阶段，各种基因极为有序地表达，一般在胚胎时期基因 开放的数量最多，随着分化发展，细胞中某些基因关闭(turn off)、 某些基因转向开放 (turn on)，胚胎发育不同阶段、不同部位的细胞 中开放的基因及其开放的程度不一样，合成蛋白质的种类和数量都不 相同，显示出基因表达调控在空间和时间上极高的有序性，从而逐步 生成形态与功能各不相同、极为协调、巧妙有序的组织脏器。 • 从上所述，不难看出：生物的基因表达不是杂乱无章的，而是受着严 密、精确调控的，不仅生命的遗传信息是生物生存所必需的，而且遗 传信息的表达调控也是生命本质所在。
乳糖操纵子含有ｚ、ｙ和ａ3个结构基因。
ｚ 基因长 3510bp ，编码含 1170 个氨基酸、
分子量为135,000的多肽，以四聚体形式组成 有活性的β-半乳糖苷酶，催化乳糖转变为半 乳糖(allolactose)，再分解为半乳糖和葡萄 糖；
ｙ基因长780bp，编码有260个氨基酸、分子
量为30,000的半乳糖透过酶，促使环境中的 乳糖进入细菌；
(galactoside permease)。 • 在此文中他们首先提出了操纵子(operon)和操纵基因
(operator)的概念，他们的操纵子学说(theory of operon)使我
们得以从分子水平认识基因表达的调控，是一个划时代的突破， 因此他们二人于1965年荣获诺贝尔生理学奖。
（一）操纵子(operon)