河南省畜牧局实习报告

实习总结

今年十月份我去河南省畜牧局下属事业单位河南省兽药监察所实习，我被分到了样品处理二室，主要学习了饲料类样品的前处理及检测方法，还熟悉了牛奶中三聚氰胺的检测方法以及猪肉中磺胺的检测方法。

一、检测项目及方法

1.1.饲料中铅含量的测定

采用石墨炉原子吸收光谱法检测，该方法样品处理简单，检出限低，可达到2ug/L,回收率可达到90%-106%。

原理：样品经消解处理后，所含的铅离子在石墨管内高温蒸发解离为原子蒸汽，并吸收铅空心阴极灯发射的共振线，且其所吸收强度在一定范围内与铅浓度成正比，根据测得的吸收值与标准系列比较进行定量。

样品处理方法：取样品约2g，置于瓷坩埚中缓慢加热至炭化，在500o C高温下加热6-8h, 直至试样呈白色。冷却，用少量水将灰化物湿润，加5mL硝酸，用表面皿盖住，在电热板上加热，待消解完全后，加10mL1mol/L的盐酸使盐类溶解，定容至100.0 mL。

石墨炉仪器参考条件：波长283.3nm；狭缝0.2 nm；灯电流：3mA；测量方式：峰高；负高压：421V。

石墨炉按一定的升温程序进行升温，到设定值之后，先测标准工作曲线的吸光度，再测样品溶液的吸光度，根据吸光度计算出结果。

1.2.鱼粉中镉含量的测定

方法原理：将试样在电炉上碳化, 马福炉550℃温度下灰化之后, 酸性条件下溶解残渣, 沉淀并过滤, 定容制成试样溶液, 用火焰原子吸收光谱法, 测量其在283.3nm 处的吸光度, 与标准系列比较定量。

样品处理方法：称取鱼粉样品5g，置于瓷坩埚中。将坩埚置于可调电炉上, 缓慢加热炭化至无烟, 然后放入已在550℃下预热15min 的马福炉中, 灰化4h。冷却后加入6mol/L 盐酸溶液5mL, 开始时慢慢一滴一滴加入到坩埚中, 边加边转动坩埚, 直到不冒泡，然后再

快速放入, 再加入6mol/L 硝酸溶液5mL, 置于电炉上煮沸。冷却后, 用蒸馏水转移定容至50mL 容量瓶中, 摇匀, 过滤待用。同时制备试样空白溶液。

测定：试样溶液和试剂空白, 按绘制标准曲线步骤进行测定, 测出的相应吸光值与标准曲线比较。导入原子吸收分光光度计, 用蒸馏水调零点, 在283.3nm 波长处测定吸光度, 以标准曲线溶液浓度为横坐标, 吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线。

说明：在测量鱼粉中镉含量时，朱老师还试过用微波压力消解炉处理样品，然后用石墨炉原子吸收光谱法检测。两种方法得出的检测结果很相近，证明方法可行。

1.3.饲料中铁、铜、锰、锌的测定

可采用微波技术消解饲料样品,也可采用普通处理法消解样品，但用微波消解处理法效果较好，该方法快速、灵敏、准确、操作简便。最后用火焰原子吸收光谱法测定铁、铜、锰和锌的含量。

样品处理方法：称取试样0. 300 0 g 于微波消化罐中,加硝酸5. 0 mL ,浸泡过夜后加入过氧化氢1. 0 mL ,连接好消解装置并放入微波消化炉中,按以下程序将样品消解完全: 420 kPa 保持10 min , 770 kPa 保持10 min ,1 120 kPa 保持10 min 。消解程序执行完毕后取出旋转托盘,冷却。开罐,将罐内试样溶液转移至50 mL 容量瓶中,用适量水洗涤消化罐,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,摇匀。同时做空白试验。

测定方法：仪器条件：原子化器高度7 mm ; 空气流量4 L ·min - 1 ; 乙炔流量0. 8 L ·min - 1 ;氘灯校正背景。将标准溶液及消解液导入原子吸收分光光度计,按仪器工作条件绘制工作曲线,并由工作曲线求得消解液中测定元素的浓度,进而计算出试样中铁、铜、锰、锌的含量。

1.4.高效液相色谱法检测牛奶中三聚氰胺

高效液相色谱法的定量限为2 mg/kg，检测方法相对较简单，成本较液相色谱-质谱/质谱法和气相色谱-质谱法低。

原理：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。

样品处理方法：称取2 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入15 mL 三氯乙酸溶液（3.2.8）和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以不低于

4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，加入5 mL水混匀后做待净化液。

HPLC 参考条件：

a) 色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相当者；C18柱，250 mm×4.6 mm （i.d.），5 μm，或相当者。

b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（85+15，体积比），混匀。

C18柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（90+10，体积比），混匀。

c) 流速：1.0 mL/min。

d) 柱温：40℃

e) 波长：240 nm。

f) 进样量：20 μL。

标准曲线的绘制：用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80 μg/mL 的标准工作液，

浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。基质匹配加标三聚氰胺的样品。

定量测定：待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。

结果计算：试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得：

A × c × V×1000

X= ×f (1)

As × m×1000

式中：

X ——试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

A ——样液中三聚氰胺的峰面积；

c ——标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V ——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

As ——标准溶液中三聚氰胺的峰面积；

m ——试样的质量，单位为克（g）；

f ——稀释倍数。

空白实验：除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。