丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌体外混合培养对肠道致病菌的影响

丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌体外混合培养对肠道致病菌的影响

[摘要] 本试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养对肠道中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌4种致病菌的影响。结果表明：丁酸梭菌对这4种菌均有明显的抑制作用，可使其菌落数下降3～5个数量级；鼠李糖乳杆菌可降低产气荚膜梭菌、沙门氏菌菌落数；丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌混合培养可使4种致病菌菌落数均下降3～4个数量级。由此可见，两种菌混合培养对 4 种病原微生物的抑制无协同作用。

[关键词] 丁酸梭菌；鼠李糖乳杆菌；混合培养；肠道致病菌

[Abstract] This experiment was conducted to study the effects of the mixed culture of Clostridium butyricum and Lac-

tobacillus rhamnosus on intestinal pathogens，including Salmonella gallinarum，Staphylococcus aureus，Clostridium perfrin-

gens and Escherichia coli.The results showed that：the Clostridium butyricum significantly inhibited the number of these

four types of bacteria and made them down 3 ～ 5 orders of magnitude；Lactobacillus rhamnosus reduced Clostridium per-

fringens，Salmonella gallinarum colonies；the mixed culture of Clostridium butyricum and Lactobacillus rhamnosus made

four kinds of bacteria down 3 ～ 4 orders of magnitude.The results indicated that the mixed culture of strains had no syner-

gistic inhibition effect on the four kinds of pathogenic microorganisms.

[Key words] Clostridium butyricum；Lactobacillus rhamnosus；mixed culture；enteric pathogens

丁酸梭菌属于梭菌属，是一种专性厌氧的革

兰氏阳性芽孢杆菌，其广泛分布于土壤，也能从

健康动物的肠道中分离出来。丁酸梭菌适合动物

的肠道厌氧环境（呼慧娟等，2011），可以控制消

化道紊乱（张晓阳等，2012），有效抑制有害菌（曹

广添等，2012）。鼠李糖乳杆菌属于乳杆菌，具有

较强的酸及胆碱耐受能力（王玉华等，2008），有

抑制有害菌的作用（吴光伟和韩建春，2009），具

有抗氧化活性，并且可以影响机体免疫功能。目

前丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌均被广泛用作饲料

添加剂，本试验研究了丁酸梭菌与鼠李糖乳杆菌

联合培养对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、沙

门氏菌、大肠杆菌的抑制作用，为微生物制剂联

和使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 菌种、试剂及培养基丁酸梭菌（Clostridi- um butyricum，HJCB998），由浙江惠嘉生物科技有

限公司提供；鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamno- sus，ATCC7469)、产气荚膜梭菌 (Clostridi um per- fringens，ATCC13124)，均由广东省微生物菌种保

藏中心提供；大肠杆菌 C83928 （Escherichia coli C83928）、沙门氏菌（Salmonella gallinarum，C79）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureaus，SHZ018），均由浙江大学动物科学学院研究室提

供。琼脂、氯化钠为分析纯。厌氧液体培养基、LB 液体培养基、LB 琼脂培养基、强化梭菌培养基(RCM)、DRCA 梭菌选择性培养基、伊红美蓝培养

基（EMB）、乳酸细菌培养基（MRS）、BP 培养基、

HE 培养基、SC 培养基，均购自北京陆桥生物科技

有限公司。

1.1.2 主要仪器与设备厌氧培养箱、灭菌锅、恒

温培养箱、培养皿、超净工作台、试管、接种环等。1.2 试验方法

1.2.1 菌种活化丁酸梭菌活化：将冻干管保藏

菌株接种于装有梭菌液体培养基的试管中，置于

厌氧培养基中37 ℃静止厌氧培养 48 h，取 0.1 mL 转接装有 9.9 mL 厌氧液体培养基的试管，厌氧静

止培养 16 h。

产气荚膜梭菌及鼠李糖乳杆菌活化：在超净

台内，取一定量的无菌水迅速加入打开的冻干管，

轻轻将菌粉混匀溶解，然后将菌液分别转接 LB

斜面及厌氧液体培养基，置37 ℃厌氧培养 48 h 后，取 1 环菌种接种于装有 9.9 mL 厌氧液体培养

基的试管，厌氧静止培养 16 h。

1.2.2 培养物的制备将活化好的 0.1 mL 丁酸

梭菌、鼠李糖乳杆菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄

球菌、大肠杆菌、沙门氏菌分别接种于装有 9.9 mL

厌氧液体培养基的试管，丁酸梭菌、鼠李糖乳杆

菌、产气荚膜梭菌均于37 ℃厌氧静止培养24 h，

其余肠道致病菌普通培养 16 h，并分别计数。

1.2.3 混合培养取 16 个装有 19.9 mL 厌氧液

体培养基的三角瓶，将活化的菌液稀释到 10

4

～

10

5

cfu/mL，分组混合：（1）丁酸梭菌与大肠杆菌按

浓度100∶1 比例混合接种到三角瓶中；（2）鼠李糖