茶多酚抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及相关机制研究
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Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｅａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ（ＶＳＭＣｓ）Ａ７Ｒ５ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｅａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ （ＡＧＥｓ）ｏｒ ＢＳＡ，ＩｌＡＧＥ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；ｃｅｌｌ ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｆ ｉｅｄ ｂｙ ＭＴｒ ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｅｕｌｔｕｒｅｄ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＥＧＣＧ；Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｔｈｅ ｒ ｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ａｄｖａ ｎ ｃｅ ｄ ｇｌｙｃａｆ ｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｒａｔ ｖａ ｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ
晚 期 糖 基 化 产 物 （Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ＡＧＥｓ）¨Ｊ，是指细胞 内蛋 白质 ，核酸或其他 大分子与 葡萄糖 通 过 非酶反应所生 成 的终末产 物。ＡＧＥｓ可通过 与其 主要受 体 （Ｔｈｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ａｄｖａ ｎｃｅｄ ｇｌｙｅａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＲＡ ＧＥ）结 合 从 而影 响细胞 内部分信号转导通路 ，刺激细胞 因子 ，炎 性反 应 介 质等释放 ，在糖尿 病性 心血管 并发症 中发 挥重 要 的致 病 效 应 Ｊ。茶多酚 （ＥＧＣＧ）是从 茶 叶 中分 离提 纯 出来 的 主要 活 性成分 ，近年来对茶多酚进行的大量 研究表 明 ，茶多 酚具有 多 种重要 的药 理作 用 ，如抗氧化清除体 内氧 自由基 ，降血脂 抗 动 脉粥样硬化 ，抗凝及预防血栓形成 ，促进部分 细胞尤其 是肿瘤 细胞凋亡 。但茶 多酚能否抑制 ＡＧＥｓ诱 导的血管 平滑肌 细胞 增 殖及其作用 机制尚不明确 ，本研究拟对 ＥＧＣＧ抑制 ＡＧＥｓ诱 导的大 鼠血 管平 滑肌细胞 增殖 作用及 相应 机制展 开研 究 ，为 临床治疗糖尿病血管并发症提供新 的思 路。
Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍ ｅｃｈａｎｉｓｍ ＨＵＰｅｎｇ一居 ，ＨＵＡＮＧ ＳＨＵ—ｗｅｉ（ＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ—ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｔｈｅ ＳｅｃｏｎｄＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓ． ｐｉｔａｌ ｏｆＺｈｅｊｉａ￣ｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎ ，Ｃｈｉｎａ）
１ 资 料 与 方 法 １．１ 材料 ：大 鼠血管平滑肌 细胞 Ａ７Ｒ５购 自上海 中科 院 细胞 研究所 ；Ｒ Ａ ＧＥ多克隆抗体 购 自 Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公 司 ；ＤＭＥＭ 培 养基购 自 Ｇｉｂｃｏ公司 ；胎 牛血清购 自四季青公 司；内毒 素 凋亡 试剂 盒 购 自上 海 润成 公 司 ；ＥＧＣＧ，ＭＴＹ，小 牛血 清 白蛋 白 （ ＢＳＡ），Ｄ一葡萄糖均购 于 Ｓｉｇｍａ公司。 １．２ 方 法 １．２．１ Ａ７Ｒ５细胞 培 养 ：大 鼠血 管 平 滑 肌 细胞 Ａ７Ｒ５用 含 １０％胎牛血清 的 ＤＭＥＭ 培养基 ，在 ３７ ，５％ ＣＯ：的培养箱 中 常规培养 。用 ０．２５％胰酶 （含 ＥＤＴＡ）消化 传代。细胞 在培养 ２４小 时后加人 ＡＧＥｓ等处理因素 。 １．２．２ ＡＧＥｓ的制 备：参照文献 ｊ，０．５ ｇ ＢＳＡ，３．０ ｇ Ｄ一葡萄
ＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＧＥｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ＲＡＧＥ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＶＳＭＣｓ ｗａｓ ｕｐ—ｒｅｇｕ ｌａｔｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ＲＡＧＥ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓ ａ ｎ ｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＶＳＭＣｓ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏ—ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｗ ｉ ｔｈ ＥＧＣＧ ｉｎ ＡＧＥ ｓ —ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥＧＣＧ ｃａｎ ｉｎｈｉｂ— ｉｔ ＡＧＥｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌ ｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕ ｌａｒ ｓｍｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ（ＶＳＭＣｓ）．Ｉｔ ｍａｙ ｒｅｌａｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ＡＧＥｓ～ｉｎｄｕｃｅｄ ＲＡＧＥ ｌｏｗ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
［关 键词］ 茶多酚 ；晚期糖基化产 物 ；ＲＡＧＥ；大 鼠血管平滑肌细胞
Ｔｏ Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ Ｅｆｉｅｅｔｓ ｏｆ Ｔｅａ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ Ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒａｔ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｍ ｏｏｔｈ Ｍ ｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ
吉林 医 学 ２０１３年 ９月第 ３４卷 第 ２６期
·５３１５ ·
· 实 验 研 究 ·
茶 多 酚 抑 制 大 鼠血 管 平 滑 肌 细 胞 增 殖 及 相 关 机 制 研 究
胡鹏 飞 ，黄抒伟 （浙江 中医药大学 附属第 二医院心内科 ，浙江 杭州 ３１０００５）
［摘 要］ 目的 ：研究晚期糖基 化产 物（ＡＧＥｓ）对 大 鼠血 管平 滑肌 细胞 ＡＴＲ５增 殖的影 响及相关机 制。方法 ：用 ＡＧＥｓ处理 Ａ７Ｒ５细胞 ，相同条件 ＢＳＡ处理为对照组 ，Ｗｅｓｔｅｒ ｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 ＲＡＧＥ蛋 白表达 的变化 ，ＭＴｒ比色法测定细胞活性。结果 ：ＡＧＥｓ处理 Ａ７Ｒ５细胞后 ，ＡＧＥｓ受体 ＲＡＧＥ及细胞增殖水平均明显升高 ，但与 ＥＧＣＧ共孵育能显著抑制 ＡＧＥｓ诱导的 ＲＡＧＥ表达增加及细胞增 殖水平。结论 ：ＥＧＣＧ能够抑制 ＡＧＥｓ诱导 的大 鼠血管平滑肌 细胞增殖水平 ，这可能与 ＥＧＣＧ抑制 ＡＧＥｓ受 体 ＲＡＧＥ的表达相关 。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＥＧＣＧ；Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｔｈｅ ｒ ｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ａｄｖａ ｎ ｃｅ ｄ ｇｌｙｃａｆ ｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ｒａｔ ｖａ ｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ
晚 期 糖 基 化 产 物 （Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ＡＧＥｓ）¨Ｊ，是指细胞 内蛋 白质 ，核酸或其他 大分子与 葡萄糖 通 过 非酶反应所生 成 的终末产 物。ＡＧＥｓ可通过 与其 主要受 体 （Ｔｈｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ａｄｖａ ｎｃｅｄ ｇｌｙｅａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＲＡ ＧＥ）结 合 从 而影 响细胞 内部分信号转导通路 ，刺激细胞 因子 ，炎 性反 应 介 质等释放 ，在糖尿 病性 心血管 并发症 中发 挥重 要 的致 病 效 应 Ｊ。茶多酚 （ＥＧＣＧ）是从 茶 叶 中分 离提 纯 出来 的 主要 活 性成分 ，近年来对茶多酚进行的大量 研究表 明 ，茶多 酚具有 多 种重要 的药 理作 用 ，如抗氧化清除体 内氧 自由基 ，降血脂 抗 动 脉粥样硬化 ，抗凝及预防血栓形成 ，促进部分 细胞尤其 是肿瘤 细胞凋亡 。但茶 多酚能否抑制 ＡＧＥｓ诱 导的血管 平滑肌 细胞 增 殖及其作用 机制尚不明确 ，本研究拟对 ＥＧＣＧ抑制 ＡＧＥｓ诱 导的大 鼠血 管平 滑肌细胞 增殖 作用及 相应 机制展 开研 究 ，为 临床治疗糖尿病血管并发症提供新 的思 路。
Ｒｅｌａｔｅｄ Ｍ ｅｃｈａｎｉｓｍ ＨＵＰｅｎｇ一居 ，ＨＵＡＮＧ ＳＨＵ—ｗｅｉ（ＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ—ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｔｈｅ ＳｅｃｏｎｄＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓ． ｐｉｔａｌ ｏｆＺｈｅｊｉａ￣ｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎ ，Ｃｈｉｎａ）
１ 资 料 与 方 法 １．１ 材料 ：大 鼠血管平滑肌 细胞 Ａ７Ｒ５购 自上海 中科 院 细胞 研究所 ；Ｒ Ａ ＧＥ多克隆抗体 购 自 Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公 司 ；ＤＭＥＭ 培 养基购 自 Ｇｉｂｃｏ公司 ；胎 牛血清购 自四季青公 司；内毒 素 凋亡 试剂 盒 购 自上 海 润成 公 司 ；ＥＧＣＧ，ＭＴＹ，小 牛血 清 白蛋 白 （ ＢＳＡ），Ｄ一葡萄糖均购 于 Ｓｉｇｍａ公司。 １．２ 方 法 １．２．１ Ａ７Ｒ５细胞 培 养 ：大 鼠血 管 平 滑 肌 细胞 Ａ７Ｒ５用 含 １０％胎牛血清 的 ＤＭＥＭ 培养基 ，在 ３７ ，５％ ＣＯ：的培养箱 中 常规培养 。用 ０．２５％胰酶 （含 ＥＤＴＡ）消化 传代。细胞 在培养 ２４小 时后加人 ＡＧＥｓ等处理因素 。 １．２．２ ＡＧＥｓ的制 备：参照文献 ｊ，０．５ ｇ ＢＳＡ，３．０ ｇ Ｄ一葡萄
ＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＧＥｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ＲＡＧＥ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＶＳＭＣｓ ｗａｓ ｕｐ—ｒｅｇｕ ｌａｔｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ＲＡＧＥ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓ ａ ｎ ｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＶＳＭＣｓ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏ—ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｗ ｉ ｔｈ ＥＧＣＧ ｉｎ ＡＧＥ ｓ —ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥＧＣＧ ｃａｎ ｉｎｈｉｂ— ｉｔ ＡＧＥｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌ ｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕ ｌａｒ ｓｍｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ（ＶＳＭＣｓ）．Ｉｔ ｍａｙ ｒｅｌａｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ＡＧＥｓ～ｉｎｄｕｃｅｄ ＲＡＧＥ ｌｏｗ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
［关 键词］ 茶多酚 ；晚期糖基化产 物 ；ＲＡＧＥ；大 鼠血管平滑肌细胞
Ｔｏ Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ Ｅｆｉｅｅｔｓ ｏｆ Ｔｅａ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ Ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒａｔ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｍ ｏｏｔｈ Ｍ ｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ
吉林 医 学 ２０１３年 ９月第 ３４卷 第 ２６期
·５３１５ ·
· 实 验 研 究 ·
茶 多 酚 抑 制 大 鼠血 管 平 滑 肌 细 胞 增 殖 及 相 关 机 制 研 究
胡鹏 飞 ，黄抒伟 （浙江 中医药大学 附属第 二医院心内科 ，浙江 杭州 ３１０００５）
［摘 要］ 目的 ：研究晚期糖基 化产 物（ＡＧＥｓ）对 大 鼠血 管平 滑肌 细胞 ＡＴＲ５增 殖的影 响及相关机 制。方法 ：用 ＡＧＥｓ处理 Ａ７Ｒ５细胞 ，相同条件 ＢＳＡ处理为对照组 ，Ｗｅｓｔｅｒ ｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 ＲＡＧＥ蛋 白表达 的变化 ，ＭＴｒ比色法测定细胞活性。结果 ：ＡＧＥｓ处理 Ａ７Ｒ５细胞后 ，ＡＧＥｓ受体 ＲＡＧＥ及细胞增殖水平均明显升高 ，但与 ＥＧＣＧ共孵育能显著抑制 ＡＧＥｓ诱导的 ＲＡＧＥ表达增加及细胞增 殖水平。结论 ：ＥＧＣＧ能够抑制 ＡＧＥｓ诱导 的大 鼠血管平滑肌 细胞增殖水平 ，这可能与 ＥＧＣＧ抑制 ＡＧＥｓ受 体 ＲＡＧＥ的表达相关 。