植物生理学实验

1、0.1%TTC溶液：取1gTTC溶于少量酒精中，再用蒸馏水定容至1L。 2、红墨水溶液：取市售红墨水稀释20倍作为染色剂。
实验五
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ呼吸速率的测定
一、实验目的：理解呼吸速率的概念，掌握呼吸速
率的测定方法。
二、实验原理：在密闭容器中加入一定量的
Ba(OH)2，并悬挂植物材料，则植物材料呼吸放出的 CO2 可为容器中Ba(OH)2 吸收，用草酸滴定剩余的 Ba(OH)2，从空白和样品消耗草酸溶液之差，可计算 出呼吸释放的CO2 量。其反应如下： Ba(OH)2 + CO2 → BaCO3↓ + H2O Ba(OH)2（剩余） + H2C2O4 →BaC2O4↓ + 2H2O
剂[由内向外：：叶绿素b（黄绿）、叶绿素a（蓝绿）、
叶黄素（黄）、胡萝卜素（橙黄）]。
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0123014341班
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3、理化性质观察：
① 叶绿体色素的吸收光谱曲线：将上述滤液注入比色杯中， 以80%的丙酮作空白，于400-700nm每隔10nm读取OD值，以 波长为横坐标，OD值为纵坐标，绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线。
三、仪器、试剂、材料：分光光度计、水溶锅、
天平、研钵、三角瓶、培养皿、试管、漏斗、滤纸、 丙酮、汽油、盐酸、醋酸铜、植物叶片 四、实验步骤： 1、色素提取：取新鲜叶片5克于研钵中，加丙酮 20ml及少许CaCO3制成匀浆，搅匀过滤于三角瓶中， 滤液备用。
2、色素分离：按现场示范进行，以层析液为驱动
实验三
叶绿素含量的测定
一、实验目的：掌握叶绿素含量的测定方法。 二、实验原理： 根据叶绿素吸收光谱的特点，利 用分光光度计在某一波长处测得叶绿素的OD值（光密 度），再通过公式计算叶绿素的含量。叶绿素的光谱 吸收峰是400~500nm及600~700nm，类胡萝卜素的光 谱吸收峰在400~500nm，所以，Arnon（1949）选定叶 绿素a的吸收峰为663nm，叶绿素b的吸收峰为645nm， 并提出计算这两种色素浓度的公式。 三、仪器、试剂、材料：分光光度计、带塞试管、 丙酮与无水乙醇的等体积混合液、水浴锅、植物叶片。
三、仪器、试剂、材料：广口瓶呼吸装置、分析天 平、酸式滴定管、滴定架、1/44 mol / L 草酸溶液、 0.05 mol / L Ba(OH)2溶液、酚酞指示剂、碱石灰、萌 发的种子。 四、实验步骤： 1、称取10克萌发种子于小篮内，挂于橡皮塞下。 加入0.05mol/L Ba(OH)2溶液20ml，塞紧瓶塞，开始计 时，不时摇动。30分钟后，取出小篮，加入酚酞指示 剂1~2滴，立即塞紧瓶塞，用草酸滴定，直到红色刚刚 消失为止，记录草酸消耗量（V1）。 2、取煮沸的种子10克，按上面同样步骤，加 Ba(OH)2与酚酞试剂，同样用草酸滴定，记录草酸消 耗量（V0）。
三、仪器、试剂、材料：培养皿、刀片、镊子、0.1 %TTC溶液， 红墨水（稀释20倍）、植物种子（小麦 或玉米） 四、实验步骤： 1、将植物种子用温水（30℃）浸泡 2 ~ 6 h ，使种 子充分吸胀。 2、取吸胀种子100 粒，用刀片沿种胚中心线切为 两半， 分别放入A、B两个培养皿中。 3、A皿加TTC溶液， 以浸没种子为度，于恒温箱 （30 ~ 35℃）保温0.5 h。 到时倒掉溶液，用自来水冲 洗1 ~ 2 次，观察种胚染色情况。凡胚部全部或大部被 染成红色的即为有生活力的种子。
植物生理学实验指导书
lsw
实验一 植物组织水势的测定 （小液流法）
一、实验目的：理解水势、渗透势的概念，掌握
植物水势的测定方法。
二、实验原理：当植物组织浸在已知浓度的外液 中时，如果组织水势高于外液水势，则组织失水， 外 液浓度降低，比重变小；如果组织水势低于外液水势， 则组织吸水，外液浓度升高，比重变大；如果组织水
实验七
果蔬有机酸含量的测定
一、实验目的：了解有机酸在果蔬中的存在情况， 掌握果蔬有机酸含量的测定方法。
二、实验原理：
有机酸易溶于水，醇、醚，用这些溶剂可将有机酸提
取出来，再用碱滴定，据此可测出有机酸含量。
三、仪器：试剂、材料：水浴锅、碱式滴定管、滴定 架、三角瓶、研钵、移液管、100ml容量瓶、 0.05mol/L NaOH溶液、酚酞指示剂、水果或蔬菜（番 茄、橘子等）
势和外液水势相等，则外液的浓度和比重都不变，此
溶液的渗透势即等于组织的水势。
三、仪器、试剂、材料：青霉素小瓶（带盖）、
弯头注射器、打孔器、镊子、培养皿、滴管、甲烯蓝
粉末。
0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mol/L蔗糖溶
液。植物叶片。 四、实验步骤： 1、用滴管取不同浓度（0.05、0.10、0.15、0.20、 0.25、0.30mol/L）蔗糖溶液各约4ml，分别注入6个青 霉素小瓶中（甲组）；再另取上面6种溶液各4ml，注 入另6个小瓶中（乙组），对应编号标记。
叶绿素b （mg/g）=（22.88OD645 - 4.67OD663）V/1000W 叶绿素总量（mg/g）=（8.04OD663+20.29OD645）V/1000W
式中： V—提取液体积（ml） W—叶片重量（g）
实验四 种子生活力的测定
一、实验目的：理解种子生活力的测定原理，掌握 种子生活力的测定方法。 二、实验原理： 1、TTC法：具有生活力的种胚在呼吸作用过程中 都有氧化还原反应，当TTC溶液渗入种胚活细胞内并 作为氢的受体被还原型脱氢辅酶（NADH2或NADPH2） 上的氢还原时，无色的 TTC 转化为红色的 TTF ，活 种胚被染成红色，而死细胞无此反应。 2、红墨水法：具有生活力的种胚细胞原生质膜具 有选择透性，一般染料不能进入细胞内，胚部不着色。 而丧失生活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择 吸收的能力，染料可进入细胞内使胚部染色。
五、结果计算 R= C（V0 - V1）/ wt 式中： R— 呼吸速率（CO2mg /gh） C—1ml草酸相当于CO2的mg 数（1） V0—对照滴定值 （ml） V1—样品滴定值（ml） W—样品重量 （g） t—反应时间（h）
附： 1、1/44mol/L草酸溶液：准确称取重结晶H2C2O4.2H2O 2.8651g溶于蒸馏水中，定容至1000ml，每ml相当于1mgCO2。 2、0.05mol/L氢氧化钡溶液：Ba(OH)28.6g或 Ba(OH)2.8H2O 15.78g溶于1000ml蒸馏水中。若有浑浊，待溶液 澄清后使用。 3、酚酞指示剂：称取1g酚酞，溶于100ml95%乙醇 中， 贮于滴瓶中。
四、实验步骤：
1、准确称取植物叶片0.05克左右放入试管，加等
体积混合液10ml，加塞。放入50-60℃水溶锅中加热，
快速提取20 ~ 60分钟。至叶片变白即可。 2、待叶片变白后，取出摇匀，在663nm和645nm 波长处测定提取液的OD值。 五、结果计算：
叶绿素a（mg/g）=（12.71OD663 - 2.59OD645）V/1000W
4、B皿加红墨水溶液，以浸没种子为度，室温染色 10分钟。到时倒掉溶液，用自来水反复冲洗至洗液不 带红色为止，观察种胚染色情况。凡胚部不着色或略 带红色的即为有生活力的种子。
五、结果计算
TTC法： 活种子（%）=
胚部着红色种子数 供试种子数
×100% ×100%
红墨水法 ： 活种子（%）=
附：
胚部未着色种子数 供试种子数
溶液 （mol/L） 蓝色液滴 升降情况
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
五、结果计算： 植物组织水势按下式计算： Ψw = - iCRT 式中：Ψw — 水势， i — 解离系数（蔗糖 为1 ） C — 等渗溶液浓度（mol/L）， R — 气体常数（0.0083L .MPa /moL.K） T — 绝对温度( K=273 + t ℃) 蔗糖分子量：342.29
酚酞2滴，用0.05mol/L NaOH溶液滴定至微红、摇动1
分钟不褪色为滴定终点，读取 NaOH溶液消耗量（V3）。
五、结果计算： 有机酸含量（%）=KCV3V1/ WV2×100% K—换算系数：苹果酸67 酒石酸75 W—样品重量（g） V3—NaOH 溶液消耗量 （ml） V1—提取时样液总量（100ml） V2—测定时样液用量（20ml ） C—NaOH溶液浓度（mol/ml） （0.05mol/L=0.00005mol/ml）
实验二 叶绿体色素的提取、分离和性质的观察 一、实验目的：掌握叶绿体色素的提取和分离方 法，加深对其性质的理解。 二、实验原理：叶绿体色素包括叶绿素a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素，这四种色素可用丙酮或乙醇等 提取。叶绿体色素可采用纸层析法进行分离。叶绿素 和类胡萝卜素可表现出一定的吸收光谱，可用分光光 度计精确测定。吸收光量子变成激发态的叶绿素分子 很不稳定，在它变回基态时，可发射出红光量子，因 而产生荧光。叶绿素中的Mg2+可被H+所取代，成为褐 色的去镁叶绿素，后者遇Cu2+则变成深绿色的铜代叶 绿素。
实验六 过氧化物酶活性的测定
一、实验目的：了解过氧化物酶在植物体内的作用， 掌握过氧化物酶活性的测定方法。 二、实验原理：在过氧化氢存在时，过氧化物酶能 将邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）氧化成红棕色的4-邻
甲氧基苯酚，生成的红棕色物质用分光光度计在
470mm处测定其OD值，即可求出酶活性。
三、仪器、试剂、材料：分光光度计、匀浆器、离
2、用打孔器从植物叶片上取下相同大小的圆叶片，
分别放入乙组小瓶中（每瓶10片），加盖， 摇动以使 圆叶片浸泡于溶液中。 3、30分钟后，向乙组小瓶加微量甲烯蓝粉末，轻 轻摇动使溶液均匀。 4、用注射器从乙组小瓶中吸取蓝色溶液，插入相 同编号的甲组小瓶溶液中部，轻轻挤出一小滴，慢慢 抽出注射器，观察蓝色液滴升降情况并填入下表。
五、结果计算：酶活性以每分钟每克鲜重材料的 OD值表示，即 过氧化物酶活性 （OD470 /g分）=（OD470×v1 /v2）/ wt
式中： v1 — 酶液总体积（ml） v2 — 测定酶液体积（ml）
w — 样品重量（g）
t —反应时间（分）
附： 1、pH5.0的醋酸缓冲液：先配0.2mol醋酸溶液，即取11.55ml 冰醋酸加蒸馏水至1000ml；再配0.2mol醋酸钠溶液，即称取 16.4g无水醋酸纳（或27.2gC2H3O2Na.3H2O）溶解并定容至 1000ml。取148ml0.2mol醋酸溶液加352ml0.2mol醋酸钠溶液混 合，即成pH5.0的醋酸缓冲液。 2、0.08%H2O2：取30%H2O22.67ml稀释至1000ml，即成 0.08%H2O2。 3、0.1%邻甲氧基苯酚。
心机、秒表、移液管、吸气球、水浴锅、pH5.0醋酸缓 冲液、0.08%H2O2、0.1%邻甲氧基苯酚、植物叶片
四、实验步骤： 1、酶液提取：准确称取植物叶片0.01~0.02（玉米 叶片0.02~0.03；小麦叶片0.01~0.015）克，放入匀浆器， 加10ml蒸馏水，研成匀浆。倒入2支离心管内， 离心15 分钟（4000转/分），上清液即酶液。 2、酶活性测定：取干净试管2支，分别加入pH5.0 醋酸缓冲液1ml、0.1%邻甲氧基苯酚1ml及酶液1ml， 摇匀后，置于30℃水浴中平衡5分钟。其中一支加1ml 蒸馏水调零，另一支加入0.08%H2O21ml并摇匀，立即 用秒表开始计时，1分钟后生成红棕色的4-邻甲氧基苯 酚溶液，将此溶液倒入比色杯中，到2分钟时于470nm 处读取OD值。
四、实验步骤：
1、称取5~10克果蔬，放入研钵中研磨成匀浆，用 30-50ml蒸馏水将研钵中的匀浆冲洗到三角瓶中，将三 角瓶置于60℃水浴锅中浸提，每隔5分钟摇动一次。30 分后钟取出冷却，转移到100ml容量瓶中，残渣用1020ml蒸馏水冲洗到容量瓶，并定容到100ml。过滤， 滤液备用。
2、测定：吸取滤液20ml于干洁三角瓶中，加1%
②叶绿素的荧光现象：取滤液少许（约3ml）用反 射光和透射光观察溶液的颜色，反射光的颜色即为叶
绿素产生的荧光。
③ H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用：在3
支试管里盛滤液约3ml，留一支作对照，另两支各加
HCl1-2滴，摇匀待溶液呈褐色后，再在其中一支加入 醋酸铜少许，于水浴加热到溶液至深绿色为止。