溴甲酚绿法测定血清白蛋白课件
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4.0
S2 — 0.02 —
4.0
测定管
U1 0.02 — —
4.0
U2 0.02 — —
4.0
立刻混匀后，在波长630nm处用空白管调零， 30s±3s内读取吸光度。
5
五、计算
血清清蛋白(g/L)＝Āu/Ās×蛋白标准液浓度(g/L)
= Āu/Ās×40 (g/L)
参考范围：正常人:35－55g/L
NH3+
+H+
NH2
pH<pI
pH=pI
阳离子
氨基酸wk.baidu.com兼性离子
在pH4.2的缓冲液中，清蛋白带正电荷
pH>pI
阴离子
2
二、实验原理
血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，
在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷
的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波
长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白的浓
Brij-35贮液2.5mL，
3. 叠氮钠贮存液
ddH2O定容至1000mL。
4. 聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液
5. BCG试剂
6. 40g/L 清蛋白标准液
7. 分光光度计
4
四、操作
加入物（mL） 空白管 （B）
血清
—
白蛋白标准液 —
蒸留水
0.02
BCG试剂
4.0
标准管
S1 — 0.02 —
9
度成正比。
与同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清 中清蛋白含量。
pH4.2
清蛋白+ BCG
蓝绿色复合物
+
Brij-35
-
3
三、试剂与器材
ddH2O 400mL 琥珀酸缓冲贮液100mL
1. 0.5mol/L 琥珀酸缓冲贮存液 BCG贮液8.0mL
叠氮钠贮液2.5mL，
2. 10mmol/L BCG贮存液
实验五 溴甲酚绿法测定血清清蛋白
一、实验目的
掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理和操作。 熟悉：血清清蛋白测定的临床意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注意事项。
1
二、实验原理
血清清蛋白的pI为：4-5.8 R CH COOH
NH2
R CH COOH +OH-
NH3+
+H+
R CH COO- +OH- R CH COO-
4.溴甲酚紫法：特异性较好，但不能与动物血清反 应，而目前的质控血清多为动物血清，因此临床应 用少。
4. 电泳法：可以将白蛋白、球蛋白等分开，并分别 测定其含量，是种较好的方法，但过程相对复杂。
8
八、临床意义
1. 血清清蛋白 ：常见于严重脱水所致的血浆浓缩。（比 较少见）
2. 血清清蛋白 :临床比较重要和常见，常与总蛋白降低的 原因大致相同。
急性 ：多见于大出血和严重烧伤。 慢性 ：肾病蛋白尿、肝功能受损，肠道肿瘤及结核伴
慢性出血、营养不良和恶性肿瘤。 若低于20g/L，临床上出现水肿。 3. A/G比值：正常人A/G>1.0 某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象，
若A/G<1.0，称为A/G比值倒置，常见于多发性骨髓瘤和 聚球蛋白升高。 4.先天性清蛋白缺乏症：有文献报道，因清蛋白合成障碍， 血清中几乎没有清蛋白而导致清蛋白缺乏。
6
六、注意事项
1. BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色） ~5.4（蓝绿色），因此控制反应液的pH是本法测 定的关键。
2. 时间必须控制准确。因为BCG不但与清蛋白呈 色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以 a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其 反应速度较清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清 蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s内读数 可明显减少非特异性呈色反应。
7
七、方法学评价
1. 本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血 症无干扰，既可手工操作，也能自动分析，是目前 国内测定血清清蛋白的最常用方法。
2. 本法线性范围为10~60g/L，RCV<4%。但该法 与溴甲酚绿紫法比较，对血清清蛋白特异性稍差，
3. 重复性差，清蛋白特异性稍差（极性氨基酸参与 反应，但参与运输的球蛋白也会与染料反应，不过 反应速度较慢）。
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测定管
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立刻混匀后，在波长630nm处用空白管调零， 30s±3s内读取吸光度。
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五、计算
血清清蛋白(g/L)＝Āu/Ās×蛋白标准液浓度(g/L)
= Āu/Ās×40 (g/L)
参考范围：正常人:35－55g/L
NH3+
+H+
NH2
pH<pI
pH=pI
阳离子
氨基酸wk.baidu.com兼性离子
在pH4.2的缓冲液中，清蛋白带正电荷
pH>pI
阴离子
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二、实验原理
血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，
在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷
的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色的复合物，在波
长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白的浓
Brij-35贮液2.5mL，
3. 叠氮钠贮存液
ddH2O定容至1000mL。
4. 聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液
5. BCG试剂
6. 40g/L 清蛋白标准液
7. 分光光度计
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四、操作
加入物（mL） 空白管 （B）
血清
—
白蛋白标准液 —
蒸留水
0.02
BCG试剂
4.0
标准管
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度成正比。
与同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清 中清蛋白含量。
pH4.2
清蛋白+ BCG
蓝绿色复合物
+
Brij-35
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三、试剂与器材
ddH2O 400mL 琥珀酸缓冲贮液100mL
1. 0.5mol/L 琥珀酸缓冲贮存液 BCG贮液8.0mL
叠氮钠贮液2.5mL，
2. 10mmol/L BCG贮存液
实验五 溴甲酚绿法测定血清清蛋白
一、实验目的
掌握：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理和操作。 熟悉：血清清蛋白测定的临床意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注意事项。
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二、实验原理
血清清蛋白的pI为：4-5.8 R CH COOH
NH2
R CH COOH +OH-
NH3+
+H+
R CH COO- +OH- R CH COO-
4.溴甲酚紫法：特异性较好，但不能与动物血清反 应，而目前的质控血清多为动物血清，因此临床应 用少。
4. 电泳法：可以将白蛋白、球蛋白等分开，并分别 测定其含量，是种较好的方法，但过程相对复杂。
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八、临床意义
1. 血清清蛋白 ：常见于严重脱水所致的血浆浓缩。（比 较少见）
2. 血清清蛋白 :临床比较重要和常见，常与总蛋白降低的 原因大致相同。
急性 ：多见于大出血和严重烧伤。 慢性 ：肾病蛋白尿、肝功能受损，肠道肿瘤及结核伴
慢性出血、营养不良和恶性肿瘤。 若低于20g/L，临床上出现水肿。 3. A/G比值：正常人A/G>1.0 某些病人可同时出现清蛋白减少和球蛋白升高的现象，
若A/G<1.0，称为A/G比值倒置，常见于多发性骨髓瘤和 聚球蛋白升高。 4.先天性清蛋白缺乏症：有文献报道，因清蛋白合成障碍， 血清中几乎没有清蛋白而导致清蛋白缺乏。
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六、注意事项
1. BCG是一种pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色） ~5.4（蓝绿色），因此控制反应液的pH是本法测 定的关键。
2. 时间必须控制准确。因为BCG不但与清蛋白呈 色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以 a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其 反应速度较清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清 蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s内读数 可明显减少非特异性呈色反应。
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七、方法学评价
1. 本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血 症无干扰，既可手工操作，也能自动分析，是目前 国内测定血清清蛋白的最常用方法。
2. 本法线性范围为10~60g/L，RCV<4%。但该法 与溴甲酚绿紫法比较，对血清清蛋白特异性稍差，
3. 重复性差，清蛋白特异性稍差（极性氨基酸参与 反应，但参与运输的球蛋白也会与染料反应，不过 反应速度较慢）。