植物细胞骨架-实验课件.

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二、实验原理 细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白 质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质 纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可 分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于 维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、 能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的 作用。
试剂
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2. M-缓冲液 ： 50mmolL-1 (PH 6.7)咪唑、50 mmolL-1 KCl 0.5 mmolL-1 MgC12、1 mmolL-1 EGTA 0.1 mmolL-1 EDTA、 1 mmolL-1巯基乙醇 4 mmolL-1甘油、pH：7.2。 3. 1%Triton-X100:用M-缓冲液配制。 4. 3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲液配制。 5. 0.2%考马斯亮蓝R250 染液： 0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、 7ml冰醋酸 、46.5ml蒸馏水。
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5.用磷酸缓冲液（pH6.8）洗2次，每次10分钟。 6.考马斯亮蓝R250 染色30分钟。
7.蒸馏水洗2次。
9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。
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五、实验结果与分析：
绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。
三、实验用品
材料：洋葱 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、 滴管、擦镜纸、50ml烧杯
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试剂
1. 磷酸缓冲液（10XPBS） NaCl 80g Na2HPO4· 2H2O 0.6g KCl 4g KH2PO4 0.6g 蒸馏水 1000mL
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细胞生物学实验课件
植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验方法步骤 实验结果与分析 作业
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一、实验目的
掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色 的方法。
通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细 胞骨架的制备方法与显微形态观察。
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四、实验方法步骤
1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。
2.用磷酸盐缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。 3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX—100处理20分 钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像 更加清晰。
4.吸去TritonX-100，用M—缓冲液洗3次，每次5分 钟。M－缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
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本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液 处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大 部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋 白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
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简述制备细胞骨架中使用磷酸盐缓冲液、M缓冲液、
TritonX-100、考马斯亮蓝250 作用。
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六、作业
1.对实验结果的分析，所观察到的细胞骨架 是胞质骨架中的哪种类型，为什么？ 2.TritonX-100和M缓冲液的作用是什么？ 3.实验中的注意事项。