三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

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C H } E C o M M UN l D 0 C T RS N SE TY 0
三 七 总 皂 苷 对 氧 糖 剥 夺 的 皮 质 神 经 元 损 伤 的 保 护 作 用
中, 放至正 常 C : 养箱 中继 续培 养 2 O 培 4
吕继 红
的保护作用 。而各浓 度 的 P S单 独与细 N
蛋 白表 达 上 调 。与 O D组 相 比 , < G P
0. 5。 0
材 料 与 方 法
B l 2蛋 白表 达 分 析 : 文献 方法 提 c一 按
药 品与 试 剂 : 七 总 皂 苷 ( N ) 血 三 PS ,
栓 通注 射 液 ( 七 总皂 苷 含量 为 3m / 三 5 g m )D E / 1 1 , M M F 2培 养 基 , T、 聚 赖 氨 M1 多 r 酸 (oy pl —D—l i ) N 一 y n 、 2一羟 乙基 哌 嗪 se
暗室曝光 , 影 , 影后拍照 。 显 定


N, 2一乙磺 酸 ( E - H P—E ) N S 、 F抗体 、
缺 血缺 氧 性 脑 损 伤 与 神 经 元 凋 亡 及 其 有 关 基 因 调 控 的 研 究 日益 受 到 重 视 。
脑 缺 血 缺 氧 后 有 多种 基 因被 诱 导 表 达 , 它 们 有 的起 促 进 凋 亡 作 用 , 的 则 起 抑 制 凋 有
白含 量 增加 。 结 论 : N P S对 缺 氧 缺 糖 条 件
相对 存活 率 ( )=( % 实验 组 O D值/ 照 对
组O D值 )X10 。 % 0
予 2 、 0 / 浓 度 的 P S明 显 降 低 5 5 mgL N
MD A。 与 O D 组 相 比 , 0 0 。而 各 浓 G P< .5 度 的 P S 单 独 与 细 胞 温 孵 2 小 时 后 N 4
的重要作用 已得 到公认 。它在 抑制 中枢 神经系统细胞 的死亡 中起重要作用 , 在神
经 元 细 胞 受 到 外 界 刺 激 时 能 保 护 细 胞 免 于 凋 亡 。本 研 究 发 现 缺 血 再 灌 流 后 神 经
统 计 学 方 法 : 有 描 述 性 数 据 用 所 m a S E M ( ±S 表 示 , 计 学 分 析 en4 . . X - ) 统 应用 t 验 。 检
1 张拥波 , 董为伟. 氧糖剥夺 离体神 经元缺血
模 型 的 建 立 . 庆 医 科 大 学 学 报 ,0 1 2 重 20 ,6
( ) 1 6—1 8 2 :1 1.
影响 : I’ Mr 检测 的结果 表 明 , 外培 养 的 T I 体
大 鼠皮 质 神 经 元 , 过 氧 糖 剥 夺 O D 处 经 G
O9 ( 4 ) 0
细胞 内 S D 和 MD 的 测 定 : 验 结 O A 实
束后 , 按文献 的方法 , 参照试剂盒说明 , 超 声裂解 细 胞后 , 心取 上 清液 测 定 各组 离
S D 和 M A 的 含 量 。各 样 本 吸 光 度 值 O D 应 用 可 见 光 一紫 外 光 分 光 光 度 计 测 定 。 细 胞 蛋 白定 量 应 用 考 马 斯 亮 兰 标 准 定 量
l0 l D O溶 解 剂 , 荡 使 结 晶物 充 O 1 的 MS x 震 分 溶 解 后 , 酶 标 仪 上 比色 , 在 以不 含 细 胞 的 培 养 液 为 空 白组 调 零 , 定 波 长 5 O m 测 7h
量 变 化 的影 响 : 外 培养 的 大 鼠皮 质 神 经 体 元 , 过 氧 糖 剥 夺 O D 处 理 后 , A 含 经 G MD 量 明显 升 高 , 与对 照 组相 比 , 0 O 。 给 P< . 1
S D 活性 下 降 , A 含 量 升 高。 P S2 、 O MD N 5 5 mgL能 明 显 提 高 细 胞 的 存 活 率 , O 0 / SD
处的 O D值 , 分析细胞 的活性。各组取 平
均值 后 按 下式 计 算 细 胞 相 对 存 活 率 : 胞 细
活 性 回 升 , A含 量 趋 向 正 常 , c 一 MD Bl 2蛋
(O 、 S D) 丙二 醛 ( A) 活 性 变 化 , 及 MD 的 以 B l 2蛋 白表 达 的 变 化 。 结 果 : G 作 e一 O D
用 1 0分钟 后 细胞 活 性 明 显 下 降 . 胞 内 2 细
氧糖剥夺 处 理 。O D结 束后 , 原培 养 G 将 基弃 去 , 入 含 M r( .g L) 血 清 加 T 0 5/ 无 ME F 2 常规培养 4小时 后 , M/ 1 , 每孔加 入
超 氧 化 物 歧 化 酶 ( O ) 丙 二 醛 ( A) SD 、 MD 及 考 马 斯 亮 蓝 法 蛋 白检 测 试 剂 盒 。
实 验 动 物 : 3天 S 1~ D大 鼠 。 大 鼠大 脑 皮 层 神 经 细 胞 培 养 : 菌 条 无
亡 的作 用 。在 抗 凋 亡 基 因 中 , c 一 B l 2家 族

取蛋 白, 行浓 度测定 , 调整 为相 同浓 进 并 度 , 1. 5 的 聚 丙 酰 胺 凝 胶 上 电 泳 4 在 21% 5 分 种 后 , 下凝 胶 , 角 标 记 , 4 恒 压 取 切 在 ℃ 1 V 电转 过 夜 后 , 下 硝 酸 纤 维 膜 , 4 取 用 T S洗 2次 , 5 脱 脂 奶 封 闭 2小 时 , B 用 % 加 入 一 抗 于 4C振 荡 过 夜 , B T洗 后 加 入  ̄ TS 二 抗 , 温 振 荡 1小 时 , 用 T S 室 再 B T洗 膜 以除 去 未 结 合 的 二 抗 , 显 色 液 A、 将 B在 用前混合 , N 将 C膜 置 入 摇 床 , 应 1份 , 反
1 8 5 5) 2 3—2 8 9 9. ( :9 9.
中 国社 区 医师 - 医学专业 2 1 年 第 9期 ( 2 00 第1 卷总 第 24 ) 7 3期
P S 氧糖 剥夺 后神 经 细胞 MD 含 N 对 A
小时 。给药 组 在氧 糖 剥夺 处 理 前 2 4小
时 、 糖 剥 夺 处 理 过 程 中及 以后 , 在 培 氧 均 养 液 中加 入 不 同 浓 度 的 P S N。 MI 检 测 : 胞 活 力 检 测 , 皮 质 神 r1 T I 细 将
经 元 以 5X1。 / 的 密 度 接 种 于 9 0 个 孔 6孔
4 00 5 00河 南 中 医学 院 一 附 院
摘 要 目的 : 究三 七 总 皂 苷 ( N ) 研 P S对
氧 糖 剥 夺 的皮 质 神 经元 损 伤 的保 护作 用 。 方 法 : 用 原 代 培 养 的 大 鼠 大 脑 皮 层 神 经 采
下 的 大 鼠 皮 层神 经 细 胞 有 保 护 作 用 . 保 其 护作用可能与其 抑制神 经 细胞脂质 过氧 化反 应 、 高 B l 2蛋 白表 达 有 关 。 提 c一 关 键 词 三七 总 皂 苷 神 经 元 氧 糖 剥 夺( G O D)
d i 1 . 9 9 j i n 0 7 —6 4 . 0 0 o : 0 3 6 / . s .10 s 1x 21.
使 O D处 理 的 皮 质 神 经 元 的 O G D值 升
高 , O D 组 相 比 P <00 。 结 果 提 示 与 G .5 2 5 mg L浓 度 的 P S对 于 经 O D处 理 5、0 / N G 的大 鼠 大 脑 皮 质 神 经 元 的 损 伤 具 有 一 定
2 王 天 佑 , 军 , 亮 . 外 培 养 的 中 枢 神 经 阎 彭 体 细 胞 的 “ 血 ” 损 害 . 国病 理 生 理 杂 志 , 缺 性 中
细胞 , 不 同浓 度 的 P S预 处 理 后 , 立 经 N 建
板 上 , 养 5天 后 , 验 组 给 予 不 同 浓 度 培 实 的 P S 培养 2 N , 4小 时 后 按 上 述 方 法 进 行
氧糖 剥夺 ( G 模 型 , O D) 2小 时后 复 氧 复
糖 , 拟 再 灌 注 模 型 。通 过 M1 模 T 较 神 r比 经 元 的 存 活 情 况 , 测 定超 氧化 物歧 化 酶 并
方法 。
M T 测得 的 O 1I 1 D值 与对照组 比较 无明显
差 异。
P S对 氧 糖 剥 夺 后 神 经 细 胞 B l N e 一2 蛋 白表 达 的 影 响 : 外 培 养 的大 鼠皮 质 神 体 经 元 , 过 氧 糖 剥 夺 O D处 理 后 , e —x 经 G Bl l 的 蛋 白 表 达 受 抑 。给 予 2 、0 / 5 5 mgL浓 度 的 P S使 O D处 理 后 受 抑 制 的 B l l N G c —x
结 果
元 的 B l 2基 因表 达 明显受抑 制 , 经 c一 神
元 凋 亡 增 多 , 重 者 发 生 坏 死 。P S处 理 严 N
Βιβλιοθήκη Baidu
P S对 氧 糖 剥 夺 后 神 经 细 胞 活 性 的 N
后受抑 的 B] c 一2蛋 白 表 达 上 调 , 经 元 神
凋亡减少 。 参考文献
胞 温孵 2 4小 时 后 M T 测得 的 O 1r D值 与对 照 组 比较无 明 显 差 异 。 P S对 氧 糖 剥 夺 后 神 经 细 胞 S D活 N O 性 的影 响 : 外 培 养 的 大 鼠 皮 质 神 经 元 , 体 经 过氧 糖 剥 夺 O D处 理 后 , O 的 活 性 G SD 则 显 著 性 的 下 降 , 对 照 组 相 比 P< 与 0O 。 给 予 2 、0 g L浓 度 的 P S增 加 .1 55 m / N 抗 氧 化 酶 的活 性 , O D组 相 比 P< 与 G 0 0 。 而 各 浓 度 的 P S单 独 与 细 胞 温 孵 .5 N 2 4小 时 后 M T测 得 的 0 1 r D值 与对 照 组 比 较 无 明显 差 异 。
理后 , O 其 D值 明显 下 降 , 与对 照 组相 比
P <00 。 给 予 2 、0 / .5 5 5 mgL浓 度 的 P S N
细胞 氧糖 剥 夺 ( G 模 型 的建 立 : O D)
参 照 文 献 方 法 并 改 进 。培 养 细 胞 采 用无糖无血清培养液 , 于含 C N ( : 置 O : 5 9) 5 的恒 温 密 闭 容 器 内造 成 缺 氧 。 细 胞 缺 氧 10分 种 后 , 液 为 无 血 清 培 养 液 2 换
件 下 分 离 l~ 3天 S 大 脑 皮 层 置 于 含 2 D . 5/ gL胰 蛋 白酶 的 D —H n ’ 液 中 ,7 ak S 3 ℃ 消化 1 5分 , 入 含 lO lL 牛 血 清 的 加 O m/ D M F 2培 养 液 中 止 胰 酶 的 作 用 , ME / 1 移 液管 轻 轻 吹 打 为单 细 胞 悬 液 , 整 细 胞 密 调 度 为( 1~2 )×1 个/ l接 种 于 预 先 经 0 m, 多 聚赖 氨酸 覆 盖 的 9 6孔 板 中 。 接 种 的第 5 ~7 天 加 入 阿 糖 胞 苷 ( 浓 度 为 终 lI o L 处 理 2 OL ] ) . / m 4小 时 以抑 制 胶 质 细 胞 的增 殖 。
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