基因重组

（一） 接合作用（conjugation)
当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接 触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转 移至另一细胞（细菌）的DNA转移称为 接合作用。
（二）转化作用（transformation)
通过自动获取或人为地供给外源DNA， 使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传 表型。
分离
粘端连接
平端连接
目的基因粘端 5’—A 3’— TTCGA—
运载体DNA粘端 AGCTT— A—
DNA连接酶
5’—AAGCTT— 3’—TTCGAA—
末端转移酶
退火
三、重组体引入受体细胞 转化、转染.利用抗药基因进行初筛
2.限制酶切图谱分析（指纹图谱法）
提取重组体DNA 提取运载体DNA
DNA
RH 型 肺炎双球菌
SH 型 肺炎双球菌
（三）转导作用（transduction)
当病毒从被感染的细胞（供体）释放 出来，再次感染另一细胞（受体）时， 发生在供体细胞与受体细胞之间的 DNA转移及基因重组。
（四）转座（transposition)
大多数基因在基因组内的位置是固定的， 但有些基因可以从一个位置移动到另一 位置。这些可移动的 DNA序列包括插入 序列和转座子。由插入序列和转座子介 导的基因移位或重排称为转座。
从原位迁至新位 2. 复制性转座
插入序列复制后，一个复制本迁 到新位，另一个保留在原位。
（二）转座子转座 转座子（transposons）：可从一个染色体位
点转移到另一位点的分散重复序列。 反向重复序列
组成 转座酶基因 特殊基因：如抗生素抗性基因等
转座酶基因
特殊基因
（五）同源重组
发生在同源序列间的重组。同源重 组不依赖特异DNA序列，而依赖同 源性。
（一）插入序列转座
插入序列（insertion sequences，IS）：长 750 ~ 1500bp
组成：反向重复序列：9~41bp，位于两侧 转座酶编码基因：产物引起转座，位于中间 正向重复序列：4~12bp，位于反向重复序列
外侧，为插入序列所特有
转座酶基因
插入序列转座： 1. 保守性转座
同源重组需要一些重组蛋白和酶。 如Rec A、B、C、D及DNA连接酶等。
Holliday 中间体
二、基因工程
1.将目的基因与运 载体DNA在体外 进行重组
载体DNA
目的基因
限制性核 酸内切酶
2.转化或转染
DNA 重组体 引入宿主细胞
3.筛选
筛选含有重组体的细胞
4.克隆（cloning）、表达 无性繁殖扩增、基因表达、纯化产物
将DNA用酶法裂解 （鸟枪法）裂解为相 当于基因长度的片段
与质粒重组并 引入大肠杆菌 即为G-二、DNA重组（目的基因与载体重组）
重要工具酶——限制性核酸内切酶 选用II型限制酶，能专一识别和切割双链DNA
限制酶的命名 Haemophilus influenzae
d
Hind I
嗜血杆菌属 流感杆菌（种名） 株名
基因重组
一、基因重组的概念
基因重组是一段DNA在细胞内或细胞间甚至 在不同物种DNA之间进行交换和重新组合。
同源重组（姐妹染色体交换）
DNA损伤时重组频率增高 转化：是指外来DNA引入细胞引起遗传性的改变。 转染：是指噬菌体感染时其DNA进入细菌体内。 转导：是指噬菌体将细菌的一段DNA代入另一个细菌。
限制酶切，琼 脂糖凝胶电泳
电泳区带比较 （指纹图谱）
3.标记探针核酸杂交鉴定
探针是与待测定基因DNA序列互补的寡核苷酸链
标记探针是用放射性同位素如此32P或用非放射性 物质标记
转基因植物获得新的性状
（一）目的基因的获得
1.直接从DNA中分离目的基因 2.分离mRNA，逆转录合成cDNA 3.用D基因
从细胞中提取 全部mRNA
反转录合成 cDNA并复 制成双链的
DNA
与质粒重组并 引入大肠杆菌 即为cDNAHind II取H
取in
d
Hind III
Hind III 5’—AAGCTT— 3’—TTCGAA—
识别六核 苷酸序列
5’—CCCGGG— Sma I 3’—GGGCCC—
5’—A AGCTT— 3’—T TCGA A—
产生粘端切口
5’—CCC GGG— 3’—GGG CCC—
产生平端切口
重组