细胞培养室的建立与环境设计.

细胞培养室的建立与环境设计

细胞培养室是提供细胞生物学研究的基础实验室，有500m2的实验场地，拥有4个层流的细胞操作间、6个普通培养操作间，及配套实验室和洗涤消毒室。

主要设备：超净工作台10台，forma细胞培养箱7台，普通倒置显微镜8台，普通生物显微镜5台，荧光显微镜--正置、倒置--各1台及照相系统一套（OLYMPUS），显微摄象和采图及分析系统1套，sigma离心机1台，sigma低温离心机1台，程序降温仪1台及相应的配套设备。

细胞培养室24小时开放，定期定时室内消毒灭菌。细胞培养室除提供细胞培养所需要的各种工具、生物学试剂及细胞储藏,洗涤、消毒服务外，还提供技术指导、咨询，定期为广大科研工作者开设技术讲座，开展技术经验交流活动。

宽敞的细胞培养区

普通细胞培养室内走廊

普通细胞培养室一角

万级层流细胞培养室

一、建细胞间的一些细节问题：

1、甲醛薰蒸：

40％甲醛溶液(药用规格、福建三明化工总厂出品)，用量30 ml／m3，室内温度21～24℃，相对湿度75％～85％，加热薰蒸使蒸汽弥漫全室，关闭门窗1 h。

甲醛水溶液为无色，具有强烈刺激性气味的液体，可杀灭多数微生物，价廉，熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。其主要用法为：

（1）．熏蒸消毒:对室内消毒其用量为20－25%毫升/米，在加热该溶液时最好同时煮沸一壶水，使室内相对温度保持在70-90%左右，室内温度最好在20摄氏度以上，作用时间12-24小时。如消毒皮毛服装，甲醛水溶液的用量可加至125毫升/米,挂衣密度为每平方米3套为宜。熏蒸消毒时应密闭门窗。消毒后一般多用自然通风驱散甲醛气体，其需时较长，急于排出气体，可将25%氨水加热蒸发中和。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半，中和时间为30分钟。

（2）．自然挥发: 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中，室内温度保持在18摄氏度以上，同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上，经16小时可达到室内消毒的目的。

关于甲酸、甲醛和甲醇三者的毒性比较：甲酸的毒性比甲醇大6倍，甲醛的毒性比甲醇大30倍。所以吃进4~10克甲醇，就能引起慢性中毒。它的毒性作用主要表现在损伤视力，使视力减退（不能矫正），视野缩小，以致双目失明，直到死亡。

2、关于紫外线：

紫外线的穿透能力非常弱的，主要靠电离产生氧自由基来消毒。细胞培养室里面一些不能照射紫外的物件可以用一般的材料盖住。如：玻璃和有机玻璃都可以的。紫外有些人认为大型精密的显微镜是不可以照紫外的，因为它们的镜头上涂的膜会被分解掉，但我特意问了我校光学系的老师，他们认为是没有关系的。

此外，不要担心紫外不能照射到的角落，因为紫外杀菌功能除了紫外本身以外，还可以由产生的臭氧来完成。

臭氧过量吸入的作用应该和双氧水的作用是一样的，个人认为也许有一定的致癌性。所以紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。

3、关于新洁尔灭：

【药品名称】苯扎溴铵溶液(新洁而灭溶液) (乙类非处方药【别名】BenzalkoniumBromideSolution【标准来源】《中华人民共和国药典》2000年版。【性状】无色或淡黄色的澄明液体;芳香;味极苦;强力振摇能发生多量泡沫，遇低温可能发生浑浊或沉淀。【药物组成】每毫升含苯扎溴铵0.05克(5%)。【作用类别】皮肤科用药品。【药理作用】苯扎溴铵为阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂。【临床应用】用于皮肤黏膜和伤口的消毒。【用法用量】外用，使用前应稀释即配即用。皮肤消毒使用0.1%溶液；创面黏膜消毒用0.01%溶液；稀释方法：0.1%溶液：取本品一份，加纯化水或清水50份；0.01%溶液：取本品1份，加纯化水或清水500份。【注意事项】l. 本品为外用消毒防腐药，不可内服。

2. 不得用塑料或铝制容器贮存。

3. 涂布部位如有灼烧感、瘙痒、红肿等，应停止用药，洗净。必要时向医师咨询。

4. 低温时，可能出现混浊或沉淀，可置于温水中加温，振摇使溶解后使用。

5. 儿童必须在成人监护下使用。【不良反应】偶见过敏反应。【药物相互作用】l. 不得与肥皂或其他合成洗涤剂并用。2. 局部消毒时勿与碘酊、高锰酸钾、双氧水、磺胺粉等并用。3. 如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。【规格】500毫升﹕25克；100毫升﹕5克(5%)。【贮藏】避光，密封保存。

评论：在甲醛灭菌前，先用新洁尔来擦洗整个墙面，此外，平时地板灭菌也可以用它。新洁尔灭和酒精相比，最大的优点是便宜，因为新洁尔灭500ml只需5元，而且可以稀释50倍用，而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。

二、培养准备时的一些问题：

1、多聚赖氨酸：

多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution）

Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃

Thimerosal, 0.01%, added as preservative

多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。

适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

[使用说明]

免疫学

操作步骤（可直接在玻片上涂布）

1．灭菌的ddH2O 1:10稀释该多聚赖氨酸溶液。

2．用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温18-26℃

3．将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。

4．在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。

[注意]

1．每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张，超过90张片子将影响其黏合力。

2．用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。

3．不要在用过的稀释液中加新的溶液。

4．释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃，至少在3个月内是稳定的。

5．用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃。

2、洗液的一些问题：

重铬酸钾硫酸洗液

通常称为洗洁液或洗液，其成分主要为重铬酸钾与硫酸,是强氧化剂。

K2Cr2O7 4H2SO4 K2SO4 Cr2(SO4)3 3[O]

因其有很强的氧化力，一般有机物如血、尿、油脂等类污遗迹可被氧化而除净。事先将溶液稍微加热，则效力更强。新鲜铬酸洗液为棕红色，若使用的次数过多，重铬酸钾就被还原为绿色的铬酸盐，效力减小，此时可加热浓缩或补加重铬酸钾，仍可继续使用。

配方：稀洗液重铬酸钾10g

粗浓硫酸200ml

水100ml

浓洗液重铬酸钾20g

粗浓硫酸350ml

水40ml

配法：先取粗制重铬酸钾20g，放于大烧杯内，加普通水100ml使重铬酸钾溶解（必