几种常用的染色方法

几种常用的染色方法

1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。

2．革兰氏染色法

（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经 1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用 1—3min，水洗。

（3）加 95％酒精于抹片上脱色，约 30s---1min，水洗。

（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染 10---30s，水洗。

（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

3．抗酸性染色法

（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经 3—5min，水洗。（2）用 3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。

（3）用美蓝染色液复染约 1min，水洗。

（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。

以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色 1min，水洗，用1 ％美蓝染色液复染约 20s ，水洗。

对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。

4．瑞氏染色法

（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经 1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或 PBS 液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约 3min 左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。

（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色 3--5min ，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。

5．姬姆萨染色法

（1）于 5ml 新煮过的中性蒸馏水中滴加 5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。

（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色 30min，或者染色数小时至 24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。

6．克利特氏荚膜染色法

（1）染色液配制

①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。

②碱性复红溶液碱性复红0.03g ，95 ％酒精 1ml ，蒸馏水 99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。

（2）染色法

①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。

②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。

③水洗后、吸干、镜检。

④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。

（ 1 ）染色配制

①结晶紫福尔马林染色液结晶紫 10g ，福尔马林溶液 100ml 。混合使其完全溶解，隔夜过滤。

②碱性复红溶液见前：克利特氏荚膜染色法

7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

（2）染色法

①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色 0.5—1min。

②水洗后，以碱性复红染色液复染15 — 30s。

③水洗、吸干、镜检。

④染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。

8. 番红染色液荚膜染色法

（ 1 ）染液配制番红（或沙黄）0.7g ， 95 ％酒精 20ml ，蒸馏水

15ml 。

将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。

（2）染色法

①涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。

②水洗、吸干、镜检。

③染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。

9. 赫斯氏荚膜染色法

（ 1 ）染色液配制

①龙胆紫酒精溶液龙胆紫酒精饱和液5ml ，蒸馏水95ml 。

②硫酸铜水溶液硫酸铜20g ，蒸馏水 100ml 。

（ 2 ）染色法

①涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。

②用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。

③染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。

10 ．安沙尼氏荚膜染色法

（ 1 ）染色液配制

①1％结晶紫水溶液。

②20％硫酸铜水溶液。

（ 2 ）染色法

①将涂片在空气中自然干燥。

②以 1 ％结晶紫水溶液染色2min （不必加热），再以20 ％硫酸铜代水冲洗染液。

③吸干、镜检。

④染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。

11 ．苗列尔氏芽孢染色法

（ 1 ）染色液配制

①媒染液5％铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml）

②染色液石炭酸复红液

③脱色液 2 ％硫酸液（纯硫酸2ml ，加蒸馏水98ml ）

④复染液碱性美蓝

（2）染色法

涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色10min ，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染色（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱色剂脱色10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。

结果：芽孢呈红色，菌体呈蓝色。

12．孔雀绿沙黄芽孢染色法

（1）染色液 5％孔雀绿液，0.5％沙黄液。

（2）染色法

涂片火焰固定，加 5％孔雀绿液微微加温染色30s—1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染 30s，水洗，干燥后镜检。

结果：芽孢呈绿色，菌体其它部分呈淡红色。

13．李富逊氏鞭毛染色法

（1）染色液配制5％钾明矾水溶液 10ml，20％鞣酸水溶液 10ml，1％碱性

复红酒杯精溶液 10ml。

将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存 1 周，复染液可用下列染液：美蓝 0.1g，硼砂 0.5g

，蒸馏水 100ml。

（2）染色法

①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。

②菌液最好用10 — 16h 的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。

③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。

④将上述染液滴加于涂片上，染10 — 15min ，染色时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染色。

⑤轻轻地水洗1—2min。

⑥在室温或37 度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红色。

⑦如需复染色，则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后，染色10min ，用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝色，鞭毛呈红色。