实验四血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
实验4 醋酸纤维薄膜法分离血清蛋白质
表 血清中各Biblioteka 白组分的等电点和相对分子量清
三、实验试剂和材料
血清：抗A血清（医用） 巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH8.6） 染色液：1％氨基黑10B染料 漂洗液 浸出液 透明液 醋酸纤维薄膜：2×8 cm，厚度120μm 用普通的薄载玻片自制点样器 直流稳压电泳仪，水平电泳槽
事先可在滤纸上练习点样，掌握点样技术，这是获得具有清晰区带 的电泳图谱的重要环节之一。
将点好样的薄膜 (无光泽面朝下)两端紧贴在支架的滤纸桥上(加血清 端靠负极)，中部悬空平直。加上槽盖平衡10min，仔细检查电泳装 臵的线路是否正确，然后通电。
Ⅱ.电泳条件
电压90-110V，电流0.4-0.6mA/cm2，通电时间45-60min。泳动距离 约达3.5-4.0cm时即可断电。
将血清样品点样于醋酸纤维膜上，在pH 8.6的缓冲液中 电泳，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各 蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，分子大小 和形状各异，氨基酸组分、立体构象和相对分子量不同， 因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM 经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1、α2、β、γ—球 蛋白5条区带。 在一定的范围内，蛋白质的含量与结合的染料量呈正比， 故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/LNaOH溶液浸 洗下来，进行比色，测定其相对含量。
四、实验操作流程
薄膜的准备 电泳槽的准备 点样 电泳 染色与漂洗脱色
Ⅰ.准备和点样：
在浸泡薄膜前应辩清薄膜的正反面，因为浸泡打湿后不易辩别正 反面。 在距膜一端1.5cm用铅笔作好标记，将薄膜漂在缓冲液液面上，迅 速湿润，整条薄膜一致而无白点。然后用竹镊子将薄膜轻轻完全 浸入缓冲液中，待膜完全浸透后使用(约0.5h)。 然后将薄膜制作电桥：将电泳缓冲液倒入电泳槽两边，平衡两边 液面。根据电泳槽的纵向尺寸，剪裁尺寸合适的滤纸条,附着在电 泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电 泳槽的缓冲液内。然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡， 使滤纸紧贴在支架上，即为“滤纸桥”。按照同样的方法，在另 一个电极槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。它们的作用是联系 醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的中间“桥梁”。
4、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳目的：熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用，了解电泳技术的一般原理。
原理：1、电泳：带电质点在电场中移动的现象称为电泳。
影响电泳泳动速度的因素：《生化实验》p.51.内因：带电性质及电量，质点大小，质点形状外因：电场强度，溶液pH值，溶液离子强度，电渗现象等任何一个物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。
例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团，它们在溶液中会解离而带电。
一般来说，在碱性溶液中（即溶液的pH值大于等电点pI；本实验的pH值为8.6，pI不一样，样品带电荷也就不一样；选取不合适的pH，会使样品带有不同的正或负电荷，影响电泳），分子带负电荷，在电场中向正极移动。
而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极移动。
移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。
不同的质点在同一电场中泳动速度不同，常用泳动度（或迁移率）来表示。
泳动度的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。
即：p.53.《生化实验》泳动度首先取决于带电质点的性质，即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的形状。
一般来说，质点所带静电荷越多，质点直径越小，越接近于球形，则在电场中泳动速度越快；反之，则越慢。
泳动度除受质点本身性质的影响外，还受其它外界因素的影响，如溶液的粘度等。
影响泳动速度的主要外界因素有下列几种：p.53-56.一）电场强度二）溶液的pH值pH值距等电点越远，质点所带静电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。
因此分离某一混合蛋白质样品时，应选择一个合适的pH值，使各种蛋白质所带静电荷的量差异较大，以利于分离。
为使电泳过程中溶液的pH恒定，必须采用缓冲液。
三）溶液的离子强度越高，泳动速度越慢，一般最适离子强度在0.02~0.2之间。
为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性，缓冲液通常要保持一定的离子强度，一般在0.02－0.2，离子强度过低，则缓冲能力差，但如果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起电泳速度降低。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理以醋酸纤维薄膜为支撑物，浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。
将微量血清点于膜上，电泳后，将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色，洗去多余染料。
操作1．准备与点样(1)将薄膜切成2.5×8cm的小片。
在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm 处用铅笔划一线，以标明点样位置。
同时在一端边沿写上实验者的学号或姓名。
(2)将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉；(3)将充分浸透(膜上没有白色斑痕)的膜条取出，用滤纸吸去多余的缓冲液，把膜条两端各贴于两块玻片上使点样线架空。
(4)用血色素吸管吸取新鲜血清3~5ul，涂于载玻片末端处，或用载玻片在血清上蘸一下，使载玻片下端粘上一薄层血清，然后紧按在薄膜点样线上，待血清全部透入膜内，移开载玻片。
2．电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时，无光泽面(即点样面)向下，点样端置于阴极槽架上以四层滤纸作桥垫，膜条与滤纸需贴紧，待平衡5分钟后通电，电压为110V，电流为0.4~0.6mA/cm，通电1小时左右关闭电源。
3．染色通电完毕后用镊子将薄膜取出，直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染5分钟取出，立即浸入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止。
用滤纸吸干薄膜。
4．定量本实验不要求进行定量分析，如有需要，可采用薄层扫描仪进行扫描定量，或采用洗脱后再进行比色的方法进行定量。
5．计算光密度总和T=A+α1+α2+β+γ各部分蛋白质的百分数为：临床意义1．正常值：白蛋白57~72%α1球蛋白2~5%α2球蛋白4~9%β球蛋白6.5~12%γ球蛋白12~20%2．肝硬化时白蛋白显著降低，γ球蛋白升高2~3倍；肾病综合症时白蛋白降低，α2和β球蛋白升高。
试剂与器材1．电泳仪：包括直流电源整流器和电泳槽两个部分，电泳槽用有机玻璃或塑料等制成。
它有两个电极，用白金丝制成。
2．巴比妥缓冲液，pH8.6，离子强度0.06巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml? 3．氨基黑10B染色液氨基黑10B 0.5g，甲醇50ml，冰醋酸10ml，蒸馏水40ml4．漂洗液配法95%乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml 混匀。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
实验：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳【实验目的】1.掌握电泳分离蛋白质的基本原理。
2.掌握醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质技术。
【实验原理】带点颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动称为电泳。
血清蛋白质的等电点均低于pH7.0，电泳时常采用pH8.6的缓冲液，此时血清各蛋白质解离成负离子，在电场中向正极移动。
因各种血清蛋白的等电点不同，在同一pH下带电数量不同，各蛋白质的分子大小也有差别，故在电场中的移动速度不同。
分子小而带电荷多的蛋白质泳动较快，分子大而带电荷少的泳动较慢，从而可将血清蛋白分离成数条区带。
蛋白质区带电泳需要支持介质，本实验采用醋酸纤维素薄膜。
醋酸纤维素薄膜电泳可把血清蛋白分离为：清蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白等5条区带。
电泳后将薄膜置于染色液中使蛋白质固定并染色后，不仅可看到清晰的条带，还可以将色带分别溶于碱溶液再进行比色测定，从而计算出血清蛋白的百分含量。
【实验步骤】1.准备电泳槽：将电泳槽洗净，在两个电泳槽中倒入等体积巴比妥缓冲液（此步骤由指导老师提前准备完成）。
2.制作滤纸桥：在电泳槽的两个膜支架上，各放两层滤纸条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电泳缓冲液中。
当滤纸全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸一端能紧贴在膜支架上，即为滤纸桥（此步骤由指导老师提前准备完成）。
3.浸泡与点样：将 2.5cm×8cm醋酸纤维素薄膜条浸入巴比妥缓冲液中充分浸透（约30min~1h)后取出，用滤纸吸干后平放在滤纸上，于光泽面用X光片条蘸上血清（量不可太多）后，在距膜端1.5cm处迅速压一下，使血清印吸在薄膜上。
点样时用力需均匀。
待血清渗入薄膜后，将薄膜两端紧贴在滤纸桥上，点样面须向下，加盖，平衡2~3min，然后通电。
4.电泳：调节电压110~160（一般140）V；电流0.4~0.6mA/cm宽；时间45~60min。
5.染色：电泳完毕后，关闭电源用镊子将薄膜取出，直接浸于氨基黑染色液中3~5min；然后取出用漂洗液漂洗3~4次，每次3~5min，至背景完全无色为止。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
【 注意事项】
⑴ 醋酸纤维素薄膜的预处理
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一。将干膜片 漂浮于电极缓冲液表面，其目的是选择膜片厚薄及均匀度， 如漂浮 15-30s 时，膜片吸水不均匀，则有白色斑点或条纹， 这提示膜片厚薄不均，应弃去不用，以免造成电泳后区带 扭曲，界线不清，背景脱色困难，结果难以重复。
③透明液：临用前配制。
甲液：取冰乙酸（AR）15mL，无水乙醇（AR）85mL， 混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液：取冰乙酸（AR）25mL，无水乙醇（AR）75mL， 混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
④保存液：液体石蜡。
⑤定量洗脱液（0.4mol/L NaOH溶液）：
称取 16g 氢氧化钠（ AR ）用少量蒸馏水溶解后定容 至1000ml。
取出薄膜放在滤纸上，用吹风机的冷风将薄膜 吹干。
图 3-8 血清蛋白与脂蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 图谱比较示意图 a.蛋白染色 b.脂蛋白染色
6、结果判断与定量 一般血清蛋白电泳经蛋白染色后，可显示 5 条区 带，其排列顺序见图 3-8a ，未经透明处理的电 泳图谱可直接用于定量测定。 可采用洗脱法或光吸收扫描法，测定各蛋白组 分相对百分含量。
表3-12 人血浆蛋白质的等电及迁移率 泳动脉/(cm2· V-1· S-1) 分子量 蛋白质名称 等电点 清蛋白 4.88 -5.9×10-5 69000
α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白 纤维蛋白元 5.06 5.06 5.12 -5.1×10-5 -4.1×10-5 -2.8×10-5 200000 300000 9000-150000 156000-300000
【实验材料】
1．电泳仪 包括直流电源整流器和 电泳槽两个部分。 2．醋酸纤维素薄膜。
实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
• 4. 染色
取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染 色10min.
• 5. 漂洗
取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数 次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。
• 6. 定量测定
• 2 点样：
• 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋 白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边 取样（注意均匀）——然后轻轻的在纤维 薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻）
• 3 电泳：
• 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲 液（注意两边液面高度一致）——将纤维 薄膜架于桥上（点样端靠近负极，点样面 朝下）——接好导线——调节电泳仪参 数——电泳30min
• 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄 膜作为支持物的电泳方法。
• 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透 性，对分子移动无阻力，作为区带电泳 的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、 样品用量少，应用范围广，分离清晰， 没有吸附现象等优点。
二 实验步骤
• 1. 浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别 光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离 边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边 缘平行的直线（为了点样方便）—— 然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡 20min——用镊子取出纤维薄膜——y 用滤纸吸干——平置于载玻片上（粗 糙面朝上）
实验四 醋酸纤维薄膜电泳2008
实验结果
醋酸纤维素薄膜电泳的实验结果 1.全血清电泳图谱 2.血清清蛋白电泳图谱 3.γ-球蛋白电泳图谱
注意事项
1、薄膜内不含杂质和膜条厚度要均匀。 2、点样时醋酸纤维薄膜以不干不湿为 宜；掌握好点样的力度；要控制好点样 的量；血清离膜条两侧要空1 - 2 m m ； 3、点样的膜条要马上搭在滤纸桥上， 而且，膜条要紧贴滤纸桥。 4、在染色固定前要谨防薄膜之间重叠， 杜绝血清蛋白彼此粘连的现象。
实验步骤
• 六、透明 透明 • 用滤纸吸干薄膜，浸入透明液的甲液中，2min 后立即取出，再浸入透明液的乙液中，1min后迅 速取出，紧贴在载物片上，赶出气泡。约2-3min 内薄膜完全透明，放置10-15min后，用吹风机将 膜吹干。在水笼头下将玻璃板上透明的薄膜润湿 后，用单面刀片从膜的一角撬起，并划开一端， 再用手捏住撬起的膜轻轻撕下，可以顺利地从玻 璃板上取下透明的薄膜。用滤纸吸干，浸入液体 石腊中，约3min后取出。再用干净的滤纸吸干， 压平，则成为色泽鲜艳而又透明的血清蛋白醋酸 纤维薄膜电泳图谱，可以长期保存不褪色。
实验原理
6.目前已广泛用于分析检测血浆蛋白、脂蛋白、 . 糖蛋白、核酸及其他生物大分子,为心血管疾病、 肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据, 因而已成为医学和临床检验的常规技术。 7.本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血 7. 清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白 质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不 同，在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素 薄膜为支持物，正常小牛血清在pH8.6的缓冲体 系中电泳，染色后可显示4条区带。其中清蛋白 的泳动速度最快，其余依次为α-、β-及γ-球 蛋白。
实验步骤
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白【实验目的】掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
【实验原理】蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
【实验器材及试剂】器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；试剂：巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）染色液（可重复使用，使用后回收）漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml，水50ml 透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml+冰乙酸4ml，混匀【操作方法】1. 薄膜浸泡：将醋酸纤维薄膜在缓冲液中浸透（30min），取出后用滤纸吸去多余缓冲液。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
三、操作
1、准备： （1）浸泡：取8cm2cm醋酸纤维薄膜条一 张，浸入pH8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中， 浸泡约30min，完全浸透后，用镊子轻轻取 出，夹在滤纸中吸去多余的缓冲液，然后无 光泽面向上平放在干净滤纸上。 （ 2 玻片宽度应小于 膜条），然后在距膜条一端1.5cm处轻轻落 下并随即提起。加样应力求均匀（可先在普 通滤纸上练习点样几次），要求在膜条上点 上细条状的血清样品。
醋酸纤维薄膜、滤纸、电泳仪、电泳槽、小镊子（无 齿）、烧杯、量筒、载玻片、培养皿。
本实验以醋酸纤维薄膜作为支持物，于浸 有缓冲液的薄膜一端加微量血清，膜两端连 接于缓冲液。所用缓冲液的pH为8.6，大于 血清中各种蛋白质的等电点。因此，各种蛋 白质皆带负电荷，在电场中向正极方向泳
动，因泳动速度不同而被分离。从正极端起， 依次为清蛋白、α1- 、α2- 、β-和γ-球蛋白， 将蛋白质染色后，可按染色区带位置进行定 性观察，也可对各条色带进行定量测定。
四、结果 将电泳图谱贴在实验报告中。
试剂和器材
1. 试剂： （1）血清：人血清或动物血清； （2）pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液：称取巴比妥钠 12.76g和巴比妥1.66g，溶于蒸溜水，定容至1000mL 。 （3）染色液：称取氨基黑10B 0.5g，加蒸溜水40mL， 甲醇50mL和冰醋酸10mL，混匀即可。 （4）漂洗液：取95％乙醇45mL，冰醋酸5mL和蒸溜水 50mL ，混匀即可。 2. 器材 ：
1.5cm
6.5cm
（－）
（＋）
（3）上槽：将点好样的膜条，无光泽面向 下，平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，两端紧 贴在滤纸桥上，点样端置于负极，（把膜条 摆平拉直后）盖好电泳槽盖，平衡10min。
(完整版)04生物化学实验--醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白【目的】1 ．掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的操作技术与原理。
2 ．熟悉醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的临床意义。
【原理】带电粒子在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象称为电泳(Electrophoresis) 。
蛋白质为两性电解质。
在不同 PH 下，其带电情况不同。
在等电点时，蛋白质为兼性离子，其实效电荷为零，不发生泳动。
蛋白分子在 pH 小于其等电点的溶液中，呈碱式解离带正电向负极泳动。
在 pH 大于其等电点溶液中，呈酸式解离带负电，泳向正极。
带电粒子在电场中的泳动速度常用迁移率 (Mobility) 来表示。
它除与电场强度、溶液的性质等有关外，主要决定于分子颗粒的电荷量以及其分子的大小与形状等。
电荷较多，分子较小的球状蛋白质泳动较快。
血清中的各种蛋白质的等电点均低于 7 ，故在 PH8.6 缓冲液中，均带负电荷。
由于各种蛋白质的等电点不同，带电荷量不等，加之分子量不同，导致在电场中泳动速度不同，从而加以分离。
清蛋白泳动最快，其次为α 1 、α 2 、β及γ 球蛋白。
将蛋白质固定染色后，洗去多余染料，可看到清晰的色带（图 3-3 ）。
将各色带剪开，分别溶于碱性液中，可进行比色分析，计算出各种蛋白质的百分含量，或用吸光度计进行扫描定量。
图 3-3 正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳示意图谱【器材】1 ．电泳仪 ( 稳压器、电泳槽 )2 ．分光光度计3 ．点样器(1.4× 1.8cm 的 X 光片 )4 ．血清 ( 放置于载玻片上 )5 ．醋酸纤维薄膜(2× 8cm )【试剂】1 ． pH8.6 0.06M 巴比妥缓冲液取巴比妥 1.62g ，巴比妥钠 12.38g ，用蒸馏水加热溶解冷却后加至 1000ml 。
测试 pH 值，若 pH 偏离 8.6 ，可用 1mol/LHCl 或 NaOH 校正。
2 ．染色液 ( 任选其一 )（ 1 ）氨基黑 10 B 1g ，三氯醋酸 13.4g ，磺柳酸 13.4g ，蒸馏水加至1000ml 。
生物化学实验血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
生物化学实验血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的1.掌握电泳法分离血清蛋白质的原理。
2.掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法。
3.测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、实验原理带电粒子在电场中向与其电性相反的电极方向泳动的现象称为电泳。
血清中各种蛋白质的等电点在pH4.0～7.3之间，在pH8.6的缓冲溶液中均带负电荷，在电场中向正极泳动。
血清中各种蛋白质的等电点不同，所以带电荷量也不同。
此外各种蛋白质的分子大小各有差异，因此在同一电场中泳动的速度不同。
分子小而带电荷多者，泳动较快；反之，则较慢。
采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法，称为醋酸纤维素薄膜电泳。
该膜具有均一的泡沫状结构（厚约120μm），渗透性强，对分子移动的阻力很弱。
用其作支持物进行电泳，具有微量、快速、简便、分离清晰、对样品无吸附现象等优点。
现已广泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材1. 电泳仪：为电泳提供直流电源。
2. 电泳槽：为电泳提供场所。
多用有机玻璃制成，电极用铂丝。
3. 血清加样器：可用盖玻片或X胶片或微量加样器。
4. 醋酸纤维素薄膜：2cm×8cm5. 其它：培养皿（直径9-10cm）、滤纸、玻璃板、镊子等。
四、实验试剂和材料1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH=8.6，离子强度 0.075)：称取2.768g巴比妥和15.458g巴比妥钠,置于大烧杯中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定溶至1000ml。
置4℃保存，备用。
2、丽春红-S：称取0.5g丽春红，三氯醋酸13.4g，磺硫酸13.4g，蒸馏水加至1000ml。
3、漂洗液：取无水乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml，混匀置塞试剂瓶内贮存。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果引言醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术，可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动，实现对混合物的分离。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离，以便进一步研究其组成和功能。
实验方法1.准备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸，并在实验室条件下保持干燥。
2.准备电泳槽：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，确保其与电极接触良好。
3.准备样品：采集血清样品，并将其稀释至适当浓度。
4.进行电泳分离：将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上，然后施加适当电场使样品在薄膜上移动。
5.停止电泳：根据需要的分离程度，适时停止电泳过程。
6.分析结果：观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况，并记录相关数据。
实验结果血清蛋白分离图谱根据实验结果，我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。
下图展示了血清蛋白分离图谱，其中纵轴表示电迁移率，横轴表示时间。
1.血清蛋白A的电迁移率为X，迁移时间为Y。
2.血清蛋白B的电迁移率为X，迁移时间为Y。
3.血清蛋白C的电迁移率为X，迁移时间为Y。
4.…血清蛋白组成分析根据血清蛋白分离图谱，我们可以进一步分析血清蛋白的组成。
通过与已知标准品进行比对，我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量：1.血清蛋白A占总蛋白的X%。
2.血清蛋白B占总蛋白的X%。
3.血清蛋白C占总蛋白的X%。
4.…血清蛋白功能研究根据血清蛋白的组成分析结果，我们可以进一步研究血清蛋白的功能。
以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果：血清蛋白A的功能1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。
2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。
血清蛋白B的功能1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。
2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
血清蛋白C的功能1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。
2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。
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3．电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，做好滤纸桥（滤纸桥的制作如下：先剪裁尺寸合适的滤纸，对折一下，一头凉在横杆上，另一头浸入缓冲液中，调节横杆之间的距离到略小于醋酸纤维薄膜的长度即可）。用镊子将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，要平直，参见图4-6和图4-7，膜条上点样的一端靠近负极。当4片醋酸纤维薄膜都放好后，盖严电泳室，检查一下电泳槽和稳压电源是否已经连接好。通电，调节电压至160V，此时的电流强度为0.4～0.7mA/cm，电泳时间约为40min。
以下4、5两步的操作，请相邻四个组的同学们（即同一排桌子）集中在一起做。
从左至右依次为：
血清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白
4．染色：电泳完毕后，关上电源开关，用镊子将薄膜条取下并放在装有染色液的培养皿中浸泡10 min（注意盖好培养皿的盖子，以免溶剂挥发）。
实验目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。
实验原理
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅120mm，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰和没有吸附现象等优点。目前已广泛应用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离以及免疫电泳。
实验操作
准备工作：安装好电泳槽，在电泳槽内加入缓冲液，连接常压电泳仪，熟悉常压电泳仪的操作。检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
1.平衡：用镊子取醋酸纤维薄膜2张，识别出光泽面与粗糙面，将粗糙面朝上放在电泳槽中的缓冲液中浸泡20min。
2.点样：事先用点样器在滤纸上点几个样，熟悉一下点样器的用法。然后把膜条从缓冲液中取出，夹在两层滤纸内用手指快速捋一下，以吸干表面多余的液体，随即将粗糙面朝上平铺在玻璃板上。注意，切勿将膜条长时间放在滤纸上，以免膜条中的缓冲液过度吸出。用玻棒蘸一点血清，再将点样器沾一下玻棒，参见图4-5，血清就会均匀地分布在点样器的狭缝中。将点样器在膜条一端2～3cm处轻轻地垂直落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品，每张膜点一个样，参见
如果需要定量测定，可以将膜条用滤纸压平吸干，按区带分段剪开，分别浸在0.4mol/L氢氧化钠溶液中，并剪取相同大小的无色带膜条作空白对照，进行比色。或者将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡2～3 min后取出贴于洁净玻璃板上，干后即为透明的薄膜图谱，用光密度计直接测定。
5．漂洗：将膜条从染色液中取出，在培养皿的边缘上沥去表面多余的染色液，依次放入装有漂洗液的培养皿（共有3套）中漂洗3次（未漂洗时注意盖好培养皿的盖子，以免溶剂挥发），至无蛋白区底色脱净为止，可得色带清晰的电泳图谱，参见图4-8。
实验结束，将染色液回收，漂洗液倒掉，培养皿清洗干净，倒置于桌面上，整理好桌面上的仪器和试剂，并注意清洁自己的操作台，请老师验收。交实验报告时请将自己的实验结果贴在上面（只贴一端，否则因膜变形而拉断）。实验报告当场交给老师。