柱色谱注意的事项
有机化学实验十柱色谱
实验十柱色谱一．实验目的：1. 学习柱色谱的原理及方法。
二．实验重点和难点：1.学习柱色谱的原理及方法。
实验类型：基础性实验学时：4学时三．实验装置和药品：主要实验仪器：色谱柱(或25mL碱式滴定管) 25mL锥形瓶普通漏斗玻璃棉或脱脂棉量筒试管电子天平烧杯主要化学试剂：石油醚（600C—900C）丙酮中性氧化铝(100--200目) 500g菠菜色素95%乙醇四．实验装置图：五．实验原理：图 1 柱色谱装置柱色谱法是色谱方法之一。
色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。
(一)色谱法的基本原理：是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配) 的不同，或其它亲和作用的性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
(二)色谱法的分类：1.根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附善谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等。
2.根据操作条件的不同，可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。
(三)柱色谱原理：柱色谱是化合物在液相和固相之间的分配，属于固--液吸附层析。
图1就是一般柱色谱装置。
柱内装有”活性”固体(固定相) 如氧化铝或硅胶等。
液体样品从柱顶加入流经吸附柱时，即被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入洗脱溶剂冲洗。
由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，形成若干色带。
再用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，分别收集各组分，再逐个鉴定。
1.吸附剂：常用的吸附剂有：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。
吸附剂一般要经过纯化和活性处理。
选择吸附剂的首要条件是与被吸附物及展开剂均无化学作用。
吸附能力与颗粒大小有关。
颗粒太粗，流速快分离效果不好。
颗粒小，表面积大，吸附能力就高，但流速慢，因此应根据实际分离需要而定。
色谱用的氧化铝可分酸性、中性和碱性三种。
2.溶质的结构与吸附能力的关系：化合物的吸附能力与分子极性有关。
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
请你总结柱色谱的操作步骤及注意事项
柱色谱是常用的分离和分析技术之一，通常有以下操作步骤及注意事项：
操作步骤：
1. 样品制备：将需要分离的混合物溶解或悬浮在合适的溶剂中，经过过滤或离心等处理，得到样品溶液。
2. 填充柱料：将柱料填充到柱中，常用的柱料有硅胶、脱脂棉、高效液相色谱柱等。
3. 平衡柱料：用适当的溶剂通过柱料进行平衡，以保证柱料内部的平衡状态。
4. 装样：将样品溶液使用适当的方法（如注射器）装载到柱中。
5. 洗脱：通过柱料添加适当的洗脱剂，将混合物中的目标成分逐一洗脱出来。
6. 收集洗脱液：将洗脱液逐一收集到相应的集样器中，可以根据需要选择收集不同时间段或体积段的洗脱液。
7. 分析：对收集的洗脱液进行后续的分析，如测量吸光度、进行色谱质谱分析等。
注意事项：
1. 柱料的选择：根据样品特性选择合适的柱料，以保证分离效果。
2. 柱料的平衡：进行柱色谱操作前，要确保柱内的柱料处于平衡状态，以获得稳定的分离结果。
3. 柱色谱条件的控制：调整洗脱剂的流速、浓度等条件，可以影响分离效果和分离时间。
4. 样品的预处理：对样品进行合适的预处理，如过滤、离心、
浓缩等，以避免堵塞柱料。
5. 柱的保养与维护：定期对柱进行保养和维护，如洗涤、再生、更换等，以保证柱的使用寿命和分离效果。
6. 操作的环境控制：在操作过程中，注意保持干净的工作台和无尘环境，以避免杂质的干扰。
柱色谱注意事项
柱色谱注意事项
柱色谱是一种常用的色谱方法，在操作过程中有以下几点需要注意：
- 色谱柱的选择：通常选择与目标化合物具有相同极性或化学特性的色谱柱固定相涂覆液，以得到良好的峰形。
但极性较高的色谱柱通常耐热温度较低，耐久性也较低，因此建议先用耐热温度较高的无极性色谱柱进行分析，再用极性较高的色谱柱分析。
- 载气纯度：为了防止色谱柱氧化导致分离性能下降，务必使用99.999%以上的高纯载气。
- 温度控制：仪器开机升温前，先注入足够的
载气，将色谱柱中的氧气排出，然后再提高色谱柱温度。
特别是极性色谱柱，容易被氧化，因此请将色谱柱内的空气完全置换为载气后，再进行升温。
关机时，先把色谱柱的温度降到40度以下，最后再关闭载气。
- 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动：温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况。
在使用柱色谱时，需根据实际情况灵活调整，以获得最佳的分离效果。
色谱柱的使用操作规程是
色谱柱的使用操作规程是色谱柱是色谱分析中非常重要的工具，正确的使用操作规程可以确保色谱柱的寿命和分析结果的准确性。
以下是一份详细的色谱柱使用操作规程，共计1200字。
1. 色谱柱保存和准备1.1 色谱柱的保存：色谱柱通常由玻璃或者金属制成，应当避免与湿气、灰尘以及高温的环境接触。
保存时，应当将色谱柱放置在干燥、清洁且温度适宜的地方。
避免长时间曝光于阳光下。
储存条件的稳定性对于保持色谱柱的性能至关重要。
1.2 色谱柱的检查：在使用色谱柱之前，应当对其进行检查，确保柱身无破损、裂纹或者污染。
同时，应当检查色谱柱的规格和批号是否与实验所需完全匹配。
1.3 色谱柱的条件适应：某些色谱柱在使用之前需要进行条件适应。
一般的做法是，在使用之前进行几个小时的溶剂通过柱操作，以确保色谱柱的平衡状态，并且清除可能影响分析结果的残留物。
2. 连接色谱柱2.1 连接前准备工作：在连接色谱柱之前，应当确保色谱仪的泵和检测器已经打开，工作正常。
同时，应当确保带压装样器、流量计、接头等设备已经准备就绪。
2.2 连接色谱柱：先将附近日期较长的色谱柱拆下来，再将新的色谱柱连接上。
连接时，要注意使用适当的扭力，防止柱子变形或者破裂。
2.3 采用适当的接头：连接色谱柱时，要使用适当的接头和密封件，确保无泄露、无死角，以及良好的稳定性。
3. 柱子的清洗3.1 色谱柱的初始化：在首次使用某个新的色谱柱之前，必须进行初始化。
一般的做法是通过注入溶剂来清洗色谱柱，直到溶剂的出图稳定为止。
3.2 溶剂的选择：在清洗色谱柱时，应选择与待测样品相同的溶剂或者相似的溶剂，以确保能够有效清除之前的样品残留物，并且不影响下一个样品的分析。
3.3 清洗的步骤：一般的清洗步骤包括预洗、洗脱和再平衡。
预洗时，可以使用较强的溶剂，如甲醇或者乙醇，以清除可能附着在色谱柱上的杂质。
洗脱时，可以使用更强的溶剂进行清洗，如乙腈或者丙酮。
再平衡时，可以使用溶剂与待测样品相同的溶剂，以使色谱柱恢复到平衡状态。
柱色谱分离实验讲解
Column Chromatography
精品资料
一、实 验 目 的
了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的 原理(yuánlǐ)。 2．固定相和流动相的选择 原则。
掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。
2．柱色谱分离的基本操作。
精品资料
色谱法简介
色谱法亦称色层法，层析 法等，是分离，纯化和鉴定有 机化合物的重要方法(fāngfǎ) 之一，还可定量分析。
吸附剂装填紧密，排除气 泡(qìpào)。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
精品资料
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否 则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的 分离，应用(yìngyòng)质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气 泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面．
精Байду номын сангаас资料
三、实实验 验步 骤内: 容
柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶
(ɡuī jiāo)
•
+乙醇
•先用乙醇 (yǐ chún)
• 后用水 •操作
•组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
精品资料
•组分颜色
仪器(yíqì)和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂(shìjì) • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 • 基橙、亚甲基蓝。 • H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
洗脱剂的极性：溶解度 适中、不反应、易获取回 收
吸附剂的性质(xìngzhì)： 均匀、表面积大、不反 应、吸附能力不同
c18柱色谱填料使用
c18柱色谱填料使用
C18色谱柱是一种常用的色谱柱，其填料具有亲脂性，常用于反相色谱中。
以下是使用C18色谱柱的注意事项：
1. 流动相的选择：C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。
正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力，甲醇则有助于溶解非极性溶剂。
根据分析需要，可以调整正己烷和甲醇的比例。
2. 预处理：在使用C18色谱柱之前，需要进行预处理以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法包括使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
应避免用过酸性或过碱性的洗脱剂，以免对C18柱填料造成损害。
3. 样品准备：样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响，因此在分析前需要充分溶解样品，并通过滤器除去杂质。
4. 色谱柱平衡：在使用C18色谱柱之前，需要将其平衡至最佳状态。
可以通过逐步增加流动相的流速并监测基线来找到最佳流速。
在达到最佳流速之前，应缓慢增加流速以避免对色谱柱造成过度压力。
5. 柱效测定：在使用C18色谱柱之前，需要测定其柱效。
可以通过使用标准品进行测定，并比较标准品和样品的保留时间和峰形来进行评估。
6. 清洗和维护：在使用C18色谱柱过程中，需要定期清洗和维护以保持其性能和寿命。
需要定期更换流动相、清洗柱子并检查其性能。
总之，使用C18色谱柱需要了解其特点和注意事项，并进行充分的预处理、样品准备、色谱柱平衡、柱效测定以及清洗和维护。
这些步骤对于获得准确、可靠的色谱结果非常重要。
柱色谱和薄层色谱实验
3、展开与显谱：
先将以环己烷：乙酸乙酯=6：1为展开 剂倒入方形染色缸中，加盖饱和5min，使 缸内充满展开剂蒸气。
然后迅速将薄板点样一端浸入展开剂 中，但样品点不可浸入，封盖。
约跑30min后，展开剂的前沿跑到薄板 的3/4时，将薄板取出，并用铅笔划出前沿， 晾干。确定斑点中心，测量，计算三个Rf 值。
由于吸附剂对不同组分有不同的 吸附能力，流动相也有不同的解吸能 力，因此，在流动相向前移动的过程 中，不同的组分移动不同的距离而形 成了互相分离的斑点。
三、实验步骤及注意事项：
（观看录像）
1、铺பைடு நூலகம்：
2、点样：
在离薄板底边约1cm处，用铅笔轻轻 地划一条线，并划上A，B两点，用毛细 管蘸取样品点于点上（A为苏丹Ⅲ溶液，B 为苏丹Ⅲ-偶氮苯混合液），风干，样点扩 散直径不得超过2~3mm。
实验十八 薄层色谱
一、目的与要求： 1、了解薄层色谱的基本原理及其一 般的操作技术。 2、学习用吸附薄层色谱法分离染料 混合物。
二、基本原理
薄层色谱可分为分配色谱和吸附色谱 本实验采用（固－液）吸附色谱。
固体吸附剂是在玻璃板上铺成均匀的 薄层，用毛细管将样品点在板的一端，把 板放在合适的流动相（展开剂）里，流动 相带着混合物组分以不同的速率沿板移动， 即组分被吸附剂不断地吸附，又被流动相 不断地解吸而向前移动。
薄层色谱 计算三个Rf值
注意事项：
1、因比色管中溶液为易挥发的苯，在点 完样后需把盖子盖上。点完样后，毛细 管应放回原试管中，不可放错。 2、点样时不可留下较深的洞穴。 3、一个方形染色缸中只可放入一块薄板。
实验 柱色谱
一、目的与要求：
1、了解柱色谱的基本原理及其一般 的操作技术。
柱色谱的使用方法
柱色谱的使用方法如下：
装柱。
干装法是在柱内装入2/3溶剂，在管口上放一漏斗，打开活塞，让溶剂慢慢地滴入锥形瓶中，接着把干吸附剂经漏斗以细流状倾泻到管柱内，同时用套在玻璃棒（或铅笔等）上的橡皮塞轻轻敲击管柱，使吸附剂均匀地向下沉降到底部。
填充完毕后，用滴管吸取少量溶剂把粘附在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内，继续敲击管子直到柱体不再下沉为止。
湿装法与干装法类似，所不同的是，装柱前吸附剂需要预先用溶剂调成淤浆状。
加样。
将柱内液面降到与柱面相齐时，关闭柱子。
用滴管小心沿色谱柱管壁均匀地加到柱顶上。
加完后，用少量溶剂把容器和滴管冲洗净并全部加到柱内，再用溶剂把粘附在管壁上的样品溶液淋洗下去。
柱色谱分离实验
灵敏度高 1(10-9)
可以检测出μg• g-1(10-6)级甚至ng• g-
级的物质量。
分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试样 分析。
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲的解析速度也不同,极性小、吸附能
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
装柱
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝 ，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影 响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球 等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密， 排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整， 无凹凸面．
三、实 验 内 容
实验步骤（续）
• 加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞， 加入 5mL左右的A 液 ,当 硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲 基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g·L -1) 。
• 洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝 两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 , 当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。此后改 用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受 器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
如何活化新色谱柱？
如何活化新色谱柱？液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
所以在实验室最好建立自己的色谱柱台账，对每根色谱柱进行编号入库、并追踪其使用过程，实现全生命周期化管理。
每个时间节点记录其柱压、峰型、进样针数等信息。
一、液相色谱柱活化方法、新液相色谱柱活化多久？新液相色谱柱使用前还要活化么？新买的液相色谱柱需要活化，活化的方法因柱子而异，普通反相C18柱的话我是这样活化的：0.5ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。
液相的新色谱柱都是保存在一定的保存液中的，所谓的活化就是替换掉其中的保存液，冲洗掉柱中可能残留的其他杂质，以免影响后续分析工作。
不同的色谱柱活化的方法不尽相同，要根据柱子的种类来选择活化方法。
另外，要提醒的是，柱子活化时不要接检测器，避免不必要的污染。
二、液相色谱柱活化到底起到一个什么样的作用？（一）排除有机相挥发所产生的起泡。
（二）柱子一般是键合了c18的，用甲醇冲柱子就是使得这些集团达到更好的排列，有利于我们做样。
就像刚买的电池。
柱的维护分为：色谱柱的平衡、色谱柱的再生、最后才是色谱柱的维护。
1、色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。
新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。
请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。
每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的“补偿”，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤：1) 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)2) 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
柱色谱注意事项
柱色谱注意事项柱色谱是一种常用的分离和纯化技术，具有高效、准确、可重复性好等优点。
为了确保柱色谱的正常运行和提高分离效果，有几个需要注意的事项。
首先，要选择合适的柱。
柱子的选择应根据样品的性质和分离要求来确定。
常见的柱子有反相、离子交换、凝胶过滤、糖化柱等。
在选择柱子时要考虑到样品的溶解度、分离的目的、样品量等因素。
其次，要注意样品的前处理。
样品的前处理包括溶解、过滤、稀释、洗脱等过程。
样品必须溶解在适当的溶剂中，以避免柱子堵塞。
如果样品中有杂质，可以通过过滤或洗脱的方法去除。
再次，需要将柱子正确连接到系统中。
柱子通常由进样口、色谱柱和检测器等组成。
在连接之前，要确保柱子和连接部件都是干净的。
正确安装柱子并且密封好连接件，以免发生泄漏。
同时，要检查流路是否完整，避免死角。
此外，要控制流速和压力。
流速和压力是影响分离效果的重要因素。
流速过大会使分离不充分，流速过小会延长分析时间。
因此，要根据实际情况调整流速和压力，以获得最佳的分离效果。
另外，要定期检查和维护柱子。
柱子在使用过程中会发生老化、堵塞等问题，因此需要进行定期检查和维护。
检查柱子的状态，如是否有泄漏、堵塞等问题，并及时更换或清洗柱子。
最后，要记录实验数据和结果。
实验数据和结果的记录是柱色谱分析的重要部分，可以用来追踪实验过程和结果的准确性。
要注意将记录的数据整理归档，方便后续的分析和验证。
综上所述，柱色谱是一种非常有用的分离和纯化技术，在使用过程中需要注意选择合适的柱子、进行样品的前处理、正确连接柱子、控制流速和压力、定期检查和维护柱子，并记录实验数据和结果。
只有这样，才能保证柱色谱的正常运行和获得准确的分离效果。
色谱柱安装注意事项
色谱柱安装注意事项一、确认仪器型号和规格是否匹配在安装色谱柱前，首先需要确认色谱仪器的型号和规格是否与色谱柱相匹配。
不同型号的仪器对色谱柱的要求可能存在差异，因此要确保所使用的色谱柱与仪器能够良好地兼容。
二、检查色谱柱的柱体、接头和密封件是否完好在安装前，应仔细检查色谱柱的柱体、接头和密封件是否完好，有无破损或泄漏。
如有破损或泄漏，应立即更换色谱柱或相应的部件。
三、确保色谱柱的进出口方向正确进出口方向问题会导致仪器不能正常运转。
进口端应连接至进样口，出口端应连接至检测器。
在连接进出口时，要特别注意不要接反方向，以免影响仪器的性能和使用寿命。
四、安装时，应将色谱柱的两端插入柱管中，用螺丝紧固在安装过程中，应将色谱柱的两端插入柱管中，并用螺丝紧固，确保密封性好。
同时，要保证柱管与色谱柱之间的密封圈完好无损，如有损坏应及时更换。
五、调整色谱柱的位置，使其与进样口和检测器的距离适中在安装过程中，应根据仪器的要求和操作指南调整色谱柱的位置，使其与进样口和检测器的距离适中。
这样可以保证样品在色谱柱中的流动阻力最小，有利于提高分离效果和检测精度。
六、开启仪器，检查色谱柱是否运行正常，无泄漏和堵塞现象在完成安装后，应开启仪器并检查色谱柱是否运行正常。
如发现色谱柱有泄漏或堵塞现象，应立即停止使用并排查问题。
如问题无法自行解决，请联系专业技术人员进行维修和咨询。
七、避免过度用力扭曲或弯曲色谱柱，以免损坏内部填料在运输和使用过程中，应避免过度用力扭曲或弯曲色谱柱。
这样可能会导致色谱柱内部的填料破损或流失，影响其分离效果和使用寿命。
建议在使用过程中按照厂家提供的操作指南进行正确的操作和维护。
柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。
由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。
柱子可以分为:加压,常压,减压、ﻫ压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数。
所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分ﻫ离,一个柱子几个月也就是有得。
减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过ﻫ硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解得东西可能得ﻫ不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)、以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了、加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。
压力ﻫ得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)、非凡就是在轻易分解ﻫ得样品得分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果、个人觉得ﻫ加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好。
柱子长了,相应得塔板数就高、柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。
试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了、当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)、现在见到得柱子径高比一般在1:5～１０,书中写硅胶量就是样品量得30~40倍,具体得选择要具体分析。
假如所需组分与杂质分得比较开(就是指在所需组分rｆ在0。
柱色谱的原理及应用实验注意事项
柱色谱的原理及应用实验注意事项一、柱色谱的原理柱色谱是一种常用的分离技术，主要基于样品在固定相和移动相之间的相互作用力的不同来实现分离。
柱色谱主要包括气相色谱（GC）和液相色谱（LC）两种类型。
1. 气相色谱（GC）1.1 原理概述气相色谱是通过气态载气流动相和固态柱填充物之间的相互作用力不同，实现样品分离的一种色谱技术。
其中，固态柱填充物通常由具有不同极性的固体材料制成，比如分子筛、聚合物等。
1.2 分离机制在气相色谱中，样品首先被注入到柱上，然后通过供气系统将载气流动相送入柱中。
不同组分在固态柱填充物上的相互作用力会导致它们以不同的速度通过柱，从而实现分离。
2. 液相色谱（LC）2.1 原理概述液相色谱是通过液态载流动相和固态或液态柱填充物之间的相互作用力不同，实现样品分离的一种色谱技术。
固态柱填充物通常由具有不同极性的固体材料制成，如硅胶、金属氧化物等。
2.2 分离机制在液相色谱中，样品被溶解在流动相中，然后通过泵系统被送入柱中。
样品与固态柱填充物之间的相互作用力不同会导致不同组分以不同的速度通过柱，从而实现分离。
二、柱色谱的应用实验注意事项进行柱色谱实验时，需要注意以下事项：1.选择合适的柱和固定相：–根据分析目的和样品性质选择合适的柱类型，如C18柱、阳离子交换柱等。
–要确保固定相的质量稳定，避免固定相破碎或松动。
2.优化流动相的组成：–流动相的选择要根据样品特性进行优化，包括溶剂极性和pH 值等。
–流动相的组成要保证溶剂纯度，避免杂质对分离的影响。
3.控制流速：–流速的选择要根据柱的规格和样品的特性进行，过高的流速可能导致分离不良。
–控制流速的变化要平稳，避免对柱填充物造成不可逆的损害。
4.操作温度：–根据样品的性质和分离需求，选择适当的操作温度，如某些物质需要在高温下进行分离。
–控制温度的变化要平稳，避免对柱填充物造成影响。
5.样品预处理：–样品的前处理对柱色谱分离的准确性和重复性有很大影响，可能需要进行样品的提取、净化和浓缩等步骤。
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱
HPLC色谱柱的良好使用规范
1.每次使用前,用0.45um/0.22um的膜过滤流动相
2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿
3.样品分离时一定要考虑溶剂对样品的溶解性及分离的影响
4.对样品要依据性质进行预处理
5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响
6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生
7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生
8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）
9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动。
简述色谱柱的使用注意事项
简述色谱柱的使用注意事项色谱柱是色谱实验中最重要的部分，它的质量和正确使用对实验结果的准确性和可靠性起着至关重要的作用。
下面是色谱柱使用的一些注意事项：1.储存条件：色谱柱应储存在干燥、阴凉和避光的地方，远离酸、碱、有机溶剂和氧化剂。
避免温度过高或过低，以防止柱体损坏或性能下降。
柱体不能长时间处于干燥状态，以免介质中的水分流失。
在存放时，柱体要由塑料袋或者塞子封口，以防止灰尘和杂质进入。
2.洗脱剂的选择：根据实验需要和待分离物质的性质，选择合适的洗脱剂。
洗脱剂的选择应考虑到洗脱剂的溶解力、缩短洗脱时间的能力、可用于检测的波长等因素。
根据实验需要，可以选择无机盐溶液、有机溶剂、酸或碱溶液等作为洗脱剂。
3.柱温的控制：对于一些需要控制温度的色谱实验，应使用恒温槽或恒温箱来控制柱温。
柱温的控制需要考虑柱子的温度稳定性和色谱介质的特性。
4.流速的控制：流速是影响色谱分离效果的重要因素之一、流速过快可能导致分离不彻底，流速过慢则会影响分析时间。
因此，根据待测物质的性质和实验要求，要选择合适的流速进行实验。
5.工作压力的控制：在液相色谱实验中，应注意控制适当的工作压力。
过高的工作压力可能导致填充物受损，严重时甚至会破损柱壁。
过低的工作压力会导致流速减慢，从而影响实验结果。
6.保护色谱柱：为了延长色谱柱的使用寿命和保持其分离能力，应在样品进样前使用预柱保护色谱柱。
预柱是一种具有相同或相似填充物的小柱，在进样前，样品会先流过预柱，可以去除样品中的杂质和保护色谱柱。
7.避免混合使用：为了保证实验结果的准确性，避免不同种类的色谱柱混合使用。
不同种类的色谱柱填充物对待测物质的选择性和分离效果可能存在差异，混用可能导致分离不完全或无法分离。
8.柱后的处理：实验结束后，应及时清洗色谱柱，防止残留物堵塞填充物。
柱后处理的方法可以根据填充物的不同，选择适当的处理液进行后处理。
9.柱的流向：根据色谱柱的设计和厂家提供的说明，正确安装柱子的流向。
色谱柱 操作规程
色谱柱操作规程
《色谱柱操作规程》
一、使用前准备
1.1 检查色谱柱是否有损坏或污染
1.2 准备好色谱柱需要用到的溶剂和试剂
1.3 准备好色谱仪器和相关设备
二、装柱操作
2.1 检查柱子的填料是否均匀，如有不均匀情况需重新填料2.2 使用正确的柱子连接件连接色谱柱和色谱仪
2.3 用适当的方法装载样品进入色谱柱
2.4 在装载样品之前，进行柱子的平衡操作，以确保实验的准确性
三、流动相操作
3.1 准备好流动相，确保流动相的纯度和稳定性
3.2 用注射器将流动相缓慢地注入色谱柱中，直到柱子完全充满
3.3 确保流动相的压力和流速在正常范围内
四、运行及维护
4.1 启动色谱仪器，设置好运行参数
4.2 监控运行过程中的色谱柱压力和流速
4.3 如果发现异常情况，立即停止运行并检查色谱柱及相关设备
4.4 实验结束后，用适当的方法对色谱柱进行保养和清洗，以
确保下次使用时的准确性和稳定性
五、安全注意事项
5.1 操作过程中要严格遵守化学品的安全操作规程
5.2 避免色谱柱受到外部物质的污染和损坏
5.3 注意色谱柱及相关设备的维护和保养，确保使用安全和稳定性
六、记录和报告
6.1 在操作过程中要及时记录实验数据和观测结果
6.2 对实验结果进行分析和总结，撰写实验报告
6.3 如有必要，将实验结果提交并交流给相关部门或同行
以上即是《色谱柱操作规程》，希望能够对使用色谱柱的实验人员有所帮助。
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1常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
关于无水无氧柱适用于对氧，水敏感，易分解的产品，可以湿柱，也可以干柱。
不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。
也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
四：关于湿法、干法上样湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶，那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。
溶剂的选择当然是最便宜，最安全，最环保的了。
所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。
文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。
乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
甲醇据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。
其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。
经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。
当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。
这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。
在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。
六：关于操作问题1、装柱柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。
书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。
当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2、加样用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。
加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3、淋洗剂的选择感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4、样品的收集用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以采用氧化铝作固定相。
另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。
如果都用小试管那工作量又太大。
5、最后的处理柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。
另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是和使用的溶剂有关，如果是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很容易出现这种现象，因此，在室温高的时候，可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。
还有，使用混合溶剂时，使用的两种溶剂的沸点应该相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90).薄层色谱内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
3 操作方法：3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
点样时必须注意勿损伤薄层表面。
3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。
将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。
由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。