HPLC的故障及处理

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HPLC常见异常及解决方法_R130326

20% - 100% MeOH 梯度洗脱没有进样
23
现鬼峰的可能原因 1. 2. 3. 4. 5. 6. 上次进样残留流动相污染样品中不明干扰物离子对：离子对：破坏平衡肽谱：肽谱：三氟乙酸氧化反相：反相：水受污染 1. 2. 3. 4. 5. 6.
解决方法运行结束时用强溶剂冲洗色谱柱或延长运行时间冲洗色谱柱除去污染物样品净化或预分馏在实际应用的流动相中制备样品每天新配样品，每天新配样品，使用抗氧化剂用不同量的水通过反相柱检查水的适用性且洗脱后测量峰高
HPLC常见故障及解决方法
Eddy Zhou
1
培训目的
∗ 通过此课程的学习，通过此课程的学习，使我们了解日常使用 HPLC 过程中最常见的异常现象、的异常现象、引起此异常的可能原因及其解决办法
2
HPLC常见异常现象 HPLC常见异常现象
∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ 溶剂(Solvent) 色谱峰(Peaks) 泄漏(Leaks) 灵敏度(Sensitivity) 保留时间(Retention) 平衡(Equilibration) 基线(Baseline) 压力(Pressure)
灵敏度( 灵敏度(Sensitivity)
出现灵敏度低的可能原因 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 自动进样器流路堵塞检测器衰减设置过高样品吸附于定量环或柱 1. 2. 3. 解决方法检查流路和清除任何障碍降低检测器衰减值用高浓度样品初始化定量环和柱子用样品充满定量环增加进样量稀释或浓缩样品，稀释或浓缩样品，使检测器响应落在线性范围之内在样品制备过程中使用内标物，在样品制备过程中使用内标物，优化样品制备方法使用聚合物填料，使用聚合物填料，改变柱的类型和模式

HPLC 故障及排除方法

氨基柱的使用：
需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。

所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。

这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

高效液相色谱仪常见故障及解决方法

高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。

2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。

二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。

解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。

2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。

解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。

三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。

四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。

解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。

解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。

高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

HPLC 常见故障分析及排除方法

Accum. Head
Primary X-ducer
Primar y Head
Prime/Vent Valve In-Line Filter
GPV
From Degasser
To Sample Management System
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 13
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 26
HPLC常见故障因素 2487/2489
错误信息
Lamp lighting failure 氘灯启动失败解决：检查电源检查氘灯使用时间
Peak not found: 656 nm Deuterium Peak not found: Erbium n nm
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈波长: 254 nm
0
5
10
15
分
2 星期
1 星期
1天
1 小时新鲜配制
20
25
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 10
例如，根据不同的应用使用 80% 水:20% 甲醇的溶液或 80% 水:20% 乙腈的溶液
©2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 16
2695 故障 2690初始化错误： Plunger homing over pressure

HPLC的故障诊断及其维修

HPLC的故障诊断及其维修在实验室中，高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法，但是使用过程中可能会出现一些故障。

下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。

1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低，可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。

此时需要检查柱是否需要更换，清洗封口件或者校准泵的工作方式。

2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况，可能是由于进样器、柱或检测器的问题。

此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。

3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。

在发现泄漏时，需要立即停止使用HPLC系统，并检查管路和连接件是否紧固，替换损坏的零件。

4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定，导致分析结果不准确。

此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵，并重新校准流速。

以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法，为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性，实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。

高效液相色谱（HPLC）作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术，在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。

然而，HPLC分析过程中常会遇到一些故障，这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

因此，了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。

5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。

如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围，一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在，并及时调整或更换相关部件。

6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。

如果发现流速或者流量不稳定，需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损，及时更换损坏部件进行维修。

7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用，如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变，需要检查检测器灯泡是否老化，光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确，进行相应的维修和调整。

高效液相色谱仪故障排除指南

高效液相色谱仪故障排除指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，可以广泛应用于药物分析、环境检测、食品科学等领域。

然而，在使用过程中，不可避免地会出现一些故障情况。

本文将介绍一些常见的HPLC故障，并提供相应的排除方法。

一、进样器故障1. 进样器漏液若观察到进样口出现漏液现象，首先可以检查密封件是否完好，如若密封件损坏应及时更换。

若密封件完好，还可以检查进样器盖上是否存在污垢，若有，则可清洗并重新安装。

2. 进样器堵塞如果在进样过程中发现进样器堵塞，可以先使用无机溶液进行冲洗，以清除可能存在的样品残留物。

如果仍然无法解决堵塞问题，可以采取拆卸进样器进行彻底清洗的方法。

二、柱温箱故障1. 温度控制不稳定若柱温箱的温度控制不稳定，可能会导致分离信号的漂移，影响分析结果的准确性。

这时，可以首先检查温度控制仪是否设置正确，如有必要，可以重新设置。

另外，也可以检查柱温箱是否存在漏气现象，若存在，应及时修复。

2. 柱温箱泄漏柱温箱泄漏可能会导致温度失控，因而影响分析结果。

检测到泄漏时，应首先检查柱温箱的密封性能，如有必要，可以更换密封圈，确保密封良好。

三、流动相泵故障1. 流量不稳定如果在使用流动相泵时，发现流量不稳定，可能是由于空气进入了系统，导致气泡形成。

这时，可以检查胶管连接是否松动，以及胶管中是否有积气现象。

如果检查后仍然无法解决问题，可以考虑更换胶管或检修流动相泵。

2. 压力异常如果HPLC系统在运行过程中压力异常，可能是由于流动相泵的压力传感器出现问题。

此时，应检查压力传感器是否损坏，如有必要，可以进行维修或更换。

四、检测器故障1. 检测器信号异常如果在分析过程中，检测器的信号异常，可能是由于光源出现故障导致。

这时，可以检查光源是否正常工作，如有必要，可以更换光源。

另外，也可以尝试调整检测器的增益或灵敏度，以改善信号异常问题。

hplc 常见故障分析及排除方法

System X-ducer Primary X-ducer
Accum. Head
Primary Head
GPV
Prime/Vent Valve To Sample Management System
From Degasser
In-Line Filter
•注意流动相组分的互溶性！ •使用正确的 Seal Wash 溶剂！
996 二极管阵列检测器 PM Kit
请使用Waters正品部件
Waters Quality Parts
Waters
非Waters 密封圈正品密封圈
请使用Waters正品部件
P rr o p e l y ce he ad m f r s a m p l e p o r t
I rr m p o p e m a g c h i n i n opt fm s p a o l r e
• 清洗柱塞杆密封（Seal Wash）
HPLC 常见故障因素（717/2690进样器）
其它注意事项：
• 打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出 • 关机前取出所有样品瓶，或将样品盘全部取出
• 注意保持样品仓内和样品盘清洁
• 请使用 Waters 公司认可的样品瓶 • 使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值（Depth of Needle〕
化学品的影响
• 已损坏的保护柱、色谱柱 • 所用溶剂、试剂的品质 • 化学品使用不当带来的影响 • 样品前处理方法不当带来的影响 • 实验前的准备和实验结束后的收尾工作
HPLC 常见故障因素（泵）
515 510
1515/1525 600
2690/2695
HPLC 常见故障因素（泵）
正确使用您的色谱泵：

液相色谱仪常见故障的处理方法

液相色谱仪常见故障的处理方法液相色谱仪是一种常用的分析仪器，广泛应用于制药、化工、环境等领域。

然而，液相色谱仪在运行中难免会遇到故障，这些故障如果不及时处理，将会影响分析结果的准确性和可靠性。

下面就介绍一些液相色谱仪常见故障的处理方法。

一、泵系统故障1.1 压力稳定性差当液相色谱仪中的某一个压力降较大时，其稳定性会变差。

此时可以尝试根据实际情况适当调整流速或空气泡数量，并检查泵的活塞是否顺畅，是否需要更换。

1.2 漏气在进行某些特殊的分析时，需要使用无气泡溶剂，如果出现漏气，可能会使得分离柱床压缩，导致分离效应减弱。

此时需要及时检查泵的密封性，并根据实际情况更换密封圈或换泵头。

二、检测器故障2.1 检测器响应不稳定液相色谱仪的检测器响应不稳定可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

一些常见的影响因素包括：灯丝寿命、流量计的稳定性、载气的纯度等。

针对这些因素，可以通过更换灯丝、清洁流量计和更换或加入更纯的载气来解决。

2.2 信号噪声过大如果检测器的信号噪声过大，可能会干扰峰的分析，导致分析结果不准确。

这时可以尝试调整检测器的增益、检测器和信号放大器的设置，或者更换检测器的灯丝和各种电子元器件。

三、自动取样器故障3.1 管道堵塞当自动取样器采样管道出现堵塞时，会使得样品无法正常进入分析系统，从而导致分析结果的不准确。

此时可以尝试使用针筒或吸头进行清洗，注意不要损坏管道，或者更换采样针头。

3.2 移液量不准确液相色谱仪的自动取样器需要能够准确地移液，否则可能会影响分析结果的可重复性。

一些常见的影响因素包括：采样针头的污染、吸头容量的错误等。

这时可以尝试更换采样针头，或者重新校正吸头容量。

四、其他故障4.1 通道阻塞当液相色谱仪中的通道出现阻塞时，会使得分离效应不理想，从而影响分析结果。

此时可以尝试使用清洗溶液进行清洗，或者更换分析柱。

4.2 控制系统故障液相色谱仪的控制系统故障可能会影响仪器的正常运行。

对于这种情况，可以尝试重启控制系统，检查控制系统的电源和通信线路。

HPLC高效液相色谱故障排除及解决办法解析

–平头峰
•检测器设置不正确 •进样体积太大或样品浓度太高
色谱图常见问题分析(二)
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间飘忽不定(各次运行之间)
•系统不稳定或未达化学平衡 •泵压力不稳(泵头里有气泡) •进样体积过大或样品浓度过大 •温度波动 •流动相混合不均匀 •色谱柱被污染
色谱图常见问题分析(二)(续)
–一个或几个峰是负峰
•流动相吸收本底高 •进样过程中进了空气 •离子对分离中的系统峰 •样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相
色谱图常见问题分析(一)(续)
•色谱峰峰形异常问题:
–所有的峰均为负峰:
•信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 •光学装置尚未达到平衡
–所有的峰都是宽峰
•系统未平衡或未达到化学平衡 •溶样的溶剂比流动相强很多 •色谱柱类型或尺寸不正确 •色谱柱或保护柱被污染或降级 •温度变化对色谱柱的影响
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间增加或减少(各次运行之间)
•系统不稳定或化学平衡不足 •泵流速变化 •温度变化 •色谱柱污染,柱效下降 •流动相被污染 •溶剂入口过滤器堵或管路堵塞 •系统渗漏
色谱图常见问题分析(二)(续)
•色谱峰保留时间问题:
–保留时间改变到一个新的恒定值
•流动相不正确或其组成不正确 •泵流速变化 •实际输液的流速不正确(泵失灵或故障) •环境温度变化；柱温不正确 •色谱柱尺寸或类型不正确 •色谱柱被污染 •流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化 •输液系统的梯度滞后体积不正确
• 规则四∶尝试预测将来可能发生的问题。利用成功的故障排除经验来改善您目前的预防保养工作,使现有问题再发率降至最低。
• 规则五∶养成记录的好习惯。一个好记录是成功地进行故障排除的关键。

高效液相色谱仪常见故障分析及解决方法

高效液相色谱仪常见故障分析及解决方法高效液相色谱仪常见故障分析及解决方法高效液相色谱（high performance liquid chromatography, hplc）是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。

它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，灵活多样，其应用范围已超过其它各种分离方法，尤其在生化医药样品的分析分离方面更能充分发挥它的特长，为推动这些领域的进步和发展作出了巨大贡献。

液相色谱在使用过程中常会出现一些影响分析结果的小问题，如果使用人员了解常见问题及其成因和相关的解决方法，能做到早预防、勤维护，会使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性。

1 液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成（如图1所示）。

对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件，同时也是容易出事故的主要场所。

2 常见问题及解决方法2．1 针对柱压问题（表1）柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在50psi之间。

压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。

值得注意的'是在使用梯度洗脱时，进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。

在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。

首先考虑柱子是否被堵，此时可更换一根新柱子进行检测。

2．2 针对保留时间漂移的问题 [2，3] （表2）保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题，其包括了保留时间增大和减小。

它的产生与很多原因有关。

2．3 针对异常色谱峰问题[2-4]异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。

具体情况与原因分析如表3。

3 高效液相色谱仪的保养[5-7]3．1 hplc的日常操作条件工作温度10～30℃；相对湿度<80％；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。

WATERSHPLC常见故障分析

WATERSHPLC常见故障分析WATERSHPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析方法，用于分离和检测化合物。

然而，HPLC仪器在使用过程中一些常见故障可能会影响分析结果和实验的进行。

在以下的文章中，我们将探讨一些WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法。

1.峰形不对称峰形不对称可能是由于流动相、柱等问题引起的。

首先，检查流动相是否正确配置，确保使用的溶剂无气泡和杂质。

其次，检查柱的状态，尽量避免在柱上运行样品时破坏柱的封底。

最后，还可以尝试调整梯度和流速等参数以改善峰对称性。

2.噪声干扰噪声干扰可能是由于仪器的光电检测器或环境因素引起的。

首先，检查光电检测器是否干净，清洁检测器表面以去除灰尘和杂质。

其次，尽量将仪器放置在安静的环境中，避免外部噪声的干扰。

最后，检查样品制备的过程，确保样品中没有杂质或颗粒。

3.漏液漏液可能是由于柱连接不紧密或密封圈老化引起的。

首先，检查柱连接是否紧固，确保连接件没有松动。

其次，检查密封圈的状态，及时更换老化的密封圈。

最后，还可以尝试调整流速和压力以减轻压力对密封的影响。

4.柱堵塞柱堵塞可能是由于样品中的杂质、柱背压增加或柱老化引起的。

首先，可以尝试使用过滤器或微孔过滤膜将样品预处理，去除样品中的颗粒和杂质。

其次，检查流动相的组分，避免出现析出物或结晶。

最后，定期检查柱背压，及时更换老化的柱。

5.柱效降低柱效降低可能是由于柱老化、样品残留或流动相组分改变引起的。

首先，定期检查柱的状态，及时更换老化的柱。

其次，对于含有高糖、脂肪或盐的样品，可以考虑进行前处理或柱后处理以减轻柱效降低的影响。

最后，检查流动相的组分，确保流动相没有杂质和过多的溶剂。

总结而言，WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法需要综合考虑多个因素，包括流动相、柱、样品和仪器等。

通过仔细检查和调整这些因素，可以解决大多数故障，并确保HPLC仪器的正常运行和准确的分析结果。

HPLC 常见故障分析及日常保养知识

Waters Connections
®
SM
切忌:
•示差/荧光检测器的出口管堵塞 •直接用甲醇置换缓冲液 •进的样品会在流动相中产生沉淀 •用水溶性滤膜过滤有机溶剂 •溶剂,特别是缓冲液撒漏在机器内 •流速变化率太大 •高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵 •阳光直射溶剂瓶或检测器 •空调直吹检测器 •溶剂瓶完全密封 •THF在不密封情况下长期存放
从最简单,容易之处入手:
机器
*泵 *进样器 *检测器 *数据处理单元

如 1.停止流速; 2.去掉柱子;
Waters Connections
®
SM
系统冲洗 -- 去掉柱子和保护柱
1. 检查反压 - 应该为零或者很小; 2. 进空白 - 基线应无问题; 3. 检查基线状况;
Waters Connections
对RI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的
所有峰都是负峰 - 可能是检测器输出与数据单元连线极性接反
Waters Connections
®
SM
峰形不好 - 如峰拖尾, 峰分叉, 出肩膀
在线过滤器(IN LINE FILTER)污染 (通常会伴随有系统压力升高之现象)
色谱柱污染
系统有不正常的死体积- 检查管路连接是否正确- 内径, 接头保护柱(GUARD COLUMN)污染溶剂不好或使用不对样品不好
TAP内容:*每年定期更换机器易损件.如各密封件,光源灯等;
*除定期更换的部件外,其他部件若出现故障,包括价格高的部件,维修或更换无需再付费; *可获得优先响应的临时性维修申请;
TAP特别适用于工作量大的质检/质控实验室; 您的经费支出和您所获得的利益相比-值得;
Waters Connections

HPLC常见故障与日常维护项

HP1C常见故障与日常维护项一、检测器的维护和保养1检测器是高效液相色谱仪器的数据收集部分，由很多的电子和光学元件组成。

禁止拆卸更动仪器内部元件防止损失或影响准确度。

2、仪器内部的流通池是流动相流过的元件，样品的干净程度和微生物的生长都可能污染流通池，导致无法检测或检测结果不准，所以在使用了一段时间以后要先用水冲流通池和管路再换有机溶剂冲洗。

3、当仪器检测数据出现明显波动，基线噪音变大时要冲洗仪器管路，冲洗后如果还是没有改善就应该检测气灯能量，如果能量不足就应更换新的气灯。

4、仪器在每次使用完了以后都要用水一定浓度的有机溶剂冲洗管路，保证下次使用时管路和系统的清洁。

二、高压恒流泵的维护和保养1高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。

高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行会逐渐磨损泵的内部结构。

在升高流速的时候应梯度势升高，最好每升0∙2m1∕min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

2、在仪器使用完了以后，要及时清洗管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。

三、色谱柱的维护和保养1所使用的流动相均应为HP1C级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HP1C级的试剂或溶液均经0.45μm薄膜过滤。

而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

2、所使用的水必须是经过蒸储纯化后再经过0.45μm水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。

并且在进样的样品都必须经过0∙45μm薄膜针筒过滤后进样。

四、常见故障与日常维护问题维护溶剂瓶进口筛板阻塞更换过滤流动相，0.45Hm膜溶剂瓶有气泡流动相脱气泵有气泡流动相脱气泵密封损坏更换泵单向阀损坏过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀进样阀转子密封损坏不要拧的过紧过滤样品色谱柱筛板阻塞过滤流动相、样品，运用在线过滤或保护柱色谱柱柱头塌陷避免使用PH>8的流动相，使用保护柱、使用预柱检测器灯失效、效应值降低、噪音更换或准备备用灯大流通池有气泡保持流通池清洁、池后使用反压抑制器、流动相脱气。

高效液相色谱仪检测器的故障排除

高效液相色谱仪检测器的故障排除高效液相色谱仪（HPLC）是现代分析化学中常用的一种分离技术，它通过分离样品中的化合物并采集数据来分析和确定它们的成分。

HPLC系统由多个部分组成，其中检测器是其中一个主要部分。

然而，由于使用寿命、错误操作或其他原因，检测器可能会导致问题或故障。

因此，了解HPLC检测器的常见问题和解决方法非常重要。

故障1：检测器灵敏度降低如果HPLC检测器的灵敏度降低，可以从以下几个方面来排查故障：1.检查流量：确保流量是正确的，因为低流量可能会使灵敏度降低。

2.检查泵：如果泵压力不够，可能会导致流量降低，从而影响灵敏度。

检查泵的相关参数是否正确。

3.检查透镜：透镜污垢可能影响灵敏度。

清洁透镜并使用相应的清洁工具。

4.更换柱：如果柱上的杂质或化合物过多，可能会影响灵敏度。

更换柱子或好好清洗。

故障2：检测器基线不稳HPLC检测器的基线不稳可能会导致灵敏度分析误差。

以下是排除这种问题的诸多方法：1.调试消除氧化物：如果液相色谱中的溶解氧含量过高，则可能导致检测器基线波动。

使用氮气或氦气除去氧气。

2.重新校准检测器：重新校准检测器可以消除基线不稳的问题。

3.检查增益通道：增益通道可以有助于确定分析结果。

确保增益通道设置正确。

4.检查积分时间：积分时间过长或过短可能会导致基线不稳。

根据实验需要更改积分时间。

故障3：检测器信号无法输出如果HPLC检测器的信号无法正常输出，可能是由以下原因导致：1.检查连接：连接从检测器到计算机的电缆可能松动。

松动连接会导致信号无法输出。

2.检查电缆：需要检查电缆本身是否损坏或老化。

3.检查计算机设置：检查数据系统是否设置正确。

故障4：检测器信号异常HPLC检测器的信号异常可能会导致实验结果不准确。

以下是检查信号异常的一些方法：1.检查波形：检查波形是否正常或者是否出现跳跃。

2.检查阻塞：检查柱是否堵塞，发现堵塞需要更换柱。

3.检查管路：检查固定管路是否出现松动等不正常情况。

HPLC常见问题和解决方法总汇

压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示，没有流动相流动B、流动相流动正常，但没有压力显示C、压力持续偏高D、压力持续偏低E、压力不断上升F、压力降为零G、压力不断下降，但不回零H、压力波动漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A、接头处漏液B、泵漏液C、进样阀漏液D、色谱柱漏液E、检测器漏液参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾B、峰前延C、峰分叉D、峰变形E、早出的峰变形F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰G、K’增加时，脱尾更严重H、酸性或碱性化合物的峰拖尾I、额外的峰J、保留时间波动K、保留时间不断变化L、基线漂移M、基线噪音（规则的）N、基线噪音（不规则的）O 、宽峰aP 、分离度降低Q 、所有的峰面积都太小R、所有的峰面积都太大A、手动进样阀，转动不灵B、手动进样阀，载样困难C、自动进样阀，不能转动D、自动进样阀，其它问题你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。

你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。

例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。

大部分的问题是可以通过眼睛看到。

A、溶剂的气味B、热气味C、读数不正常D、灯警告E、警告音F、刺耳的短音或长音下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。

括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。

用户手册则提供您更多的维护方。

HPLC常见故障排除完美版要点

HPLC常见故障排除完美版（1）注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。

**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

色谱柱的维护1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中6．压力升高是需要更换预柱的信号HPLC六通阀进样器的使用及保养六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。

美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。

工作原理：1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。

虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。

如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。

以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。

在HPLC 系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。

一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。