猪附红细胞体特异性基因的克隆和序列分析

合集下载

猪附红体剖析

强心：使用安那加注射液：肌注0.5-1g/头。
解热：对于高热（42℃）发病猪可肌注安乃近注射液。
补铁、维生素：在饲料中补充铁盐和维生素C。
目前，暂无有效疫苗使用。
预防 ·无疫苗 ·减少抑制免疫性疾病及应激反应 ·切断传播途径：针头、手术器械等严格
消毒；驱虫、灭蝇、灭虱等
·用药预防
附红细胞体病
➢ 诊断：根据症状，温暖季节多发，查病原体。
病理变化
·血液呈水样、清漆样 ·肝变性肿大，黄棕色 ·淋巴结肿大 ·胸腔、腹腔及心包积液
诊断
·临床症状：高热、贫血、耳廓边缘变色和皮肤变态反应、应激后发病
·血液学变化：血液水样、贫血像
·病原：血涂片Giemsa染色，查找附红体，在红
细胞表面见有卵圆形至圆形的附红细胞单体，或完全将红细胞包围的链状附红细胞体
每吨饲料添加150g），连续使用5-7天，然后将剂量减半，再连续使用2周。
金霉素：每吨饲料添加300g，连用3-5天，然后剂量减半，再连续使用2周。可同时添加阿散酸。
土霉素：每吨饲料添加600g，疗程同上。可同时添加阿散酸。
②对症治疗
输液：附红细胞体病的一个显著病理特征是低血糖、酸中毒。因此可对发病母猪（种用）静脉输注10%葡萄糖和碳酸氢钠，对发病群体（商品猪）在饲料中添加碳酸氢钠（每吨饲料添加1-2kg）
临床症状：
高热、黄疸、贫血、消瘦、食欲不振、呼吸困难；慢性型表现为粘膜苍白，皮肤上有瘀斑，耳部边缘发紫；母猪（20～30％）表现为受胎率低，不发情、流产、产死胎、弱仔、无乳。发病率高（100％），单纯感染时，死亡率低（小于2％）。
临床症状
·急性期—高热达42℃，苍白，黄疸
（少见），尿液呈红茶色

猪附红细胞体SRP54基因的克隆及表达质粒的构建

ｔｎａｄｔｅｅｉｅｏｏｉａｈｒｃｅｉｔｃ，ｆｅａａｌｓｃｎｉｍｅｓＣＰａｄＭＥＶｎｅｔｎｗｅｅｃｌｉｎｈｐｄｍｉｌｇｃｌａａｔｒｉｓａｃｌｍｐｅｏｆｒｄａＶｎｏｃｓｓｉｆｃｉｒｏ— ｏｌｃｅｎｓｄｆｒｃｏｉｇｔｅｃｍｐｅｅＯＲＦｅｅｏｈｏｏ－ｔｕｔｒｌｐｏｅｎＮＳｎｈｉｅｔｄａｄｕｅｏｌｎｎｈｏｌｔｓｇｎｓｂｔｆｎｎｓｒｃｕａｒｔｉ１ａｄｔｅｍａｎ
基因片段，隆至ｐ克ＭＤ１一ｉｌ载体上，ＰＲ、切初步鉴定正确后进行测序，所克隆片段进行生物８Ｔｓｍｐｅ经Ｃ酶对
信息学分析，并构建重组表达质粒ｐＸＳＰ４ＧＥ－Ｒ５。结果显示，隆的ＳＰ４基因片段大小为１１４ｂ，克Ｒ５６ｐ与Ｇｎａｋ中参考序列的同源性为９；ｅＢｎ７该基因编码３１个氨基酸，Ａ０８编码蛋白的等电点为６’１无跨膜区；．，５重
ＹＡＮＧｈｎ，ＷＡＮＧｉｎｋ，ＹＩＬ，ＸＵｏｇｌ，ＣＨＥＮＧｈ— ｅｇＳｅＪａ－ｅｉＨｎ —ｉＳｉｐｎ，ＷＵｕＨａ
（ｓｔｔｏｐｃａｌｃｎｍｉＡｎｍａｎｌｎｃｅｃ，ＡＩｔｕｅｆＳｅｉｌｉＷｉｄＥｏｏｃｉｌｄＰａｔｉｎｅＣＡＳｉｎＪｌ，３１９ＣｉａａＳ，Ｊｌ，ｉｎ１２０，ｈｎ）ｉｉ

猪附红细胞体病及并发猪链球菌病的综合分析.doc

猪附红细胞体病及并发猪链球菌病的综合分析概述：近几年来，猪附红细胞体病在我国流行普遍,凡养猪地区均有该病发生。

猪感染附红细胞体后，可导致猪机体抵抗力、免疫力降低，极易引起其他疾病的混合感染。

猪饲料添加剂—活性肽原临床常见的猪感染附红细胞体后发病的有猪瘟、猪链球菌病、猪水肿病、猪沙门氏菌病、传染性胸膜肺炎等，有的甚至几种病混合感染，给临床诊疗带来一定困难。

若诊断不确切、治疗不当，死亡率较高。

猪饲料添加剂—活性肽原流行特点猪附红细胞体病占猪病发病比例与季节没有明显差异，说明本病已没有明显的季节性，可能与传播途径的广泛性有关。

临床症状猪饲料添加剂—活性肽原(1)猪附红细胞体病临床症状：病初精神沉郁，食欲不振，体温升高(40.5℃～41.5℃以上)尿呈茶褐色或血红蛋白尿，有的毛囊出血，部分病例贫血，黏膜苍白、黄疸，持续感染的病例耳朵边缘能发生坏死。

急性感染耐过的猪往往生长缓慢。

由于被感染耐过的猪不能产生很强的免疫力，可能再次被感染发病。

猪饲料添加剂—活性肽原母猪可引起繁殖障碍，主要表现：受胎率低、不发情、流产、产弱子。

此外还有许多母猪出现怀孕延迟或不发情，有的母猪几次发情配种而不能受孕。

猪饲料添加剂—活性肽原(2)猪链球菌病的临床症状：临床可分为最急性型、急性型、慢性型种类型。

猪饲料添加剂—活性肽原最急性型：发病急、病程短，不见症状突然死亡。

急性型：体温升高到41℃以上，不食或少食，精神沉郁，呼吸迫促。

腹下、四肢、耳朵呈紫色。

猪饲料添加剂—活性肽原有的呈游泳状,抽搐，转圈，突然倒地，最后衰竭，麻痹死亡。

有的出现关节炎，跛行或不能站立。

猪饲料添加剂—活性肽原慢性型：由急性型耐过猪可转为慢性型，或开始发病即为关节炎型或化脓性淋巴结炎型，病程较长，食欲较差。

猪饲料添加剂—活性肽原四肢关节肿大、痛疼、跛行或不能站立。

下颌淋巴结发炎肿胀，后期化脓破溃。

猪饲料添加剂—活性肽原病理变化(1)猪附红细胞体病主要变化可见：贫血、黄疸、血液稀薄、肝脏肿大，脂肪变性，有的呈黄棕色，胆汁浓稠。

猪附红细胞体病的诊治(doc 5页)

猪附红细胞体病的诊治(doc 5页)猪附红细胞体病的诊治几个月以来，在山东农业大学动物保健医院门诊上常发现以高热、贫血、轻度黄疽、皮肤发红为特征的疾病。

由于大部分猪场猪群己用猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、仔猪副伤寒疫苗进行了免疫预防接种，因此很多人怀疑为猪弓形虫病，但用磺胺类等药物治疗，均未见效，并出现死亡。

我们根据临床症状，流行特点结合实验室检查确诊为猪附红细胞体病，并且取得了明显的治疗效果。

1、病原特点在猪体内存在有两种附红细胞体，一种是猪附红细胞体，另一种是小附红细胞体。

后一种对猪不发生致病作用，常引起猪发病的只是前一种，它能使猪发生一种热性病。

猪附红细胞体是这两种原虫中较大的一种，直径平均为0．8微米，最大的可达2，5微米。

通常的形态是环形，也有球形、杆状和发芽状的。

这些原虫通常依附于红细胞上，有时也游离于血浆中。

其增殖是在红细胞内行二分裂萌芽法。

附红细胞体对干燥和化学药品的抵抗力很低，但耐低状出血；全身骨骼肌色泽变淡、稍黄染；肝表面有黄色条纹状坏死，胆囊充满胆汁；肺叶边缘充血、出血；纵隔淋巴结水肿；心包积液，心脏肿胀，心内外膜有点状出血；脾脏肿胀、柔软，切面有稀薄血液。

4、实验室诊断4.1 血液压片取病猪新鲜血液一滴，加等量生理盐水混匀，加盖玻片，油镜暗视野下观察，发现红细胞表面和血浆中有多种形态如球形、椭圆形、环形及杆状的闪光虫体，这些虫体能前后、左右、上下伸展、旋转、翻滚。

由于在红细胞表面的虫体有张力作用，使红细胞的形态发生变化，呈锯齿状、菠萝状等不规则形态，一个红细胞上可附着数个至数十个虫体。

4.2姬姆萨染色镜检取病猪耳静脉血，涂片，姬姆萨染色，在1500倍油镜下，可观察到附在红细胞表面的淡紫色、呈多种形态的附红纲胞体，而以点状、不规则的环形为多，其特点是当调动微动螺旋时，折光性较强，附红细胞体中央发亮，形似空泡。

5、治疗咪唑苯脲20-30mg/kg体重肌肉注射间隔24小时再注射一次。

注射本品前，可先注射地塞米松以防猪只过敏；注射本品后若有猪只出现严重的气喘症状，可以用硫酸阿托品缓解。

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析猪附红细胞体病（PRRS），是一种由PRRS病毒引起的高致死率和高传染性的疾病，严重危害了全球猪业的发展。

猪附红细胞体病在全球范围内广泛流行，给养猪业带来了严重的经济损失。

本文将针对不可轻视的猪附红细胞体病进行深入分析，探讨其核心思路和防控方法。

一、PRRS病毒的传播途径及危害1. 传播途径猪附红细胞体病主要通过粪便、鼻液、唾液和血液等途径进行传播。

空气传播也是其主要传播途径之一。

由于PRRS病毒对环境适应力强，能在恶劣环境中长时间存活，所以传播速度快，范围广，很容易感染整个猪场。

2. 危害PRRS病毒感染后，会导致猪的免疫功能受损，易患其他细菌、病毒等二次感染，严重影响猪的生长发育和生产性能。

由于PRRS病毒具有高传染性，感染后可在猪群中迅速扩散，大面积死亡现象时有发生，给猪场带来了严重的经济损失。

1. 疫情监测针对猪附红细胞体病的严重危害，猪场需加强疫情监测，定期对猪群进行检测，及时发现病毒感染的情况，以便采取针对性的防控措施。

对于疑似感染的猪群，要及时进行隔离治疗，避免病毒的传播扩散。

2. 强化生物安全措施生物安全是防控猪附红细胞体病的关键。

猪场需严格执行消毒制度，做好猪场环境卫生管理工作，保持猪舍内外的干净整洁，定期对猪场设施和设备进行消毒清洁，减少病毒的存活和传播。

3. 加强免疫管理科学合理地开展猪群免疫程序，提高猪的免疫力，对猪附红细胞体病进行预防接种，规范及时地进行疫苗接种计划，有效提高猪的抵抗力，减少病毒感染的风险。

4. 提高猪群品质管理水平加强饲养管理，保障猪群的健康生长。

在饲喂管理方面，要注意合理配饲，保证猪的营养需求，提高猪的抗病能力，减少病毒感染的风险。

5. 建立完善的防疫体系建立全面的防疫体系，加强对猪附红细胞体病的认识，提高防控意识，提高防控措施的实施力度，确保猪场的生产安全。

三、猪附红细胞体病的防控方法1. 积极加强猪群的免疫力在日常饲养管理中，要注重提高饲养水平，加强猪群的营养保健，合理配置饲料，增强猪的体质，提高免疫力。

猪附红细胞体特异性基因的克隆和PCR诊断方法的建立

Ｋｙｗｏｄ：ｙｏｌｓｕｓｏｙｒｓｈｉｅｃｉｎ；ｃｏｅｅｒｓＭｃｐａｍａｓｉ；ｐｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｏｌｎ
Ｃｏｒｅｐｏｄｉｕｔｒｒｓｎｎｇａｈｏ
附红细胞体病是由附红细胞体（ｃｐａｍａｕ，Ｍｙｏｌｉｓｓｓ
ａｃｒｉｅｓｑｅｃｕｌｈｄｂｏｌｅｉ０３（Ｊ０９９．ｈＣｒｄｃｃｎｉｅ０ｐｗｉｓｉｎｉａｔｃｏｄｎｔｔｅｕｎｅｐｂｉｅｙＨｅｌｎ２０Ａ５４９）ＴｅＰＲｐｏｕｔｏｔｎｄ６３ｂｈｃｗａｅｔｌｏｇｏｈｓｚａｈｄｃ
ｈｕｌｅｅｕｎｅＴｅＰｔｅｐｂｉｈｄｓｑｅｃ．ｈＣＲｓａｓｓｅｉｃａｄｃｕｄｄｔｃ．５ｒ／ｓａｓｙｗａｐｃｆｎｏｌｅｅｔ０６ｇｍＥｆＭ，ｕｓｔｉａｑｉｋｍｅｈｄｔａｏｌｅｉｉｏｓｉ、Ｉｓｕｃｔｏｔｃｕｄｂｈｕｅｒｅｉｅｏｏｙｓｄｎａｌｌｉａｉｇｏｅｏ．ｕｓｓｄｆｐｄｍｉｌｇｔｙａｄｅｒｃｉｃｌａｎｓｆｓｉ、ｏｕｙｎｄＭ
Ｍ．ｉ寄生在人或多种动物的红细胞表面、血浆和ｓｓｕ）
方法，但费时、成本高；血清学方法包括补体结合
试验（Ｆ）ＣＴ、间接血凝试验（Ａ）ＥＩＡ方法检测Ｉ和ＬＳＨ

猪附红细胞体pcr检测方法的建立和初步应用

猪附红细胞体pcr检测方法的建立和初步应用文章标题：猪附红细胞体PCR检测方法的建立与初步应用在农业领域，猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用备受关注。

本文将从建立方法的过程、应用范围和未来发展等方面进行深入探讨，帮助读者全面了解这一重要的技术。

一、建立方法的过程1.1 猪附红细胞体PCR检测方法的原理猪附红细胞体PCR检测方法是一种基于多重PCR的检测技术，主要用于检测猪体内的特定病原体。

1.2 关键步骤和技术要点建立这一检测方法需要充分理解猪体内病原体的生物学特征，同时需要在PCR技术上进行优化，确保灵敏度和特异性。

1.3 方法的验证和实验数据经过大量实验和数据对比，可以确定该方法在猪体内病原体检测方面具有可靠性和准确性。

二、初步应用2.1 在疾病防控中的应用猪附红细胞体PCR检测方法可以用于疾病的早期诊断和监测，为疾病的控制和防治提供重要支持。

2.2 在饲养管理中的作用通过该方法的应用，可以及时检测病原体，避免疾病的传播，保障猪的生长和健康。

2.3 对农业生产的意义猪附红细胞体PCR检测方法的建立和应用，对农业生产具有重要意义，可以提高疾病检测的精准度，保障畜禽健康生产。

三、未来展望3.1 技术的改进和完善在未来，需要不断改进和完善猪附红细胞体PCR检测方法，提高其在现实应用中的效率和稳定性。

3.2 拓展应用领域除了用于猪体内病原体的检测，该技术还可以在其他动物的病原体检测中得到拓展，具有广阔的应用前景。

3.3 国内外研究现状与竞争优势通过了解国内外研究现状，可以为我们提供更多的启发和借鉴，提高我们的研究水平和竞争力。

个人观点和总结通过对猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用的深入探讨，我认为这一技术具有巨大的潜力和应用前景。

在未来，随着技术的不断改进和完善，相信它将在农业生产和疾病防控领域发挥更大的作用。

在撰写本文的过程中，我深刻理解了猪附红细胞体PCR检测方法的重要性和价值所在。

猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较

猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较王向佩;雷晓思;陈兆国;赵权;周鹏;米荣升;沈莉萍;黄燕;王晓娟;杨晓娇;石凯;刘宇轩【摘要】为了解猪源附红细胞体（Mycoplasma spp.）RNA酶P RNA（RNase P RNA，rnpB）基因序列变异状况，将实验室保存的经16S rRNA基因序列分析鉴定的53份猪源附红细胞体阳性DNA样品用于rnpB基因的扩增，扩增产物克隆至pMD18-T载体并进行序列测定。

将获得的序列与GenBank登录的猪附红细胞体（Mycoplasma suis）德国分离株rnpB基因序列（登录号：EF523602）进行分析和比对，利用MEGA5.0软件构建系统发育树，并与16S rRNA判定结果进行比较。

结果共得到42条猪附红细胞体rnpB基因和11条小附红细胞体（M.parvum）rnpB基因序列。

猪附红细胞体上海分离株rnpB基因与GenBank 登录的猪附红细胞体德国分离株rnpB基因之间的核苷酸序列相似性为98.1%~100.0%；小附红细胞体上海分离株rnpB基因与猪附红细胞体德国分离株rnpB基因序列的相似性为91.0%，与猪附红细胞体上海分离株rnpB基因序列相似性为90.0%~91.0%。

系统进化分析显示猪附红细胞体rnpB基因与小附红细胞体rnpB基因分布在不同聚簇上，与16S rRNA基因序列鉴定结果一致。

%The present study was designed to illustrate variation of RNase P RNA (rnpB) gene of Mycoplasma spp. origin of swine. Partial rnpB gene of Mycoplasmasuis and M.parvum was amplified in PCR from 53 genomic DNAs extracted from pig blood samples, which had been identified as Mycoplasma spp. positive by 16S rRNA gene sequence analysis. The amplified products were cloned into pMD18-T vector for sequencing. The obtained sequences were compared with the sequence of rnpB gene of M. suis German isolate in GenBank (Accession number: EF523602). Thephylogenetic tree was constructed based on nucleotide sequence of rnpB gene of different species using MEGA 5.0 software and the results of Mycoplasma species identification were compared with those of 16S rRNA assessment. Total 42 rnpB genes of different M. suis isolates and 11 rnpB genes of different M. parvum isolates were cloned and sequenced. Homology analysis showed that the nucleotide sequence identities were 98.1%-100.0% between M. suis rnpB gene of Shanghai isolates and German isolate, 91.0%between rnpB gene of M. parvum Shanghai isolates and German isolate and 90.0%-91.0%between M.parvum and M.suis Shanghai isolates. The rnpB genes of M.suis and M.parvum distributed in different clusters of phylogenetic tree, which was consistent with 16S rRNA gene assessment.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】8页(P26-33)【关键词】猪附红细胞体;小附红细胞体;rnpB;克隆;序列比较【作者】王向佩;雷晓思;陈兆国;赵权;周鹏;米荣升;沈莉萍;黄燕;王晓娟;杨晓娇;石凯;刘宇轩【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118; 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;上海市动物疫病预防控制中心，上海201103;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.64猪的附红细胞体病（eperythrozoonosis）是由附红细胞体（Mycoplasma spp.）寄生于猪的红细胞表面、血浆及骨髓等引起的[1,2]，以发热、贫血、黄疸为主要临床症状的人兽共患传染病[3]。

猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用

猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：巴彩凤，李久纯，冯会权，赵微【摘要】目的建立一种新型的猪附红细胞体病PCR诊断方法。

方法根据猪附红细胞体部分CDS基因序列（AJ504999）设计引物，建立一种新的猪附红细胞体病PCR诊断方法。

通过实验室染毒实验，建立感染猪附红细胞体病的小鼠模型，并应用研制的PCR 方法进行实验室验证。

应用建立的PCR诊断方法对辽宁5个城市的385个猪样本进行猪附红细胞体病流行病学情况调查，确定猪附红细胞体病的感染率。

结果成功建立猪附红细胞体病PCR诊断方法，通过染毒模型验证了该方法具有快速、特异性强、敏感性高的特点。

并估计出辽宁省猪群中附红细胞体总体感染率95%的可信区间为（82.50%，89.44%）。

结论本研究建立的猪附红细胞体病PCR诊断方法及临床应用，为辽宁地区乃至全国附红细胞体病的防治工作提供了科学理论数据。

【关键词】猪附红细胞体病PCR 动物模型感染率Abstract: Objective To establish a new PCR diagnostic method of mycoplasma suis(M.suis) .Methods The primers were designed based on the partial CDS gene sequences(GenBank nos AJ504999) to establish a new PCR diagnostic method. A mouse model was established through the toxicity test in the lab and the lab test was conducted using the PCR method. The epidemiology situation of M. suis of 385 porcine blood samples in Liaoning Province was investigated using the CPR diagnostic method. Results It showed that the PCR diagnostic method was established successfully and it has been tested that this method was rapid, specific and highly sensitive . In this study, we find that the prevalence rate of M. suis infection varied from 82.50% to 89.44% in province. Conclusions The study showed that the PCR diagnostic method and its clinical application of M. suis provided the scientific theory data for the prevention and cure of M.suis in Liaoning Province even the whole nation.Key words:mycoplasma suis; polymerase chain reaction; animal model; infectionrate附红细胞体是一种专性血液寄生生物，寄生于多种动物和人红细胞表面、血浆及骨髓内，引起一种以溶血性贫血、黄疸、发热等为主要临床症状的人兽共患传染病［1］。

抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备和鉴定

·简报·抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备和鉴定任春宇1,2，薛书江1，梁晚枫1，倪婷婷1，伍生军1，宋建臣1（1.延边大学农学院，延吉 133002；2.延边州畜牧总站，延吉 133000）摘要：为了制备特异的抗猪附红细胞体单克隆抗体（monoclonal antibody ，MAb ），将纯化的猪附红细胞体抗原浓缩后免疫6周龄BALB/c 小鼠，通过杂交瘤细胞技术制备MAb 。

制备的MAb 分别通过抗体亚类试剂盒、Western blot 进行单抗亚类和特异性检测。

结果显示，共获得了2株能稳定分泌MAb 的杂交瘤细胞株，命名为3F7和2C4。

2株MAb 的亚型均为IgG2a ，其腹水效价分别可达1:16 000和1:14 000。

特异性检测表明，2株MAb 均能特异性地与猪附红细胞体结合，而与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒均无反应。

2株MAb 的获得有望为猪附红细胞体病的诊断和防治提供新的材料。

关键词：猪附红细胞体；单克隆抗体；制备；鉴定中图分类号：S855.95文献标志码：B文章编号：1674-6422（2017）06-0056-04GENERATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIESAGAINST MYCOPLASMA SUISREN Chun-yu 1,2, XUE Shu-jiang 1, LIANG Wan-feng 1, NI Ting-ting 1, WU Sheng-jun 1, SONG jian-chen 1(1. Agricultural College, Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Yanbian State Animal Husbandry Station, Yanji 133000, China)Abstract: In order to generate monoclonal antibodies (MAbs) against Mycoplasma suis , 6-week-old BALB/c mice were immunized with puriﬁed and concentrated M. suis antigen and antibody secreting hybridomas were obtained by fusing splenocytes and myeloma cells. Two strains of stable hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies were obtained and designated as 3F7 and 2C4. Both strains were IgG2a as determined using the antibody subclass kit. The antibody titers of ascites were up to 1:16 000 and 1:14 000, respectively. The speciﬁcity test showed that both MAbs reacted with M. suis antigen in Western blot but did not recognize antigens of Toxoplasmagondii , Streptococcus suis , Mycoplasma hyopneumoniae and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus. The availability of these MAbs against M. suis would provide biological materials for the diagnosis and prevention of eperythrozoonosis.Key words: Mycoplasma suis ; monoclonal antibody; preparation; identiﬁcation收稿日期：2017-02-06基金项目：国家自然基金项目（31460657）；吉林省科技厅青年科研基金项目（20150520129JH）作者简介：任春宇，男，硕士，主要从事动物养殖与疾病研究通信作者：宋建臣，E-mail：jcsong@Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2017,25(6): 56-59猪附红细胞体（Mycoplasma suis，M. suis ）是附着于猪红细胞表面的细胞外寄生虫，可引起红细胞损伤和畸形。

猪附红细胞体膜蛋白OxaA全长基因的克隆及结构功能预测刘明明

刘明明，贾立军，薛书江，等．猪附红细胞体膜蛋白OxaA 全长基因的克隆及结构功能预测［J ］．江苏农业科学，2013，41（1）：12－15．猪附红细胞体膜蛋白OxaA 全长基因的克隆及结构功能预测刘明明，贾立军，薛书江，梁晚枫，张守发（延边大学农学院，吉林延吉133002）摘要：为了解猪附红细胞体膜蛋白OxaA 的生物学特性，本研究设计一对特异性引物，应用PCR 方法扩增OxaA基因的全长序列，进行克隆和测序，并采用生物信息学方法，对OxaA 蛋白的分子结构、理化性质、结构功能域、蛋白质二级结构和三级结构及抗原表位等重要参数进行了预测和分析。

结果表明：PCR 扩增出了1561bp 的目的片段；经测序OxaA 核苷酸序列与GenBank 中KI_3806（NC_015153）基因组序列相比，存在21处同义突变，核苷酸序列同源性98%，氨基酸序列同源性100%；OxaA 蛋白的理论等电点为9．98，偏碱性；OxaA 蛋白存在多个信号肽可能位点和5个跨膜区域；OxaA 蛋白的二级结构以α螺旋、不规则卷曲、延伸链为主要构件；SWISS 数据库中并未找到与OxaA 蛋白结构高度相似的蛋白，应用CPHmodels 模拟出OxaA 蛋白的三级结构；OxaA 蛋白的B 细胞抗原表位可能存在于20 24位、28 40位、45 53位、142 150位、260 263位氨基酸处。

本研究为OxaA 蛋白功能的深入研究提供了参考，并为猪附红细胞体病单克隆抗体的制备及合成肽疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪附红细胞体；OxaA 基因；克隆；功能预测中图分类号：S852．62文献标志码：A文章编号：1002－1302（2013）01－0012－04收稿日期：2012－05－05基金项目：公益性行业（农业）科研专项（编号：200903036－13）。

作者简介：刘明明（1987—），男，吉林长春人，硕士研究生，主要从事分子免疫学研究。

猪附红细胞体病的实验室检测方法研究

猪附红细胞体病的实验室检测方法研究作者：刘桂丽来源：《科技创新导报》 2012年第21期刘桂丽（山东省沂源县南鲁山镇兽医站山东沂源 256103）摘要:猪附红细胞体的检测方法,包括光学显微镜检查、电子显微镜检查、补体结合试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体试验、聚合酶链式反应、DNA重组探针技术、DNA杂交技术、原位杂交技术等,为快速、准确地诊断附红细胞体病提供了参考。

这种疾病一旦流行发生,会引起大量猪死亡,且诊断十分困难,随着研究的深入发现其是人畜共患的疾病,将是近段时间研究的热点。

关键词:附红细胞体病实验室检测方法研究中图分类号:S8 文献标识码:A 文章编号:1674-098X(2012)07(c)-0024-01山东省沂源县立足山草资源大力发展畜牧养殖业,成为当地农村经济发展支柱产业,其中养猪业发展成为畜牧养殖业的龙头。

但近年来猪附红细胞体病呈大面积暴发流行,给养猪业造成严重的经济损失。

该病是猪红细胞感染附红细胞体病毒引起的流行性病害,临床以贫血、黄疸和发热为主要症状,常与其他疾病同时发生,外部表现为体重增加速度慢,饲养周期长,种猪性能力测定下降,甚至丧失,且常规诊断比较困难。

为了进一步让人们认识和了解这种疾病,更有效的预防此类的疾病,就猪附红细胞体病的临床症状和一系列的检测方法简单介绍一下。

1 猪附红细胞体病的流行病学我们查阅了国内外大量资料发现该病多发生于温暖季节,夏秋多雨季节最易发病,常呈地方流行性。

据我们对全县大型养殖场调查,怀孕的母猪最容易得病,哺乳期的仔猪死亡率最高,从调查数据看该病害可感染任何日龄的猪,表现隐性感染。

由于该病是隐性感染,造成此病流行发生的途径如下:(1)外来的感染病猪。

(2)防疫、注射被血液污染的针头,阉割时等被污染的剪刀等手术器械。

(3)传病介质传播。

如寄生于体表的血虱、疥螨、蚊蝇等吸血的节肢动物传播。

(3)配种传播。

交配时的互相传播。

2 猪附红细胞体病临床症状我们近几年观察在哺乳前期,由于无法由食物中获取造血成分——铁质,仅能由日粮以及铁剂的注射来补充铁质,然而这样的铁质含量对于患猪附红细胞体的仔猪是不够的,因此小猪常常会有皮肤无血色、贫血以及黄疸等的症状。

猪USF1基因克隆与序列分析

猪USF1基因克隆与序列分析摘要：研究克隆了猪USF1基因1 382 bp的cDNA序列（登录号：EF 219407）和5 516 bp的DNA序列（登录号：EF 625885）。

序列分析发现猪USF1基因编码区序列与人、小鼠的同源性分别为99%和98%。

基因组序列分析发现猪USF1基因包含11个外显子和10个内含子，内含子的剪接方式均符合“GT-AG”法则。

关键词：猪；USF1基因；克隆；序列分析上游刺激因子1（Upstream stimulatory factor 1，USF1）是螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链（HLH- LZIP）转录因子家族成员之一[1]，可以与USF2形成二聚体，并能识别DNA的E-box序列，调节基因转录[2]。

人类USF1基因位于1q22-q23[3]，并广泛表达于机体的各个组织，调控糖和脂肪代谢基因的表达[4]，此外USF1基因还具有调节免疫反应和细胞周期的功能[5]。

研究发现USF1基因可以作为调节治疗人的胰岛素抵抗葡萄糖不耐症、II型糖尿病和向心型肥胖易感症的候选基因[6-9]。

本研究利用EST信息和测序的方法克隆了猪USF1基因并进行了序列分析，为进一步研究该基因对猪生长发育的调控机理具有重要的意义。

1 材料与方法1.1 试验材料采集4月龄大白猪（湖北省农业科学院畜牧兽医研究所原种猪场）的肌肉组织，用液氮速冻置于-70 ℃中，利用TRizol法提取总RNA，反转录得到cDNA。

利用DNA提取试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]提取DNA，贮存于-20 ℃。

1.2 引物设计以人的基因序列为探针，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank数据库中搜索同源序列，筛选猪的同源性EST（标准：长度≥200 bp，相似性≥80%），用DNAStar软件包中的SeqMan程序进行EST序列拼接，参照拼接的contig（重叠群）采用Primer5.0软件设计引物U1F/U1R，U2F/U2R，U3F/U3R等3对引物扩增USF1基因的cDNA序列。

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析猪附红细胞体病是一种猪只常见的传染病，由猪附红细胞体病毒引起，病毒在猪只体内繁殖，并通过鼻腔、眼结膜、消化道等途径传播。

该病毒主要感染幼猪，但也会影响成年猪，严重影响猪群的生长发育和养殖效益。

对猪附红细胞体病进行深入的核心思路分析，对于科学防控和疫情管理具有重要意义。

1. 病毒特性分析：对猪附红细胞体病毒的特性进行深入研究，包括病毒的形态特征、生物学特性、遗传变异等方面的分析。

通过了解病毒的特性，可以为疫苗研制、药物筛选等提供重要的依据。

2. 病理学观察与病理机制研究：通过对感染猪组织病理学的观察和病理机制的研究，探究病毒对宿主的致病机制。

研究病毒对猪组织的感染能力、病理损伤程度以及机体免疫反应等，有助于揭示病毒感染的机理，为疫情防控提供理论基础。

3. 流行病学调查与监测：通过对不同地区、不同时间段的猪附红细胞体病疫情进行调查和监测，了解病情发展态势、病毒的传播途径以及影响因素等。

通过采集病毒样本，进行病毒分离和分型，可以为疫情防控提供科学的基础数据。

4. 疫苗研发与免疫防控策略：通过研发针对猪附红细胞体病的有效疫苗，并制定合理的免疫防控策略。

对疫苗的研发需要深入了解病毒的免疫原性、抗原性以及疫苗接种后的免疫效果等。

并且，将疫苗接种与其他防控措施相结合，制定全面、系统的防控策略。

猪附红细胞体病核心思路分析需要从病毒特性、病理学观察、流行病学调查与监测以及疫苗研发与免疫防控策略等多个方面进行综合研究。

通过深入分析病毒的特性和感染机制，研究病理学变化和病程发展规律，掌握疫情发展态势和传播途径，同时推动疫苗的研发与推广应用，可以更有效地预防和控制猪附红细胞体病的发生和传播，保障养殖业的健康可持续发展。

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析

不可轻视的猪附红细胞体病核心思路分析引言猪附红细胞体病（Porcine parvovirus disease，也称PPV）是一种由猪附红细胞体病毒引起的猪类传染病。

该病毒可以感染各个年龄段的猪，尤其是幼猪，导致猪的生长发育受到严重影响，甚至引起死亡。

由于该病对猪类养殖业的危害性较大，因此对猪附红细胞体病进行深入的病理学研究十分必要。

本文将对猪附红细胞体病的核心思路进行分析，以期为该病的预防和控制提供科学依据。

一、病原学猪附红细胞体病毒（PPV）是一种DNA病毒，属于副黏病毒科、副黏病毒属，是引起猪附红细胞体病的主要病原。

该病毒具有较强的稳定性，能够在环境中存活一段时间，并且对温度和酸碱度的适应性较强。

目前，猪附红细胞体病毒已在全球范围内广泛传播，成为威胁猪类养殖业的重要病原。

二、传播途径猪附红细胞体病毒主要通过呼吸道、消化道、皮肤和粘膜等途径传播。

通过孕母猪感染该病毒，导致胎儿的感染，也是造成该病传播的重要途径之一。

病毒在环境中的稳定性较强，污染的猪场、猪舍等环境也是传播该病的重要途径之一。

要有效控制猪附红细胞体病的传播，需要全面加强猪场的卫生管理。

三、临床表现猪附红细胞体病的临床表现主要包括发热、咳嗽、呼吸急促、厌食、体重下降等症状。

患猪还会出现贫血、黄疸、痢疾等临床症状。

在母猪感染该病毒后，还会导致胎儿的死亡、畸形、流产等情况。

由于该病毒对猪类的危害性较大，因此一旦发现疑似猪附红细胞体病的情况，应立即采取相应的防控措施，避免疫情向更广泛的范围传播。

四、病理学变化猪附红细胞体病病毒主要侵害猪的红细胞体，引起贫血，同时还会损害猪的肝脏、肺部等重要器官。

在病理学上，患猪肝脏会出现充血、肿胀，肝细胞肿胀、坏死，肝内出血等病变。

患猪的肺部也会出现充血、水肿、出血点等病变。

患猪的骨髓中也会出现病理学变化，主要表现为血小板减少，造血功能减退等病变。

猪附红细胞体病毒对猪的病理学影响非常严重，严重影响了猪的健康状况和生长发育。

常见猪病防治--猪附红细胞体病

常见猪病防治--猪附红细胞体病猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于人、猪等多种动物的红细胞或血浆中引起的一种人畜共患传染病，国内外曾有人称之为黄疸性贫血病、类边虫病、赤兽体病和红皮病等。

猪附红细胞全病主要以急性、黄疸性贫血和发热为特征，严重时导致死亡。

（一）病原猪附红细胞立克次体是血液寄生性病原体，这种病原体大小为0.3～1.3微米×0.5～2.6微米，呈环形、卵圆形、逗点形或杆状等形态。

虫体常单个、数个乃至10多个寄生于红细胞的中央或边缘，血液涂片姬姆萨染色呈淡红或淡紫红色。

（二）流行特点本病主要发生温暖季节，夏季发病较多，冬季较少，根据该病发生的季节性推测节肢动物可能是该病的传播者，国外有人用螫蝇等做绵羊附红细胞体感染试验已获成功。

附红细胞体对宿主的选择并不严格，人、牛、猪、羊等多种动物的附红细胞体病在我国均在报道，实验动物小鼠，家兔均能感染附红细胞体。

另外，经胎盘传播该病也已在临床得到证实，注射针头、手术器械、交配等也可能传播本病。

附红细胞体对干燥和化学药剂抵抗力弱，但对低温的抵抗力强，一般常用消毒药均能杀死病原，如在0.5%石炭酸中37℃3个小时就可以被杀死，但在5℃时可保存15天，在冰冻凝固的血液中可存活31天，在加15%甘油的血液中－70℃可保持感染力80天，冻干保存可活765天。

（三）临床症状小猪最早3月龄发病，病猪发烧、扎堆；步态不稳、发抖、不食，个别弱小猪很快死亡。

随着病程发展，病猪皮肤发黄或发红，胸腹下及四肢内侧更甚。

可视黏膜黄染或苍白。

耐过仔猪往往形成僵猪。

母猪的症状分为慢性和急性两种：急性感染的症状为持续高热（40～41.7℃），厌食。

妊娠后期和产后母猪易发生乳房炎。

个别母猪发生流产或死胎，慢性感染母猪呈现衰弱，黏膜苍白、黄疽，不发情或屡配不孕，如有其他疾病或营养不良，可使症状加重甚至死亡。

（四）病理变化特征性的病变是贫血及黄疸。

可视黏膜苍白，全身性黄疸，血液稀薄。

猪附红细胞体病防治技术

血清学检测
检测血清中抗附红细胞体的抗体，了解免疫状态和感染情况。
鉴别诊断
与类似疾病的鉴别
与猪瘟、猪丹毒等类似疾病的临床症状和病理变化进行鉴别，避免误诊。
确诊需结合实验室诊断
仅凭临床症状和流行病学特征难以确诊，需结合实验室诊断结果进行综合判断。
03
猪附红细胞体病的防治技术
预防措施
疫苗接种
使用猪附红细胞体病疫苗进行免疫接种，提高
药物使用方法与注意事项
抗生素类药物
按体重或按饲料量计算给药量，每日一次或两次给药，连续使用3-5天为一个疗程。注意观察猪只的反应，出现过敏反应应及时停药。
抗原虫药
按体重或按饲料量计算给药量，每日一次或两次给药，连续使用3-5天为一个疗程。注意观察猪只的反应，出现中毒症状应及时停药。
中药制剂
了解流行病学特征
了解猪附红细胞体病的流行病学特征，如传播途径、季节性发病等，有助于临床诊断。
3
对比类似疾病
与猪瘟、猪丹毒等类似疾病进行鉴别，避免误诊。
实验室诊断
血液检查
进行血液涂片，观察红细胞形态是否异常，有无附红细胞体。
病原学检测
通过显微镜检查、PCR等分子生物学方法检测附红细胞体的核酸，以确诊。
接种时间
通常在猪出生后21天左右进行首免，1个月后进行二免。也可根据当地疫情和猪场实际情况制定免疫计划。
接种方式
肌肉注射或皮下注射均可，具体可根据疫苗说明书和兽医建议进行操作。
注意事项
接种前应检查疫苗的生产日期、保质期及包装完好情况；接种后应观察猪只的反应情况，如有异常应及时处理；同时，应做好免疫记录和档案管理。
亚单位疫苗
提取病原体中的特定成分（如抗原蛋白）制备，具有安全性好、免疫原性强等优点，是当前研究的热点。

猪附红细胞体实时荧光定量PCR检测方法的建立

中图分类号:S 852.64:Q 503　文献标识码:A 文章编号:167324696(2007)022*******猪附红细胞体实时荧光定量PCR 检测方法的建立朱绍辉1,2,吴延功2,单　虎1,王志亮2,姜同泉1,孙承英2,赵永刚2(1.莱阳农学院动物科技学院,山东青岛　266109;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛　266032) 摘要:参照猪附红细胞体16S rRNA 基因序列设计了1对引物,分别以标准株和分离株的基因组DNA 为模板,采用S Y BR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 方法检测猪附红细胞体,确定特异性产物的Tm 值,同时做普通PCR 。

试验结果表明,特异性产物的Tm 值为88.5℃,最低能检测到含0.036fg/μL 阳性质粒的标准品。

以阳性质粒标准品10倍倍比稀释的模板进行实时荧光定量PCR ,通过对反应体系和反应条件进行筛选和优化,建立了检测猪附红细胞体的标准曲线。

建立的S Y BR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 检测方法显示了较好的特异性、敏感性和广谱性,为猪附红细胞体病的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。

关键词:猪附红细胞体;实时荧光定量PCR ;荧光染料Establishment of a real 2time fluorescent qu antitative PCR assayfor the detection of Eper yt hrozoon suisZHU Shao 2hui 1,2,WU Yan 2gong 2,SHAN Hu 1,WAN G Zhi 2liang 2,J IAN G Tong 2quan 1,SUN Cheng 2ying 2,ZHAO Y ong 2gang 2(1.De partment of A nimal S cience and Technology ,L ai y ang A g ricultural College ,Qing dao 266109,China;2.China A nimal Health and Epi demiology Center ,Qing dao 266032,China ) Abstract :A pair of p rimers were designed based o n t he 16S rRNA sequence of E pery t hroz oon s uis ,and a real 2time fluorescent quantitative PCR (real 2time FQ 2PCR )assay was established for t he detection of E.suis by using DNA ext racted from po sitive st rain and t he ferret isolated as templates.Tm value of t he spe 2cific p roduction was confirmed to be 88.5℃.An ordinary PCR was also performed.This technique was highly sensitive wit h a detection limit of 0.036f g/μL of positive recombinant plasmid.After t he reaction conditions and reactio n systems of t he real 2time FQ 2PCR were optimized ,a standard curve was obtained wit h t he po sitive recombinant plasmid diluted by 10times as template.The developed real 2time FQ 2PCR using S Y BR Green Ⅰwas specific ,highly sensitive and had broad applications ,and could be f urt her used in clinic detection and epidemic investigatio n of E.s uis .K ey w ords :E pery t hroz oon s uis ;real 2time fluoresent quantitative PCR ;S Y BR Green Ⅰ 猪附红细胞体病(eperyt hrozoono sis )是由猪附红细胞体(E pery t hroz oon s uis )寄生于人畜红细胞表面、血浆和骨髓中而引起的一种人畜共患传染病[1]。

猪Arf家族基因的克隆、定位及组织表达谱分析的开题报告

猪Arf家族基因的克隆、定位及组织表达谱分析的开题报
告
一、研究背景及意义
家畜基因组的研究对于畜牧业的发展有着重要的意义。

猪是我国重要的畜牧业动物之一，其肉类产量和质量对于我国人民的生活和经济都有着重要意义。

而研究猪的基因组结构，能够帮助人们更好地了解猪的生命活动和身体机能，同时也为猪的育种和改良提供了重要的理论基础。

狗家族Arf基因家族同样在科学研究领域中占有重要地位，其在细胞增殖调控和肿瘤发生中的作用已经得到了广泛的研究。

二、研究内容与方法
本研究计划通过基因克隆和生物信息学分析等手段，研究猪家族Arf基因家族的基因序列、基因组定位和组织表达谱分析，并对其在猪身体机能中的生物学功能进行分析。

具体的研究步骤包括：
1. 采集猪的组织样本，提取总RNA，并通过逆转录PCR的方式合成cDNA。

2. 根据已有的狗Arf基因家族序列信息设计一对引物，进行PCR扩增猪Arf基因家族的序列，并将PCR产物进行纯化和测序。

3. 利用生物信息学软件对猪Arf基因家族的基因序列进行分析和定位。

4. 通过实时荧光定量PCR技术分析猪Arf基因家族在不同组织中的表达谱。

5. 构建Arf基因过表达和RNA干扰模型，进一步验证其在细胞增殖和肿瘤发生等生物学过程中的作用。

三、预期成果与意义
通过猪Arf基因家族的克隆、定位和组织表达谱分析，可以更加深入地了解猪的基因组结构和功能特点。

同时，对猪体内Arf基因家族在肿瘤发生和细胞增殖调控等方面的作用进行研究，可以为猪的育种和营养改良提供重要的理论基础，也可以为人类疾病的治疗和药物研发提供一定的参考价值。