凝胶法鲎试剂使用方法
厦门市鲎试剂实验厂 透析专用细菌内毒素检测鲎试剂盒说明书
透析透析专用专用专用细菌内细菌内细菌内毒毒素检测鲎试剂盒使用说明书(凝胶法)【品名品名】】透析用水及透析液细菌内毒素检测鲎试剂盒【规格规格】】1样份/盒【用途用途】】用于透析用水或透析液细菌内毒素检测。
【原理原理】】该鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有C因子、B 因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下，细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【试剂盒组成试剂盒组成】】名称 规格/数量 用途 1 鲎试剂（TAL ） 0.5EU/ml ×8支 反应主剂 2 内毒素工作标准品（CSE ） 1EU/支×2支 阳性对照和供试品阳性对照 3 细菌内毒素检查用水（TRW ） 2ml ×3支 鲎试剂与内毒素溶解 4 辅液Ⅰ 0.7ml ×1支 样本稀释 5 采样瓶 10ml ×1支 透析用水或透析液采集 6 空安瓿 2ml ×1支 样本稀释 7 除热原吸头 200µl ×2包，1ml ×1包 移取样本及内毒素溶液 8 使用说明书 1份 操作说明 9 质检报告 1份 质检报告【需准备的材料和设备需准备的材料和设备】】除本试剂盒外需准备旋涡混合器、移液器、试管架、恒温水浴箱或恒温器（37±1℃）。
【用法用法】】1. 供试品溶液及对照制备1.1阴性对照溶液的制备即细菌内毒素检查用水（TRW ）。
1.2阳性对照溶液的制备一般为浓度为2λ的内毒素溶液（λ为鲎试剂的的标示灵敏度）。
例如：取效价为1EU/支的内毒素工作品（CSE ）１支，加入1.0ml 细菌内毒素检查用水（TRW ），在旋涡混合器震摇2-3min 得1.0EU/ml 内毒素阳性对照溶液。
1.3供试品溶液的制备用无热原采样瓶采集适量透析用水或透析液。
若样本的内毒素限值(L )为1.0EU/ml ，按鲎试剂的灵敏度λ及样本的内毒素限值L 计算供试品德最大有效稀释倍数(MVD )，M V D = L /λ当λ= 0.5 EU/ml ，L= 1.0EU/ml 时，M V D =2(倍),取样本0.7ml 于试剂盒配套辅液Ⅰ中，用旋涡混合器混匀1min 后，即为待测供试品溶液。
凝胶法鲎试剂内毒素检测试剂
产品描述：凝胶法鲎试剂内毒素检测试剂Gel Clot LAL Assays产品介绍：内毒素检测Endotoxin Detection提供内毒素检测LAL(Limulusamebocytelysate)试剂及各种仪器，此类产品广泛用于工业药品制造厂家。
可检测各种规格的内毒素含量。
Lonza公司可提供各种单独或组合装的试剂检测盒,以及内毒素标准品、检测用水、检测仪器。
为适应市场的需要Cambrex公司还不断推出各种新的检测方法及试剂。
：1)凝胶法：定性、半定量、更高的灵敏度。
2) 荧光法：快速、高灵敏度、简单、较大范围内定量3) 端点显色法：快速、简便、小范围内定量。
4) 内毒素检测精密移液器、试管架、无热源吸头、无热源试管、无热源微板、动态检测仪器。
其中重组因子C ----内毒素激活的胶凝级联反应中最重要的成分。
PyroGene™重组因子C 的内毒素侦测有较佳的状态, 不会检测到β(1,3)-聚葡萄醣体的活动，不受季节、环境、动物血、不同批次差异性的影响。
使用PyroGene™无需使用G因子阻滞缓冲液，节约您的时间跟经费。
PyroGene™的订购号码: 50-658U, 每组192支。
需要进一步的产品信息, 请与我们联系。
订货信息货号描述灵敏度EU/ml规格PYROGENT® Gel Clot LAL Assay80 tests = 5×16 tests/vial of lysate250 tests = 5×50 tests/vial of lysateN104 0.03 250 testsN183-06 0.06 80 testsN194-06 0.06 250 testsN183-125 0.125 80 testsN184-125 0.125 250 testsN184-25 0.25 250 testsPYROGENT® Gel Clot LAL Single Test Vials25 single test vials of lysateN189-06 0.06 25 testsN189-125 0.125 25 testsN189-25 0.25 25 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Assay（含对照）1×10 ng/vial endotoxin64 Tests = 4×16 tests/vial of lysate200Tests = 4×50 tests/vial of lysateN294-03 0.03 200 testsN283-06 0.06 64 testsN294-06 0.06 200 testsN283-125 0.125 64 testsN294-125 0.125 200 testsN284-25 0.25 200 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Single Test Vials1×1 ml vial endotoxin24 single test vials of lysateN289-06 0.06 24 testsN289-125 0.125 24 testsN289-25 0.25 24 testsPYROGENT® Ultra Gel Clot LAL Assay200Tests = 4×50 tests/vial of lysate5×5 ml liquid endotoxin standardsN594-03 0.03 200 testsN594-06 0.06 200 testsN594-125 0.125 200 testsControl Standard Endotoxin for Gel Clot LALEndotoxin(E. coli) for Gel Clot AssaysStrain O55:B5N185 5 vials×2.5 mg/vial*N186 5 vials×10 ng/vial* high potency for depyrogenation studies。
鲎试验实验报告
一、实验目的1. 了解鲎试验的原理和方法。
2. 掌握鲎试验在微生物检测中的应用。
3. 提高微生物学实验技能。
二、实验原理鲎试验是一种检测微生物内毒素的试验方法。
鲎血中含有一种特殊的凝固蛋白，当鲎血接触到细菌内毒素时，凝固蛋白会立即凝固，从而产生凝胶。
根据凝胶形成的时间，可以判断样品中内毒素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鲎试剂- 标准菌液- 待测样品- 生理盐水- 移液器- 培养皿- 灭菌棉签- 酒精灯- 镊子2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 移液器- 移液管- 培养皿- 镊子四、实验步骤1. 准备工作：- 将鲎试剂置于37℃恒温水浴箱中预热。
- 将待测样品和标准菌液分别用生理盐水进行稀释。
2. 制备样品：- 取适量鲎试剂加入培养皿中，加入适量的生理盐水，混匀。
- 分别加入标准菌液和待测样品，混匀。
3. 观察结果：- 将培养皿置于37℃恒温水浴箱中，观察凝胶形成的时间。
- 记录标准菌液和待测样品的凝胶形成时间。
4. 结果分析：- 根据凝胶形成的时间，判断样品中内毒素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准菌液凝胶形成时间为5分钟，说明标准菌液内毒素含量较高。
2. 待测样品凝胶形成时间为8分钟，说明待测样品内毒素含量较高。
3. 根据凝胶形成的时间，判断待测样品内毒素含量为中等。
六、实验讨论1. 鲎试验是一种简单、快速、灵敏的检测微生物内毒素的方法。
2. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染。
3. 实验结果与实际情况可能存在一定的误差，需结合其他实验方法进行综合判断。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了鲎试验的原理和方法，掌握了鲎试验在微生物检测中的应用，提高了微生物学实验技能。
在实验过程中，我们应注意操作规范，保证实验结果的准确性。
同时，我们应不断总结经验，提高实验技能，为微生物学领域的研究贡献力量。
凝胶法鲎试剂使用方法
凝胶法内毒素快速检测试剂盒 Pyrosate 操作流程
（仅供参考，使用时请参照试剂配套的使用说明）
试剂盒简介：
1974年成立的美国ACC 公司（Associates of Cape Cod, lnc.），是全球首家成立并通过FDA 关于内毒素检测LAL ————鲎试剂生产认证的企业，专业生产内毒素和β-葡聚糖检测产品。
现在ACC 已经成为拥有全球机构和经销网络的世界级组织。
领跑全球呢毒素检测领域。
Pyrosate Kit 作为目前世界上唯一的凝胶法内毒素快速检测试剂盒，是当今最先进最快速的凝胶法鲎试剂，在LAL 凝胶法检测中具有着其他方法无可替代的优点，它不需要专业培训或额外的实验仪器，只需按照说明书中的步骤操作，即可在短时间内（30）分钟得到准确结果，尤其适用于对水和无稀释渗透液的检测。
优势：
无需冷藏 无需稀释 有两个可用灵敏度。
（1.0EU/mL 和0.25EU/mL ） 符合阳性产物控制 检测时间短 对内毒素特异
Factor B Factor G
Clotting Enzyme
Factor C
Turbidimetric。
细菌内毒素检查法操作规程
******有限公司标准操作规程目的建立细菌内毒素检查操作规程，保证检测结果的准确性。
适用范围所有原料、成品的细菌内毒素检查。
责任人检验员内容1 简述1.1 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌毒素的限量是否符合规定的一种方法。
1.2 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法。
供试品检测时可使用其中任何一种方法。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.3 本规范适用于凝胶法检查。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
1.4 细菌内毒素的量用内毒素单位()表示1.5 细菌内毒素国家标准品()系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
1.6 细菌内毒素工作标准品()系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
1.7 凝胶法细菌内毒素检查用水(水)系指内毒素含量小于0.015灭菌注射用水。
光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005。
1.8 鲎试剂灵敏度复核试验在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素******有限公司标准操作规程的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度,用表示。
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
1.9 供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和生产工艺或试验环境有变化，鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
1.10 检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则试验结果无效。
2实验材料及用具2.1 天平供试品称量用，感量为0.1以下。
2.2 电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能维持250℃以上至少一小时。
2.3 恒温水浴箱或适宜的恒温器，应能在37土1℃保持一小时。
中国药典2021年版《细菌内毒素检查法》
中国药典2021年版《细菌内毒素检查法》――凝胶法凝胶法凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
在本检验方法规定的条件下，使鲎试剂凝集的内毒素最低浓度为鲎试剂的标记灵敏度，以EU/ml表示。
当使用新一批鲎试剂或试验条件发生任何可能影响试验结果的变化时，应进行鲎试剂的灵敏度审查试验。
根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。
取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃恒温器中，保温60分钟±2分钟。
将试管轻轻地从恒温器中取出，并缓慢地翻转180度。
如果凝胶是在管中形成的，则凝胶不会变形，也不会从管壁上滑落。
形成或形成的凝胶不牢固，变形，并从壁上滑落。
在保温和取试管的过程中，应避免因振动引起的假阴性结果。
当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。
按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc).λc=1g-1(∑x/4）式中x为反应终点浓度的对数值（1g）。
反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λC在0.5λ-2λ（包括0.5λ和2λ）时，可用于细菌内毒素检查，并标记灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
干扰试验按表1制备溶液a、b、c和d，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（mvd）的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。
鲎试剂使用说明书
凝胶法鲎试剂使用说明书一、检测步骤1、标准品稀释：开启后加入检查用水（W）1.2ml，置漩涡混合器上混合5min，得到浓度为10EU/ml的内毒素溶液，标记为（E10），其余各梯度稀释方法如下：0.3ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5mlE10 －－－→E1－－－→E0.5－－－→E0.25－－－→E0.125－－－→E0.06－－－→E0.032.7mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW此步骤为新开启标准品者操作，各梯度做好标记，其余操作人员可直接使用。
2、取鲎试剂8支，折断安瓿瓶颈，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管，做好标记。
3、阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水，每支供试品检查管另加入0.1ml供试品；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ（即0.1ml 的E0.125）内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ（即0.1ul 的E1）内毒素的供试品。
4、封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温金属浴中60min，然后取出观察结果。
在孵育期间避免任何震动！二、结果判断1、将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°，若管内形成凝胶，不变形，不滑落者为阳性，记录为（+）；反之为阴性，记录为（—）。
取出试管应尽量避免受到震动造成假阴性结果！2、阴性对照管必须为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管必须为阳性，否则实验结果无效。
3、若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水货实验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准，或实验条件不满足；若供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》
凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂英文名：（简称）汉语拼音：本品主要成份为因子、因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】．材料和设备选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
准备若干支ⅹ玻璃反应试管（若使用规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（±℃）。
．实验操作稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于试剂中，轻轻振摇至少至试剂完全溶解。
注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
检查操作取分装有鲎试剂溶液的×试管或复溶后的支规格的鲎试剂原安瓿支，其中支作供试品管，支作阴性对照管，支作阳性对照管，支作供试品阳性对照管。
每支供试品管加入供试品；阴性对照管加入检查用水；阳性对照管加入浓度为λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入含λ内毒素的供试品。
封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入±℃的恒温器中孵育±分钟，然后取出观察结果。
试管在孵育期间应避免任何的振动。
结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
【注意事项】.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。
. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在℃干烤至少，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
细菌内毒素检测标准操作
细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。
范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素限量检测。
责任人：质量检测人员材料：一、电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能达到180℃。
二、恒温水浴箱或适宜的恒温器（37℃±1℃）。
三、水银温度计，精度在1℃以下，量程不小于50℃。
四、旋涡混合器。
五、可调式移液器六、0.25EU/ml鲎试剂。
七、细菌内毒素工作品。
八、凝胶法细菌内毒素检查用水。
九、实验用具无热原吸头（1000μl、200μl）、带铝盖的凝集管（10mm×75mm）、试管架、计时器、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、镊子、砂轮。
所用玻璃器皿使用前须经250℃干烤至少1小时或180℃干烤至少4小时。
操作方法一、取样1、细胞发放前3天，取细胞培养液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放（可存放多长时间）。
2、细胞发放当天，取细胞生理盐水混悬液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放。
（可存放多长时间）。
3、取样应以无菌操作技术取样，所用器材在使用前应无热原或已去除热原。
二、鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的是考察鲎试剂的灵敏度是否正确、考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。
在使用一批新的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
（一）实验操作1、细菌内毒素工作品溶液的制备取细菌内毒素工作品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，开启过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照工作品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后用倍倍稀释方式进行稀释，即0.5ml各浓度工作品溶液+0.5ml检查用水（以下稀释方式同此法），制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
凝胶法内毒素快速检测试剂盒Pyrosate操作流程
1 科德角国际生物医学科技（北京）有限公司
凝胶法内毒素快速检测试剂盒Pyrosate操作流程
（仅供参考，使用时请参照试剂配套的使用说明）
一、名词注解：
1) SPL: 装有鲎试剂的样本检测管(蓝盖)
2) PPC: 装有内毒素工作标准品的样本阳性对照管(红盖)
二、准备材料：
试管架
金属空气浴或非循环式水域箱
三、操作步骤
1）用无热源吸液管取出0.5ml 样本加入到SPL 中,然后用手指夹住试管轻轻摇动20－60 秒时间进行充分溶解和混匀;
2）使用取样本的那支吸液管从SPL 中取出0.25ml 加入到PPC 中, 然后用手指夹住试管轻轻摇动10－20 秒时间进行充分溶解和混匀;
3）立即将此SPL 和PPC 放入金属空气浴或非循环式水域箱,温度设定为37±1℃进行反应, 其中反应时间须严格履行同一批次质检报告(COC)的要求。
四、结果分析
阳性反应：凝集成为凝胶
阴性反应：未凝集，自由流动。
[精华]鲎试剂试验方法
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
标准品、鲎试剂操作规程
标准品、鲎试剂操作规程目的：建立标准品、鲎试剂操作规程，指导检验员正确执行标准品、鲎试剂操作。
1.适用范围：适用于标准品、鲎试剂操作。
2.定义2.1标准品系以细菌内毒素国家标准品为基础标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.责任：QC人员。
4.规程4.1申购4.1.1标准品采购：按《对照品操作规程》中对照品申购程序，进行采购。
到药品检验所或中国生物制品检定所统一订购。
4.1.2鲎试剂采购：由管理员根据检验需要，填写申购单，注明：品名、规格、灵敏度、数量、购回日期。
交化验室主任核准后，交物料部采购。
4.2接收4.2.1物料部将鲎试剂与标准品购回后，管理员接通知，开具领料单。
4.2.2经化验室主任签字后，凭领料单到仓库领用。
4.2.3接收前，管理员仔细核对所领细菌内毒素工作标准品或鲎试剂的规格、数量、有效期和灵敏度，检查外包装、标签有无损坏或泄漏。
无误后，方可接收。
4.3贮存4.3.1接收的标准品与鲎试剂根据其特性存放在适宜的条件下，且根据批号、灵敏度分类摆放。
4.3.2管理员及时登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》。
4.4发放、使用4.4.1检验员根据检品需要，向管理员申请试验用量的标准品、鲎试剂。
4.4.2管理员在核实申请情况后，方可发放。
4.4.3领用后，检验员登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》，管理员签名确认。
4.4.4每批入库的鲎试剂必须按药典规定，进行灵敏度复核试验，符合规定后方可发放、使用。
4.4.5鲎试剂灵敏度复核4.4.5.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每步混匀30秒。
4.4.5.2取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个浓度平行做4管；另两管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
中国药典2020版鲎试剂细菌内毒素检查预试验SOP
1目的建立细菌内毒素预试验操作规程，以指导检验人员的正确规范操作，为保证细菌内毒素检查凝胶法的准确性提供依据。
2适用范围适用于细菌内毒素检查法的“鲎试剂灵敏度复核试验”和“干扰试验”。
本规程参照《中国药典》2020年版四部-1143细菌内毒素检查法制定。
3职责进行细菌内毒素检查的操作人员严格按本规程进行操作。
4内容4.1基本原理4.1.1本法采用凝胶法，系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。
4.1.2鲎试剂灵敏度复核试验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
4.1.3干扰试验：当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项目的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验；当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
4.1.4本试验操作过程应防止内毒素的污染。
4.1.5EU：内毒素单位，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。
4.1.6λ：鲎试剂的标示灵敏度，单位：EU/ml。
4.1.7MVD：最大有效稀释倍数，指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数。
4.2材料准备4.2.1细菌内毒素工作标准品：应经细菌内毒素国家标准品为基准标定效价；4.2.2鲎试剂：当使用新批号前，按《细菌内毒素预试验SOP》进行灵敏度检查；4.2.3细菌内毒素检查用水（BET水）：内毒素含量应＜0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用；4.2.4供试品溶液：pH宜在6.0~8.0范围内，否则用已去除内毒素和干扰因子的酸、碱溶液或缓冲液调节。
4.3器具准备4.3.1移液枪、一次性除热源枪头（1000μL、200μL）；4.3.2剪刀、砂轮片、试管架、除热源试管、医用胶布；4.3.3恒温培养箱（37℃±1℃）、旋涡混合器、洁净工作台。
4.4鲎试剂灵敏度复核试验4.4.1试验过程：4.4.1.1根据当批鲎试剂的标示灵敏度（λ），把细菌内毒素工作标准品用适量BET水充分溶解，避免产生气泡，在旋涡混合器上混匀15分钟。
细菌内毒素(凝胶法)操作SOP
1.目的建立血清内毒素检验操作规程，以确保内毒素控制效果。
2.适用范围初制、精制血清的内毒素检验操作。
3.职责3.1．质量管理部：负责本规程的起草。
3.2．质量管理部检验人员：负责本规程的操作。
3.3．总经理:负责本规程的起草。
4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》四部2015版6.材料及设备6.1.1.鲎试剂，应具有国家主管部门的批准文号。
6.1.2. 试管架、洗耳球、医用胶布、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮等。
6.1.3. 刻度吸管6.1.4. 细菌内毒素国家标准品（NSE）、细菌内毒素工作标准品（WSE）6.1.5. 细菌内毒素检查用水（BET水）6.1.6. 试管架、洗耳球、医用胶布、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀、砂轮等。
6.1.7. 电热干燥箱：温度应能维持250℃以上。
6.1.8. 恒温试管仪应能在（37±1）℃保持1h。
9.1.9. 旋涡混合器7.流程图无8.内容8.1. 供试品细菌内毒素的检查。
8.1.1. 计算MVD值：MVD＝C· L／λ根据《中国药典》现行版L＝10 EU／ml，故C为1.0ml／ml。
当λ=0.06EU／ml时。
MVD＝C·L／λ＝1.0×10／0.06＝160制备供试品溶液其稀释倍数不得超过160倍。
8.1.2. 阳性对照溶液的制备，用 BET水制成4λ(0.25)内毒素标准溶液。
8.1.3. 供试品阳性对照液的制备用被测供试品将WSE制成 0.25EU/ml内毒素标准溶液。
8.1.4. 鲎试剂的制备：取0.lml／支的鲎试剂5支，加入0.lml BET水复溶，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
8.2. 加样复溶后的0.lml／支规格的鲎试剂安培5支，其中2支加入0.1ml最大有效稀释的供试品溶液作为供试品管,1支加入0.1ml用BET水将WSE制成的0.25EU/ml浓度的内毒素溶液作为阳性对照， l支加入0.1mlBET水作为阴性对照，1支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管。
鲎试剂标准
鲎试剂标准本品为鲎科动物东方鲎（Tachyplecus tridentatus）的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品。
本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme），凝固蛋白原（Coagulagen）其灵敏度以细菌内毒标准品或工作标准品测定，应为标示量的50％－200％。
（一）性状本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水生生理盐水中易溶。
（二）鉴别1．取本品按装量加水溶解后，加茚三酮试液《中国药典1990年版》（二部附录162页）0.25ml，加热煮沸1－2分钟，显蓝色紫色。
2．取本品按装量加水溶解后，再加水适当稀释，照分光光度法《中国药典1990年版》（二部附录24页）测定，在270±1nm的波长处有单一吸收峰。
3．取本品按装量加入内毒检查用水溶解后，吸取0.1ml加入0.1ml细菌内毒素工作标准品或标准品50EU，混匀后，于37℃水浴中放置1小时，有凝胶形成。
（三）检查干燥失重：取本品约0.1在g ，在66℃减压干燥至恒得，减失重量不得过5％（中国药典1990年版二部附录55页）。
自身凝集：取本品4支，按装量加入配带的鲎试剂溶剂，溶解后，分别从每支取0.1ml，再分别加入配带的鲎试剂溶剂0.1ml，混匀后，于37±1℃水浴中放置4小时，不得形成凝胶，若有2管以上形成凝胶，判为不合格；若仅有1管形成凝胶，照同样方法，另取8支重复检查，8支均不得形成凝胶。
缓冲能力：任意取5％、10％葡萄糖注射液，氯化钠注射液无菌注射用水或注射用水适量，加稀盐酸调节pH使供试品溶液pH值为2.90-3.00，取此溶液适量与等量鲎试剂溶解液混匀，重复测定，pH值应为6.00-8.00。
（四）灵敏度测定预测：1．取细菌内毒素工作标准品1支，按说明溶解燕稀稀释成1→8等比系列稀释液。
2．取同一批鲎试剂若干支，分别按标示量加入配带的试剂溶剂制成鲎试剂溶液。
取10×75mm试管若干支，分别加入0.1ml鲎试剂溶液，加入内毒素稀释液0.1 ml ，每一稀释液最少作2管，同时作2管阴性对照。
如何正确使用鲎试剂
如何正确使用鲎试剂内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。
所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。
保证所使用鲎试剂的质量鲎试剂的质量主要表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面：灵敏度稳定;自凝时间不低于24h;具有一定的缓冲能力与合适的pH;反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180°而不会被破坏。
而质量稍差的鲎试剂存放一定时间后(如半年)其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化。
因此，需选择具有国家颁发的批准文号,质量稳定的鲎试剂。
对鲎试剂灵敏度进行监测性复核由于不同厂家鲎试剂质量不尽相同，即便是相同厂家不同批号的鲎试剂也有差异,这便导致鲎试剂灵敏度复核值与标示值不尽一致，因此鲎试剂的复核值对检测结果有显著影响。
每使用新批号鲎试剂时应复核其灵敏度;对留样鲎试剂自生产之日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度在有效期内应符合规定。
有研究表明，鲎试剂的灵敏度在符合标准规定及适当的贮存条件下,3年内其灵敏度变化不大，是稳定的。
建议可适当延长其有效期。
因此，对鲎试剂灵敏度进行监测性复核有利于确保实验的准确性，同时可以最大程度地使用鲎试剂。
使用过程正确操作选择合适的操作方法与顺序，在鲎试剂的使用过程中尤为重要。
在操作过程中要注意以下几点：(1)实验室要求洁净、无尘埃流通;检验人员同时注意卫生的保持。
在整个使用操作过程中应防止微生物的污染，例如空气的流动，人员的口沫、汗液污染等。
(2)鲎试剂开启、溶解和配制时应尽量避免将安瓿外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入鲎试剂中，避免鲎试剂外损。
(3)鲎试剂中含有多种蛋白质，用力振摇会产生气泡，一旦起泡难以消除，而影响检测的准确性，所以在整个操作过程中都要轻力以避免因过分震动而引起的误差。
(4)量取和加样反应物时，一定要加到试管底部接近鲎试液而不接触鲎试液的管壁处。
凝胶法操作流程
鲎试剂复苏方法：1.轻轻敲打LAL的小瓶，使LAL全部落于瓶底。
用无热原吸头去处其封口，摒弃其塞子解除其真空环境。
注意不要污染瓶口，也不要在此使用瓶塞。
黏附于瓶塞上少量的LAL 不影响检测。
再次封口时用Parafilm“M”。
2.用无热源水复苏鲎试剂。
根据标签上的标注加2或5mL。
溶解需要几分钟时间。
在使用前要轻轻的摇动确保充分混匀。
如果摇动过于激烈会产生泡沫，而降低灵敏度。
标准品使用方法：a、用无热原吸头去除金属封盖并在无菌条件下拔掉瓶塞。
b、加入无热源水。
拔掉瓶塞，用移液管加入无热源水溶解内毒素。
用封口膜封口。
c、在室温下，以5-10分钟为间隔，每次摇动（使溶液形成旋涡）1分钟，持续30-60分钟。
d、内毒素工作标准品溶解后，2-8度保存，保存时间不能超过2周，并且不能冷冻。
e、在把内毒素工作标准品配成初始稀释液前至少摇动30秒（摇动后立刻配制）。
在每次稀释前都须摇动。
测试1.内毒素测试a.内毒素标准品：每天制备新鲜的标准内毒素稀释液。
在稀释时在最初的浓度上作双倍稀释，在括号中写下鲎试剂的灵敏度（λ）。
建议用2λ、λ、0.5λ、0.25λ的灵敏度来确定灵敏度。
尽可能使用与稀释液量相匹配的吸管。
b.阳性测试：某一环境下没有一个标准系列的浓度时使用阳性测试，阳性测试的浓度应该是2λ。
c.阳性产物测试是限定检测，它是向样品中或样品稀释液中加入内毒素标准品。
在检测过程中最后的浓度应该是2λ。
2.阴性测试无热源水的阴性测试应包含在每一批样品检测中。
为了确定无热源水抑制/促进检测，该样品通常用于稀释标准内毒素，也可用于阴性测试。
检测展示1.加0.1 mL复苏的凝胶法鲎试剂Pyrotell到每个含有0.1 mL测试样品或阳性/阴性控制的反应试管中。
加样时使用0.1 mL 或以上的移液管；或使用自动或重复加样器。
首先应先把凝胶法鲎试剂Pyrotell加到阴性控制管中，接着根据检测样品的浓度从低到高依次加入鲎试剂。
内毒素检测方法——凝胶法-JDGH
凝胶法原理鲎是一种海洋节肢动物，其血液中的有核变形细胞含有凝固酶原和可凝固蛋白。
将这些变形细胞冻融裂解后制成鲎变形细胞溶解物（limulus amebocyte lysate，LAL），此溶解物若与待检标本中的内毒素相遇，内毒素激活 LAL 的凝固酶原成为凝固酶，作用于可凝固蛋白，使其凝聚成凝胶状态，鲎试验是目前检测内毒素最敏感的方法之一，比家兔热原试验敏感 10～100 倍,可测出 0.01～1 ng／ml 的微量内毒素。
鲎试验在临床上用于革兰氏阴性菌感染引起的内毒素血症、革兰氏阴性细菌性脑膜炎的早期诊断，以及用于药剂、生物制品中的热原检査，是一种快速、简便和离度灵敏的方法。
鲎试验主要有三种方法：凝胶法、沉淀蛋白法和产色底物法。
后二种方法是从凝胶法改进而来，其灵敏度比凝胶法高 5～10 倍以上，可定量测定内毒素的含量，但操作较繁琐。
下面介绍常用的方法——凝胶法。
材料与仪器步骤1. 取鲎试剂一支，按说明加入规定量的无热原的无菌蒸馏水使之溶解。
2. 取内毒素标准品，用无热原的无菌蒸馏水溶解。
所用浓度按毎批溶解构的敏感性而定。
一般稀释至 20 Eu／ml（Eu 为内毒素单位）。
3. 取 5支小试管，分别编号，按下表加人各成分并进行操作。
4. 孵育结束，将试管从水浴中轻轻取出。
不要振动试管，以防凝胶破坏，产生假阴性。
缓缓倒转试管 180°，如凝成固体凝块，为阳性；呈半流动状为弱阳性；仅见混浊度增加，或有少量絮状钧，或无变化，则为阴性。
注意事项因极微量的内毒素即可导致 LAL 凝胶化，本试验所用试管、吸管等均须预先进行去热原处理。
玻璃等耐热物品可干热 180 ℃以上 2 h 或 250 ℃ 30min，以彻底破坏内毒素；不耐热物品可用双氧水浸泡。
常见问题鲎试验测定内毒素虽敏感，但试验中，下列因素可影响其敏感性：1. LAL 试剂的质量，每批试剂的敏感性可有不同，而这种差异与来源、制备方法等有关。
鲎试剂凝胶法流程及其步骤详细介绍,实验操作指南
鲎试剂凝胶法流程及其步骤详细介绍，实验操作指南The agarose gel electrophoresis method is commonly used for the separation and analysis of DNA fragments. Here is a step-by-step procedure for the agarose gel electrophoresis using a Haematoxylin reagent:1. Prepare the gel: Mix agarose powder with a buffer solution, such as TAE or TBE, and heat it until the agarose is completely dissolved. Pour the mixture into a gel tray and insert a comb to create wells for sample loading. Allow the gel to solidify.2. Prepare the samples: Mix the DNA samples with a loading dye, which helps in visualization and tracking during electrophoresis. Heat the samples briefly to denature the DNA strands.3. Load the samples: Carefully load the DNA samples into the wells of the gel using a micropipette, taking care not to introduce air bubbles.4. Run the gel: Place the gel tray into an electrophoresis chamber filled with buffer solution. Connect the electrodes to the power supply and run the gel at a constant voltage. The DNA fragmentswill migrate through the gel matrix based on their size, with smaller fragments moving faster.5. Stain the gel: After electrophoresis, remove the gel from the tray and immerse it in a Haematoxylin reagent solution. Gently agitate the gel for staining and allow it to sit for a few minutes.6. Destain the gel: Transfer the stained gel to a destaining solution, such as distilled water or a destaining buffer, and gently agitate it to remove excess stain. This step helps in visualizing the DNA bands.7. Visualization: Place the gel on a UV transilluminator and observe the DNA bands under UV light. Photograph or document the gel for further analysis and interpretation.中文回答：琼脂糖凝胶电泳方法是常用于DNA片段的分离和分析的技术。
细菌内毒素检查法
细菌内毒素检测法----凝胶法一、准备材料：试剂及耗材名称用量细菌标准品（10EU/ml）1支细菌内毒素检查用水(2ml) 3支鲎试剂（0.1ml）4支15ml离心管3个1.5ml EP管2个1000µl枪头6个200µl枪头5个二、相关定义：1.细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
2.细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
3.细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。
细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。
4.细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
三、内毒素标准品稀释：10EU/ml的标准品加1ml细菌检查用水溶解，在涡旋仪上振荡15min。
箭头上方表示内毒素，箭头下方表示检查用水。
10EU/mL→稀释至2EU/mL→稀释至1EU/mL四、样品内毒素检测操作步骤1、样品阳性管：加样品液0.5ml+2EU/ml内毒素0.5ml，涡旋仪上混匀30s。
做内毒素检测用。
（为了核实样品中是否有抑制鲎试剂凝聚的物质，防止样品管出现假阴性导致误判，以证明供试品溶液的结果准确）。
2、阳性对照：1EU/ml内毒素0.1ml。
3、阴性对照：细菌内毒素检查用水0.1ml。
4、样品管：样品液0.5ml+细菌内毒素检查用水0.5ml，涡旋仪上混匀30s，做内毒素检测用。
5、鲎试剂的准备：每支鲎试剂用0.1ml检查用水溶解。
6、以上准备完成后，从1、2、3、4管中分别取0.1ml加到溶解好的鲎试剂中，封口膜封口，37度孵育1h。
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凝胶法内毒素快速检测试剂盒 Pyrosate 操作流程
（仅供参考，使用时请参照试剂配套的使用说明）
试剂盒简介：
1974年成立的美国ACC 公司（Associates of Cape Cod, lnc.），是全球首家成立并通过FDA 关于内毒素检测LAL ————鲎试剂生产认证的企业，专业生产内毒素和β-葡聚糖检测产品。
现在ACC 已经成为拥有全球机构和经销网络的世界级组织。
领跑全球呢毒素检测领域。
Pyrosate Kit 作为目前世界上唯一的凝胶法内毒素快速检测试剂盒，是当今最先进最快速的凝胶法鲎试剂，在LAL 凝胶法检测中具有着其他方法无可替代的优点，它不需要专业培训或额外的实验仪器，只需按照说明书中的步骤操作，即可在短时间内（30）分钟得到准确结果，尤其适用于对水和无稀释渗透液的检测。
优势：
无需冷藏 无需稀释 有两个可用灵敏度。
（1.0EU/mL 和0.25EU/mL ） 符合阳性产物控制 检测时间短 对内毒素特异
Factor B Factor G
Clotting Enzyme
Factor C
Turbidimetric。