鲎试剂干扰试验检查记录
细菌内毒素测定技术—鲎试剂灵敏度复核和方法验证试验
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
二、鲎试剂灵敏度的复核 在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
当λc在0.5λ~2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于内毒素 检查。但是注意要以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
知识点：干扰试验
一、干扰试验 是为了确定供试品在多大的稀释倍数或 浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为产 品能否用细菌内毒素检查法提供依据，并且验证供试品 的配方和工艺有变化，鲎试剂来源改变或供试品阳性对 照结果呈阴性时，供试品是否存在干扰作用。
编号
内毒素浓度
被加入内毒素的溶液 平行管数
A
无
供试品溶液
至少2
标准曲线的中点（或附近点
B
）的浓度（设为λm）
C
至少3个浓度 （最低一点设定为λ）
供试品溶液 检查用水
至少2 每一浓度至少2
D
无
检查用水
至少2
A 为稀释倍数不超过MVD 的供试品溶液。B 为加入了标准曲线中点或 靠近中点的一个已知浓度内毒素的，且与溶液A 有相同稀释倍数的供 试品溶液。C 为如“标准曲线的可靠性试验”项下描述的，用于制备 标准曲线的标准内毒素溶液。D 为阴性对照。
浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml 表示。当使用新批号的 鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进 行鲎试剂灵敏度复核试验。
复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检 验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
鲎试剂灵敏度复核记录
结果是否有效
计算结果
结果判断
检验人员
BET水批号：12011305
规格：mL/支来源：福州新北化工业有限公司
内毒素标准品复溶时的体积为mL，稀释方法为：用刻度吸管准确吸取内毒素检查用水1mL制成细菌内毒素标准液0λ1.0λ0.5λ0.25λ
（）（）（）（）
NC
反应终点浓度
重1
复2
管3
鲎试剂灵敏度复核试验记录
一仪器设备
试管恒温仪
二鲎试剂检验日期：年月日
批号：
灵敏度：EU/mL
供养单位：
规格：mL/支（瓶）
生产单位：
有效期：年
检验目的：灵敏度考核
检验数量：支（瓶）
检验依据：中国药典年版
三标准品
NES批号：
效价：EU来源：
WSE批号：150601-201072
效价：EU来源：中国药品生物制品检定所
鲎试验实验报告
一、实验目的1. 了解鲎试验的原理和方法。
2. 掌握鲎试验在微生物检测中的应用。
3. 提高微生物学实验技能。
二、实验原理鲎试验是一种检测微生物内毒素的试验方法。
鲎血中含有一种特殊的凝固蛋白，当鲎血接触到细菌内毒素时，凝固蛋白会立即凝固，从而产生凝胶。
根据凝胶形成的时间，可以判断样品中内毒素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鲎试剂- 标准菌液- 待测样品- 生理盐水- 移液器- 培养皿- 灭菌棉签- 酒精灯- 镊子2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 移液器- 移液管- 培养皿- 镊子四、实验步骤1. 准备工作：- 将鲎试剂置于37℃恒温水浴箱中预热。
- 将待测样品和标准菌液分别用生理盐水进行稀释。
2. 制备样品：- 取适量鲎试剂加入培养皿中，加入适量的生理盐水，混匀。
- 分别加入标准菌液和待测样品，混匀。
3. 观察结果：- 将培养皿置于37℃恒温水浴箱中，观察凝胶形成的时间。
- 记录标准菌液和待测样品的凝胶形成时间。
4. 结果分析：- 根据凝胶形成的时间，判断样品中内毒素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准菌液凝胶形成时间为5分钟，说明标准菌液内毒素含量较高。
2. 待测样品凝胶形成时间为8分钟，说明待测样品内毒素含量较高。
3. 根据凝胶形成的时间，判断待测样品内毒素含量为中等。
六、实验讨论1. 鲎试验是一种简单、快速、灵敏的检测微生物内毒素的方法。
2. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染。
3. 实验结果与实际情况可能存在一定的误差，需结合其他实验方法进行综合判断。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了鲎试验的原理和方法，掌握了鲎试验在微生物检测中的应用，提高了微生物学实验技能。
在实验过程中，我们应注意操作规范，保证实验结果的准确性。
同时，我们应不断总结经验，提高实验技能，为微生物学领域的研究贡献力量。
内毒素鲎实验,如何消除样品干扰？
内毒素鲎实验，如何消除样品干扰？在鲎试剂检验内毒素试验中有些样品严重干扰鲎试验生化反应，甚至使反应不能进行。
这就需要采用特殊方法对样品进行预处理。
1 稀释法相当大一部分样品的干扰因素在一定浓度下才起作用，把样品适量稀释后即可按常规方法测定。
如甘露醇、庆大霉素、人血白蛋白、肝素钠和维生素 C 等注射液等。
2 加热法有些干扰因素为不耐热的物质，将样品在适当温度下保温一段时间，即可按常规方法测定。
如某些血液制品和生物药品等。
3 调整 pH 值法有些样品 PH 值偏高或偏低，且鲎试剂中 pH 缓冲剂不能将反应液调整至正常范围。
这时可用预先处理并已确认无菌无热原的盐酸或氢氧化钠液调整样品液 pH。
然后按常规方法测定，如氨基酸注射液。
4 超滤─反冲法一般中草药注射液成份复杂，干扰因素较多，难以用普通方法加以消除，即可用超滤法。
取样品适量，进行超滤，样品药液全部压滤通过滤膜，内毒素被阻滤在超滤膜片上，再取少量无热原水冲洗滤器、滤膜。
卸开滤器，将超滤膜反向放置滤器上，严密固定。
再用无热原水将内毒素从超滤膜上冲至一量瓶中，精密加水至刻度。
冲洗液按常规方法测定。
5 固体样品若固体样品为可溶性物质，用无热原水溶解，按上述方法进行干扰样品试验。
手术器械、一次性输液器等固体物品的内毒素测定，用适量无热原水按规定方法浸泡或冲洗即可。
内毒素的水溶性较大，器具内表面或外表面的内毒素经适当时间、适当温度浸泡或冲洗，即可溶入液体，按常规方法测定。
对于复杂样品还需将上述各法联合应用。
但不管单独用其一法，或二法、三法联用，在操作过程中均有可能出现抑制或增敏等干扰作用，使测定浓度高于或低于实际浓度，这时必须做回收率实验，并根据测得的回收率求算内毒素。
细菌内毒素干扰试验记录鲎试剂灵敏度复核记录
检验目的
鲎试剂灵敏度复核
室 温
检验依据
《中国药典》2010年版附录
试剂名称
生产单位
批号
灵敏度/效价
规格
鲎试剂
EU/ml
细菌内毒素标用水
标准品稀释：
10EU/ml1 EU/ml()0.0.5EU/ml ()0.25EU/ml( )
0.125 EU/ml()0.0625 EU/ml()
鲎试剂干扰试验记录室 温：
样品名称
样品批号
样品规格
样品包装
样品来源
检验依据
《中国药典》2010年版附录
内毒素限值
试剂名称
生产单位
批号
灵敏度/效价
规格
鲎试剂
EU/ml
细菌内毒素标准品
EU/ml
细菌内毒素检查用水
实验操作
1、标准品稀释：10 EU/ml1 EU/ml0.5 EU/ml
2、供试品的制备：
3、含供试品内毒素溶液的制备：10EU/ml1 EU/ml0.5 EU/ml
保温时间
内毒素浓度
EU/ml
2λ
（）
λ
（）
0.5λ
（）
0.25λ
（）
阴性对照
终点浓度
反应
结果
1
2
3
4
结果计算
标准规定
当λc在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
结果判断
□ 符合规定□ 不符合规定
检验者： 校对者：
日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日
反应结果 保温时间（～）
内毒素浓度
细菌内毒素检查的药品干扰试验检查
细菌内毒素检查的药品干扰试验检查1.目的：建立药品的干扰试验方法，判断检品对细菌内毒素检查是否有干扰，找出一个最大的不干扰浓度。
2.范围：没有使用内毒素检查法的药品,或鲎试剂来源、样品的来源和配方或生产工艺有变化时。
3.责任者：质检科检验员对实施本规程负责。
4.程序:4.1试验前准备工作:4.1.1实验设备及用具:4.1.1.1 10mm﹡75mm、13mm﹡100mm试管，试管架，不锈钢盒（或铝盒），有盖大瓷盘，2ml安瓿瓶，一次性0.6ml刻度滴管，5号针头，5ml刻度具塞试管，镊子，以上用具均需高温烘烤。
4.1.1.2 高温电热干燥箱，恒温水浴箱，旋涡混合器。
4.1.1.3 酒精灯，75%酒精棉，剪刀，砂轮片，医用胶布，标记纸，纱布，洗耳球等用具。
4.1.2 实验试剂与内毒素标准品：4.1.2.1 鲎试剂：规格0.6ml/支或0.5ml/支，标示灵敏度0.25Eu/ml或0.5Eu/ml，冻干品。
4.1.2.2 细菌内毒素检查用水，也用内毒素含量不超过0.03Eu/ml的注射用水。
4.1.2.3 细菌内毒素国家标准品和工作标准品4.1.3实验用具的消毒处理：凡是要与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除热原处理，将洗净的器具经蒸馏水冲洗后，在250℃干烤1小时。
4.1.4恒温水浴箱内水浴温度调节到37℃。
4.1.5干扰方法的操作步骤：4.1.5.1 用水稀释内毒素工作标准品：按照细菌内毒素检查法中4.1.5.1稀释标准内毒素的方法操作，得到一系列内毒素水溶液：E1.0，E0.5，E0.25，E0.125，我们称其为E系列。
4.1.5.2 用检品或检品的稀释液稀释内毒素。
4.1.5.2.1供试品的最大有效稀释倍数（MVD），按下式计算：MVD=CL/λ式中：L：供试品的细菌内毒素限值C：供试品溶液的浓度，其中当L以En/ml表示时，C为1.0ml/ml，当L以Eu/ml表示时，C为mg/ml。
鲎试剂灵敏度复核记录
鲎试剂灵敏度复核试验记录
一 仪器设备
试管恒温仪
二 鲎试剂 检验日期： 年 月 日
批号：
灵敏度： EU/mL
供养单位：
规格： mL/支（瓶）
生产单位：
有效期： 年
检验目的：灵敏度考核
检验数量： 支（瓶）
检验依据：中国药典 年版
三 标准品
NES批号：
效价： EU 来源：
WSE 批号：
NC
反应终点浓度
重 1
复 2
管 3
数 4结果是否有效计算结果结果判断检验人员
效价： EU 来源：中国药品生物制品检定所
BET水批号：
规格： mL/支 来源：福州新北化工业有限公司
内毒素标准品复溶时的体积为 mL，稀释方法为：用刻度吸管准确吸取内毒素检查用水1mL制成细菌内毒素标准液。
四 反应结果 （反应起止时间： ～ ） 室温： ℃
内毒素浓度
λ λ λ λ
（ ） （ ） （ ） （ ）
标准品、鲎试剂操作规程
标准品、鲎试剂操作规程目的：建立标准品、鲎试剂操作规程，指导检验员正确执行标准品、鲎试剂操作。
1.适用范围：适用于标准品、鲎试剂操作。
2.定义2.1标准品系以细菌内毒素国家标准品为基础标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
3.责任：QC人员。
4.规程4.1申购4.1.1标准品采购：按《对照品操作规程》中对照品申购程序，进行采购。
到药品检验所或中国生物制品检定所统一订购。
4.1.2鲎试剂采购：由管理员根据检验需要，填写申购单，注明：品名、规格、灵敏度、数量、购回日期。
交化验室主任核准后，交物料部采购。
4.2接收4.2.1物料部将鲎试剂与标准品购回后，管理员接通知，开具领料单。
4.2.2经化验室主任签字后，凭领料单到仓库领用。
4.2.3接收前，管理员仔细核对所领细菌内毒素工作标准品或鲎试剂的规格、数量、有效期和灵敏度，检查外包装、标签有无损坏或泄漏。
无误后，方可接收。
4.3贮存4.3.1接收的标准品与鲎试剂根据其特性存放在适宜的条件下，且根据批号、灵敏度分类摆放。
4.3.2管理员及时登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》。
4.4发放、使用4.4.1检验员根据检品需要，向管理员申请试验用量的标准品、鲎试剂。
4.4.2管理员在核实申请情况后，方可发放。
4.4.3领用后，检验员登记《标准品、鲎试剂接收、使用记录》，管理员签名确认。
4.4.4每批入库的鲎试剂必须按药典规定，进行灵敏度复核试验，符合规定后方可发放、使用。
4.4.5鲎试剂灵敏度复核4.4.5.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每步混匀30秒。
4.4.5.2取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个浓度平行做4管；另两管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。
鲎试剂灵敏度复核记录
NO.
鲎试剂/B司
鲎试剂批号
鲎试剂标示灵敏度
BET水批号
工作标准品效价
工作标准品批号
测试依据
《中国药典》2010版（二部）
细菌内毒素工作标准品稀释方法及步骤如下：
λ（鲎试剂标示灵敏度）=
组别
组序
2λ
λ
0．5λ
0．25λ
阴性对照
①
②
③
——
④
——
结果计算：
鲎试剂灵敏度测定值λC=antilg(ΣX/4)
式中： X为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
测试结果：λC=
结论：□符合□不符合《中国药典》2010版（二部）规定。
备注：“√”表“适用此项”。
测试人
复核人
日期
日期
肝素钠注射液对鲎试验干扰作用的定量分析
Ouantitative Analysis of Interference on the Limulus Test from heparin sodium
HU Guan-Shi!，WEI Ji-Lu，GONG Li-oing"，ZHAO Hai-Shan" （!Department of Pharmaceutical Sciences，PLA Jinan Military General Hospital，Jinan 250031，Shandong China） （"Tianjin University Radio Factory，Tianjin 300072 China）
! 作者简介：胡冠时（1944 - ），男，江苏无锡人，教授，主任药师。研究方向：药剂学。Tel：（0531）5909098；E - mail：huy@ yao85 . com
· 106 · 解放军药学学报 2004 年 4 月 第 20 卷 第 2 期
Pharm Chin PLA Vol 20 No 2 Apr 2004
解放军药学学报 第 20 卷 第 2 期 肝素钠注射液对鲎试验干扰作用的定量分析
鲎实验实验报告
一、实验目的1. 了解鲎实验的基本原理和方法；2. 掌握鲎实验的操作步骤；3. 学会观察和分析实验结果；4. 培养实验操作技能和实验报告撰写能力。
二、实验原理鲎实验是一种检测细菌内毒素的方法。
鲎是一种生活在海洋中的生物，其血液中含有一种特殊的凝固蛋白，当与细菌内毒素接触时，会迅速凝固。
通过观察鲎血液凝固的时间，可以判断细菌内毒素的存在和含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鲎血液、细菌内毒素标准品、生理盐水、注射器、试管等；2. 实验仪器：恒温箱、显微镜、计时器等。
四、实验步骤1. 准备工作：将鲎血液和细菌内毒素标准品分别放入无菌试管中，加入适量生理盐水稀释；2. 设置实验组：将稀释后的鲎血液和细菌内毒素标准品分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；3. 设置对照组：将稀释后的鲎血液和生理盐水分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；4. 加入细菌内毒素：在实验组和对照组的试管中分别加入适量的细菌内毒素；5. 混匀：用无菌棉签轻轻搅拌试管中的混合液，使细菌内毒素充分溶解；6. 观察和记录：将实验组和对照组的试管放入恒温箱中，观察鲎血液凝固的时间，并记录实验结果；7. 结果分析：根据实验结果，判断细菌内毒素的存在和含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：实验组中，鲎血液在加入细菌内毒素后迅速凝固，对照组中，鲎血液在加入生理盐水后无明显变化；2. 结果分析：实验结果表明，细菌内毒素能引起鲎血液凝固，从而判断细菌内毒素的存在。
根据实验结果，可以推算出细菌内毒素的含量。
六、实验总结1. 鲎实验是一种检测细菌内毒素的有效方法，具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点；2. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染；3. 通过本次实验，掌握了鲎实验的操作步骤，提高了实验操作技能和实验报告撰写能力。
七、注意事项1. 实验过程中，应严格遵守无菌操作原则，避免污染；2. 实验操作时应保持冷静，避免慌乱；3. 实验结果分析时，应结合理论知识，准确判断细菌内毒素的存在和含量；4. 实验报告撰写时，应清晰、简洁、有条理地表达实验过程和结果。
鲎试剂灵敏度复核试验资料
文件编号：版本：鲎试剂灵敏度复核试验作业指导书修订历史记录[至多存五版的历史修订记录]1.0 目的对细菌内毒素检查试验所用的鲎试剂的灵敏度进行复核。
2.0 职责质量与法规部负责本规程的起草，QC及相关人员执行本规程。
3.0 范围适用于本公司细菌内毒素检查法。
4.0 参考文件2010年版《中国药典》二部附录ⅪE细菌内毒素检查法2010年版《中国药品检验标准操作规范》细菌内毒素检查法《细菌内毒素检查法及其应用》第一版，气象出版社5.0 定义鲎试剂灵敏度复核试验：在细菌内毒素检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度（λ），用EU/ml表示。
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
反应终点浓度：指鲎试剂灵敏度复核试验中，系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。
6.0 设备/工具及物料6.1 设备/工具6.2 物料6.2.1 细菌内毒素工作标准品除另有规定外，使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。
6.2.2 细菌内毒素检查用水指内毒素含量小于0.015EU/ml（凝胶法）且对内毒素试验无干扰的灭菌注射用水。
6.2.3 鲎试剂规格一般选用0.25 EU/ml。
7.0 操作步骤7.1 提前30 min开启超净工作台，试验操作过程中不要开启风机，完毕后用75%乙醇擦拭超净工作台。
试验操作过程应防止微生物和细菌内毒素污染。
7.2 制备细菌内毒素标准溶液7.2.1 取细菌内毒素工作标准品1支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈上部划痕，用75%乙醇擦拭后启开，避免玻璃屑落入瓶内。
7.2.2 按照工作标准品说明书，加入细菌内毒素检查用水溶解。
封口膜封口，置漩涡混合器上混匀15 min后用细菌内毒素检查用水进行稀释，制成2.0 λ、1.0 λ、0.5 λ、0.25 λ四个浓度的内毒素标准溶液。
每稀释一步均应在漩涡混合器上混匀30 s。
QC-003 鲎试剂干扰试验记录
河南省华隆生物技术有限公司质控中心鲎试剂干扰实验记录实验依据：_《细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作规程》（G-SOP-QD-QC-002）供试品：名称编号送检部门细菌内毒素工作标准品：批号规格生产单位待检鲎试剂：批号灵敏度规格生产单位细菌内毒素检查用水：批号规格生产单位一、内毒素标准品稀释：（1）取 ml检查用水溶解标准品在漩涡混合器上混匀 min，为 E0（EU/ml）；（2）取E0 ml+ ml检查用水在漩涡混合器上混匀30s，为E1 （EU/ml）；（3）取E1 ml+ ml检查用水在漩涡混合器上混匀30s，为E2 （EU/ml）；（4）取E2 ml+ ml检查用水在漩涡混合器上混匀30s，为E3 （EU/ml）；（5）取E3 ml+ ml检查用水在漩涡混合器上混匀30s，为E4 （EU/ml）；其中，E1～E4为2λ～0.25λ内毒素标准浓度二、供试品阳性液稀释：（1）取 ml供试品稀释液溶解内毒素标准品，并在混悬仪上混匀 min，得到溶液为 E0*（EU/ml）；（2）取E0* ml+ ml供试品稀释液在漩涡混合器上混匀30s，为E1*（EU/ml）；（3）取E1* ml+ ml供试品稀释液在漩涡混合器上混匀30s，为E2*（EU/ml）；（4）取E2* ml+ ml供试品稀释液在漩涡混合器上混匀30s，为E3*（EU/ml）；（5）取E3* ml+ ml供试品稀释液在漩涡混合器上混匀30s，为E4*（EU/ml）；其中，E1*～E4*为供试品阳性标准浓度。
1 / 3溶液A：准备进行检查并且未检出内毒素的供试品溶液溶液B：干扰实验系列溶液C：鲎试剂标示灵敏度的对照系列溶液D：检查用水做的阴性对照放入℃水浴箱/生化培养箱中，保温 min，取出倒转180°观察结果。
三、结果：2 / 3四、计算：Es=Lg-1（∑Xs/4）=Et=Lg-1（∑Xt/4）=Xs为C溶液的反应终点浓度的对数值；Xt为B溶液的反应终点浓度的对数值；Es为C溶液的反应终点浓度的几何平均值；Et为B溶液的反应终点浓度的几何平均值；五、结论：备注：实验人员：实验日期：核对人员：核对日期：3 / 3。
鲎试剂干扰试验检查记录
鲎试剂干扰试验检查记录
1.0 干扰试验预试验
将内毒素检查阴性的供试品进行一系列倍数的稀释，但最大稀释倍数不得超过MVD= C*L/λ0.03(0.03EU/ml为现今我国市售鲎试剂的最高灵敏度)。
使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验。
每一稀释倍数下做2支供试品管和2支供试品阳性对照管（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度）。
另取2支加入细菌内毒素检查用水作为阴性对照，2支加入2λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。
2.0 干扰试验
检验人：检验日期：复核人：复核日期：。
细菌内毒素检查法干扰试验
Es不在0.5λ—2.0λ范围内，试验无效。
7.4 结 论 依据中国药典2010版附录“细菌内毒素检查
法”，西咪替丁氯化钠注射液细菌内毒素检查干 扰试验2倍和4倍稀释液符合试验要求，对鲎试验 没有干扰。
7.5、检测浓度的选择 如样品有干扰作用，选择符合干扰试验要求的
第二个浓度作为日常检查的浓度。
20192019年年1010月月1818日日博康wwwzjwwwzjhycomhycom2929样品内毒素05euml06ml06ml06ml06ml03ml样品03ml06ml06ml0125euml006euml003euml025euml20192019年年1010月月1818日日博康wwwzjwwwzjhycomhycom3030干扰试验加样wse对照名称05025nc20192019年年1010月月1818日日博康wwwzjwwwzjhycomhycom3131干扰试验判断的标准当es在0520包括05和20时且当et在05es20es20192019年年1010月月1818日日博康wwwzjwwwzjhycomhycom323271如所用鲎试剂灵敏度为025euml供试品为xx注射液稀释4倍wse对照名称050250125006nc结果0125es在0520且et在05es20es包括05es和20es认为供试品在该浓度下无干扰作20192019年年1010月月1818日日博康wwwzjwwwzjhycomhycom333372如所用鲎试剂灵敏度为025euml供试品为xx注射液稀释4倍wse对照名称050250125006nc结果042虽然es在0520范围内et不在05es20es范围内供试品在该浓度下有干扰作用需进行适当处理后重做试验
然后用样品西咪替丁氯化钠注射液 的4倍稀释液稀 释该混合液，稀释倍数依次为2、4和8倍，将这三支 管混合均匀连同该混合液即可得到含内毒素分别为 0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml和0.03EU/ml， 含样品西咪替丁氯化钠注射液 浓度为4倍稀释液的 标准内毒素对照溶液（干扰试验系列）。
鲎试剂灵敏度复核记录
文件名称File Name Record of Review for LimulusReagent SensitivityFile NumberREC-SOP-C003059-01-02生效日期Effective Date 2018-10-18有效期至Expiry Date2021-10-17审批及颁发/APPROV AL & ISSUANCE部门签名日期起草质量控制部审核质量控制部质量保证部批准质量负责人颁发质量保证部会审/COLLECTIVE REVIEW部门签名日期部门签名日期/ / /分发/DISTRIBUTIONCopy-1 Copy-2/质量保证部质量控制部/文件名称File Name Record of Review for LimulusReagent SensitivityFile NumberREC-SOP-C003059-01-02生效日期Effective Date 2018-10-18有效期至Expiry Date2021-10-17变更历史/CHANGES版本号修改简述提出人生效日期01 由原文件RE-C003060《鲎试剂灵敏度复核记录》变更而来；文件编码改变。
魏永红2017-06-0102 增加所使用仪器及试剂的信息汪华2018-10-18 附：记录样张REC-SOP-C003059-01-02鲎试剂灵敏度复核记录Record of Review for Limulus Reagent Sensitivity 起草人/日期审核人/日期批准人/日期执行日期2018-10-18 制订依据SOP-C003059 《细菌内毒素检查法标准操作规程》1 试剂鲎试剂批号：；规格： ml×支；生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司；细菌内毒素检查用水批号：；规格： ml×支；内毒素含量： EU/ml；生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司；细菌内毒素标准品批号：；规格：支/盒；效价：______EU/支；生产厂家：□中国药品生物制品检定所；□；2 仪器试管恒温仪型号：TAL-40D 编号：□QC-187 □QC-216 □QC-2173 操作根据鲎试剂灵敏度标示值（λ）将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混匀15分钟，然后制成2.0λ、1.0λ、0.5λ、和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液。
内毒素——精选推荐
细菌内毒素检查法1 目的该SOP用来判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。
2适用范围该SOP适用于《中国兽药典》要求检查该项的药品和适合《中国兽药典》要求的其它品种的药品的细菌内毒素检查。
3职责进行该项检验的检验员应该按该SOP进行检验，检测室主任负责监督该SOP的正确执行。
4检验4.1 技术依据及原理本法系用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应即内毒素在二价阳离子的参与下，作用于鲎血凝集酶系统而发生的一系列酶联反应，最后形成凝胶，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
4.1.1 鲎试剂灵敏度复核试验项的目的不仅是考查鲎试剂和细菌内毒素工作标准品的效价是否准确，也是考查检验人员操作方法是否正确和实验条件是否符合规定。
因此要求每个实验室在将一批新的鲎试剂用于干扰试验或供试品细菌内毒素检查前应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
4.1.2 供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和工艺有变化，鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
4.1.3检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则试验结果无效。
4.2注意事项4.2.1实验前，须用肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒4.2.2实验时，须戴工作帽和口罩。
尤其在配制洗液和洗涤玻璃器皿时一定要戴手套、工作帽和口罩。
4.2.3试验应在洁净室或洁净工作台内进行。
4.2.4用移液管或刻度吸管等吸取样品时，须使用洗耳球，勿用嘴吸、吹，防止唾液溅入。
也可使用加样器等其它方法。
4.2.5 注意所用鲎试剂的批号、有效期、规格、灵敏度等。
4.2.6进行干扰实验时，标准对照和供试品阳性对照（含供试品的内毒素溶液）应同时进行。
4.2.7在进行灵敏度复核、干扰试验和供试品内毒素检查时，各个实验所要求的对照应同时进行，并在有效的条件下才能进行计算和判断。
4.3材料、仪器、试剂的准备及基本要求4.3.1天平供试品称量用，感量为0.1mg以下。
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鲎试剂干扰试验检查记录
1.0 干扰试验预试验
将内毒素检查阴性的供试品进行一系列倍数的稀释，但最大稀释倍数不得超过MVD= C*L/λ0.03(0.03EU/ml为现今我国市售鲎试剂的最高灵敏度)。
使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验。
每一稀释倍数下做2支供试品管和2支供试品阳性对照管（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度）。
另取2支加入细菌内毒素检查用水作为阴性对照，2支加入2λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。
2.0 干扰试验
检验人：检验日期：复核人：复核日期：。