抗人白细胞介素31多克隆抗体的制备及活性鉴定

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白细胞介素的发展史

白细胞介素的发展史白细胞介素（Interleukin，简称IL）是一类细胞因子，起着调节免疫反应、细胞信号传导等多种重要功能。

它们在人体内发挥着至关重要的作用，对于维持免疫系统的平衡和健康具有重要意义。

本文将为您介绍白细胞介素的发展史，从最早的发现到如今的应用。

一、IL-1的发现与研究20世纪70年代，研究人员首次发现了白细胞介素，其中最早被命名的是IL-1。

IL-1系列的细胞因子具有调节细胞信号传导和促进细胞增殖的功能。

此后，研究人员发现IL-1还能够诱导发热、促进炎症反应等。

这项研究为后续的白细胞介素研究奠定了基础。

二、白细胞介素的分类与命名随着研究的深入，科学家们陆续发现了许多新的白细胞介素。

根据它们的功能和结构差异，白细胞介素被分为不同的类型，并进行了编号。

例如，IL-2被鉴定为一种可以刺激T细胞增殖的介素，而IL-4则被认为具有调节免疫应答的功能。

三、白细胞介素在疾病治疗中的应用白细胞介素在医学领域的应用也逐渐展开。

IL-2被应用于癌症治疗中，通过增强机体免疫功能来抑制癌细胞的生长。

此外，IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)被用来治疗关节炎等炎症性疾病，其可以抑制IL-1的活性从而减轻炎症反应。

四、白细胞介素的研究进展和前景展望随着科技的不断进步，对白细胞介素的研究也日益深入。

最新的研究表明，白细胞介素与肿瘤免疫治疗、抗病毒治疗等领域密切相关。

科学家们正在探索新的白细胞介素类型，并研发相应的治疗策略。

这些研究有望为临床治疗提供更加精准和有效的手段。

总结起来，白细胞介素的发展史见证了人们对免疫系统的不断探索和理解。

白细胞介素的研究不仅丰富了我们对免疫反应的认识，而且为治疗疾病提供了重要的理论基础和临床方法。

随着科学技术的不断进步，相信白细胞介素的应用将为人类健康事业带来更多的突破和创新。

TBa多克隆抗体的制备及其重组蛋白免疫活性的鉴定

Abstract: Objective:TBa is the major allergen in the tartary buckwheat. In order to research the relationship between the structure and the func tion of TBa and to identify the special immunocompetence of recombinant protein. Methods: The natural TBa was extracted and purified from the
TBa 多克隆抗体的制备及其重组蛋白免疫活性的鉴定
王岚 , 景巍 , 王转花
*
( 山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室 , 山西太原 030006) 摘要 : 目的 : TBa( tartary buckwheat allergen) 是苦荞麦中的主要过敏原。为了研究 TBa 的结构与功能关系并鉴定其重组蛋白的特异性免疫活性。方法 : 采用之前从种子中分离纯化的天然 TBa 作为抗原免疫小鼠 , 制备抗血清 , 建立了类似竞争酶联免疫吸附检测 TBa 的分析方法。结果 : 对重组 TBa 的免疫活性鉴定表明 , 采用该方法制备的多克隆抗体能满足重组 T Ba 的免疫活性鉴定 , 这为下一步研究其免疫学功能奠定了基础。关键词 :T Ba; 过敏原 ; 多克隆抗体 ; 类似竞争酶联免疫吸附反应
参考文献 : [ 1] Colditz, G A, Brewer T F, Berkley C S, et al . Eff icacy of BCG vaccine in the prevention of tuberculosis. Met a analysis of the published lit erature[ J] . JA MA, 1994, 271( 9) : 698- 702. [ 2] Anonymous. Global tuberculosis control [ C ] . World Health Organizat ion Report, 2001, WHO CDS TB 2001. 287. [ 3] Huygen K . On t he use of DNA vaccines for the prophylaxis of mycobacterial diseases[ J] . Infect Immun, 2003, 71( 4) : 1613- 1621. [ 4] Food and Drug Administration. Points to consider on plasmid DNA vaccines preventive inf ectious disease indications [ Z] . Published December 22, 1996, Docket no. 96N- 0400. [ 5] 朱中元 , 王海波 , 谢勇 , 等 . 结核分支杆菌 inhA 基因突变的测序研究 [ J] . 中华结核和呼吸杂志 , 2001, 24( 1) : 48- 51. [ 6] 萨姆布鲁克 J, 拉塞尔 D W. 分子克隆实验指南 [ M ] . 黄培堂 , 等 . 译 . 3 版. 北京 : 科学出版社 , 2002: 23- 59. [ 7] Silva C L and Lowrie D B. A single mycobact erial prot ein ( hsp65) ex pressed by a transgenic antigen- present ing cell vaccinat es mice against tuber culosis[ J] . Immunol, 1994, 82( 2) : 244- 248. [ 8] Col er R N, Skeiky Y A, V edvick T, et al. Molecular cloning and immuno logical react ivit y of a novel low molecular mass ant igen of Mycobacterium tuber cul osis [ J] . J Immunol, 1998, 161( 5) : 2356- 2364.

多克隆抗体的制备

改变抗体类型，使产生抗体由IgM型转变为IgG型；
引起或增强迟发性超敏反应。
2021/6/16
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佐剂的作用机制
佐剂的作用机制归纳起来主要有如下几种：
可增强抗原的表面积和改变抗原活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性。
佐剂与抗原混合一起注入机体，可改变抗原的物理性状，形成抗原储存库，延长抗原在局部组织的滞留时间，有利于抗原的缓慢释放。
该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
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特异性鉴定：抗体特异性鉴定常用双向免疫扩散法、免疫电泳法。
纯度鉴定：抗体纯度的鉴定可采用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、双向扩散试验、免疫电泳等方法。 IgG含有重链和轻链，纯IgG的SDS-PAGE结果应有两条蛋白电泳带（分子量约53kD和22kD），若出现多条电泳带则表明制备的抗体混有杂蛋白，需进一步纯化。
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动物采血
采集免疫血清前，要预先测试抗体效价测定，若效价达到要求，应在末次免疫后一周及时采血，否则抗体效价会下降。
颈动脉采血法心脏采血法静脉采血法
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免疫血清的鉴定
表达量的测定：颗粒性抗原可采用凝集试验，可溶性抗原常用双向免疫扩散试验、ELISA等方法。
选择性沉淀：
选择某抗原理化特性，采用相应沉淀剂或溶液环境，如：
核酸去除
盐析沉淀法有机溶剂沉淀法高分子聚合物沉淀法
50%饱和硫酸铵盐溶液可沉淀析出血清球蛋白； 8%～12%PEG6000可沉淀IgG。
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超滤法：利用孔径大小不同的特制薄膜对不同分子大小的抗原物质进行滤筛。

人白细胞介素-31的真核表达及其对HaCaT细胞IL-6和TNFα表达的影响

人白细胞介素-31的真核表达及其对HaCaT细胞IL-6和TNFα表达的影响黄海良;罗欣;顾芳;张胜权【摘要】Purpose To clone the encoding sequence of human IL-31 gene, to construct recombinant eukaryotic expression plasmid vector and to study its effects on the expression of IL-6 and TNFα in HaCaT. Methods Full-length hIL-31 cDNA was amplified by RT-PCR and cloned into the pSecTag2/Hy-groB plasmid vector. Western-blot analyzes the expression of hIL-31 in HaCaT. RT-PCR analyzes the effects of hIL-31 on the expression level of IL-6 and TNFa- Results The recombinant plasmid was cut with restriction endonuclease HindⅢ and Xho I . By the confirmation by sequencing and nucleotide ho-mology analyzed to CenBank, we obtained the hIL-31 cDNA and the recombinant plasmid pSecTag2/Hy-groB-Ⅱ-31 successfully. And the exogenous hIL-31 can promote the expression of IL-6 and TNFa. Conclusion HIL-31 can promote the expression of inflammation factors by the way of autocrining in HaCaT.%目的构建人白细胞介素-31( hIL-31)基因真核表达载体并将其转染到HaCaT细胞,观察其对HaCaT细胞炎症因子分泌的影响.方法分离人外周血单核细胞,加入终浓度为20 nmoUL的豆蔻佛波醇乙酯(PMA),继续培养24 h收集细胞.RT-PCR克隆hIL-31 cDNA,并将其克隆到真核表达载体pSecTag2/Hygro B上.将构建成功的重组体转染至HaCaT细胞,用Western blot分析hIL-31在细胞中的表达以及RT-PCR方法分析其对IL-6、TNFα表达的影响.结果经双醇切、测序及Blast分析鉴定,我们成功获得hIL-31基因cDNA全长序列和pSecTag2/HygroB-IL-31重组体.转染至HaCaT细胞的外源性hIL-31可以促进IL-6、TNFα的表达.结论 hIL-31可以通过自分泌的方式促进HaCaT细胞炎性相关细胞因子的表达.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2011(032)005【总页数】4页(P345-348)【关键词】人白介素-31;真核表达;皮肤角质形成细胞【作者】黄海良;罗欣;顾芳;张胜权【作者单位】安徽医科大学,生物化学与分子生物学教研室,安徽,合肥,230032;安徽医科大学,生物化学与分子生物学教研室,安徽,合肥,230032;安徽医科大学,生物化学与分子生物学教研室,安徽,合肥,230032;安徽医科大学,生物化学与分子生物学教研室,安徽,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】Q78人白细胞介素-31(human interleukin-31，hIL-31)是新发现的gp130/il-6细胞因子家族成员，其主要由激活的CD4+T淋巴细胞产生。

抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用

河北医科大学硕士学位论文抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用姓名：***申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：***2003.3.1抗人白细胞介素１５单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用摘要目的：白细胞介素１５（ＩＬ．１５）是与白细胞介素２（ＩＬ．２）有相似生物学活性，但无序列同源性的新细胞因子，其体内分布远较ＩＬ．２广泛，在免疫调节和免疫应答尤其是在抗肿瘤免疫应答中有重要作用。

对ＩＬ—１５的鉴定和研究均需有抗ＩＬ．１５的抗体。

本研究的目的是用细胞工程的方法制备鼠抗人ＩＬ．１５单克隆抗体（简称单抗），鉴定其生物学和免疫学特性及理化特性，并初步探讨其应用。

方法：自ｒｈＩＬ．１５基因工程菌提取融合蛋白ＧＳＴ－ＩＬ．１５，１２％ＳＤＳ．ＰＡＧＥ电泳鉴定，依据牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的浓度目测选择蛋白量为５０ｕｇ的凝胶条带切下制备免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｅ小鼠５次，第一次与第二次免疫间隔４周，其后每次免疫间隔２周，融合前三天以ｒｈＩＬ．１５包涵体蛋白（ｒｈｌＬ．１５ＩＢＰ）攻击。

取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞株Ｓｐ２／０，用５０％聚乙二醇（ＰＥＧ）融合，ＨＡＴ培养基选择培养出融合细胞。

用ｒｈｌＬ。

１５ＩＢＰ为抗原，间接ＥＬＩＳＡ法，初筛分泌抗ｒｈＩＬ．１５ＩＢＰ抗体的融合细胞，有限稀释法克隆化培养获得稳定分泌抗ｒｈｌＬ．１５ＩＢＰ单抗的阳性杂交瘤细胞株，最后以国际市售有生物学活性的ｒｈｌＬ．１５蛋白为抗原，间接ＥＬＩＳＡ法，鉴定阳性细胞株分泌的单抗对功能性ｒｈＩＬ．１５蛋白的有效性。

以体外连续传３０代、反复冻存复苏５次、液氮中冻存３个月后复苏，测定细胞株分泌单抗的稳定性。

做杂交瘤细胞的染色体计数并与骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０和小鼠骨髓细胞的染色体计数进行比较。

制备腹水型、上清型和无血清型单抗。

用无血清型单抗作间接ＥＬＩＳＡ测定单抗的Ｉｇ类别。

用腹水型单抗做耐热性、耐冻融性实验及ｐＨ值对单抗稳定性影响实验。

耐热性实验分为５６℃３０分钟，３７℃保存１．７天和４。

白细胞介素-31多克隆或单克隆抗体的制备方法及应用[发明专利]

专利名称：白细胞介素-31多克隆或单克隆抗体的制备方法及应用
专利类型：发明专利
发明人：黄俊琼,孙万邦,魏培,郑静,曹雪梅,董革辉
申请号：CN201410686491.X
申请日：20141126
公开号：CN104447991A
公开日：
20150325
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种白细胞介素-31多克隆或单克隆抗体的制备方法及应用，白细胞介素－31是近年发现的具有4个螺旋结构的多肽链，为Th2型细胞因子，具有调节细胞增殖分化、促进造血、参与炎症反应等多种生物学功能，是一种重要的炎症因子，在炎症反应和过敏性疾病中发挥重要的作用。

白细胞介素-31多克隆抗体或单克隆抗体的制备方法分为以下几个步骤：大肠杆菌 E.coli. BL21的培养及rhIL-31的诱导表达；免疫原制备；免疫原注射试验动物；提取抗体；IL-31多克隆或单克隆抗体特异性鉴定。

IL-31多克隆或单克隆抗体的应用包括：ELISA检测方法及试剂和抗体外用治疗及皮肤保健应用。

申请人：遵义医学院附属医院
地址：563003 贵州省遵义市大连路149号
国籍：CN
代理机构：重庆博凯知识产权代理有限公司
代理人：李雪梅
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抗白细胞介素-33抗体及其制备方法和应用[发明专利]

专利名称：抗白细胞介素-33抗体及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：张成海,郭锦林,党尉,吴易潘,袁玉菁,邹秋玲,李致科,王洋,李武平,朱玲巧
申请号：CN201910868100.9
申请日：20190912
公开号：CN112480252A
公开日：
20210312
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供结合IL‑33的抗体、其抗原结合片段及用途和相关方法。

具体而言，本发明提供一种特异性结合人IL‑33抗体及其抗原结合片段，编码所述抗体或片段的核酸分子，包含核酸分子的载体和宿主细胞，制备所述抗体或片段的方法，包含所述抗体或片段的药物组合物，以及抗体或片段治疗与变态反应性疾病有关的病症(包括治疗特应性皮炎)的方法或相关制药用途。

申请人：上海麦济生物技术有限公司
地址：201203 上海市浦东新区哈雷路1011号304室
国籍：CN
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抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定

抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：吴春风, 马忠森, 王秀丽, 杨俊玲, 杨洋, 张越, 图们乌力吉, 乔俊华【摘要】目的: 制备抗人DcR3单克隆抗体（mAb）, 并鉴定其特异性。

方法: 纯化的His DcR3融合蛋白免疫小鼠, 应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化, 纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价。

结果: 获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞, 均属IgG1亚型, 其腹水抗体效价为1×10-5～1×10-7, Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白, 其中1株（1B1）可与SW480细胞成分反应。

结论: 成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的抗体特异性强、效价高, 为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础。

【关键词】DcR3 单克隆抗体制备[Abstract] AIM: To prepare monoclonal antibodies(mAbs) against human DcR3 and identify their characterization. METHODS:BALB/c mice were immunized with purified His DcR3 protein, and mAbs against DcR3 which prepared by hybridoma technique were purified and identified by their specificity, subtype, titers via ELISA and Western blot. RESULTS: Five hybridoma cell lines secreting mAbs against human DcR3 were obtained, which were determined as IgG1 subtype and ascites titers of five mAbs against DcR3 reached 1×10-5-1×10-7. Five mAbs were proved to recognize His DcR3 protein specifically, one of which (1B1) could recognize SW480 cell. CONCLUSION: mAbs against DcR3 with high titers and specificity have been prepared and purified successfully, which laid a foundation for the study of DcR3 expression, distribution in tissu and development of ELISA kit.[Keywords]DcR3; monoclonal antibody; preparation诱骗受体3(decoy receptor 3, DcR3, 又称TR6)为近年新发现的一种可溶性肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员, 可竞争性结合肿瘤坏死因子(TNF)成员LIGHT、FasL及TL1A[1, 2], 但并不介导细胞凋亡, 在细胞的生长、分化、死亡以及免疫调节等方面发挥重要作用, 与肿瘤、自身免疫疾病、移植排斥等密切相关。

重组PV-杀白细胞素LukF-PV蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

重组PV-杀白细胞素LukF-PV蛋白多克隆抗体的制备及鉴定戴媛媛;马筱玲;常文娇;高玉录【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2010(2)4【摘要】目的制备重组金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素LukF-PV蛋白多克隆抗体并鉴定.方法纯化获得重组蛋白LukF-PV,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA法测定抗体滴度,Western blotting法鉴定免疫活性.结果成功免疫新西兰白兔获得多抗血清,ELISA测定其效价为1∶103,Western blotting鉴定其能识别重组蛋白和金葡菌PVL蛋白.结论成功制备出重组金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素LukF-PV 蛋白多克隆抗体,并进行鉴定,为建立产杀白细胞素的金黄色葡萄球菌的快速、廉价的免疫学检测方法奠定基础.【总页数】3页(P325-327)【作者】戴媛媛;马筱玲;常文娇;高玉录【作者单位】230001,合肥,安徽省立医院检验科;230001,合肥,安徽省立医院检验科;230001,合肥,安徽省立医院检验科;230001,合肥,安徽省立医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R392.11;R378.1+1【相关文献】1.EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定 [J], 毛珊珊;王路得;周萌;吕开绩;朱进顺;Kamara Saidu;叶晓鲜;张丽芳2.抗人白细胞介素31多克隆抗体的制备及活性鉴定 [J], 黄俊琼;胡永林;杜文胜3.重组绿脓杆菌外膜蛋白OprF的表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定 [J], 陈春琳;刘祥;俱雄4.EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定 [J], 毛珊珊;王路得;周萌;吕开绩;朱进顺;Kamara Saidu;叶晓鲜;张丽芳;5.重组人白细胞介素15蛋白的制备和鉴定方法研究 [J], 郑燕平;黄晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

bioying-多克隆抗体制备和检测技术pdf-多克隆抗体技术

多克隆抗体技术（Polyclone antibodies preparation technique）一、概述（一）多克隆抗体的概念抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。

由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE 和IgD 等五类抗体。

（二）免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。

动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。

如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。

免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。

由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。

抗原是多种多样的，而且千差万别。

就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。

就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。

为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA 文库或免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。

不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。

用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体

第１７卷第１５期中国现代医学杂志Ｖｏｌ．１７Ｎｏ．１５２００７年８月ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｄｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅＡｕｇ．２００７文章编号：１００５－８９８２（２００７）１５－１８２６－０５·论著·用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人ＯＡＴ３多克隆抗体许国双１，刘安２（１．第四军医大学西京医院肾脏病科，陕西西安７１００３２；２．西安市儿童医院急诊科，陕西西安７１０００３）摘要：目的用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白３（ｈＯＡＴ３）多克隆抗体。

方法提取人肾组织总ＲＮＡ，用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增ｈＯＡＴ３基因中免疫原性较强的细胞内亲水序列片段，克隆到Ｔ－Ａ克隆载体ｐＣＲ２．１中构建ｐＣＲ２．１－ｈＯＡＴ３载体，再从ｐＣＲ２．１－ｈＯＡＴ３中用特异性内切酶ＢｃｌＩ和ＸｍａＩ切下ｈＯＡＴ３基因片段，亚克隆到载体ｐＢＱＡＰ－ＴＴ中构建基因免疫载体ｐＢＱＡＰ－ＴＴ－ｈＯＡＴ３，酶切及序列分析鉴定正确后，用基因枪与辅助载体ｐＣＭＶｉ－ＧＭＣＳＦ和ｐＣＭＶｉ－Ｆｉｔ３Ｌ同时免疫小鼠，１２周后分离血清，ＥＬＩＳＡ方法测定抗体滴度，人肾组织Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。

结果成功扩增出２２８ｂｐ的ｈＯＡＴ３细胞内亲水序列片段，构建基因免疫载体ｐＢＱＡＰ－ＴＴ－ｈＯＡＴ３，经酶切及序列分析鉴定正确。

Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示小鼠抗ｈＯＡＴ３多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白５７ｋＤ的ｈＯＡＴ３。

免疫组化结果显示ｈＯＡＴ３定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜。

结论用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗ｈＯＡＴ３多克隆抗体。

关键词：肾脏；有机阴离子转运蛋白３；小鼠；基因免疫；抗体制备中图分类号：Ｒ３９２．１１文献标识码：ＡＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅａｎｔｉ－ｈｕｍａｎｏｒｇａｎｉｃａｎｉｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ３ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｉｍｐｒｏｖｅｄｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎＸＵＧｕｏ－ｓｈｕａｎｇ１，ＬＩＵＡｎ２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，ＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅＦｏｕｒｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ，Ｓｈａｎｘｉ７１００３２，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，Ｘｉ′ａｎＣｈｉｌｄｒｅｎ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉ′ａｎ，Ｓｈａｎｘｉ７１０００３，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｍｏｕｓｅａｎｔｉ－ｈｕｍａｎｏｒｇａｎｉｃａｎｉｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ３（ｈＯＡＴ３）ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈｉｍｐｒｏｖｅｄｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＴｏｔａｌＲＮＡｏｆｈｕｍａｎｋｉｄｎｅｙｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｈｉｇｈａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈＯＡＴ３ｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ｔｈｅｎｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏＴ－ＡｖｅｃｔｏｒｐＣＲ２．１ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒｅｃｏｍ－ｂｉｎａｔｅｄｖｅｃｔｏｒｐＣＲ２．１－ｈＯＡＴ３．ＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｈｉｇｈａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈＯＡＴ３ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐＣＲ２．１－ｈＯＡＴ１ｗｉｔｈＢｃｌＩａｎｄＸｍａＩｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ｔｈｅｎｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＢＱＡＰ－ＴＴｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃ－ｔｏｒｐＢＱＡＰ－ＴＴ－ｈＯＡＴ３．Ｇｅｎｅｇｕｎｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｉｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄａｎｄｔｗｏｏｔｈｅｒａｄｊｕｖａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓ，ｗｈｉｃｈｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒａｎｄＦＭＳ－ｌｉｋｅｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ３ｌｉｇａｎｄｒｅｓｐｅｃ－ｔｉｖｅｌｙ，ｉｎｄｕｃｅｄｈｉｇｈｌｅｖｅｌａｎｔｉｂｏｄｙａｆｔｅｒ１２ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ′ｔｉｔｅｒｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＥｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒ－ｂｅｎｔａｓｓａｙ，ａｎｄｉｔｓｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｉｎｔｒａ－ｃｅｌｌｕｌａｒｈｉｇｈｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈＯＡＴ３ｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｆｒｏｍｔｏｔａｌＲＮＡｏｆｈｕｍａｎｋｉｄｎｅｙｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＢＱＡＰ－ＴＴｆｏｒｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｍｉｚａｔｉｏｎ．ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｐＢＱＡＰ－ＴＴ－ｈＯＡＴ３ｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｔｈｅｍｏｕｓｅａｎｔｉ－ｈＯＡＴ３ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｕｌｄｒｅｃｏｇｎｉｚｅａｂａｎｄｏｆｒｅｌａ－ｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓ５７ｋＤ，ｗｈｉｃｈｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｃａｌｃｕｌａｔｅｄｏｎｅｆｏｒｈＯＡＴ３．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎｄｉ－收稿日期：２００６－１２－２１第１５期许国双，等：用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人ＯＡＴ３多克隆抗体体内的许多代谢产物和药物最终都是以有机阴离子的形式通过肾小管上皮细胞分泌排除体外的，肾小管上皮细胞对这些阴离子的分泌主要经过两个步骤：第１步，从肾小管周血液通过肾小管上皮细胞基底侧膜转运到肾小管上皮细胞内；第２步，从肾小管上皮细胞通过顶膜转运到管腔内。

抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定

抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：李淑珍, 刘莹, 陈苗, 柳晓兰, 唐小波, 高建恩, 朱大岭, 孙启鸿【摘要】目的: 制备分泌型的磷脂酶A2 G13（group XIII secreted phospholipase A2, PLA2G13）的多克隆抗体（pAb）和单克隆抗体（mAb）, 并对抗体进行特性鉴定。

方法: 以人正常肝cDNA 文库为模板, 构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PLA2G13（即PLA2G13-GST）和pET-32a-PLA2G13（即PLA2G13-His）。

PLA2G13-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb和鼠mAb。

采用Western blot鉴定兔抗人PLA2G13 pAb的特异性。

采用Western blot 和Immunohistochemistry鉴定鼠抗人PLA2G13 mAb的特异性。

结果: PLA2G13-GST和PLA2G13-His融合蛋白在均大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。

Western blot鉴定表明, 兔抗人PLA2G13 pAb 可特异地识别HepG2细胞系中相对分子质量（Mr）约19700的蛋白, 与文献报道中PLA2G13的实际Mr相符。

通过筛选共获得8株可稳定分泌抗PLA2G13的杂交瘤细胞株, Western blot鉴定表明6株可识别重组人PLA2G13蛋白, 免疫组织化学鉴定显示2株可特异性识别正常肝组织中的PLA2G13蛋白。

结论: 成功地制备了抗人PLA2G13兔pAb和鼠mAb, 为进一步研究PLA2G13的功能提供了特异性检测工具。

【关键词】PLA2G13 原核表达融合蛋白抗体制备分泌型的磷脂酶A2 G13（group XIII secreted phospholipase A2, PLA2G13）是分泌型磷脂酶家族的成员之一, 基因定位于10q22.1, 包含195个氨基酸, 相对分子质量（Mr）约21400, 主要存在于细胞外基质, 成熟型PLA2G13 Mr约19700, 其结构特征类似于磷脂酶家族另一个成员PLA2G12, 但二者的组织分布呈现很大差别［1］。