HBV会议荟萃

一、基因型

表面抗体阳性的健康人中分离出sG145R氨基酸替换的HBV病毒株，这说明“a”决定簇突变可能影响HBV的抗原性，并能使HBV逃避免疫攻击。在三维培养体系里，以C-AT野生株作为对照，拿不同浓度的病毒颗粒感染HuS-E/2细胞，检测sG145R突变株的感染能力。结果显示，102拷贝/毫升的sG145R突变株和野生株都感染了Huh7细胞。在sG145R感染肝细胞里，HBV DNA浓度与抗前S2抗体浓度成反比。20ug/ml的抗前S2抗体可以完全阻止sG145R突变株及C-AT野生株的感染。

对广西隆安县281例HBsAg携带者进行病毒分型，发现71%为C型，14%为B型，但还有多于13%（38/281）的患者不清楚基因型。对这38例患者病毒DNA 进行测序，17例患者病毒DNA完整，21例有不同程度的DNA缺失。进化树分析显示所有病毒株与越南的VH24分离株属于同一个进化枝，都属于C型，但是其核心区基因序列有显著不同。与除C型外的其他基因型相比，这些差异都大于8%。所有病毒株S区序列与C型相比差异都大于4%，然而，所有分离株都属于同一进化枝，有些核苷酸序列差异小于8%，因此，很难确定这些整合株的基因型。

与野生株相比，隐性感染突变株313.1及761.1在转染Huh7细胞24小时后可以观察到显性表现，如HBsAg分泌减少。转染48-72小时后，313.1突变株变现为隐性感染，而761.1突变株和野生株没有差异。在第24、48、72小时时HBeAg 分泌没有差异。突变株和野生株在细胞内的复制没有明显差异。在第72小时时，所有转染的细胞核和细胞浆中都检测到HBcAg。这些结果表明，主要大蛋白的比例失调影响了病毒的分泌，但这对病毒复制没有影响。

一些研究表明，HBV在妊娠早期即可以通过胎盘屏障而仍然有传染性。仅在出生后可以检测到新的病毒合成，这反映了病毒复制。在胚胎期12.5天可以检测到低水平的HBV RNA，但只有在胚胎期18.5天才最先发现核心蛋白，大核壳蛋白不早于出生前。在肝脏生长过程中，所有病毒复制标志物均持续升高，同HNF1a及HNF4a水平密切相关。这些结果表明，在HBV转染小鼠中，出生后病毒开始复制，肝细胞分化决定了病毒复制的开始。

二、发病机理

澳大利亚Mason教授报告，HBV基因以松弛环状形式存在，两条链5’端均有一个粘性末端。当病毒感染肝细胞时，DNA在细胞核内转变成共价闭合环状DNA（cccDNA），一些病毒DNA也可以随机组合在宿主DNA上，整合的DNA不参与病毒复制。cccDNA在RNA聚合酶Ⅱ的作用下，转录生成6种病毒mRNA，包括前基因组RNA。前基因组RNA可以翻译生成病毒核心蛋白和逆转录酶，并参与组成核壳体。在核壳体里cccDNA可以增值大约30倍，随后核壳体和病毒表面蛋白组成病毒颗粒，并从肝细胞分泌到血液中。病毒感染本身不引起肝细胞病变，肝脏疾病是由于免疫系统攻击表达病毒抗原的肝细胞而导致的。目前肝细胞清除病毒的机制并不明确，抗病毒细胞因子可以清除病毒复制中间体。推测有几种免疫反应清除cccDNA的模式，包括抗病毒细胞因子诱导的非细胞坏死性cccDNA

降解，免疫反应攻击表达病毒抗原的肝细胞致其凋亡及正常细胞增值使cccDNA 相对减少。慢性病毒感染可以导致肝脏纤维化、硬化甚至发生肝癌，在极少数病例中，也可由于整合的病毒DNA激活宿主癌基因而导致肝癌。一些核苷类似物可以通过阻止病毒逆转录而抑制病毒复制，这些药物可以使细胞浆内的病毒DNA迅速降低，但是对细胞核内的cccDNA影响很小。一些研究显示肝细胞分裂

时可以使cccDNA丢失，但另一些研究结果则相反。

cccDNA作为HBV的复制模板，在肝细胞内以30拷贝/细胞的浓度维持着细胞内感染。然而，cccDNA在分裂肝细胞内的转归并不明确。DHBV感染成长中的鸭，并以恩替卡韦抑制病毒复制，观察肝细胞分裂时cccDNA的变化。结果显示，24小时时平均cccDNA含量为1.37拷贝/细胞，42小时时其含量降低17倍，到0.08拷贝/细胞。在感染的前42天，除去肝细胞增长因素的影响，cccDNA残余模型显示cccDNA含量降低了47倍，而分裂丢失模型显示cccDNA含量降低了2100倍。是否肝细胞分裂时cccDNA仍然能够存活下来仍不明确，抑或是抗病毒治疗不能完全抑制病毒复制。

三、隐匿性感染

美国Jilbert教授报告，成人感染HBV后，90-95%患者表现为急性过程并可痊愈。典型的一过性HBV感染包括＞95%感染的肝细胞清除cccDNA，产生表面抗体及获得免疫力。一过性感染后，正常肝细胞分裂增值可以使cccDNA稀释减少。尽管急性感染可以显著清除病毒，但仍有一些残余病毒DNA存在，在肝移植或免疫抑制的情况下开始复制。研究结果显示残余鸭HBV DNA存在于长寿的肝细胞中，肝细胞周转可以降低残余鸭HBV DNA含量。数学模型显示，肝细胞分裂时残余cccDNA很可能仍然存在，而不是丢失。从模型中我们也可以看出，cccDNA 持续存在很可能是个被动过程，而不是依赖于持续的病毒复制。5-10%的成人及30-90%5岁以下感染的儿童可以出现慢性感染。我们推测这些“HBV阴性病灶”可能是一些肝细胞克隆，它们不能支持HBV复制但是也不表达病毒抗原，因而可以逃避免疫清除。这可能是发生肝癌的早期步骤。免疫逃避导致选择性肝细胞克隆扩增，这些肝细胞克隆内含有突变病毒（例如HBeAg(-)HBV），使肝细胞基因谱变窄及选择性增值，从而有助于肝癌的发生。

在德国，因输血感染HBV的风险比感染HCV、HIV高10倍。约一半的风险来自于HBsAg阴性的隐性感染。

在台湾，筛选12名HBV隐性感染的献血者，确定74名受血者，其中18名受血者仍然健在。回顾研究受血者在输血前后的ALT及HBV血清学指标，同时对比分析献血者和受血者HBV DNA序列。12名献血者的血清HBV DNA均低于128 IU/ml，在74名受血者中，输血前HBsAg携带率为33%（12/36），76%（29/38）受血者有证据表明输血前HBV感染。没有受血者在输血后发生肝炎。24名输血前没感染HBV的受血者在输血后没有出现HBsAg，通过DNA序列分析也没有发现输血相关的HBV感染。总之，隐性HBV感染输血可能不会导致HBsAg携带、感染或肝炎。

来自俄罗斯的，分析不同HBV滴度的3232名献血者及532名卫生保健人员、837名HIV感染者。献血者中HBV隐性感染率为0.31%（10/3232），平均29.51%（157/532）卫生保健人员中分离出抗HBcAb，其中，高发地区为62.6%（56/90），低发地区为14.84%（23/155）。不同地区健康人群HBV隐性感染率之间没有差异。HIV感染人群中抗HBcAg抗体检出率为41.1%（344/837）。所有隐性HBV 感染者基因型为D型，除一例V128A替代之外，S区“a”决定簇没有发现氨基酸替换。与健康人群相比，HBV高危群体的隐性感染率高，不同于典型的HBV感染，HBV隐性感染率和自然流行率之间没有明显关系。

墨西哥为HBV感染低发国，其优势基因型为H型。分析306名（其中17名HBsAg阴性者作为对照）纳华人及惠乔尔人，HBsAg阳性率为6.5%，抗HBcAb 抗体阳性率为33%。隐性HBV感染率为13.28%（38/286），6%（17/286）抗