多重定性PCR和SYBR GreenⅠ实时PCR快速检测转基因食品方法的研究

合集下载

食品质量快速检测技术的研究与应用

食品质量快速检测技术的研究与应用在现代社会中，食品安全问题受到了广泛关注。

为了确保食品质量和安全，食品质量快速检测技术应运而生。

这些新技术以其高效、准确和可靠的特点，改变了传统的食品检测方式，成为食品行业的一项重要支撑。

一、非破坏性快速检测技术非破坏性快速检测技术是现代食品质量检测的一大突破。

相比传统的化学分析方法，非破坏性的技术更加安全和可靠。

例如，近红外光谱技术（NIRS）能够通过物质的光谱特征进行快速检测，并且不需要对样品进行任何化学处理。

这种技术的优势在于废弃物少、所需样品量小、分析快速，适用于大规模食品加工企业中的质量检测。

二、生物传感器技术生物传感器技术也是食品质量快速检测的一项重要技术。

该技术利用生物体对特定的目标分子有选择性的识别作用，通过转换成电信号来检测目标物。

例如，基于酶的生物传感器利用酶的高度特异性和灵敏性，可以快速、高效地检测食品中的添加剂、农药残留等物质。

三、纳米技术的应用纳米技术已经被广泛应用于食品质量快速检测中。

纳米材料具有很大比表面积和独特的物理、化学性质，可以提高传感器的灵敏性和选择性。

例如，纳米金颗粒可以用于检测食品中的重金属污染物。

研究人员通过将纳米金和特定蛋白质结合，可以通过颜色变化快速检测出食品中的重金属离子浓度，从而保障食品质量。

四、智能检测系统智能检测系统是食品质量快速检测的一项创新技术。

该系统利用人工智能算法，结合传感器技术和图像处理技术，可以对食品进行自动识别和分类。

这种系统大大提高了食品质量检测的效率和准确性。

同时，也减少了人为因素对检测结果的影响。

智能检测系统已经广泛应用于食品工业中，为食品生产企业提供了可靠的质量保障手段。

总结：食品质量快速检测技术的不断推陈出新，为食品行业提供了更多的选择和保障。

非破坏性快速检测技术、生物传感器技术、纳米技术以及智能检测系统都为提高食品质量的监测效率和准确性做出了重要贡献。

然而，技术的研究和应用并非一蹴而就，还需要进一步加强与食品生产企业的合作，更好地满足市场的需求，确保广大消费者的食品安全。

PCR 技术在食品检测中的应用

许昌学院食品与生物工程学院2015-2016学年第一学期《现代食品检测技术》课程论文PCR 技术在食品检测中的应用PCR技术在食品检测中的应用许昌学院食品与生物工程学院，河南许昌461000摘要传统检测食品中微生物的方法主要是分离和培养鉴别，该方法操作繁琐，有些微生物很难培养。

尤其是针对检测食品中的弱势菌，使用传统的方法基本无法检测出来。

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，由于它可以将微量的DNA大幅增加的特点，所以能够比较准确地检测食品中微生物。

本文主要介绍PCR技术的操作原理和目前运用到食品检测中的几种具体的PCR技术特点，包括：多重PCR技术、实时荧光定量PCR检测技术、免疫PCR 检测技术。

并且对PCR技术在食品检测方面予以展望，为解决食品安全问题和相关食品检测做出导向作用。

关键词：食品检测；微生物培养；聚合酶链式反应；食品安全问题前言食品[1]是指原料不经加工或经过加工或改变性状、具有一定营养价值、对人体无害、可供人类食用的物质。

它不仅富含营养成分和水等物质更容易滋生微生物，而且它能最直接的与人体接触，进入人体的消化系统，所以食品安全问题[2-4]不容轻视。

现代食品行业，在生产、运输、销售过程中有很多有害的微生物，这将严重危害食品的品质和人们的健康，甚至会引起一些严重的疾病。

现代食品检测技术[5]是对食品按其原定用途进行制作和食用时不会使消费者受到伤害的一种担保。

为保证食品安全急需一些快速、敏感、特异的检测方法，以及时发现致病菌，控制污染及其可能对人体健康产生的危害。

PCR检测技术具有敏感性、特异性、简便、快速的优点，现已广泛应用于微生物检测，尤其对培养困难的细菌检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面，具有常规方法无法比拟的优越性。

随着分子微生物学和分子化学的飞速发展，对病原微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用一、本文概述实时荧光定量PCR（Real-Time Quantitative PCR，简称qPCR）是一种在分子生物学领域广泛应用的分子生物学技术，它能够在PCR 扩增过程中实时监测反应产物的积累，从而精确地定量目标DNA或RNA的初始浓度。

自20世纪90年代诞生以来，qPCR技术以其高灵敏度、高特异性、快速性和定量准确等优点，在基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定、基因突变分析、药物研发等多个领域发挥了重要作用。

随着技术的不断发展和完善，实时荧光定量PCR已成为现代生物学研究中不可或缺的工具。

本文旨在全面综述实时荧光定量PCR技术的最新研究进展，包括其原理、方法、技术优化、应用领域的拓展以及面临的挑战等。

文章首先简要介绍qPCR技术的基本原理和常用方法，然后重点论述近年来在技术优化、多重PCR、数字化PCR等方向上的进展。

接着，本文详细探讨实时荧光定量PCR在基因表达分析、病原体检测、基因型鉴定、基因突变分析、药物研发等领域的应用案例和前景。

文章还将讨论实时荧光定量PCR面临的挑战，如引物设计、数据分析等问题，并提出相应的解决方案。

通过本文的综述，读者可以对实时荧光定量PCR技术的最新进展和应用有一个全面的了解，为相关研究提供参考和借鉴。

二、实时荧光定量PCR的基本原理与技术特点实时荧光定量PCR（Real-time Fluorescent Quantitative PCR，简称qPCR）是一种在PCR扩增过程中，通过对荧光信号的实时检测，对特定DNA片段进行定量分析的技术。

其基本原理是利用荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR反应过程中实时检测PCR产物量的变化，从而得到DNA模板的初始浓度。

实时性：通过荧光信号的实时检测，可以实时了解PCR产物的生成情况，无需PCR结束后进行电泳等后续操作，大大缩短了实验时间。

定量性：通过标准曲线的建立，可以准确地计算出DNA模板的初始浓度，实现了PCR的定量分析。

应用多重SYBR Green—I实时荧光定量PCR检测甘蔗黄叶病毒和高梁花叶病毒

分类号Ｒ８．４３３２
ＤｅｅｔｏｏｕｇｒａｅｔｃｉｎｆＳａｃｎＹｅｌｗａｒｎＳｒｈｕｏａｃＶｉｕｓｂｌｏＬｅｆＶｉｕｓａｄｏｇｍＭｓｉｒｙＭｕｌｉｅＳｔｐｌｘＹＢＲＧｒｅ－ＩＲｅｌＴｉｅＰＣＲｅｎａｍ
值分别为８．～８．￣８．～８．￣０８２８Ｃ和４６６６Ｃ
检测数据显示：ＳＭｒＶ和ＳＹＶ均有各自的特异性峰值出现，而健康植株无特异性峰值：在单独检测中的检出水ｃＬ
平分别可达５０和２０ｃｐ／Ｌ两种病毒０５ｏｙｌ；ｘ值的批内变异系数分别为００％００％．３和．２．批间变异系数分别为
ｔＣｗａｓｂｉｅｕｃｓｆｌｙｔｅＴｖｌｅｄｓａｉｆｔｅｔｍｐｉｏｓ（ｃＶ０８ｉＰＲｓｅｔｌｈｄｓｃｅｓｌｂｈｍａｕｉｒｙｏｗｏａｌｎＳＹＬ８．～ｍｅａｓｕｙｐｔｈｃ
ｄｓｎｄｂｓｄｏｅｓｑｅｃｓｏｅｅｏｕａｃｎｅｌｅｆｉｓ（ｃＬ）ａｄＮＰｇｎｆｅｉｅａｅｎｔｅｕｎｅｆｐｇｎｆＳｇｒａｅＹｌｗＬａｒＳＹＶｎｓｅｅｏｇｈｃｏＶｕＳｒｈｍｍｏａｉｓＳｌＶ）ｒｓｅｔｅｅｅａｋＯｈｓｂｓ，ｈｌｌＹＲＧｅｎｒａｏｇｕｓｉｖｒ（ｒＩｅｃｖｌｉｇｎｂｎ．ｎｔｉａｉｔｅｍｕｉｅＳＢｒｅ— ｌｃｕＶｐｉｙｎｓｔｘｐｅ

SYBRGreen实时定量PCR检测转基因大豆中外源基因拷贝数

的影响[J].土壤,2004,36(1):56-60.[31]彭诚.土壤施硒对白菜和堇叶碎米荠生理指标的影响[J].湖北民族学院学报,2007,25(1):88-90.[32]院金渴,王朴,刘正兴,等.土壤施硒对大蒜生理特性、含硒量及产量的影响[J].新疆农业大学学报,2010,33(1):19-22.[33]周大寨,唐巧玉,陈建英,等.土壤施硒对花椰菜硒质量分数及主要营养成分的影响[J].湖北民族学院学报,2005,23(2):121-123.[34]冶军,单维东,褚贵新.叶面喷施硒肥对大豆产量和质量效应的初步研究[J].新疆农业科学,2009,46(3):506-509.[35]郁飞燕,寇太记,张联合,等.硒对植物生理功能影响的研究进展[J].安徽农业科学,2008,36(26):11202-11204.[36]邵志慧,林匡飞,徐小清,等.硒对小麦和水稻种子萌发的生态毒理效应的比较研究[J].生态学杂志,2005,24(12):1440-1443.[37]贾宏昉,宋家永,王海红,等.硒对作物生理、生长发育及产量、品质的影响研究进展[J].河南农业大学学报,2006,40(4):449-454.[38]苏爱国,陈大清,李亚男.植物硫转运蛋白及其硒盐胁迫响应研究进展[J].长江大学学报,2008,5(1):70-73.[39]王晋民,赵之重,沈增基.叶面施硒对青花菜含硒量及产量与品质的影响[J].西北农林科技大学学报,2006,34(3):127-130.[40]Wang H L,Zhang J S,Yu H Q.Elemental selenium at nano sizepossesses lower toxicity without compromising the fundamental effect on selenoenzymes:Comparison with selenomethionine in mice[J].Free Radical Biology and Medicine,2007,42:1524-1533.[41]Huang B,Zhang J S,Ho J W,et al.Free radical scavengingefficiency of nano-se in vitro [J].Free Radical Biology and Medi-cine,2003,35(7):805-813.[42]周毅峰,吴永尧,唐巧玉.硒对大豆叶片谷肤甘肤过氧化物酶和过氧化氢酶歧化酶活的影响[J].湖北民族学院学报,2005,23(2):127-129.SYBR Green 实时定量PCR 检测转基因大豆中外源基因拷贝数冀志庚，高学军*，敖金霞，张明辉，霍楠（东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，哈尔滨150030）摘要：采用SYBR Green Ιreal-time PCR 方法检测转基因大豆中外源基因35S 边界基因的拷贝数，以大豆凝集素基因（Lectin ）作为内参照基因，以转基因大豆基因组DNA 为内参照基因标准品，初始浓度为0.43μg ·μL -1，进行5倍梯度稀释得到内参照基因C T 值与起始模板量的相关性标准曲线：y =-2.9915x +22.3321，R 2=0.996；以含35S 边界序列的质粒DNA 为目的基因为标准品，初始浓度为0.64μg ·μL -1，同样进行5倍梯度稀释，建立目的基因C T与起始模板量的相关性标准曲线：y =-3.4021x +17.7219，R 2=0.999。

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测中的应用研究进展

［摘要］随着转基因食品的快速发展，转基因食品的大规模商业化引起了对安全性问题的广泛争议．为了对转
基因食品作出综合的评价，建立灵敏、快速、准确、高通量的检测方法十分必要．本文综述了实时荧光定量ＰＣＲ技术的基本原理、优缺点及其在转基因食品检测中的应用与研究进展，并探讨了该技术存在的问题和应用前
ｏｖｅｒｔｈｅｓａｆｅｔｙｐｒｏｂｌｅｍｏｆＧＭＦｂｅｃａｕｓｅｏｆｉｔｓｌａｒｇｅｓｃｌｅａｃｏｍｍｅｒｃｉｌｉａｚａｔｉｏｎ．ＴｏｅｖｌｕａａｔｅｔｈｅｓｆｅａｔｙｏｆＧＭＦｓｙｎｈｅｔｔｉｃａｌ — ｌｙ，ａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｈｉｇｈ－ｈｒｔｏｕｇｈｐｕｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｓｓａｙｗａｓｎｅｃｅｓｓａｒｙ．Ｉｎｔｈห้องสมุดไป่ตู้ｉｓｐａｐｅｒ，ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆ
ＶｏＩ．２８Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１３
实时荧光定量ＰＣＲ技术在转基因食品检测中的应用研究进展
倪娜，张智勇Ｌ，李国瑞，夏春丽，李华，郭闯
（１内蒙古民族大学生命科学学院，内蒙古通辽０２８０４３；２．通辽市农业科学研究院，内蒙古通辽０２８０１５）

实时荧光PCR检测食品肉类种源的方法探讨

分析与检测1　PCR检测技术概述1.1　PCR技术简介PCR技术始于1985年，其用于特定的DNA片段的快速检测，与传统的检测方法相比，能够对特定的成分进行快速检测，并能够快速检测出目标物质中的不同成分，因此，该技术在目前的食品成分检测和致病菌检测等多方面均得到了越来越广泛的应用[1]。

1.2　PCR技术的优势传统的成分检测环节往往需要大量的人力物力，且操作的复杂程度高，由于各种成分的生物特性和化学性质都有着一定的区别，对各个成分进行分别鉴定时，经常需要多次调整环境的pH、温度等参数，任何一个环节的失误都可能导致前功尽弃，而PCR技术的应用，有效解决了上述问题[2]。

具体来看，PCR技术主要表现出以下两方面的优点：①便利性好，与传统方法相比，PCR技术只需使用较少的设备和常规的操作步骤即可实现检测，整个过程更加便捷；②速度快，可以短期进行大量的检测[3-4]。

2　食品中肉类种源的实时荧光PCR检测2.1　实验材料2.1.1　实验试剂实验试剂包括琼脂糖、GelRed染色剂、50 bp DNA Ladder、无水乙醇、DNA提取试剂盒、DreamTaq PCR Master Mix，以及市售的牛肉卷样品和牛肉。

2.1.2　实验仪器实验仪器包括高速冷冻离心机、恒温水浴槽、涡旋振荡器、电子天平、生物分光光度计、制冰机和实时荧光PCR仪。

2.2　实验方法2.2.1　样品处理及基因组模板制备首先，采用剪刀和研钵，将所购买的样品剪碎和研磨，以进行匀质处理，其中，牛肉样品需要先在105 ℃下烘干，而后再进行均质处理。

两种样品的均质处理，应当保持一定距离，分开进行，避免交叉污染。

在均质处理步骤完成后，按照DNA试剂盒上的说明进行后续操作，以获取OD260/OD280比值处于1.7～2.0区间内的动物组织DNA。

2.2.2　引物与探针的合成及有效性验证根据Genbank所公布的基因序列，并通过Meglign软件进行对比分析，选取匹配度低和差异大的序列片段，并使用primer express2.0软件，在引物探针设计原则指导下，设计牛源成分的特异性引物和探针。

SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的初步建立

Ｒｅ２Ｏ８９（）１１ｖ．Ｏ。１：４２．
［］袁宝君，６潘晓群，戴月，等．江苏地区居民膳食结构与营养状况
变迁研究［］Ｊ．营养学报．２０，９（）６一７．。７２６：５９ｊ２［］徐轶群，７季成叶，马军，等．超重肥胖对青少年健康相关生活质量的影响［］Ｊ．中国学校卫生．２Ｏ２３：２１２２Ｏ８，９（）１—１．
【关键词】转基因；ＹＲ（ｒｅ实时荧光ＰＲ；５；（ＳｓＢｅｎＴＣ３ｓＮ）
【图分类号】Ｒ３【献标识码】Ａ【章编号】ｌ（９７（Ｏ９Ｏ一Ｏ１一Ｏ中一３文文［６ＯＯ２Ｏ）１Ｏ２２））
（卵Ｐ， ‘以ｇ “ ，
（ｆｒ－ｒＤ Ⅱ Ｐ，，“ Ｃｒ “ ７１０９（ “ Ｃ厂ｒＤ ” ｂｆ。７２ＯＯ，￡ｊｏｇ）
【ｂｔｃ】（ｂｃｖ：ｅｅｔｎｏｅｔｎｇｎｃ。ｏｅｔｎｇｎｔａｌｄｆｄｆｄｂｕＡｓｒｔ）ｊｔｅＤｔｃｉｆｈａｓｅｉｃｍｐｎｎｅｅｉｌｍｏ｜ｅｏｙｆ — ｄｅｉｏｔｒｉｃｙｉｏｌ
［］中国肥胖问题：组．中国学龄儿童青少年超重、胖筛查体４作肥重指数值分类怀准＿Ｊ．中华流行病学杂志．（４２（）７２Ｏ．ｊ１：９一）
论著
ＳＢｒｅ时荧光ＰＲ检测食品中转基因成分ＹＲＧｅｎＩ实Ｃ方法的初步建立

实时荧光定量PCR简介及其在食品监测领域中的应用要点

实时荧光定量PCR简介及其在食品检测领域中应用摘要：实时荧光定量PCR 是在定性PCR 技术基础上发展起来的核酸定量技术；该技术不仅实现对DNA 模板定量，且具有灵敏度高、特异性强、无污染性、及实时性和准确性等特点。

该文主要介绍实时荧光定量PCR 原理和在食品检测中应用，及其在食品领域发展前景。

关键字：荧光定量PCR；致病菌检测；转基因食品检测Abstract：Real–time fluorogenic quantitative polymerase Chain Reaction is a quantitative nucleic acids technology based on quanlity PCR，with characteristics of high sensitivity and specificity，pollution–free，instantaneity and accuracy as well as realization for quantitation of DNA template. its principle and application in food detection have been introduced in this article，and its prospect in food field predicted.Key word：real–time quantitative PCR；pathogen detection；genetically modified food detection一、实时荧光定量PCR技术原理实时定量荧光PCR技术是从传统PCR技术发展而来，其基本原理是相同的，主要不同之处是其定量的体系。

PCR反应过程产生DNA拷贝数，随反应循环数增加，以呈指数方式增加逐渐转入平台期。

在传统PCR中，用终点法对PCR产物定量有不足之处；而在实时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物质，加入的荧光物质具有特定的波长，随着PCR反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。

实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用_敖金霞

实时荧光定量PCR 技术在转基因检测中的应用收稿日期：2008-03-05基金项目：东北农业大学创新团队项目（CXT004-3-2）作者简介：敖金霞（1977-），女，黑龙江人，博士研究生，助研，主要从事转基因作物基因检测技术方面研究。

*通讯作者：教授，博士生导师，E-mail:gaoxj5390@敖金霞1，高学军1*，仇有文1，郭士成2（1．东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心，哈尔滨150030；2．东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）摘要：实时荧光定量PCR 技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。

随着转基因产品大规模商业化，转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。

实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR 反应后不需电泳检测等优点，使RQ-PCR 逐步成为转基因检测的重要工具。

关键词：实时荧光定量PCR ；Taq Man 探针法；SYBR Green I 染料法；转基因检测中图分类号：TS207.3文献标识码：A随着有关转基因成分标签法的建立和对于转基因食品的重视程度及量化要求的提高，定性PCR 因其在转基因检测中的高敏感性差易造成假阳性现象，以及操作误差和一些反应抑制因素带来的假阴性现象，使其已经不能再满足人们的需要。

在这种基础之上实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction ，RQ-PCR ）发展起来，RQ-PCR 技术不仅实现了对DNA 模板的定量，而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。

目前实时荧光定量PCR 已广泛应用于分子生物学、农业、医学等学科的应用和基础研究领域，并已经在转基因检测中发挥了不可替代的作用[1-2]。

1R Q -PC R 的基本原理实时荧光定量PCR 技术是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线，对待测样品中的未知模板进行定量分析的方法。

食品中的转基因成分检测方法

食品中的转基因成分检测方法转基因技术是现代生物技术领域的一项重要技术，通过在食品作物中引入外源基因，可以提高作物的产量、抗病虫害能力以及改善其品质。

然而，随着转基因食品的广泛应用，人们对于食品中是否存在转基因成分的关注与日俱增。

因此，开发准确可靠的转基因成分检测方法成为食品安全监管和消费者权益保护的重要任务之一。

一、PCR方法PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的转基因成分检测方法。

它通过扩增目标DNA片段，然后进行特定基因的检测，以确定食品样品中是否存在转基因成分。

PCR方法的原理是利用DNA聚合酶在模板DNA的引导下，不断扩增目标基因区段，最终可以从食品样品中获得足够数量的转基因 DNA 片段。

PCR方法具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点，因此被广泛应用于转基因食品的检测领域。

二、荧光定量PCR方法荧光定量PCR是PCR方法的一种改进形式。

通过引入特定的荧光探针，可以实现对转基因成分的快速、准确的定量检测。

该方法利用特定荧光探针与目标DNA结合，产生荧光信号，并通过荧光实时监测的方式，定量检测样品中的转基因成分含量。

荧光定量PCR方法具有灵敏度高、准确性强、操作简单快速等优点，被广泛应用于食品安全监管和质量控制。

三、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量、高灵敏度的转基因成分检测方法。

该技术通过将大量的特异性的探针固定在芯片上，可以同时检测多个基因。

食品样品的DNA与芯片上的探针发生特异性的杂交反应，然后通过荧光或其他信号检测出转基因成分的存在和含量。

基因芯片技术具有多重检测、高通量、高灵敏度等特点，能够更全面、准确地检测食品中的转基因成分。

四、下一代测序技术下一代测序技术是近年来快速发展的高通量测序技术。

它可以对DNA样本进行高效、全面的测序，并通过比对分析，检测出其中存在的转基因成分。

相较于传统的PCR方法，下一代测序技术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等特点，能够准确检测出转基因成分的存在和含量，对于食品检测具有重要的应用前景。

猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR_GreenⅠ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用

·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘要：猪圆环病毒（PCV ）包括猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）。

近些年来，PCV1、PCV2、PCV3基因型之间存在共感染，因此建立一种快捷、特异、敏感的PCV1、PCV2、PCV3的SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 鉴别检测方法显得尤为必要。

本试验通过特异性引物筛选，各项反应条件优化，建立了实时荧光定量PCR 鉴别方法。

结果表明：PCV1、PCV2、PCV3检测下限分别为40.3、25.2、22.4 copies/μL 。

与猪瘟病毒（CSFV ）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）、猪伪狂犬病病毒（PRV ）、猪细小病毒（PPV ）均无交叉反应。

批内及批间变异系数均小于1%。

对98份PCV 疑似阳性病料检测结果表明，PCV1、PCV2、PCV3感染率分别为10.2%、65.3%、53.1%，共感染率为7.1%。

该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，为PCV1、PCV2、PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒；特异性；敏感性；SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）06-0085-07D evelopment and Application of a SYBR Green Real-Time Quantitative PCR Method for Differentiation of Porcine Circoviruses 1, 2 and 3收稿日期：2021-05-24基金项目：山东省重大科技创新工程项目（2023CXGC010705）；山东省现代农业产业技术体系项目（SDAIT-08-06）；山东省自然基金（ZR2022MC011）；济南市“新高校20条”资助项目（202228112）；山东省科技型中小企业创新能力提升工程（2023TSGC0734）；山东省农业科学院创新工程（CXGC2018E10, CXGC2023G03, CXGC2023E02, CXGC2023A21）作者简介：田瑶，女，硕士，主要从事动物病毒学与免疫学研究通信作者：李俊，E-mail：***************；韩先杰，E-mail：**********************猪圆环病毒1型、2型、3型 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 鉴别方法的建立及应用田瑶1,2，时建立2，彭喆2，李琛2，徐绍建2，吴晓燕2,3，李佳昕1,2，杨莹2,3，王硕2，刘畅2，韩红2，李俊1,2,3，韩先杰1（1.青岛农业大学动物医学院，青岛266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，济南250100；3.山东师范大学生命科学院，济南250100）2023,31(6):85-93Abstract: Porcine circovirus (PCV) includes three genotypes: Porcine circovirus 1 (PCV1), Porcine circovirus 2 (PCV2) and Porcine circovirus 3 (PCV3). In recent years, there have been co-infections among these 3 genotypes. Therefore, it is particularly necessary to develop a fast, speciﬁ c and sensitive SYBR Green I real-time quantitative PCR method for differentiation of PCV1, PCV2 and PCV3. In this experiment, a real-time ﬂ uorescent quantitative PCR method was developed by using speciﬁ c primers and optimizing various reaction conditions. The results showed that the lower limits of detection were 40.3 copies/μL for PCV1, 25.2 copies/μL for PCV2 andTIAN Yao 1,2, SHI Jianli 2, PENG Zhe 2, LI Chen 2, XU Shaojian 2, WU Xiaoyan 2,3, LI Jiaxin 1,2,YANG Ying 2,3, WANG Shuo 2, LIU Chang 2, HAN Hong 2, LI Jun 1,2,3, HAN Xianjie 1(1. College of Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China; 2. Institute of Animal Science and Veterinary Medicine , Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; 3. College of Life Sciences, Shandong Normal University,Jinan 250100, China)· 86 ·中国动物传染病学报2023年12月猪圆环病毒（Porcine circovirus, PCV）是圆环病毒科圆环病毒属的一种无囊膜环状单链 DNA 病毒，也是迄今为止发现的具有自主复制能力的最小的动物病毒[1-2]。

绿脓杆菌SYBRGreen_实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

以 10 倍系列梯度稀释后的标准质粒作为扩增模板，对不同稀释度的标准质粒分别进行扩增，确定最低检出量。 1． 9 特异性试验
SONG Yue1，2 ，CHENG Kun1 ，LIANG Xiu-li3 ，WANG Ya-bin2 ，FU Tong2 ， HAN Li-qiang2 ，WEI Zhan-yong1
（ 1． Key Laboratory for Animal-derived Food Safety of Henan Province，Zhengzhou 450002，China； 2． College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，
将各种细菌在合适的培养条件下培养过夜，用传统的酚-氯仿抽提法获取细菌基因组 DNA，贮存于－ 20 ℃ 备用。 1． 5 质粒模板标准品的制备
以提取的绿脓杆菌基因组 DNA 为模板，用优化的条件扩增 16S DNA 片段。PCＲ产物经过 1% 琼脂糖凝胶电泳，用胶回收试剂盒回收目的产物。按照载体连接试剂盒将目的片段与 pMD-18 T 载体连接，转化 DH5α 感受态细胞，挑选白色菌落，进行菌液 PCＲ鉴定后，用质粒提取试剂盒提取质粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。将测序正确的阳性质粒作为 DNA 标准品，用分光光度计测定浓度后进行 10 倍系列稀释，用于构建标准曲线。 1． 6 荧光定量 PCＲ条件的优化
1． 3 引物设计参考 GenBank 上绿脓杆菌 16S rDNA 序列，根

转基因大豆检测技术研究进展

转基因大豆检测技术研究进展[摘要]大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。

转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。

由于转基因产品的安全性在世界范围内引起广泛关注，对转基因检测技术的要求也越来越高，因此,对转基因大豆检测技术的研究成为近年来研究的热点。

重点介绍以蛋白质和核酸为目标的检测技术，如EI。

ISA、PCR和基因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行比较，为转基因大豆快速检测方法的选择、改进和后续研究提供参考。

[关键词]转基因大豆；检测技术；蛋白质；核酸Abstract：Soybean transformation research is a/hot spot0in the area of plant molecular genetics. Transgenic soybean has become the important power of soybeans industry development in the worlds' major producers of soybean. The different points on potential ecological risks and the impact of transgenic products on human health attracted worldwide attention． With the increase of transgenic products， the transgenic detection technology requirements should be established and perfected． The advance in detection techniques of transgenic soybean were summarized focusing on the protein and nucleic acid for target detection technology，such as new research on ELISA，PCR and gene chip techn0109y，and their characteristic were compared to provide references for transgenic soybean fast detection selection，improvement and subsequent research．Key words：transgenosis soybean；detection technology；protein；nucleic acid.转基因大豆，是指利用转基因技术，通过基因工程方法导入外源基因所培育的具有特定性状的大豆品种。

sybr green荧光定量pcr原理

sybr green荧光定量pcr原理
Sybr Green I的实际名称是二(4-羟基苯基)-6(4-甲氧基苯基)-三甲基吡啶三乙酸铵，是由美国绿色流动技术(Invitrogen)推出的一种新型定量荧光染料。

荧光染料可以与双链DNA或RNA特异性结合，在发光光度受到激活基因上的复制影响时，就可以快速、特异性
地检测到基因表达水平及其变化。

说白了，Sybr Green I荧光染料可以反映出基因特异度复制数、拷贝数及表达量。

由于Sybr Green I的荧光发射集中在500nm附近，因此把它用作qPCR的检测染料是
一个不错的选择。

另外，它的特性还表明它可以作为双链DNA特异性结合的染料，包括基
因检测、筛选特异性cDNA文库等。

Sybr Green I的定量检测原理是：在Sybr Green I染料的体系中，双链DNA和Sybr Green I结合之后，会使染料发出一种特殊的荧光，当基因发生复制时，双链DNA会越来
越多，Sybr Green I染料中结合的双链DNA会越来越多，随之形成新的染料-DNA复合物，同时使荧光发射强度增加。

最终，通过荧光定量仪记录荧光的强度，就可以获得目的基因
的复制状态和相应复制产物的量。

Sybr Green I也具有应用程度高、成本低、容易操作、体系稳定等优点。

Sybr Green I主要是作为定量PCR的检测染料，它能够检测和定量分析特定基因序列，比传统定量
PCR技术更灵敏、更精准，并可以作为SNP和MLPA扩增研究的PCR定量方法。

食品中转基因成分检验流程与技术研发

食品中转基因成分检验流程与技术研发食品中转基因成分检验流程与技术研发随着生物技术的发展，转基因食品的出现已经成为人们关注的重要话题。

转基因食品是指通过基因工程技术将外源基因导入食品生产中，使得食品植物具有某种特殊功能或者抗性。

然而，由于转基因食品与传统食品在成分上的差异，其安全性与是否符合消费者需求备受争议。

因此，建立一套科学化、标准化的转基因食品检验流程与技术研发显得尤为重要。

一、食品中转基因成分检验流程1. 样品采集：从市场上购买一定数量的食品样品，根据样品特点选择合适的采集方法，确保样品的全面性和代表性。

2. 样品处理：将所采集的样品进行样品预处理，主要包括样品的混匀、分离等工作。

3. DNA提取：利用DNA提取试剂盒或者其他方法，从样品中提取出所需的DNA物质。

4. PCR扩增：利用特定引物和酶，在PCR扩增仪中进行PCR反应，扩增出转基因物质的特异片段。

5. 扩增产物检测：将PCR扩增后的产物通过电泳等方法进行检测，确定是否存在转基因物质。

6. 数据分析：根据扩增产物分析数据，判断样品中是否存在转基因物质，计算其含量及比例。

7. 结果报告：将检测结果编制成报告，以便进一步的科学研究和监管工作。

二、技术研发1. 引物设计：通过分析转基因食品的外源基因序列，设计特异性引物，确保能够准确、快速地检测转基因物质。

2. 标准物质制备：根据转基因物质的特性，合成转基因DNA标准物质，用于标定和校准分析仪器。

3. 验证实验：利用已知含量的转基因物质标准品，对所研发的检测方法进行验证实验，确保方法的准确性和可靠性。

4. 自动化技术：引入自动化技术，提高样品处理和检测效率，减少人为操作错误的可能性。

5. 快速检测方法研发：针对食品中转基因物质的检测需求，研发新的快速检测方法，提高转基因物质的检测效率和准确性。

6. 大规模样品处理技术：研发高通量、自动化的样品处理技术，提高样品处理能力，适应大规模样品检测的需求。

转基因食品成分检测技术研究进展

转基因食品成分检测技术研究进展转基因食品成分检测技术是一种用于确定食品中是否存在转基因成分的分析方法。

转基因食品是指通过现代生物技术手段将外源基因导入食品作物中，使其具有新的特性或优势的食品产品。

转基因食品在食品安全和公众健康方面引起了广泛关注，因此开发准确、快速、可靠的转基因食品成分检测技术非常重要。

目前，转基因食品成分检测技术的研究进展主要包括以下几个方面。

1.PCR法：聚合酶链反应(PCR)法是最常用的转基因食品检测方法之一、它可以特异性地扩增转基因植物中的特定DNA序列，并通过电泳分离和检测扩增产物来确定食品中是否存在转基因成分。

2.即时PCR法：即时PCR法是PCR技术的一种改进，可以在PCR反应过程中实时监测扩增产物的积累。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和快速分析的优势，适用于大规模的转基因食品筛查。

3.数字PCR法：数字PCR法是一种新的转基因食品检测方法，可以实现对样品中转基因成分的绝对定量。

与传统PCR方法相比，数字PCR法具有更高的准确性和灵敏度，能够在低转基因成分水平下检测到微量的转基因成分。

4.荧光定量PCR法：荧光定量PCR法是一种利用荧光染料标记的探针对转基因成分进行定量分析的方法。

与传统PCR法相比，这种方法可以减少误判概率，提高检测灵敏度和可靠性。

5.下一代测序技术：下一代测序技术是目前最先进的基因测序技术之一，可以对DNA样品进行高通量的测序分析。

利用这种技术，可以对转基因食品样品中的整个基因组进行测序，并确定是否存在转基因成分。

总体来说，转基因食品成分检测技术在过去几十年取得了显著的进展。

这些技术不断提高着转基因食品检测的效率和准确性，为监管机构和消费者提供了更可靠的食品安全保障。

然而，由于不断涌现的新的转基因食品和转基因成分，还需要进一步研究和改进转基因食品检测技术，以满足市场需求并确保食品安全。

SYBR Green Ⅰ实时PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系

于莉，华，熊国刘志恒，娟（沈农大，宁阳１１．宁出境验疫，宁连ｌｏ曹际２１阳业学辽沈ｌ１；辽省入检检局辽大１１．ｏ２６６）０
摘要利用特殊性引物，应用ＳＢ＠ｒｎＩＹＲＧｅ实时ＰＲ技术鉴定检测了商业化种植的转基因油菜Ｒ＇品系。结果表明，用实时ＰＲｅＣＴ３／应Ｃ技术，用ＳＢ￣ＧｅｎＩ利ＹＲｒ染料能选择性结合双链ＤＡ的特点，测到Ｒ＇品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号，通过溶解曲ｅＮ可检Ｔ３／且线确定其熔点值为（．± ．），８２０５ ℃ 而对其他油菜品系则检测不到荧光信号。ＳＢ￣ｒｎＩ时ＰＲ能通过溶解曲线有效地区分了特异ｏＹＲＧｅ实ｅｃ性产物、非特异性产物以及引物二聚体，是基因鉴定检测的新方法。关键词ＳＢ￣ｒｎＩＹＲＧｅ实时ＰＲ转基因油菜；１３品系；ｅｃ；Ｒ＿７鉴定中图分类号Ｑ８文献标识码Ａ７９文章编号０１ — ６１２ｏ）００１ — ２５７６１（０７１ — ３０００
ｌｒｃｎｅｓｇａｎｏｒｒｐｉｓｄｄ１ｅｄｔｅｈＹＢＲ￣Ｇｒｅｅｌｔｆｏｓｅｃｉｎｌｉｔｅａｅｌｅｉｌｔｂｅｅｔ．ＴｅＳｕｅｈｎ ’ ｃｄｅｎＩｒａ—ｉＰＣＲｃｕｄａａｌｂｙｄｆｅｅｔｔｐｃａｒｎｎｓｅｉｒｄｃｓｅｍｌｖｉｌｉｒｎｉｅｓｅｉｏｏ —ｐｃａｐｏｕｔｏａａｌｌｎｒｍｅｉｒｙｍｅｉｇｃ１ｅ，ｗｉｈｉＩＷｔｏｏｅｅｉｅｆｃｔｎ．ａｄｐｉｒｄｍｅｓｂｈｎｕＴｈｃｓａＩ￣ｍｅｈｄｆｒｇｎｄｎｉａｉ￣ｉｔｏＫｅｒｓＳｙｗｏｄＹＢＲ￣ＧｒｅｅｌｔＲ；ｅｅｉａｌｄｆｄｍｐ；１７ｉｅｄｎｉｃｔｎｅｎＩｒａ—ｉＰｍｅＣＧｎｔｌｙｍｏｉｅｅＲ＿３Ｌｎ：Ｉｅｔｉａｉｃｉｆｏ

SYBRGreen实时定量PCR检测转基因大豆中外源基因拷贝数

SYBRGreen实时定量PCR检测转基因大豆中外源基因拷贝数的影响[J].土壤,2004,36(1):56-60.[31]彭诚.土壤施硒对白菜和堇叶碎米荠生理指标的影响[J].湖北民族学院学报,2007,25(1):88-90.[32]院金渴,王朴,刘正兴,等.土壤施硒对大蒜生理特性、含硒量及产量的影响[J].新疆农业大学学报,2010,33(1):19-22.[33]周大寨,唐巧玉,陈建英,等.土壤施硒对花椰菜硒质量分数及主要营养成分的影响[J].湖北民族学院学报,2005,23(2):121-123.[34]冶军,单维东,褚贵新.叶面喷施硒肥对大豆产量和质量效应的初步研究[J].新疆农业科学,2009,46(3):506-509.[35]郁飞燕,寇太记,张联合,等.硒对植物生理功能影响的研究进展[J].安徽农业科学,2008,36(26):11202-11204.[36]邵志慧,林匡飞,徐小清,等.硒对小麦和水稻种子萌发的生态毒理效应的比较研究[J].生态学杂志,2005,24(12):1440-1443.[37] 贾宏昉,宋家永,王海红,等.硒对作物生理、生长发育及产量、品质的影响研究进展[J].河南农业大学学报,2006,40(4):449-454.[38]苏爱国,陈大清,李亚男.植物硫转运蛋白及其硒盐胁迫响应研究进展[J].长江大学学报,2008,5(1):70-73.[39]王晋民,赵之重,沈增基.叶面施硒对青花菜含硒量及产量与品质的影响[J].西北农林科技大学学报,2006,34(3):127-130.[40]Wang H L,Zhang J S,Yu H Q.Elemental selenium at nano sizepossesses lower toxicity without compromising the fundamental effect on selenoenzymes:Comparison with selenomethionine in mice[J].Free Radical Biology and Medicine,2007,42:1524-1533.[41]Huang B,Zhang J S,Ho J W,et al.Free radical scavengingefficiency of nano-se in vitro [J].Free Radical Biology andMedi-cine,2003,35(7):805-813.[42]周毅峰,吴永尧,唐巧玉.硒对大豆叶片谷肤甘肤过氧化物酶和过氧化氢酶歧化酶活的影响[J].湖北民族学院学报,2005,23(2):127-129.SYBR Green 实时定量PCR 检测转基因大豆中外源基因拷贝数冀志庚，高学军*，敖金霞，张明辉，霍楠（东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，哈尔滨150030）摘要：采用SYBR Green Ιreal-time PCR 方法检测转基因大豆中外源基因35S 边界基因的拷贝数，以大豆凝集素基因（Lectin ）作为内参照基因，以转基因大豆基因组DNA 为内参照基因标准品，初始浓度为0.43μg ·μL -1，进行5倍梯度稀释得到内参照基因C T 值与起始模板量的相关性标准曲线：y =-2.9915x +22.3321，R 2=0.996；以含35S 边界序列的质粒DNA 为目的基因为标准品，初始浓度为0.64μg ·μL -1，同样进行5倍梯度稀释，建立目的基因C T与起始模板量的相关性标准曲线：y =-3.4021x +17.7219，R 2=0.999。

实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用

实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用程海星;郭月英;任霆;张静;王乐;张利霞;靳烨【摘要】实时荧光定量PCR技术是一种新兴的核酸定量分析技术,与普通PCR定性分析相比,具有简单高效、准确灵敏、实时分析等更多的优势,是一项实用性很强的技术方法.文中主要对实时荧光定量PCR技术的操作原理、荧光类型及其在食品检测和科学研究领域中的应用进行综述.%Compared with conventional qualitative PCR,the real-time fluorogenic quantitative PCR has the characteristic of simple,efficient,accurate and sensitive.Real-time analysis is a very practical method.The purpose of this article is to summarize the principle and fluorescent systems of RTQ-PCR and its application in food detection and scientific research.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)003【总页数】5页(P243-247)【关键词】实时荧光定量PCR;荧光染料;探针;食品检测;应用【作者】程海星;郭月英;任霆;张静;王乐;张利霞;靳烨【作者单位】内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特,010018【正文语种】中文近年来，实时荧光定量PCR技术因其独特的优点，被广泛的应用于兽医、畜牧、动物检疫、水产养殖等研究领域，成为分子生物学研究中一项重要的技术工具。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

柱回收率在９以上，比较选择Ｅｖ—Ｃｒ０经ｎｉａｈ作
（１Ｊ．０｜ａｏｈｏｄＨｙｉｎｃＳｃｔｆＪｐｎＳＭ）］ｎｌｆｔｅＦｏｇｅｉ０ｉｙｏａａ，ＪＬｒｅ
１９３（）：３４．９５．６２２３２３
提高＿方法的检测限。ｒ
２４样品处理条件的确定．
时能将辛硫磷很好地洗脱，因此确定乙腈为Ｅｖ— ｎｉＣｒ对辛硫磷的洗脱溶剂。ａｂ
３小结
本实验结果表明，氯甲烷一丙酮１混合溶二＋ｌ剂提取植物性食品，Ｅｖ— Ｃｒ相萃取柱，过ｎｉａｂ固乙
转基因植物具有特殊的营养价值、量和抗病产能力，但其安全性，尤其是食用安全性已引起世界范
围内的广泛关注ｎ。许多国家和地区先后制定了
转基因食品标识管理政策，以保障消费者的知情权和选择权。因此建立检测转基因食品的方法势在必
ＰｏｉｉＡｒｕｔｒｌｒｄｃｓｂ（ＣＦＤｎ（：ＭＳｈｘｍｎｇｉｌａｃｕＰ０ｕｔｙ —Ｐａｄ／
Ｆｏｌｌｒ、硅胶、ｎｉａｂＥｖ—ｃ８等固相萃取Ｅｖ— ｒ、ｎｉ１
柱，发现Ｅｖ—ＣＪｎｉａｌ柱萃取效果好，质干扰少，ｒ杂过
［参考文献］
醚、氯甲烷一丙酮等对植物性食品中的辛硫磷的二
提取效果以及对后续净化的结果，现虽然乙腈的发
提取率高，乙睛沸点高．取液浓缩困难，乙睛但提且
与水互溶，脱水困难；而辛硫磷在二氯甲烷中较在石油醚中易溶，方法采用二氯甲烷一丙酮１溶液本＋１
［］周瑶敏，５王冬根。延灿，戴等．用毛细管气相色谱法测定蔬菜中的辛硫磷［］Ｊ．江西农业学报．∞５１（）５—５２。７４：２５．［］ＧＢＴＯ９１２２Ｏ，物性食品中辛硫磷农药残留的测定６／Ｏ．Ｏ —Ｏ３植
１黄伯俊．农药毒理一性手册［．北京：民卫生出版社，］毒Ｍ］人
ｌ９４３９３：４．
［］樊海燕，２田瑞华．气相色谱法快速检测辛硫磷残留＿．内蒙古Ｊ］
石油化．∞ ２２：２２．８１．
作为提取液，取率＞９。提Ｏ（）同相孳取柱与洗脱溶液的选择：较了２比
腈淋洗净化，很好地提取样品中的辛硫磷残留，能同时去除杂质。采用大口径毛细管柱能减少柱保留时间，克服了辛硫磷热分解问题。方法回收率、密度精
（）提取溶剂的选择：１比较ｌ乙腈、酮一石油『丙
和检测限均能满足辛硫磷残留分析需要。
［］北京：ｓ．中国标准地保留脂肪、素等杂质．ｎｉｒ］色同
・
毒理与检验
・
多重定性ＰＲ和ＳＢｅｎＩ实时ＰＲ快速检测ＣＹＲＧｒｅＣ转基因食品方法的研究
汀苏预防陕学２）９年３月第２ｆ］（０卷第１期ＪｎｓＰｅｄＭａｃ，Ｏ９ＶｏＯＮｏ１ｉｇｕＪｒｖＭｅ，ｒｈ２０。１，．ａ．２
温，升温程序为：。］１（Ｃ保持ｌｍｉ，ｎ然后以２ｍｉＯＣ／ｎ升温到】０Ｃ保持５ｍｉ．８ｎ程序升温有利于提高柱子的分离度，使样晶巾杂质与目标化合物的充分分离；方法同时采用大柱流速．流速为２／ｎ这有柱５ｍｌｍｉ，利于辛硫磷快速出峰，少热分解；口径短毛细管减大柱较毛细管柱柱容量大。方法采用大进样体积，从而
行。ｊ３一葡萄糖苷酸酶基因（ｕ）除草剂抗性基因ｇｓ和
Ｉ）：Ｏ３６／．ｓｎ１Ｏ — ９７．Ｏ９Ｏ．３）ｌｌ．９９ｊｉ．Ｏ６ＯＯ２０．１Ｏ５（ｓ
沈赘，王燕梅，符晓梅（江苏省疾病预防控制中心．江苏南京２（０１（９）））
【献标识码】Ｂ【文中图分类号】Ｒ一３１【３文章编号】
【关键词】转基因食品；多重ＰＲ；ｃ实时定量ＰＲｃ
［］顾明松。３罗毅．毛细管气相色谱法测定热不稳定有机磷辛硫磷＿．色谱．９５１（）４Ｏｌ］ＩＩ１９，３６：７．［］Ｓｔｒ４ａｏｕＮ，Ｒｙｕ，Ｈｉ幽ｉｏｋｓｒｏＫ，ｅ１ｔ．ＡｎＩＩａＭｅｈｄｏａａｙｌｌｔｏｆｃ
为测定的固相萃取柱。确定了固相萃取柱后，需还要对Ｅｖ— ａ固相萃取条件进行优化。比较了ｎｉ乙腈、酮、氯甲烷、己烷等溶剂对辛硫磷在丙二正
Ｅｖ—Ｃｒ柱上的洗脱效果，现用乙腈洗脱时，ｎｉａｔ）发