HBV基因分型的检测方法及临床意义
乙肝病毒基因分型及其临床意义
乙肝病毒基因分型及其临床意义周光耀;蒋道荣;姚登福;李金强【期刊名称】《交通医学》【年(卷),期】2006(020)001【摘要】目的:探讨南通地区乙肝病毒(HBV)基因型分布状况及其临床相关性.方法:选择南通地区HBV-DNA阳性者200例,其中乙肝表面抗原携带者(ASC)28例,慢性乙型肝炎(CHB)89例,重型肝炎(FHF)26例,肝硬化(LH)30例,肝细胞癌(HCC)27例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型.结果:200例中B型51例(25.5%),C型141例(70.5%),BC混合型8例(4.0%);C基因型在FHF组、LC组、HCC组中的比例显著高于ASC组(P＜0.05).B型、C型、BC混合型HBeAg阳性率分别为49.0%、53.2%和37.5%,无统计学意义(P＞0.05).C型和BC混合型HBV-DNA载量显著高于B型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:南通地区HBV基因型以B、C型为主,C型为优势基因型,并与重型肝炎、肝硬化、肝癌的发生及血清HBV-DNA高载量相关.【总页数】3页(P49-50,53)【作者】周光耀;蒋道荣;姚登福;李金强【作者单位】南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001;南通大学附属医院感染疾病科,江苏,226001【正文语种】中文【中图分类】Q754【相关文献】1.乙肝病毒的基因分型对患者治疗有临床意义吗？ [J], 易银（编译）;杨月（审校）2.乙肝病毒基因分型的临床意义 [J], 李天一;陈青锋;吴国琳3.实时荧光PCR方法对乙肝病毒基因分型的检测及临床意义 [J], 肖晓光;李艳莲;王晶;孙国华4.乙肝病毒基因分型的临床意义 [J], 区映研;杨海红;曾文铤;朱科伦;马佩球5.宁夏地区乙肝病毒感染者HBV基因分型与临床意义 [J], 孙珍;赵志军;师志云;赵玥;赵洁;魏军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义
乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义目的阐述血清标本的乙型肝炎病毒(HBV)标志物的临床意义,指导临床工作者对乙型肝炎的正确诊治。
方法结合自己工作经验并参考相关文献,阐述检测血清标本的HBV标志物方法和临床参考值的意义。
结果血清标本的HBV 标志物的检测可以作为快速诊断乙肝的简便方法,为临床所应用。
结论正确认识乙型肝炎病毒血清标志物对临床医生有十分重要的指导意义。
标签：乙型肝炎病毒标志物临床意义肝炎病毒感染机体后,血液中可产生一种或多种抗原抗体系统。
检测病人血清中的这些病原标志物,对病毒性肝炎的分型、临床诊断、传染性的判定、发病机理的研究和流行病学调查具有重大意义。
本文就乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物的检测及临床意义阐述如下。
HBV至少有3个抗原抗体系统:表面抗原抗体系统(HbsAg,HBsAb)、e系统(HbeAg,HBeAb)和核心抗原抗体系统(HbcAg,HBcAb)。
目前HbcAg在一般化验室中尚难直接检测到,临床上常用的指标如下。
(1)HbsAg和HbsAb:HBsAg是HBV感染后第1个出现的血清指标,HbsAg阳性表明有HBV急性感染或持续感染。
持续6个月以上阳性为慢性感染。
HbsAg 在血液中以下列3种形式存在：①Dane颗粒(HBV完整病毒)外壳是HbcAg,内心为HbeAg;②小球形颗粒(HbsAg本身)是Dane颗粒装配后过剩外壳;③管状颗粒可裂解而成为数个小球形颗粒。
HbsAg是HBV感染后最早和最常见的指标,它一般多在感染后4～6周(转氨酶或黄疸升高前2～4周)出现,至恢复期消失(感染后5～7个月)。
如转为慢性肝炎或携带者,可持续数年或终生。
但是:①HbsAg阳性表示有过感染或正在感染,并不说明现在HBV是否复制;②HbsAg滴度与肝脏病变类型无关,也不指示预后好坏;③HbsAg滴度与病情变化无肯定一致的关系,也不应将HbcAg滴度升降作为判定病情好坏和药物疗效的指标。
HbsAg>100mg/L时,多同时伴有HBeAg(+)。
肝癌患者血清中乙型肝炎病毒基因分型及临床意义
肝癌患者血清中乙型肝炎病毒基因分型及临床意义徐天敏;王永忠;濮翔科;卫峥【期刊名称】《中西医结合肝病杂志》【年(卷),期】2008(018)005【摘要】目的:探讨血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型及HBV DNA水平与肝细胞癌的关系.方法:应用巢式聚合酶链反应扩增乙型肝炎病毒与基因,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较,应用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平.对61例肝癌、65例慢性乙型肝炎、10例乙型肝炎病毒携带者进行了检测.结果:136例中B基因型59例(43.4%)、C 基因型77例(56.6%),随着病情加重,C基因型比例逐渐增高;不同基因型HBV感染的肝癌患者间HBV DNA水平差异有显著意义,P＜0.05;在慢性乙型肝炎患者中,HBV DNA水平差异无显著性意义.结论:本地区乙型肝炎病毒以B、C基因型为主,乙型肝炎病毒C基因型及高水平的HBV DNA感染与肝癌的发生相关.【总页数】2页(P269-270)【作者】徐天敏;王永忠;濮翔科;卫峥【作者单位】常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001;常州市第三人民医院肝病研究所,江苏,常州,213001【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.肝癌患者乙型肝炎病毒血清标志物及核酸检测的临床意义 [J], 刘红军2.肝癌患者血清中乙型肝炎病毒前C和BCP区基因变异的临床研究 [J], 周国平;白敬羽;罗立波;唐向荣;王永忠;陈敏;杭双荣3.血清中乙型肝炎病毒转录的检测在母婴垂直传播中的临床意义 [J], 赵薇4.肝癌患者血清中SIX1、SIX2的表达及临床意义 [J], 张新;焦明克5.血清可溶性甘露糖受体在肝癌患者中的表达及其临床意义 [J], 黄程荣;李太平;汪静;张浩;谢然;王琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙肝病毒HBV血清学标志物检测的临床意义
乙肝病毒HBV 血清学标志物检测的临床意义HBV 是一种小的有包膜病毒它被分类为嗜肝 DNA 病毒科中的一员。
虽然HBV 在动物病 毒中有若干近亲，但人类病毒中没有与 HBV 相似者,HBV 的DNA 基因组只含四个编码病毒蛋 白的基因：编码三种形式的表面抗原的表面基因S ,编码HBeAg 和HBcAg 的前核心/核心基因C ,编码x 抗原的基因X 和编码HBVDNA 聚合酶的聚合酶基因 P 。
HBV 的复制000*4^ A(n)cccDNA 转录 mRNA | 细胞核HBV 利用一种与逆转录病毒如人类免疫缺陷病毒 Human 1mmunodeficiency Virus,HIV 复制方式相关的新复制策略•在这一过程中，将 RNA 逆转录为DNA 是复制周期中极其重要的一 步。
然而与逆转录病毒不同的是HBVDNA 在复制时并不整合到宿主细胞的DNA 中去。
当一个有感染性的 HBV 颗粒结合并进入肝细胞时，HBVDNA 进入肝细胞并变为共价闭合环状DNA,cccDNA,CoValent Closed C yc1ic DNA 。
这种 cccDNA 是高度稳定的， 而且是 HBV 复 制过珵中重要的中间产物，其作用是作为 RNA 拷贝的模板。
这些 RNA 拷贝中最大者被称为 HBV 前基因组mRNA ，它被转运到细胞浆中，它有双重功能，一方面作为合成新的 HBVDNA 的 模板;另方面又携带遗传信息指导病毒某些蛋白质合成，较小的HBVmRNA 则参与其他病毒蛋白质的合成。
病毒蛋白质合成开始之后，前基因组mRNA 、HBV 核心蛋白和HBVDNA 聚合酶装配在起形成新的病毒颗粒。
每个颗粒中的前基因组 mRNA 被HBVDNA 聚合酶转录为DNA 负链,minus sense,同时此RNA 模板被降解。
而负链 DNA 再作为模板合成正链 DNA 。
当 HBVDNA 的合成正在进行时，病毒颗粒在内质网中获得包膜并从细胞中输出到细胞外 •少量新的HBV 颗粒仍在细胞内，并以其DNA 补充细胞核内cccDNA 的储备。
HBV基因和亚型：分型技术
参考文献：南方医科大学硕士学位论文~《HCV基因型和亚型：分型技术、临床意义及其流行病学研究》HBV基因型和亚型：分型技术乙肝临床与分型研究国际现状：乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝病毒，在全世界长期感染约3亿人，据报道每年造成约100万人死亡。
基于对完整基因组的序列相似性，将诸多HBV分离株分为8个基因型A至H。
HBV基因型显示特征性地理分布：基因型A流行最广，但普遍是在北欧、北美和中非;在东亚，韩国、中国、日本、波利尼西亚和越南发现了基因型B和C;基因型D也是大流行性基因型，但最要在地中海地区、中东和印度为主要分布地;基因型E是非洲的典型常见型;美国当地人和波利尼西亚发现基因型F;基因型G在西欧和北美，基因型H主要发现在中美洲。
不仅对于分子流行病学的目的，HBV的基因分型是重要的；最近的几项研究也表明，一些基因型的慢性结局和肝脏疾病的严重程度可能是不同的。
来自：National Center for Biotechnology Information—Viral Genotyping Tool Hepatitis B virus (HBV) is a hepatotropic virus, that chronically infects some 300 million people worldwide and is thought to be responsible for a million deaths annually. Numerous HBV isolates have been grouped into eight genotypes, A through H, on the basis of sequence similarities of their complete genomes. HBV genotypes show a characteristic geographical distribution: genotype A is pandemic but most prevalent in northern Europe, North America and central Africa; genotypes B and C are found in eastern Asia, Korea, China, Japan, Polynesia and Vietnam; genotype D is also pandemic but is predominant in the Mediterranean area, the Middle East and India; genotype E is typical for Africa; genotype F is found in American natives and in Polynesia; genotype G in western Europe and North America and genotype H is found predominantly in Central America. Genotyping of HBV is important not only for molecular epidemiology purposes. Several recent researches demonstrated that rate of the chronic outcome and the severity of liver disease can be different for some genotypes. 来自：National Center for Biotechnology Information—Viral Genotyping Tool乙肝临床与分型研究中国现状：目前（追溯至2005年），根据乙型肝炎病毒（HBV）全基因组序列差异大于8%或者S基因序列大于4%，将HBV分为A、B、C、D、E、F、G、H等8个基因型，当时报道，HBV每个基因型还可以分为不同亚型，如：A基因型可分为Aa和Ae亚型；B基因型可分为B1、B2、B3和B4亚型，C基因型可分为C1、C2、C3和C4亚型等。
乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测.doc
乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测一．检验项目：乙型肝炎病毒分型(B型、C型、D型)和耐药突变基因检测二．检验目的：在进行抗病毒治疗前和抗病毒治疗中进行乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测，能够：1). 区分中国和其他亚洲国家常见的HBV-B、C、D基因型；2). 检测HBV抗病毒药物5个热点突变位点的6种突变类型；3). 对HBV实行动态监控，辅助确定个性化的临床诊疗方案，进行HBV流行病学研究。
三．临床意义：HBV基因型分为9种（A-I），其分布具有地域性，中国乃至亚洲流行的乙型肝炎病毒几乎都是B、C型，此外还有少量D型，不同的基因型易发生的突变类型不同，与病情转归也密切相关，如基因型C较B更容易引起严重的肝炎或肝癌，对干扰素的应答率A型高于D型，B型高于C型，C型高于D型。
与C型患者相比，B型患者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎，肝硬化和原发性肝细胞癌。
核苷（酸）类似物，如拉米夫定（Lamivudine，LMV），替比夫定（Telbivudine,LdT），阿德福韦酯（Adefovir,ADV）和恩替卡韦（Enticavir,ETV）等是抗HBV常见药物。
但这些药物都无法彻底清除大多数乙肝病人体内的HBV，患者需要长期维持治疗。
HBV在宿主体内感染以及抗病毒治疗的过程中会发生基因变异，并在宿主体内免疫系统的压力下和在治疗干预过程中进行变异的优势选择，以达到逃逸免疫、对抗药物、实现物种生存的目的，进而发生耐药。
乙肝病人一旦出现耐药突变，其肝功能恶化的比例将显著增高，甚至快速进展至肝衰竭。
四．标本送检要求：4ml黄色帽血清管，空腹采集后立即送检，室温放置不宜超过2小时，如不能立即送检可于4℃保存一周，如需长期保存请放入－20℃冻存，运输过程中请注意保持低温。
五．开单名称：乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测进入本科室“医生工作站”→选择开单病人“姓名”→选择“项目类别”→选择“检验”→选择“乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测”→确定或进入本科室“医生工作站”→选择开单病人“姓名”→选择“项目类别”→选择“检验”→选择“实验室”→选择“乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测”→确定六．收费：570元/例七．送检时间：周一至周日8：00am－12：00am八．送检地点：检验科三楼服务台九．报告时间：抽血后，7个工作日后进入我院计算机检查报告系统，查看检测结果。
乙型肝炎病毒基因型检测的临床意义
乙型肝炎病毒基因型检测的临床意义乙型肝炎病毒（HBV）基因型分为A～H八个型，不同基因型与病情的严重程度、预后、抗毒治疗效果等方面都可能有一定的相关性[1-3]。
本文对上海市165例乙肝患者的HBV基因型布及与病情严重程度的关系，进行了初步的研究。
另外，HBV的前C区变异会影响抗病毒药物选择及治疗的效果，本文就HBV基因型与这些变异及病毒的复制能力是否相关，进行了探讨。
材料与方法 1. 研究对象：165份血清标本来自上海市传染病医院的住院和门诊乙肝患者包括114例慢性乙型肝炎（CHB），26例慢性重型乙型肝炎（CHG），22例肝硬化（LC），2例性乙型肝炎（AHB），1例肝癌（HCC）。
疾病的诊断依据2000年全国病毒性肝炎和肝病会议拟的方案。
并从上述收集的部分标本进行HBV血清学标志物、前C区1896位变异及HBV DNA定检测。
2. 方法：HBV基因型检测：以特异性引物套式PCR法检测不同的HBV基因型[4]取部分不同基因型的扩增产物进行测序分析，证实二种分型方法的结果一致。
前C 变异检测：以特异性引物PCR法进行检测，部分结果也经测序证实。
HBV DNA载测定：以TaqMan探针实时荧光PCR法定量检测。
3. 统计学处理：用卡方检验分析所得数据。
结果 1. HBV感染者的基因型分析结果：从表1可以看出，A型1例（0.6%），型55例（33.3%），C型105例（63.6%），D型2例（1.2%）A/B和B/C混合型各1例（0.6% 0.6%），没有发现E、F、G、H型及其混合型。
基因型在不同临床型患者中的分布情况其总体成比中，LC与CHB患者的基因型分布有统计学差异，C型在CHB和LC患者中所占百分比明高于B型，分别为61.4%比36.8%（P<0.01）和90.9%比9.1%（P<0.001）。
CHG患者的基型分布无显著差异。
因HCC 、AHB患者病例数少难以进行统计学分析。
乙型肝炎血清HBV-DNA定量检测及其临床意义
中外医疗 CH IN A F OR EI G N ME DI C AL T R EA TM EN T 临 床 医 学乙型病毒性肝炎在我国有较高的发病率,已经成为危害群众健康的公众性问题［1］,实验室的诊断对于乙型肝炎的预防以及患者的病情观测、抗病毒治疗效果的观察等有着至关重要的作用,目前临床上检测乙肝病毒及其复制情况的方法主要有酶联免疫法检测乙肝两对半(HV B M)血清标志物和P CR法测定H BV-D NA［2］。
因此在临床中通过监测乙肝患者血清HB V-DN A的动态变化,来了解乙刑肝炎H B V-D N A病毒复制活跃与临床的关系以及拉米夫定治疗效果。
1 材料与方法1.1 标本来源100例,乙型肝炎均为我院2006年9月至2008年4月门诊或者住院患者,男68例,女32例,年龄(50.48±11.52)岁,诊断符合西安病毒性肝炎学术会议诊定诊断标准［3］。
其中25例为对照组,75例肝功能化验治疗前A L T>40μ,H B V-D N A≥1.0×104c o p i e s/m LH B V-M示H b s A g、H B c A b均为阳性的患者。
(1)HBV-DNA检测采用荧光定量方法,检测试剂盒购自深圳匹基生物工程有限公司。
(2)肝功能检测,血清ALT测定采用全自动生化分析仪,ALT> 40UL视为异常。
(3)乙肝二对半检测采用酶联免疫方法,乙肝检测试剂盒为夏门新创生物制品所提供。
(4)LAM(葛兰素史克中国投资有限公司)100mg片/d,疗程52周,于治疗前治疗期间,每隔3个月检测H B V-M、H BV-D VA定量,并动态观察ALT水平,疗程结束后随诊24周。
1.3 仪器美国PE7700自动荧火PCR仪、日本奥林巴斯AU600全自动生化分析仪。
1.4 疗效评价完全应答治疗结束时H b eA g转阴,或H Be A g/HB e Ab出现转换,A LT正常,HB V-D NA阴性,部分答应:HB e Ag阴转或H Be Ab未阳转,HB V-DN A短暂消失,AL T值下降为治疗前一半,无应答:未达上述标准者。
《HBV分子诊断技术》课件
3. Wu W and Zhang X. (2016). Recent advances in microfluidic techniques for cancer diagnosis.
总结
HBV分子诊断技术的优势和不足
HBV分子诊断技术具有高度敏感性和准确性， 但仍存在一些挑战，如操作复杂性和设备要求。
发展趋势和未来发展方向
未来，HBV分子诊断技术将更加普及和便携， 提高检测速度来自准确性，并与其他技术结合应 用。
参考文献
1. Xie Y, et al. (2019). Molecular diagnostic methods for HBV infection status and antiviral therapy.
HBV分子诊断技术的意义和应用
HBV分子诊断技术是一种高效准确的检测方法，可以帮助早期发现和治疗HBV感染。
HBV的分子生物学特征
HBV的结构和基因组
HBV病毒具有特殊的壳层结构，其基因组包含4个 编码区域，控制着病毒的复制和传播。
HBV编码的蛋白质及其功能
HBV编码一系列蛋白质，包括核心蛋白、表面蛋白 和NSP系列蛋白，它们在病毒的感染和增殖过程中 起关键作用。
《HBV分子诊断技术》 PPT课件
欢迎来到《HBV分子诊断技术》的PPT课件。在这个课件中，我们将深入探讨 HBV病毒的分子诊断技术，帮助您了解其意义、应用以及最新的研究进展。
概述
什么是HBV
荧光PCR法检测HBV感染者HBV基因型及其临床应用
Ｈ Ｖ；部 分 结 果 进 行 基 因 测 序 验 证 ；以 ３例 非 乙型 肝 炎 患 者 为 对 照 。 结 果 ： Ｂ ３例 非 乙 型 肝 炎 患者 Ｈ Ｖ 、 Ｂ Ｄ Ａ、 Ｂ Ｍ Ｈ Ｖ— Ｎ Ｈ Ｖ Ｂ Ｃ基 因均 阴性 。６ 患 者 双 份标 本 荧 光 Ｐ Ｒ 法 、 因 测序 检 测 Ｈ Ｖ基 因型 结果 完 全 一致 均 为 Ｈ ＶＣ型 １５例 Ｂ 、 例 Ｃ 基 Ｂ Ｂ ２
量 Ｐ Ｒ方 法 检 测 血 清 Ｈ Ｖ— Ｎ 的含 量 ．以截 止 Ｃ Ｂ Ｄ Ａ
型 由于其 基 因结 构 的差 异 可造 成 其 致病 性 差 异 ． 从
而 影 响慢 性 乙肝患 者 病 情发 展 、转 归 、 Ｂ Ｈ Ｖ标 志 物 的表 达 以及 对抗 病毒 药 物治 疗 的疗 效 本 研究 拟 应
共 １５例 ， 中 无 症 状 携 带 者ｆ Ｓ ）１ ， 性 乙 型 肝炎 （ＨＢ４ ２ 其 Ａ Ｃ３ 例 慢 Ｃ ）６例 ， 乙型 肝 炎 肝 硬 化（Ｃ２ Ｌ ）３例 ， 发 性 肝 细 胞 癌 （ Ｃ２ 原 ＨＣ ）５
例 。 应 用 实 时 Ｐ Ｒ 技 术 对 患 者 进 行 血 清 Ｈ Ｖ 基 因 分 型 测 定 ． Ａ 波 长 检 测 Ｂ型 Ｈ Ｖ． Ｅ 或 Ｈ Ｘ 波 长 检 测 Ｃ型 Ｃ Ｂ Ｆ Ｍ Ｂ Ｊ Ｏ Ｅ
测 序 法 检 测 Ｈ Ｖ基 因 型委 托 南 京迪 安 医学 检 验所 Ｂ 完成 。 １ ． 主要 仪 器 ５ Ｐ ９０ Ｅ ６ ０型基 因扩 增仪 ． Ｂ７ ０ Ａ Ｉ５ ０荧
【 图 分 类 号１ Ｒ ７ ．＋ 中 ３３ １ ２ ｆ 献 标 志 码１ Ｂ 文 『 章 编 号１ １ ７ — ８ ７ ２ １ ） 一 ０ １ ０ 文 ６４ ７ ８ （０２ 叭 ０ ６ — ２
HBV—DNA定量检测的临床意义
HBV—DNA定量检测的临床意义目前检查乙肝病人最常用的方法是化验“两对半”，即乙肝病毒抗原和抗体的测定。
但它检查的只是乙肝病毒的抗原和人体对这些抗原的免疫反应，并不能代表病毒本身，无法知道体内病毒的多少。
HBVDNA是判断乙肝病毒有无复制的“金指标” HBVDNA称为乙肝病毒脱氧核糖核酸。
病毒从结构上分为两类一类是RNA病毒(核糖核酸病毒)，另一类是DNA病毒(脱氧核糖核酸病毒)，乙肝病毒属于后者。
病毒与细菌不同，细菌体内含有两种核酸(RNA和DNA)，而病毒体内只含有一种核酸，或RNA或DNA。
核酸是病毒的核心部分、病毒的基因都在这里，没有核酸，病毒就不能复制。
因此，检测HBVDNA是判断乙肝病毒有无复制的“金指标”。
有人会问，检测乙肝“二对半”已能反映乙肝病毒有无复制、有无传染性，为何还要检测HBVDNA呢?这是不是重复检查，增加了病人的负担? 可以肯定，检测HBVDNA是必需的，不是重复检查，原因如下：重庆市中医院肝病科陈新瑜1．如果乙肝病人是“小三阳”，一般说这是乙肝病毒进入非复制状态，传染性消失或很低，病情也应当趋于稳定。
但实际情况并非如此，有时病人的转氨酶仍然反复波动，甚至出现黄疽，这是怎么回事?经检测HBVDNA发现其为阳性，可以肯定，病毒仍复制活跃、病情不稳定与乙肝病毒活跃有关。
“小三阳”乙肝因其HBe Ag阴性，被称为“HBeAg阴性肝炎”，这是由于病毒“变异”造成的，故也称“异型乙肝炎”。
对此型乙肝不能掉以轻心，病情可能更重。
2．在检测病人“二对半”时，仅发现其中1项阳性，如HBsAg 阳性或单一的抗—HBc阳性，这并不能说明病人体内的病毒有无复制，必需检测HBVDNA，一旦阳性，就可肯定仍有病毒复制、也有传染性。
3．有一些肝炎病人的“二对半”5项全部阴性，甚至甲、丙、丁、戊型肝炎病毒标志物也是阴性，但病人的转氨酶却很高，有黄疽，肝功能损伤明显、这是怎么回事呢?通过测HBVDNA后，可能发现为阳性，就此可断定这种肝炎叫“慢性隐匿性乙肝”，在不明原因的肝炎中，此类型肝炎约占30一60％。
乙型肝炎的实验室检测及临床意义
乙型肝炎的实验室检测及临床意义乙肝是目前已确认的病毒性肝炎中对人类健康危害最为严重的一种肝炎，1965年Bhumberg等首次发现乙型肝炎病毒（HBV）的表面抗原（HBsAg），HBV 属于嗜肝DNA病毒科，完整的HBV病毒称为Dane颗粒，直径42nm，球形，有包膜（即HBsAg）。
患者血中除Dane颗粒外，还有16～25nm的球状和杆状体，是病毒组装过剩的HBsAg，HBV基因组由部分双链的环状DNA组成，长约3.2Kb，有4个开放读码框架，即S（包括前S1和前S2）、C（包括前C）、P 和X4区HBV抗原。
主要包括表面抗原（HBsAg）：由S基因编码，是HBV的衣壳蛋白，包括S前S1和前S2蛋白，HBsAg是HBV感染的主要标志，具有抗原性，可刺激机体产生特异性抗HBs。
抗HBs可中和HBV，是一种保护性抗体。
核心抗原（HBcAg）：是病毒的核衣壳成分，由C基因编码，为颗粒状态的抗原，被HBsAg包被，因此在感染者血液中不易检出。
HBcAg可刺激机体产生抗HBc抗体。
e抗原（HBeAg）：也由C基因编码，是HBV核心的可溶性抗原，HBeAg 阳性表示病毒在体内复制，传染性较强，HBeAg可刺激机体产生抗HBe抗体，此抗体对HBV感染具有保护作用。
传播途径急性和慢性乙型肝炎病人及血液HBsAg阳性无症状的携带者是HBV的主要传染源，HBV主要经过血液、性接触、日常生活密切接触和母婴垂直传播。
检测方法目前检测的HBV特异血清标志物主要有HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc-IgM和抗HBc-IgG，常用的检测方法为酶联反应法，此方法检测HBV主要影响因素有以下几种。
⑴试剂影响因素：目前酶联反应法检测HBV的试剂盒有很多厂家生产，由于不同厂家HBV抗原组合不同，来源和用量方面也有差异，就造成临床上使用不同厂家的试剂盒检测HBV的结果有很大差异，经常是这家试剂检测阳性，另一家试剂检测阴性，尤其是弱阳性标本，不但使这部分患者HBV感染的临床诊断不明确，而且在筛选献血源时，极易发生漏检造成受血者感染HBV病毒。
高灵敏HBV-DNA、HCV-RNA检测临床应用
0% LAM
29%
43% 35%
18% 11% 3% 0.0%
0.1%-1.1%
ADV
ETV（初治）
（HBeAg阴性初治）
15% 6.0%
ETV （LAM耐药）
8.60% 2.7%
LdT
LAM：拉米夫定 ADV：阿德福韦酯 ETV：恩替卡韦 LdT：替比夫定
Locarnini S. Hepatol Int 2008;2:147–151
肝硬化？
是
否
立即启动抗病毒治疗
HBeAg+: HBV DNA≥20,000IU/mL HBeAg-: HBV DNA≥2,000IU/mL
对持续HBV DNA阳性，有以下情形之一者，疾病进展风险较大，可考虑 给予抗病毒治疗 ✓ 明显的肝脏炎症（2级以上）或纤维化，特别是肝纤维化2级以上 (A1)； ✓ ALT持续处于1～2xULN之间，明确肝脏纤维化情况后 (B2)； ✓ ALT持续正常，伴有肝硬化或HCC家族史，明确肝纤维化情况后 (B2)； ✓ 存在肝硬化客观依据，无论ALT和HBeAg情况 (A1)
治疗中定期检测HBV DNA
－及时发现原发性无应答或病毒学突破
HBV DNA (log10 IU/mL)
6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0
0
抗病毒治疗
病毒学突破*
*已获得初始病毒学应答的患者，在随访过程中 HBV DNA比最低值上升>1 log10 （10倍）。 对抗病毒治疗耐药的最初临床表现是病毒学突 破1*。
70%
患 者 60% 比 50% 例 ％ 40%
30%
71.1% 46.6%
24W HBV DNA>60 IU/mL 联合ADV 24W HBV DNA>60 IU/mL 继续LdT单药治疗
HBV DNA荧光定量PCR检测及临床意义
HBV DNA荧光定量PCR检测及临床意义血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎病毒感染的严重程度和传染性有关，可用于判断病情和预后，以及观察抗病毒药物的治疗效果。
通常血清 HBV-DNA持续阳性超过6个月会转为慢性肝炎。
抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝受损严重,50%以上抗-HBc阳性慢性活动性肝炎患者，经平均4.5年发展为肝硬化，常与HBV-DNA持续阳性有关。
因此，采用荧光定量PCR检测方法，对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态及药物治疗观察就显得及其重要。
1 资料与方法1.1 一般资料选取 2008年10月～2009年10月，就诊患者检查200例HBVm全阴者血清样本。
1.2 血清标本的采集采用灭菌的一次性带盖塑料管，清晨空腹抽取静脉血5ml，离心分离血清，-20℃冻存备用，集中检测。
1.3 方法荧光定量PCR法检测HBV-DNA，检测仪器为Roche LightˉCycle荧光PCR检测仪，按照试剂盒说明书操作程序对上述血清标本进行检测。
HBV-DNA提取: 血清100μl加DNA提取液1100μl,13000r/min离心10min→弃上清→再加提取液Ⅱ 25 μl,振摇10 s→100 ℃10min→13000 r/min离心10min，上清液备用。
扩增取上清液2 μl，加入盛有扩增反应液38μl(含引物，dNTPs，Taq酶及PCR缓冲液)的PCR反应管中，扩增40个循环，循环参数为37 ℃5min；95 ℃ 1min；60 ℃ 30s。
定量结果采用计算对数平均值的方法来计算HBV-DNA平均拷贝数，遇有阴性结果，不参加平均值的统计。
2 结果200例乙肝标本中有91例HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性的标本中，FQ-PCR检测HBV-DNA全部阳性，阳性率100％，平均HBV-DNA拷贝数为2.8×106/ml。
3 讨论乙肝病毒血清标志物检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标，主要反映人体对乙肝病毒的免疫反应状态，不同血清标志模式反映不同的临床意义。
乙型肝炎病毒基因分型方法简述
乙型肝炎病毒基因分型方法简述邵 玲 张 男【摘要】乙型肝炎病毒是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒,属于一种复合体DNA病毒。
乙型肝炎病毒可按两种方法分型:血清型和基因型。
随着分子生物学的发展以及对乙型肝炎病毒研究的深入,乙型肝炎病毒血清分型法已不能适应对该病毒感染研究的需要,而出现的基因分型法则引起广泛的重视。
【关键词】乙型肝炎病毒;基因分型方法H epatitis B virus gene minute method summ aryS HA O L in Z HA N G N an【Abstract】The hepatitis B virus is one kind is addicted to the liver deoxyribonucleic acid virus,belongs to one kind of complex DNA virus.The hepatitis B virus may according to two method minutes:Blood serum and genotype.Along with molecular biology’s development as well as to hepatitis B virus research’s thorough,a hepatitis B virus blood serum minute law has not been able to adapt to this virus infection research need,but appears a gene minute principle brings to the widespread attention.【K ey w ords】Hepatitis B virus;Gene minute method 乙型肝炎病毒是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒,属于一种复合体DNA病毒。
安徽省某市级医院HBV感染住院患者HBV基因型检测分析
采用 Ｐ Ｒ技术结合 荧光探针技术 ， Ｃ 进行 荧光 Ｐ Ｒ分型检测 。 Ｃ Ｈ Ｖ血清标 志物 的 检测 应 用化 学 发 光微 粒 子 免疫 分 析 法 Ｂ
（ Ｍ Ａ） Ｂ — Ｎ Ｃ Ｉ 。Ｈ Ｖ Ｄ Ａ含量应 用实 时荧 光 定量 方法 检测 。结
光 Ｐ Ｒ 法 ） 自上 海 之 江 生 物 科 技 有 限 公 司 ； Ｃ 购 Ｍｘ０ ０ ３０ Ｐ多 色 荧 光 Ｐ Ｒ 仪 购 自美 国 安 捷 伦 公 司 ； Ｃ Ｈ Ｖ血 清标 志 物 的检 测 采 用 美 国雅 培 全 自动 酶 免 Ｂ 分析 仪 Ａ Ｃ ＩＥ Ｔ ｌ０ Ｒ ＨＴ Ｃ ．ｉ００及 其 配 套 试 剂 产 品 ；
原则 ： 针对 Ｈ Ｖ 基 因分 型 荧 光 Ｐ Ｒ检 测 混 合 液 Ａ Ｂ Ｃ 反 应管 ，Ａ Ｆ Ｍ通 道 以 刚好 超 过 Ｂ型 阳性对 照 品 的最 高 点 ；Ｉ 道 以刚 好 超 过 ｃ型 阳性 对 照 品 的最 高 ＶＣ通 点 。针 对 ＨＢ Ｖ基 因分 型荧 光 Ｐ Ｒ检 测混 合液 Ｂ反 Ｃ 应 管 ，Ａ 通道 以刚好超 过 ｃ型 阳性对 照 品的最 高 ＦＭ 点 。操 作过 程 中严 格 质 量 控制 ： 阴性 血 清对 照 品在
摘要 目的 了解安徽省某市 级 医院乙型肝 炎病 毒 （ Ｂ Ｈ Ｖ） 感染住 院患 者的 Ｈ Ｖ基 因型分布状况 ， Ｂ 并探 讨 ＨＢ Ｖ基 因型
与肝炎严重程度 、 疾病进展 的关 系。方法 ＨＢ Ｖ基 因型检测
１ 材 料与方 法
１１ 试 剂与 仪 器 ．
ＨＢ Ｖ基 因分 型 测 定 试 剂 盒 （ 荧
基 因型感染者可 能与肝炎病情发展有关 。
级医院 ４ 例 Ｈ Ｖ感染者血清 ， 中男 ３ 例 ， １ ８ Ｂ 其 ６ 女 ２ 例， 年龄 ９—７ ４ ．５－１．８ 岁 。所 有 பைடு நூலகம் 例 的诊 ５（３３ ４ ４ ９ ） － 断均符合 ２０ ００年（ 西安 ） 十次全 国病 毒性肝炎与 第 肝病学术会议修订 的病毒性肝炎诊 断标准 ， 中 ｊ其
hbv 分型检测内容
hbv 分型检测内容
HBV分型检测是基因扩增检测实验室（PCR实验室）进行的一项检查，通过取自患者血液及其他体液、细胞中提取的HBV DNA进行检测的技术。
具体检测内容如下：
1. 全面型别分析：提取出来的HBVDNA经过扩增基因信息后，通过特定设备对乙肝患者细胞中的HBVDNA分字进行分子信息检测，分析它所含有各种基因型的情况。
2. 分型针对性治疗：为乙肝患者诊断、抗病毒用药治疗、预后提供了重要的指导依据。
HBV分型检测可以诊断识别常见的A-H乙肝HBV基因具体分型。
其中，A型易于转为慢性乙型肝炎，B型通常病程轻微，C型易发重症肝病，D型则表现为急性自限型乙型肝炎。
如果需要进行HBV分型检测，请在专业医师指导下进行，切勿自行诊断。
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HBV 亲 缘 树 分 析
B基因型
C基因型
B、C混合型
荧光PCR检测特点：
1.准确性好:与核酸序列测定分型比较，两者结 果吻合率100%。 2.有效防污染: PCR反应和分析在完全闭管条件 下进行，同时采用了d-UTP-UNG系统，有效防范 PCR产物污染，提高检测结果的可靠性。 3.操作简单、耗时短、结果判断直观明确 :试 剂在荧光PCR检测仪上进行扩增和分型分析，不 需进行电泳、核酸纯化、紫外灯观测、测序反 应等步骤。只需0.5~1.2小时即可完成PCR过程， 有利于提高报告速度。只需根据双通道荧光增 长曲线或Ct值即可直接判断HBV基因型。
88.9
50
42.7
81.4
40%
20%
11.1
25
32.8
17.2
沈阳
北京
广州
上海
HBV基因型的临床意义
近年来研究发现, HBV基因型具有如下意义
HBV标志物清除 病毒致病性 乙型肝炎的病程及转归 药物敏感性
与HBV血清型比较,HBV 基因型具有更加重要的意义。
HBV标志物清除
HBV基因型和ＨＢｅＡｇ的清除的关系
核酸序列测定法检测HBV基因 分型方法
首先采用末端终止法，获得待检样本的 核酸序列，通常按照国际惯例选择HBV S 区基因进行扩增，获得HBV S区的序列， 然后将该序列与国际基因库中HBV 各个 基因型的标准序列进行比对，建立亲缘 树，分析待检HBV与何种基因型的遗传 距离最近，即判断为该种基因型。
Patients Without HBsAg Seroclearance (n = 50)
1 (3.3) 16 (53.3%) 10 (33.3%) 2 (6.7) 1 (3.3) -
2 (4) 15 (30%) 32 (64%) 1 (2)
Among patients with single genotype B or C, those with HBsAg seroclearance had a higher proportion of genotype B and lower proportion of genotype C when compared to controls; odds ratio 3.41; (95% CI, 1.26-9.28); P = .014.
HBV的基因型和分布
亚洲部分地区的基因型分布
100% 80%
32 81.4
HBV基因型B
84.7
60% 40%
53
HBV基因型C 其他基因型
20%
17.2 12.2
0% 中国 (上海） 台湾 日本
国内部分地区基因型分布
100%
25
2.5 23
1.4 其它基因型 B、C混合型 C型 B型
80%
60%
Kao JH, et al. J Hepatol 2000;33:998–1002.
核苷类药物疗效与HBV基因型的关系。
注：最近文献倾向于没有两者没有差异，但是基因型B除外。 Intervirology 2003;46:373–376
检测基因分型的常见方法
基因测序法 PCR-RFLP ELISA 生物芯片 实时荧光PCR法
病毒致病性
HBV基因型与肝硬化的关系
病毒致病性
HBV基因型和肝细胞癌的关系
KAO等在进一步对67 例无症状HBV携带,103 例慢性肝
炎,32 例肝硬化,20 பைடு நூலகம்肝细胞癌患者进行基因分型研究中发现,
各组均以B/ C 型为主,C基因型所占比例按上述顺序逐渐增大, 而B 基因型的比例逐渐减小;与B 基因型比较,C 基因型在肝硬 化及50 岁以上的肝细胞癌患者中比例较高,而B 基因型与50 岁 以下,特别是35 岁以下的肝细胞癌患者有关。
HBV基因分型检测方法及其意义
杭州博赛基因诊断技术有限公司
HBV的基因型和分布
1. 根据ＨＢＶ全基因核苷酸序列异源性≥８％或者Ｓ基因 区核苷酸序列异源性≥４％，将不同病毒株分为不同的 基因型，迄今为止，ＨＢＶ可以分为８个基因型，即Ａ、 Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ和Ｈ型。 2. A B D E F G H 型：西欧,北欧、北美洲及非洲地区; 型和C 型：亚洲,澳大利亚; 型：中东、北非和南欧; 型：非洲撒哈拉沙漠地带; 型：美国; 型：法国和美国; 型：尼加拉瓜、墨西哥,及美国加里弗尼亚地区。
临床资料显示，ＨＢｅＡｇ的清除可能与ＨＢＶ基因型有关。
与Ｂ基因型相比，Ｃ基因型有更高的ＨＢｅＡｇ阳性率，分别为 １６％与５３％。
Ｂ基因型的自发性ＨＢｅＡｇ清除要比C基因型早１０年，并且在 ＨＢｅＡｇ清除后，肝脏生物化学指标持续正常。
HBV标志物清除
HBeAg累积清除率
Journal of Medical Virology 70:350–354 (2003)
HBV标志物清除
HBV基因型与HBsAg转阴 的关系
No. of Patients Single genotype* A (%) B (%) C (%) D (%) Mixed genotypes A + D (%) B + C (%)
*
Patients With HBsAg Seroclearance (n = 30)
HBV基因型与抗病毒药物敏感性的关系
不同基因型HBV 感染对干扰素治疗的反应有差别
Kao 对58 例慢性乙型肝炎患者给予干扰素治疗48周,B 基因型和C 基因型的完全应答率(血清ALT 恢复正常,HBeAg 消除,HBV DNA 转阴) 分 别为41％和15％ ,说明干扰素对B基因型治疗效果较好。
Hepatology. 2004 Jun;39(6):1694-701.
HBV 基因型与病毒致制病性的关系
• 日本学者Shiina分析了1 744 例HBsAg 阳性者的基因
型与肝功能异常的关系后发现,与B 基因型相比,C 基 因型的肝功能异常更为常见。
• C 基因型引起的临床表现及组织学损伤更严重。