黄芩素在大鼠体内对氟苯尼考药动学的影响研究

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2019·06 期·总第 347 期
试验研究
物制品检定所，批号：130555-201704）；氟苯尼考 原料药（含量为 98.9%，浙江康牧药业有限公司生 产，批号：201710163）。
乙腈为色谱纯，乙酸乙酯等其余试剂均为分 析纯，水为重蒸馏水。 1.4 分组及给药方法 将 12 只健康大鼠随机分 为单用组和合用组，每组 6 只。合用组连续 7 d 每 天灌服一次黄芩素（50 mg/kg），单用组连续 7 d 给 予相应体积的生理盐水。两组大鼠禁食 12 h，于 第 8 d 按 25 mg/kg 剂量灌服氟苯尼考（氟苯尼考原 粉溶于 PEG400，配制成 5%溶液），给药后 0.083、 0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h 从眼眶静 脉丛采血约 0.2 mL，EDTA 抗凝，4 000 r/min 离心 5 min，分离血浆，于-20 ℃冰箱中保存待用。 1.5 样品处理 精确取血浆 0.1 mL 于试管中，加 入 10 μL 氯霉素内标液（500 μg/mL）和 400 μL 乙 酸乙酯，涡动混合 2 min，4 000 r/min 离心 10 min， 吸取上层液于另一离心管中，然后再加入乙酸乙 酯 400 μL 重复提取 1 次，合并两次提取液。在 40 ℃水浴中氮气吹干，残渣加入 100 μL 流动相溶 解，涡动混合 2 min，12 000 r/min 离心 10 min，将上 清液转移至进样瓶，取 20 μL 进样检测。 1.6 标准曲线绘制 取空白血浆80 μL，加入20 μL 氟苯尼考系列标准溶液，配制成 50、20、10、5.0、 2.5、0.5、0.1、0.05 μg/mL 系列标准血浆样品，按 “1.5”项下方法处理样品，以氟苯尼考与氯霉素峰 面积的比值（S）对相应氟苯尼考浓度（C）作线性 回归，求回归方程和相关系数。结果得出：氟苯 尼考在质量浓度 0.05～50 μg/mL 范围内线性关系 良好，回归方程为 S=0.073 5 C－0.014 2，相关系数 R2＝0.999 7。标准曲线见图 1。
中图分类号：S859.7 文献标识码：B 文章编号：1001-8964（2019）06-0022-03
摘要：为研究黄芩素对氟苯尼考在大鼠体内药动学的影响，将 12 只大鼠随机分成单用组、合用组，合用组 连续 7 d 灌服黄芩素（50 mg/kg，1 次/d），单用组则给予相同体积的生理盐水，第 8 d 两组大鼠均按 25 mg/kg 剂 量灌服氟苯尼考，给药后按时间点连续采样，数据采用 DAS2.0 分析。试验结果表明，黄芩素连续给药 7 d，可 以增加氟苯尼考在大鼠体内的吸收，减缓代谢消除，提高口服生物利用度，提示这两种药物在临床上合用具 有潜在的药动学相互作用。
试验研究
2019·06 期·总第 347 期
黄 芩 素 在大鼠体内对氟苯尼考药动学的影响研究
李旭廷 1，2，李思聪 1，2，王红宁 1，李金良 1，2，王斌 1，2，杨锐 1，2 （1. 四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川 成都 610064；
2. 四川省畜牧科学研究院，动物遗传育种四川省重点实验室，四川 成都 610066）
兽医常用抗菌药，临床实践中经常与黄芩类中药 如双黄连等联合应用来防治畜禽细菌性感染。 黄芩及其有效成分黄芩素是否对氟苯尼考的药 代动力学产生影响值得研究。本文开展了黄芩 素对氟苯尼考在大鼠体内药动学的影响研究， 探讨可能发生的药动学相互作用及其机制，为临 床安全、合理、有效用药提供参考。 1 材料和方法 1.1 实 验动物 12 只 SD 大鼠，每只体重 280 ± 25 g。试验前按常规饲养 1 周，自由饮水和采食， 饲料为不含任何抗生素的大鼠专用日粮。大鼠 和饲料均由成都达硕实验动物有限公司提供，合 格证号：SCXK（川）2013-24。 1.2 实验仪器 赛默飞 UltiMate3000 高效液相 色谱仪；CQ250 超声洗涤器；800B 台式离心机； WH-3微型旋涡混合仪；MiniSpin plus高速离心机。 1.3 药品与试剂 黄芩素（含量为 98.5％，中国 药品生物制品检定所，批号：111595-201808）；氟 苯尼考对照品（含量为 99.1%，中国兽医药品监察 所，编号：K0301703）；氯霉素标准品（中国药品生
取回收率和精密度，每个样品做 5 个重复，测得方 法平均回收率分别为（81.5±3.8）%、（94.2±2.6）% 和（87.6±2.7）%，测得日内 RSD 分别为 5.1%、1.6% 和 2.3%，测得日间 RSD 分别为 6.4%、2.1%和 2.4%。 按信噪比 S/N＝3 计算，最低检测限为 0.02 μg/mL。 1.8 色谱条件 色谱柱：Agilen HC-C1（8 250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水（27∶73，V/V）；流 速 1.0 mL/min；检测波长 223 nm；柱温 40 ℃；进样 量 20 μL。 1.9 数据分析处理 用 DAS2.0 软件以非房室模 型分析方法计算药代动力学参数，所有数据以平均 数±标准差（x±s）表示；单用组和合用组组间采用 SPSS 11.0 统计软件对药动学参数进行 t 检验。 2 结果与分析 2.1 方法专属性 本色谱条件下，氟苯尼考保 留时 间 约 13.4 min，氯 霉 素（内 标）保 留 时 间 约 17.7 min。氟苯尼考与内标分离良好，样品处理 过程中未引入干扰性杂质，内源性成分不干扰药物 的分离测定（见图 2）。本方法具有较高的特异性， 能准确测定血浆中的氟苯尼考浓度，重现性好。
峰面积比值
4.0
3.5
S＝0.073 5C－0.014 2 R2＝0.999 7
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
0
10
20
Leabharlann Baidu30
40
50
60
-0.5
氟苯尼考浓度（μg/mL）
图 1 血浆药物浓度标准曲线
1.7 分析方法质量控制 以血浆样品低、中、高 （0.1、2.5、20 μg/mL）3 个浓度考察氟苯尼考的提
关键词：黄芩素；氟苯尼考；大鼠；药动学
在当前畜牧生产中，用中兽药与化药联合防 治畜禽疾病已经成为一种普遍现象。尽管中兽 药有着天然、低毒、低残留等诸多优点，但有研究 表明中兽药可以通过调节机体代谢酶和转运体 等方式，改变联用药物的药效学或药动学特征， 甚至产生不良反应 。 [1] 因此，中兽药与化药联合 使用可能产生的药物互作值得重视和研究。
黄芩是中兽医临床上最常用的药物之一，具 有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功能[2]。黄芩 素是黄芩中的主要活性成分，研究显示：黄芩和 黄芩素均能作用于药物代谢酶和转运蛋白的调 控和表达[3-4]，对一些化学药物如诺氟沙星等的体 内代谢产生影响，引起疗效改变 。 [5] 氟苯尼考是
收稿日期：2019-03-15 基金项目：国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专 项（CARS- SVDIP）；四 川 省 财 政 运 行 专 项（SA⁃ SA2014CZYX010） 作者简介：李旭廷(1977-)，男，四川简阳人，在职研究生， 研究员，主要从事新兽药的开发与应用工作。E-mail: 676049640@qq.com