临床PCR实验室基本设置要求 张琼
临床PCR实验室建设及注意事项
的门可安装一种磁性连锁装置
理想的PCR实验室设置A
产物分析区
扩增区
标本制流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
青海省人民医院医学检验科分子生物实验室建筑图
理想的PCR实验室设置B
产物分析区
扩增区
接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区
临床PCR实验室分区设计的一般原则
第一 各区独立
含义就是PCR实验室的四个区，即试剂准备区、标本制备 区、扩增区和产物分析区，应该是在物理上完全分开的各自 独立的区域，并且不能有通过连通各区的中央空调、分区装 修隔断不密封、传递窗不密封等发生空气直通的现象。
实验室自制试剂 制备扩增反应混合溶液 试剂原材料必须贮存在
本区内，并在本区内制 备成所需的贮存试剂。
标本制备区：
仪器设备、工作服及各种物品都必须专用。 核酸提取 标本制备区仪器设备主要应有生物安全柜(最好为 B2，可避免提取核酸
在柜内反复循环，造成标本间交叉“污染”，出现假阳性结果。 配备加样器、台式高速离心机(冷冻及常温)、台式低速离心机、恒温设
临床PCR实验室建设 及注意事项
前言
Introduction
随着公众对医疗服务需求的不断增加，医院发展规模日益扩大
，门诊量、住院量持续增多，临床对于检验技术水平、检测结果的 准确性和时效性有了更高的期待和要求。
为进一步规范临床基因扩增检验实验室管理，保证临床诊断科学 、合理，保障患者合法权益，根据《医疗机构管理条例》、《医疗 机构临床实验室管理办法》，对《临床基因扩增检验实验室管理暂 行办法》（卫医发〔2002〕10号）进行了修订，制定了《医疗机构 临床基因扩增检验实验室管理办法》。
临床PCR实验室的设置及质量管理内容
什么样的临床基因扩增检验实验室 是最标准的？
临床基因扩增实验室设置的一般原则
各区独立
注意风向 因地制宜
“十六字口诀”
方便工作
基因扩增实验室 各区的功能和配置
试剂储存和准备区
储存试剂的制备 试剂的分装 主反应混合液的制备
冰箱 混匀器 微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 消耗品（带滤心吸头、
实验室管理要求：记录
实验室应有适合自身实际情况又符合现行规章 制度的记录管理制度；
记录应有参与标本收集、标本准备和处理、检 测的人员签字。
所有记录和报告都应安全贮存、妥善保管并保 密。
实验室管理要求：报告
检测结果的报告应准确、清晰和客观。定性测定报告“阴 性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ml报告。
当临床科室或患者要求用电话、图文传真或其它电子和电 磁设备传送结果时，实验室应保证工作人员遵循文件化的 程序，并为对方保密。
怎样编写SOP？
实验室的日常工作管理
工作项目 水浴箱、微量恒温器（加热模块） 次氯酸钠溶液 生物安全柜 室内质控
弱阳性质控（定性） 低、中、高浓度质控（定量） 阴性质控：原样本
最主要的扩增产物污染 来源
有可能使用致突变和有 毒物质
微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 专用消耗品 专用办公用品等
实验室质量管理体系的建立
质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序
实验室管理要求：设备管理
主要设备应有维护程序文件及维护记录；
(a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可 能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)修复的设备必须 经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使 用；(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工 作的影响。
PCR实验室
PCR实验室PCR实验室设计方案一、设计要求1.概述PCR实验室是用于临床基因扩增实验的专门实验室，可检测艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病。
该实验方法具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，但需要配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。
本文主要从实验室平面布局、空调通风系统设计、气流控制和污染防制几个方面对PCR实验室进行设计。
2.PCR实验室平面布局为避免交叉污染，实验室应分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
3.实验室空调通风系统设计及压力控制为保证各实验区的压力要求和避免交叉污染，宜采用全送全排的气流组织形式，并严格控制送、排风的比例。
4.污染的预防与控制实验室应采用防护措施，如安装紫外线灯、使用消毒剂等，避免污染的发生。
二、设计方案根据设计要求，实验室平面布局应分为四个单独的工作区域。
各区域之间应通过传递窗进行试剂及样品传递，避免交叉污染的可能性。
空调通风系统应采用全送全排的气流组织形式，并严格控制送、排风的比例，以保证各实验区的压力要求。
同时，实验室应采用防护措施，如安装紫外线灯、使用消毒剂等，避免污染的发生。
三、设计图纸1.平面布局图2.风口平面图3.通风管道布局图4.照明线路分布图5.插座线路分布图6.电力系统图1.严格控制实验室人员进出，非实验相关人员禁止随意进出，必要时应设置独立通道和进出门。
2.实验区域应使用带有明显标志的工作服，不得将本区工作服带至其他区域。
3.尽量减少在实验区内不必要的走动，以减少交叉污染的可能性。
4.扩增产物分析区是最主要的污染来源，废液和一次性材料应经消毒液浸泡后远离实验室处理。
5.扩增产物分析区可能用到有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
完备的实验室配套设施是保证实验工作必要条件，应根据实验内容配备相应设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。
PCR实验室的设置及管理规程
PCR实验室的设置及管理规程
1. 目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2. 范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3. 职责：PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
4. 程序：
4.1 分子诊断室为检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作。
4.2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
各区标签颜色：红色（第一区）、白色或绿色（第二区）、蓝色（第三区）；专用工作服：粉红色（第一区）、白色（第二区）、蓝色（第三区）。
标本
的接收则在检验科标本接收处进行。
4.3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4.4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP文件。
4.5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4.6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4.7实验完毕后做好清洁消毒工作。
5. 相关文件:
实验室设计平面图
6. 相关记录:
无。
PCR实验室分区设置和要求, PPT课件
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意 避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在 使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用 洗板机洗板，废液必须收集至1mol/L HC1中，并 且不能在实验室内倾倒，而应至远离PCR实验室的 地方弃掉。用过的吸头也必须放至1mol/L HCl中浸 泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。
怎样编写SOP？
知识回顾 Knowledge Review
扩增区
PCR 扩增区工作细则 1. 操作者应穿本区工作服，戴双层手套，自核酸样品制备区来者不
必更换手套。 2. 按 PCR 仪操作规程创建自己的反应程序，记录自己的反应程序号，
以后直接运行该程序。 3. 如果创建反应程序过程中，机器出现某程序号与其他程序号相关
联的情况，要另选新的程序号，以免误将别人的程序篡改。 4. 每次运行程序前一定要核对该程序的内容。 5. 运行结束后，及时取出反应管，关闭机器并填写记录，勿使机器
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺 序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备 区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增 区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区 别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作 者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带 出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因， 因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩 增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应 有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物 质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故应 注意实验人员的安全防护。
本区的清洁消毒和紫外照射方法同前面区域。本区 如采用负压条件或减压情况下(如安装排风扇)可减 少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性。
PCR 实验室要求
PCR 实验室要求PCR（聚合酶链式反应）技术在现代生物学研究中发挥着重要作用。
为了确保实验结果的准确性和可靠性，PCR 实验室设置了一系列要求，包括实验环境、实验设备和实验人员等方面。
本文将就 PCR 实验室的要求进行介绍。
实验环境要求首先，PCR 实验室应具备清洁、无尘、无菌的实验环境。
实验室地面、工作台面、储藏柜等应定期清洁消毒，以防止外源性污染引入实验物质。
实验室应配备紫外线灯，用于对实验器皿、试剂瓶等杀菌消毒。
其次，PCR 实验室应具备稳定的温度控制系统。
PCR 反应需要在特定温度条件下进行，控制范围一般为40℃至95℃之间。
温度过高或过低都将影响 PCR 反应的结果，因此实验室应配备稳定温度的恒温器以确保温度的准确控制。
此外，实验室应具备良好的气氛控制系统。
PCR 实验需要高纯度的空气环境，以避免空气中的微生物污染影响反应结果。
实验室应配备空气净化设备，并定期进行维护和更换过滤器，以确保实验室空气的纯净度。
实验设备要求PCR 实验室所需的设备包括PCR扩增仪、电泳仪、显微镜等。
首先，PCR 扩增仪是PCR 实验中必备的设备，用于控制反应温度和时间。
实验室应选择质量可靠、温度精确控制的 PCR 扩增仪，以确保 PCR 反应的成功。
其次，电泳仪是PCR 实验中测定扩增产物大小和纯度的必备设备。
实验室应选择具备高分辨率和敏感性的电泳仪，以确保准确测量 PCR反应产物的大小。
另外，显微镜是PCR 实验中观察片的设备。
实验室应选择具备高放大倍数、清晰度好的显微镜，以便研究人员观察PCR 反应产物的形态和结构等特征。
实验人员要求PCR 实验的准确性和可靠性取决于实验人员的经验和技术水平。
实验室应配备经验丰富、熟练掌握PCR 技术的人员。
实验人员应具备以下要求：首先，实验人员应熟悉PCR 实验的原理和操作步骤，掌握PCR 反应体系的配制和实验条件的设置。
其次，实验人员应具备对实验样本进行前处理、DNA 提取和PCR反应等操作的技巧和经验。
PCR实验室建设
建立PCR实验室的基本条件临床基因扩增实验室采用PCR技术用于临床基因诊断，由于PCR技术对所检测的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测标本假阳性结果；另外由于PCR技术要求高、影响因素多（特别是RNA标本），实验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。
因此临床基因扩增检验实验室技术验收和规范化管理是PCR技术本身需要，也是在临床上顺利应用该技术前提。
二、PCR实验室验收准备工作（一）硬件准备——实验室基本建设1.根据文件要求，临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
2.各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
3.进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
4.不同的工作区域使用不同的工作服（不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
5.工作区域仪器设备配置标准（1）试剂贮存和准备区2～8℃和-15℃冰箱：混匀器；微量加样器（覆盖1～1000μl）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
（2）标本制备区2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
（3）扩增反应混合物配制和扩增区核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
PCR实验室标准
P C R实验室基本要求1.1.1P C R实验室基本要求2.1P C R实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。
只是使用实时荧光P C R仪、H I V病毒载量测定仪的P C R实验室�有上述前面三个区域即可。
各区域应完全独立分隔�不应有任何的空气直通。
B a s e d o n t h e m e t h o d s u s e d b y PC R l a b,t h e P C R l a b o r a t o r y c a n b e d i v i d e d i n t o t h r e e o r f o u r r o o m s o r a r e a s f o r(i)r e a g e n t p r e p a r a t i o n,(i i) s a m p l e p r e p a r a t i o n,(i i i)a m p l i f i c a t i o n a r e a,a n d(i v)p r o d u c t a n a l y s i s a r e a.I f t h e P C R l a b o r a t o r y o n l y u s e s r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e P C Ri n s t r u m e n t s a n d/o r i n s t r u m e n t s f o r H I V v i r u s l o a d,t h e P C R l a b m a y h a v e o n l y t h e f i r s t t h r e e r o o m s o r a r e a s(r e a g e n t p r e p a r a t i o n,s a m p l ep r e p a r a t i o n,a m p l i f i c a t i o n).T h e r o o m s o r a r e a s o f t h e P C R l a b s h o u l d b e i n d e p e n d e n t l y s e p a r a t e d,a n d t h e r e i s n o a i r f l o w t h r o u g h t h e s e p a r a t e d r o o m s o r a r e a s.2.2产物分析区或三个区域的最后一个区域�即扩增及产物分析区��空气流向应由室外向室内�可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。
PCR实验室分区设置及要求
严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经 高压处理。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本 工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠 的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的 紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离 和能量对去污染的效果非常关键，因此可使 用可移动紫外灯(254nm波长)，在工作完成 后调至实验台上60~90cm内照射。由于扩增 产物仅几百bp，对紫外线损伤不敏感，因此 紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好 是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有 日常记录。
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲区 专用走廊
缓冲区
缓冲区 工作流向
错误的设计
临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区 域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区 域都必须有明确的标记，以避免设备物品如 加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而 造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。
用于RNA扩增检测的样本制备好以后，应 立即进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA 稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应 的需要，应在标本制备区设置一个以上的 温育装置。
cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定， 倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓 冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的 DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后 再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩 增发生污染的可能性降低。
分子生物学实验室设置及要求
甘肃省疾病预防控制中心 二○一一年四月 张林才
设计根据
在由中华人民共和国卫生部办公厅于 2002年1月14日下发的《临床基因扩增检 验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10 号文)附件《临床基因扩增检验实验室基 本设置标准》。
02PCR实验室基本设置要求张琼
• 第三类：能够引起人类或者动物疾病；不构成严重危 害，传播风险有限；具备有效治疗和预防措施
• 第四类：通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微 生物
• 第一类和第二类病原微生物统称为高致病性病 原微生物
1.生物危险（risk）的分级
• I 级：个体和群体低危险 • II 级：中等个体危险，有限群体危险 • III级：高个体危险，低群体危险 • IV 级：高度的个体和群体危险
美国CDC对微生物指导性分级
• 第一级：不引起健康成年人疾病 • 第二级：可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露
等方式引起人类疾病 • 第三级：本土或外来的微生物，通过吸入途径
II
I
III
II 级生物安全柜根据结构以及气流分配不同主 要是外排气流不同分为：
A1型:（ 0.38m/s， 30%排在室内 ） A2型: （0.5m/s，30% 外排，原B3 型） B1型: （ 0.5m/s， 70%接管道外排） B2型: （ 0.5m/s， 100%接管道外排）
Ⅲ级生物安全柜 （class Ⅲ biosafety cabinet）
实验室生物安全防护分级
一级生物安全防护实验室，简称BSL1或P1 二级生物安全防护实验室，简称BSL2或P2 三级生物安全防护实验室，简称BSL3或P3 四级生物安全防护实验室，简称BSL4或P4
一级最低，四级最高
典型的一级生物安全 水平实验室 （图片由CUH2A ， Princeton ，NJ ， USA 提供）
PCR实验室基本设置要求
张琼
主要内容
一、实验室生物安全 二、PCR实验室布局设置
临床PCR实验室建设及注意事项
仪器设备的维护和校准制度
责任人 维护和校准的基本方面：光路、滤光片、波
长、加热模块的清洁、具体的校准点选择 （如加样器的校准体积点选择、温度计的校 准温度点选择等）、维护和校准的具体方法 包括用具 校准合格的判断标准 维护和校准的间隔时间
仪器设备的操作制度
按照每台仪器设备的使用说明书，将其详细操作步骤包括 开机关机次序、编程、调试、运行、计算等按实际使用中 的先后顺序逐项列出，最后还应有使用的注意事项。
管理制度 清洁制度 生物安全防护制度 仪器设备的维护和校准制度 仪器设备的操作制度 实验室质量管理
管理制度
严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进 出实验室，有条件的 情况下要设置独立的通道和进出整个实 验区的门;
尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性; 扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在
安全注意问题 ：
A、生物安全柜的摆放位置不易摆放在与出入口紧邻的墙体上; B、实验室内的通讯设施应该放置于生物安全柜对面; C、实验室门口位置设置紧急洗眼器和紧急喷淋，以防止实验人员受
到伤害; D、高压灭菌器应与传递窗紧邻; E、实验室内的压力显示器和报警装置都应放置在醒目位置; F、与室外联系的电话应放置在醒目位置，并且放置在便于实验室人
PCR实验室建设要点
对总体布局/屏障系统有一定的要求
一、临床PCR实验室的分区规划设计
如何规划设计一个合格的实验室?
目的： 保护操作人员 保护环境 保护样本
那么怎样才能设计一个合格的实验室呢？
各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作
“十六字口诀”
标本的接收
应在四个测定区域之外的地方或 区域内接收
临床PCR实验室基本设置要求
精选2021版课件
15
7.医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
内容节选：
一.临床基因扩增检验实验室的设计 （一）临床基因扩增检验实验室区域设计规划。原则 上临床基因扩增实验室应当设置以下区域：试剂储存 和准备区，标本制备区，扩增区，扩增产物分析区。 这四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完 全的分割状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪 器的功能，区域可适当合并。如使用实时荧光PCR仪， 扩增区，扩增产物分析区可合并；采用标本处理，核 酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制 备区，扩增区，扩增产物分析区可合并。
临床PCR实验室基本设置要求
张琼 2017年PCR上岗证
内容
一.设置依据 二.PCR实验室设计 三.PCR实验室配置
精选2021版课件
2
一.设置依据
设置 “设”设计：布局、暖通设计 “置”配置：水电、设备装备
精选2021版课件
3
国家关于PCR实验室建设及管理的现行技术规范和标准
*《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发 2010 194号 *《临床实验室设计总则 》GBT-20469-2006 *《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》 *《临床基因扩增检验实验室工作规范》 *《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 *《生物安全实验室建筑技术规范》 GB50346-2011 *《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008 *《洁净厂房设计规范》GB50073-2013 *《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS233-2002 *《实验室生物安全手册 》世界卫生组织 *《实验室生物安全认可准则》CNAS-CL05
PCR实验室的基本设备与要求
PCR实验室的基本设备与要求临床基因扩增检验实验室管理暂行办法第一章总则第一条为规范临床基因扩增检验实验室管理;保证临床基因扩增检验质量;使临床诊断和治疗更为科学、合理;特制定本办法..第二条临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的;以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术;如聚合酶链反应PCR、连接酶链反应LCR、转录依赖的放大系统TAS自主序列复制系统3SR和链替代扩增SDA等..第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验的实验室..临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院..第四条临床基因扩增检验实验室必须使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目..第五条卫生部临床检验中心以下简称卫生部临检中心和省、自治区、直辖市临床检验中心以下简称省临检中心负责对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验室的质量监督管理工作.. 第二章实验室设置和验收第六条拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》见附件筹建实验室；筹建完成后;由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请..申请时需提交以下材料：一《医疗机构执业许可证》复印件；二可行性研究报告；1、拟设临床基因扩增检验实验室机构的所在地医疗卫生资源状况、本机构的基本情况、对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增实验室运行的预测分析；2、拟设临床基因扩增检验实验室的设置平面图；3、拟设临床基因扩增检验实验室将开展的检验项目、实验设备条件和有关技术人员资料第七条卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组以下简称专家组;按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收..验收完成后;在20日内将验收报告寄送至申请机构..第八条经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案..在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门后15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见;方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目..第九条未经专家组验收合格并报省级卫生行政部门备案的医疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验项目..第三章实验室监督管理第十条临床基因检验实验室必须按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》另发开展临床基因扩增检验工作..第十一条临床基因扩增检验实验室技术人员必须进行上岗培训..经培训合格者;由培训单位发给合格证书;并将培训合格人员名单报卫生部临检中心备案..获得培训合格证书者方可从事临床基因扩增检验工作..培训单位为卫生部临检中心;或由省级卫生行政部门指定并经卫生部临检中心认定的机构..培训时使用规定的统一教材..第十二条以科研为目的的基因扩增检验项目..不得向临床出具检验报告;不得向病人收取任何费用..第十三条临床基因扩增检验实验室必须按照《临床基因扩增实验室工作规范》开展室内质量控制;并参加卫生部临检中心组织的室内质量评价..第十四条卫生部临检中心按照本方法和《临床基因扩增实验室工作规范》协调、组织省临检中心对临床基因扩增检验实验室的检验质量进行监测..监测结果报省级卫生行政部门;同时抄送被监测的临床基因扩增检验实验室所在医疗机构..第十五条卫生部临检中心或省级临检中心受省级以上卫生行政部门委托可对临床基因扩增检验实验室进行现场检查;现场检查工作人员在履行职责时应出示证件..在进行现场检查时;检查人员有权调阅有关资料;被检查机构不得拒绝或隐瞒..第十六条卫生部临检中心对在室间质量评价中不合格的临床基因扩增检验实验室提出警告;对连续二次或三次中有二次发现临床基因扩增检验结果不合格的临床基因扩增检验实验室;卫生部临检中心报省级以上卫生行政部门由省级以上卫生行政部门责令其暂停有关临床基因扩增检验项目;限期整改..经专家组进行再次技术验收并合格;并报省级卫生行政部门核准后;方可重新开展临床基因扩增检验项目..第十七条对于未经卫生部临检中心组织的专家组技术验收合格并报省级卫生部门备案;擅自开展临床基因检验项目的医疗机构;由省级卫生行政部门依据《医疗机构管理条例》第四十七条和《医疗机构管理条例实施细则》第八十条予以处罚;并予以公告..公告所需费用由被公告机构支付..第十八条出现下列情况之一的临床基因扩增检验实验室;由省级卫生行政部门责令其停止开展临床基因扩增检验;并对其所在医疗机构予以公告..公告所需费用由被公告机构支付：一开展超出卫生部临检中心组织的技术验收合格并报省级卫生行政部门备案临床基因扩增检验项目的；二使用未经国家药品监督管理局批准的试剂开展临床基因扩增检验的；三在临床基因扩增检验中未开展室内质量控制的；四在临床基因扩增检验中未参加室间质量评价的；五在临床基因扩增检验中弄虚作假的；六以科研为目的的基因扩增检验项目向病人收取费用的；七使用未经培训合格的专业技术人员从事临床基因扩增检验的；第四章附则第十九条对采供血机构的基因扩增检验实验室开展基因扩增检验项目的管理;参照本办法执行..第二十条卫生部临检中心组织的专家组对申请开展临床基因扩增检验的实验室进行技术验收所需费用按国家有关规定执行..第二十一条本办法由卫生部负责解释..第二十二条本办法自发布之日起施行..附：临床基因扩增检验实验室基本设置标准根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》;制定本标准一、临床基因扩增检验实验室区域设置原则一临床基因扩增检验实验室区域设置原则1、试剂储存和准备区2、标本制备区3、扩增反应混合物配制和扩增区4、扩增产物分析区如使用全自动分析仪;区域可适当合并..二各工作区域必须有明确的标记;避免不同工作区域内的设备、物品混用..三进入各工作区域必须严格按照单一方向进行;即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区..四不同的工作区域使用不同的工作服例如不同的颜色..工作人员离开各工作区域时;不得将工作服带出..二、工作区域仪器设备配置标准一试剂储存和准备区1、2-8C和-15C冰箱2、混匀器3、微量加样器覆盖1-1000ul4、移动紫外灯近工作台面5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头带滤心6、专用工作服和工作鞋7、专用办公用品二标本制备区1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2、高速台式冷冻离心机3、混允器4、水浴箱或加热模块5、微量加样器覆盖1-1000ul6、可移动紫外灯近工作台面7、超净工作台8、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头带滤心9、专用工作服和工作鞋10、专用办公用品如需处理大分子DNA;应具有超声波水浴仪..三扩增反应混合物配制和扩增区1、核酸扩增仪2、微量加样器覆盖1-1000ul3、可移动紫外灯近工作台面4、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头带滤心5、专用工作服和工作鞋6、专用办公用品四扩增产物分析区视检验方法不同而定..基本仪器设备如下：1、微量加样器覆盖1-1000ul2、可移动紫外灯近工作台面3、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头带滤心4、专用工作服和工作鞋5、专用办公用品临床基因扩增检验实验室工作规范为使基因扩增检验技术有效地应用于临床;更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务;保证检验质量;特制定本规范..一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》卫医发200210号文附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》..为避免污染;必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室..临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备..各区域都必须有明确的标记;以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆..进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序;即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区简称扩增区至产物分析区;避免发生交叉污染..在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服;以便于鉴别..此外;当工作者离开工作区时;不得将各区特定的工作服带出..清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因;因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行..不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染..一试剂贮存和准备区下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备..贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区;不能经过产物分析区..在打开含有反应混合液的离心管或试管前;应将其快速离心数秒..试剂原材料必须贮存在本区内;并在本区内制备成所需的贮存试剂..当贮存试剂溶液经检查可用后;应将其分装贮存备用;避免由于经常打开反应管吸液而造成污染..含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒..大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存..为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂;应分装冰冻贮存试剂溶液..贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定..主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查;评价结果必须有书面报告..对于"热启动"技术在第一个高温变性步骤后加入酶;聚合酶也可不包含在主反应混合液中..在整个本区的实验操作过程中;操作者必须戴手套;并经常更换..此外;操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施..严禁用嘴吸取液体;加样器和吸头等必须经高压处理..工作结束后必须立即对工作区进行清洁..本工作区的实验台表面应可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用..实验台表面的紫外照射应方便有效..由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键;因此可使用可移动紫外灯254nm波长;在工作完成后调至实验台上60~90cm内照射..由于扩增产物仅几百bp;对紫外线损伤不敏感;因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间;最好是照射过夜..实验室及其设备的使用必须有日常记录..二标本制备区下述操作在该区进行：临床标本的保存;核酸RNA、DNA提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成..要正确使用加样器..由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染;所以应避免在本区内不必要的走动..可通过在本区内设立正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染..为避免样本间的交叉污染;加入待测核酸后;必须盖好含反应混合液的反应管..对具有潜在传染危险性的材料;必须有明确的样本处理和灭活程序..用过的加样器吸头必须放入专门的消毒例如含次氯酸钠溶液容器内..实验室桌椅表面每次工作后都要清洁;实验材料原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等如出现外溅;则必须分别处理并作出记录..对实验台适当的紫外照射254nm波长;与工作台面近距离适合于灭活去污染..可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台面的充分照射..样本处理对核酸扩增有很大影响;必须使用有效的核酸提取方法;可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价..用于RNA扩增检测的样本制备好以后;应立即进行cDNA合成;因为cDNA链较RNA稳定;保存相对容易..为保证逆转录反应的需要;应在标本制备区设置一个以上的温育装置..cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定;倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录;其较cDNA合成后再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低..待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区;不得在本区对样本进行PCR扩增..三扩增区下述工作在本区内进行：DNA或cDNA扩增..此外;已制备的DNA模板和合成的cDNA来自样本制备区的加入和主反应混合液来自试剂贮存和制备区制备成反应混合液等也可在本区内进行..在巢式PCR测定中;通常在第一轮扩增后必须打开反应管;因此巢式扩增有较高的污染危险性;第二次加样必须在本区内进行..不能从本区再进入任何"上游"区域;可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出..为避免气溶胶所致的污染;应尽量减少在本区内的走动..如有加样则应在超净台内进行..打开预处理过的反应混合液时必须防止液体溅出;尤其是在巢式扩增步骤之间..一个简单的方法是在打开反应管前快速离心数秒..可使用体积较小的离心机;因其所占实验台面小;易于用一只手操作;适合于大多数超净台..防潮屏障如石蜡油或轻矿物油也具有防污染作用;但必须注意的是;矿物油本身也可能成为一种持续性的污染源..用过的加样器必须注意清洁消毒..完成操作及每天工作后都必须对实验室台面进行清洁和消毒;紫外照射方法与前面区域相同..如有溶液溅出;必须处理并作出记录..四扩增产物分析区下述操作在本区内进行：扩增片段的测定..核酸扩增后产物的分析方法多种多样;如膜上或微孔板上探针杂交方法同位素标记或非同位素标记、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法等..目前国内的商品试剂盒绝大部分均采用非同位素标记的微孔板上探针杂交方法;即PCR-ELISA方法;也有膜上探针杂交方法..本区是最主要的扩增产物污染来源;因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出..在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时;必须使用洗板机洗板;废液必须收集至1mol/L HC1中;并且不能在实验室内倾倒;而应至远离PCR实验室的地方弃掉..用过的吸头也必须放至1mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理;如焚烧..由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等;故应注意实验人员的安全防护..本区的清洁消毒和紫外照射方法同前面区域..本区如采用负压条件或减压情况下如安装排风扇可减少扩增产物从本区扩散至前面区域的可能性..二、临床基因扩增检验实验室质量保证临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩增检验的所有阶段;即测定分析前的标本采集处理、测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告等..一标本的采集常用于基因扩增检测的临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等..采血液等样本时;应使用一次性密闭容器;如真空采血管..当使用非密闭采样系统时;如尿、分泌物和骨髓的采样;必须注意防止来自采样者的皮屑或分泌物的污染..采样时必须戴一次性手套..玻璃器皿在使用前应高压处理;因为玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶..最好是热灭菌;250℃烘烤4小时以上可使RNA酶永久性失活..全血和骨髓标本必须进行抗凝处理..EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂..不能使用肝素抗凝;因为肝素是Taq酶的强抑制剂;而且在其后的核酸提取步骤中很难去除..临床用于RNA如HCV RNA扩增检测的血标本建议进行抗凝处理;并尽快3小时以内分离血浆;以避免RNA的降解..如未作抗凝处理;则抽血后;必须在1小时内分离血清..二标本的稳定化处理用于DNA扩增检测的标本;采集后一般不需要特殊的稳定化处理;但标本应及时送至实验室..由于RNA易受RNA酶的降解;因此用于RNA测定的标本有时必须进行稳定化处理;如流行病学调查的现场采样..异硫氰酸胍盐Guanidine thiocyanate;GITC可使DNA酶和RNA酶立即失活;因此在采集标本时;可将标本材料如血清或血浆按1:4的比例加至含有5mol/L GITC的试管中;从而使血清浆中的RNA酶不可逆失活..经上述稳定化处理后;标本一般不需要冷藏即可邮寄..对于特定的检测项目;上述稳定化处理方法的效果究竟如何;要使用相应的逆转录PCR测定方法来评价..三标本的运送标本采集后必须尽快送至实验室..经过适当稳定化处理的标本可在常温下通过邮寄运送..如用于DNA扩增检测的EDTA抗凝全血标本及用于RNA扩增检测的经GITC稳定化处理的标本..通常在运送时;应采用不易破碎的容器装载标本..用于RNA检测的标本;如果未经稳定化处理;则必须速冻后;放在干冰中运送..四标本的贮存临床体液标本如血清/血浆等可于-70℃下长时间贮存..用于DNA测定的已纯化核酸样本可在10mmol/L Tris-1 mmol/L EDTA缓冲液pH 7.5-8.0中4℃保存..用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中-80℃或液氮中贮存..用乙醇沉淀的核酸样本贮存在-20℃即可..用GITC处理的RNA标本在室温可保存7天..五标本的处理核酸提取标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤;在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前;应对其进行充分评价以验证其提取的有效性..通常;核酸制备质量不高是由于抑制物去除不完全所致;抑制物可能来源于标本本身如血红素及其前体或降解产物或核酸提取过程中残留的有机溶剂如酚、氯仿等;这些物质对其后的Taq酶扩增反应步骤具有强烈的抑制作用;从而影响靶核酸的扩增测定..当标本为痰时;则必须先进行液化处理;再提取核酸..需注意的是;液化时不能加热;液化时间不能过长..此外;当靶核酸为RNA 时;逆转录PCR测定失败的常见原因是标本在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的RNA酶的污染..对于前者;要核查测定分析前的步骤;如果发现有RNA降解的证据;实验室则应拒绝接受标本;要求重新采取标本;并对运送者给以详细的指导..对于后者;建议使用高质量的商品核酸提取试剂..六靶核酸的逆转录RT和扩增1、靶RNA的逆转录cDNA合成为逆转录PCR中的第一个酶反应步骤;所产生的cDNA为靶RNA的反向互补链;为后面扩增的模板..下述因素通常影响cDNA合成的效率：1逆转录效率的降低或完全缺乏..其可能的原因有逆转录酶质量不高、试剂降解变质或加样错误等；2用于逆转录的标本中存在逆转录或Taq酶的抑制物如酚、氯仿、血红素等；3RNA酶的存在导致RNA的降解..2、核酸的扩增有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果;如扩增靶核酸中抑制剂存在、Taq 酶失活、退火温度不对、Mg++浓度不佳、患者标本或试剂受污染等..扩增仪孔中热传导的均一性极为重要;必须定期对扩增仪的温度控制和加热模块中热传导的一致性进行检查;以避免假阴性结果..七污染在实际工作中;常见有以下几种污染类型：扩增片段的污染产物污染；天然基因组DNA的污染、试剂污染贮存液或工作液以及标本间交叉污染如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本..临床基因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染..由于一旦发生污染后;再围绕实验室来寻找污染源不仅耗时而且还很繁琐;所以防止污染重在预防..但如果发生了污染;实验就必须停止;直到发现了污染源为止;并且实验结果必须作废..1、测定分析前的污染源测定分析前实验材料的污染主要来自非病人标本来源的核酸..2、测定分析阶段的污染源通常;测定分析阶段的每一步都可能发生对样本的污染..反应混合液的任何成分及核酸的制备和反应建立阶段所涉及到的实验设备的任何部位都是可能的污染源..如受污染的试剂例如牛血清白蛋白;明胶或矿物油、商品酶制剂、消耗品如反应管;吸头和实验设备如加样器、离心机等..在前面三个工作区中;不当的实验操作会引起所使用的试剂、消耗品或实验设备的污染..而在产物分析区;当吸取扩增产物用于检测时;非常容易引起污染;因此必须制定标准操作程序SOP;并严格执行..3、污染的避免要避免污染;首先应是预防而不是排除污染;前面所述对工作区的严格划分的目的即是为了预防污染..为避免以前测定中所产生的扩增产物的污染;可设法将其破坏掉..如在扩增反应中用dUTP 取代部分dTTP;使得产生的特异扩增片段含有尿嘧啶;这样扩增前在反应混合液中加入尿嘧啶糖苷酶UNG;可破坏来自以前测定的扩增产物;从而避免其对以后要进行的扩增测定的污染..另外一种方法是持续的长波紫外灯照射;通过异补骨脂素光化学产生DNA加合物;由于DNA加合物对扩增没有反应但又不妨碍PCR后杂交过程;所以这种方法也能防止污染..上述防污染方法只在一定程度上有效;所以不能用其来替代严格的实验室设置和管理;尤其是这些方法不能防止外来非扩增的天然DNA的污染..4、去除污染的措施工作完后必须定期对实验室采取有效的去污染措施;结合各种不同的方法可达到最佳效果..去污染措施包括但不仅限下面几种：1用10%v/v次氯酸钠清洁表面；2试验后长时间的紫外照射实验操作台面和其他表面；3实验设备如加样器的高压消毒..八扩增产物的分析扩增产物的测定有各种方法;如电泳、限制性酶切、斑点印迹、探针杂交、测序、分光光度法定量等;但临床PCR检验项目基本上都使用探针杂交方法..杂交结果不充分的原因可能是基因探针不合适、标记方法不对、对探针的标记不够、杂交或洗涤方法不合适等..最常使用的基因探针有：DNA片段、合成的寡核苷酸和体外转录的反义RNA探针..探针的标记物常用的有生物素、地高辛、荧光素和同位素等..在扩增后的杂交检测中; 应该严格遵守商品试剂盒确定的杂交程序和杂交条件..温度太低。
PCR实验室要求
P C R实验室设计要求及功能分区PCR实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出，四区域分别为：1.试剂配制区n2.样品处理区n3.核酸扩增区n4.产物分析区n如使用全自动分析仪，区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是：1.1.1试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。
1.1.3扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。
1.3使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内：1.4.1在生物安全柜内操作。
1.4.2每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求：PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。
完成一组PCR实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成独立实验区域的形式。
对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
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其他依据
《生物安全实验室建筑技术规范》
GB/T 50346-2004
《洁净室施工及验收规范》
JGJ 71-1990
《民用建筑电气设计规范》
JGJ 16-2008
《建筑电气工程施工质量验收规范》
GB 50303-2002
《建筑给水排水设计规范》
GB 50015-2003
《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》 GB 50242-2002
《生物安全实验室建筑技术规范》 GB 50346-2011
微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 WS 233-2002
？
什么是上送下排？
吊顶 地面
排风口要求？
排风口要求？
微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 WS 233-2002
如何控制送排风系统？
实验室气密性如何检测评价？
临床实验室设计总则 GB/T 20469-2006
实验室 生物安全通用要求GB 19489-2008
三.PCR实验室配置 水电、设备装备
1.PCR实验室配置依据
依据《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》
2.工作区域仪器设备配置标准
试
主要功能
剂
试剂的制备和贮存 试剂的分装
储
主反应混合液的制备
存 和 准 备 区
设备配置 2-8℃和-15℃冰箱 混匀器 微量加样器（覆盖1-1000ul） 移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、 耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）
门
扩增和产 物分析区
其他实 验室
试剂准 备区
其他实 其他实
验室
验室
空气流向
走
空气流向
走
廊
廊
其他实 验室标本制来自备区其他实 其他实 其他实
验室
验室
验室
2.临床PCR实验室的工作流程
试剂准备区 标本制备区
扩增区 产物分析区
3.通风
理想的PCR实验室通风模式A
理想的PCR实验室通风模式B
通风方式
临床实验室设计总则 GB/T 20469-2006
专用工作服和工作鞋 专用办公用品
标本制备区
主要功能 核酸(RNA、DNA)提取、贮存 扩增反应管的制作
设备配置 2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱 高速台式冷冻离心机 混匀器 水浴箱或加热模块 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 生物安全柜 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理
的离心管和加样器吸头（带滤心） 专用工作服和工作鞋 专用办公用品
扩增产物分析区
主要功能 扩增片段的测定
设备配置 视检验方法不同而定。基本仪器设备如下： 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带 滤心） 专用工作服和工作鞋 专用办公用品
《采暖通风与空气调节设计规范》
GB 50019-2003
《通风与空调工程施工质量验收规范》
GB 50243-2002
《建筑装饰装修工程质量验收规范》
GB50210-2001
“对于涉及临床样本的操作，应符合 生物安全二级实验室防护设备、个人防护 和操作规范的要求。”
BSL-2
首先PCR实验室要符合 生物安全二级要求！
二.PCR实验室设计 布局、暖通设计
1.布局 标准四个分区
使用实时荧光PCR仪，扩增区、 产物分析区可合并
扩增 区
门
产物分 析区
标本制 门 备区
门
试剂准 备区
门 外走
门
廊
标本 制备 区
试剂准 备区 门
门
空气 流向
扩增 及产 物分 析区
门
门
扩增及产 物分析区
标本制备 区
门
试剂准备 区
门
门
外走廊
5.实验室生物安全认可准则 CNAS CL02
6.实验室生物安全手册
世界卫生组织2004
这么多标准，参照哪个？
*《临床实验室设计总则 》GB/T 20469-2006 *《生物安全实验室建筑技术规范》 GB 50346-2011 *《实验室生物安全通用要求》GB 19489-2008 *《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS 233-2002 *《实验室生物安全手册 》世界卫生组织 2004 *《实验室生物安全认可准则》CNAS-CL05 2015
临床PCR实验室基本设置要求
张琼 2017年PCR上岗证
内容
一.设置依据 二.PCR实验室设计 三.PCR实验室配置
一.设置依据
设置 “设”设计：布局、暖通设计 “置”配置：水电、设备装备
国家关于PCR实验室建设及管理的现行技术规范和标准
*《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发 2010 194号 *《临床实验室设计总则 》GBT-20469-2006 *《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》 *《临床基因扩增检验实验室工作规范》 *《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》 *《生物安全实验室建筑技术规范》 GB50346-2011 *《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008 *《洁净厂房设计规范》GB50073-2013 *《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS233-2002 *《实验室生物安全手册 》世界卫生组织 *《实验室生物安全认可准则》CNAS-CL05
7.医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
内容节选：
一.临床基因扩增检验实验室的设计 （一）临床基因扩增检验实验室区域设计规划。原则 上临床基因扩增实验室应当设置以下区域：试剂储存 和准备区，标本制备区，扩增区，扩增产物分析区。 这四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完 全的分割状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪 器的功能，区域可适当合并。如使用实时荧光PCR仪， 扩增区，扩增产物分析区可合并；采用标本处理，核 酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制 备区，扩增区，扩增产物分析区可合并。
1.临床实验室设计总则 GB/T 20469-2006
2.《生物安全实验室建筑技术规范》 GB 50346-2011
2.《生物安全实验室建筑技术规范》 GB 50346-2011
3.实验室 生物安全通用要求GB 19489-2008
4.微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 WS 233-2002
的离心管和加样器吸头（带滤心） 专用工作服和工作鞋 专用办公用品 如需处理大分子DNA，应具有超声波水浴仪
扩增反应混合物配置和扩增区
主要功能 DNA或cDNA扩增
设备配置 核酸扩增仪 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理
《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》
3.水电要求
临床实验室设计总则 GB/T 20469-2006
采血室
采血室
采血室
谢 谢！