蛋白质测试
检验蛋白质的方法及现象
检验蛋白质的方法及现象检测蛋白质的方法有：1、分子量测定法：通过把蛋白质以某种介质流动，使其迅速穿越一定粒径的离子交换层，然后采取液相色谱法测定相应蛋白质的分子量，从而求出特定蛋白质的特征分子量。
2、凝胶电泳：是将蛋白质在 LED-偶联法分子量鉴定，是采用激光电子捕获和驱动，蛋白质和急性偶联物组合结合，以生产一种特殊的类聚多糖化合物，达到电泳分离蛋白质的目的。
3、蛋白质的细胞测定：通过把蛋白质放到不同浓度的离子条件下，以细胞技术手段测定蛋白质的稳定性和可被抑制的性能。
4、体外模拟实验：将不同比例的蛋白质与某种固定化剂混合，模拟体内条件，以测定蛋白质的稳定性和特异性。
5、放射性标记：把蛋白质结合放射性标记的药物标记物，然后使用凝胶电泳，紫外可见光谱等方法测定放射性标记的标记物显示的服用蛋白质的分布和定量，从而评价蛋白质的质量。
6、 DNA 分子测定：采用高效液相色谱法，把蛋白质代谢到个体 DNA 分子中，测试DNA 分子的碱性度，判断蛋白质含量。
7、蛋白质安定性分析：利用数据库软件（如Bridge），研究蛋白质在体外条件及温度、pH值、盐浓度、有机溶剂含量及催化剂等共表征环境中作用时，结构安定性的变化。
蛋白质性现象：1、可均质性降解及易损质：蛋白质对热、酸、碱、抗生素等有不同的稳定性，受物理化学作用的刺激，无论是天然的还是添加的成分，均可使其酶聚及脱氨键，影响溶解性。
2、亲和性：蛋白质分子由于其胞内的环境不同，构成不同的分子结构状态，各种实验条件的变化，均会影响蛋白质的亲合力，从而导致其亲合性的变化。
3、可流动性：蛋白质分子和结构会受到它们离子和结构性结合能力等因素的影响，当环境条件改变时，蛋白质分子之间的排斥力发生增大，从而减少可流动性。
4、免疫原性：由于蛋白质本身的分子结构和结合特性，出现不可逆的结构变化尤其是连锁反应，导致其免疫原性大大增强，从而产生特异性抗体。
5、细胞毒性：在一定条件下，蛋白质被细胞直接吸收，可抑制细胞的生理和代谢活动，使细胞破坏，从而产生细胞毒性。
蛋白质的测定方法—凯氏定氮法
蛋白质的测定方法—凯氏定氮法一、原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
二、试剂1、硫酸铜硫酸钾浓硫酸氢氧化钠2、硼酸溶液（20g/L）：称取20g硼酸，加水溶解并稀释至1000ml。
3、氢氧化钠溶液（400g/L）：称取400gNaOH加水溶解后，放冷，并稀释至1000ml。
4、盐酸标准溶液（0.05mol/L）5、甲基红乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml。
6、溴甲酚绿乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml。
7、甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：临用时以1:5混合。
三、测定1、试样处理（消化）：准确称取水解胶原蛋白0.5g,准确至0.0001g，硫酸铜0.2g，硫酸钾6g于干燥洁净的凯氏定氮管中，至消化炉上，加浓硫酸20ml，盖帽。
开启消化炉（温度设定为400℃），仪器大约20分钟达到设定温度，开始计时，样品消化需2-3h，至液体呈蓝绿色并澄清透明后。
断电，放冷。
2、蒸馏与吸收：将消化好的试样转移至100ml容量瓶中，加水（边加边缓慢振摇容量瓶，由于样品放热，操作时戴手套以免烫伤）稀释至100ml容量瓶中，摇匀，备用。
同时做空白试验。
向接收瓶中加入硼酸（20g/L）50ml及10D甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。
打开凯氏定氮仪电源开关，打开冷却水，设置加碱（40%的NaOH 溶液）时间为7秒，蒸馏时间为6分钟，取定容后溶液10ml到消化管中，放置到相应位置。
关闭安全门，开机预热3分钟后按启动键开始加碱、蒸馏。
当吸收液呈中性时，停止吸收。
用0.05mol/L盐酸标准液滴定接收液，颜色由绿色变为灰红色即为滴定终点，记录消耗盐酸体积。
3、计算C*(V1-V0)*0.014X=----------------------*F*100M*10/100其中水解胶原蛋白换算系数F为5.791、注意事项1、开机预热3分钟，第一个样品测试用蒸馏水代替样品，加碱时间设置为0，使仪器预热。
蛋白质含量的测定方法
蛋白质含量的测定方法蛋白质是生物体内重要的营养成分，对于人体的生长发育和健康维护起着重要的作用。
因此，准确测定食品、药物、生物样品中的蛋白质含量，对于保障食品安全和科学研究具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法，供大家参考。
首先，常用的蛋白质含量测定方法之一是比色法。
比色法是通过蛋白质与某种试剂发生化学反应，产生有色产物，再利用光度计测定产物的吸光度来间接测定蛋白质含量。
其中，最常用的试剂是布拉德福试剂和伯尼斯试剂。
这种方法操作简便，测定结果准确，因此被广泛应用于食品、生物样品的蛋白质含量测定。
其次，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是比浊法。
比浊法是通过蛋白质与某种试剂发生沉淀反应，根据沉淀的浑浊度来测定蛋白质含量。
常用的试剂有硫酸铵和三氯乙醛。
比浊法操作简便，成本低廉，适用于大批量样品的测定。
另外，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是氨基酸分析法。
氨基酸分析法是通过水解蛋白质，然后利用色谱仪或氨基酸分析仪测定水解产物中各种氨基酸的含量，从而计算出蛋白质的含量。
这种方法对于蛋白质的成分分析非常准确，但操作复杂，需要专业设备和技术支持。
最后，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是生物素标记法。
生物素标记法是将生物素标记在蛋白质分子上，然后利用生物素与酶的特异性结合来测定蛋白质含量。
这种方法对于高灵敏度的蛋白质测定非常有效，但需要专门的标记试剂和设备支持。
总之，蛋白质含量的测定方法有很多种，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际应用中，需要根据样品的特点和实验条件选择合适的测定方法，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的几种常用方法能够为大家在蛋白质含量测定方面提供一些帮助。
蛋白质含量测定方法汇总[整理]
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蛋白质含量测定方法汇总[整理]蛋白质含量测定是一种用于测定任何生物样品中蛋白质含量的有效测试方法。
此外，蛋白质含量也可以被用于检测不同生物样品中的样本污染程度的指标，以及生物样品中某种从另一个样本污染的量。
现今，存在许多蛋白质含量测定的方法，通常称作“蛋白质测定方法”，它们常用于检测各种类型的高分子生物物质，如蛋白质、核酸、多糖、脂类等。
下面总结了一些常见的蛋白质含量测定方法：1、分子吸光法：分子吸光法是一种常用的蛋白质测定方法，它利用液体或气体样品中分子的光吸收特性来测量蛋白质的含量。
它通过测量样品当量吸收辐射的强度来测量含量，并通过分子结构及激发能获取分子吸收率。
2、酶标法：酶标法是一种常见的蛋白质测定方法，它使用特定酶将蛋白质转化为可测试物质来准确估算样品中蛋白质含量。
此外，也可以用其他物质作为指示物来改变酶反应的速率，从而获取蛋白质含量。
3、体外测定法：体外测定法是一种常见的蛋白质测定方法，它可以任意选择探测，即特定蛋白质向特定外部刺激物反应的速率，以反映样品中的蛋白质含量。
它在分析较新的样品以及批量定量分析中有很大的优势。
4、表面增强拉曼光谱：表面增强拉曼光谱是一种新的蛋白质测定方法，它利用光的调制前后产生的均方根像素来测量蛋白质的含量，这种方法可在低浓度范围内准确定量样品中的蛋白质含量。
5、比多肽配体应答行为水平测定：比多肽配体应答行为水平是一种常见的蛋白质测定方法，它利用特指性多肽核酸探针乙酰化后，在特定条件下发生应答强度及反应速率的改变，从而测量样品中的蛋白质含量。
这是一种可以在短时间内实现高灵敏度和高精度的测定方法。
6、限制性酶体系：限制酶体系是一种常见的蛋白质测定方法，它利用限制性酶来切割或降解蛋白质链，从而得到可用于测定蛋白质含量的切片产物。
限制酶体系也能够有效地检测末端特异性蛋白质种类，以及它们的分布情况。
蛋白质检测操作规程最新
蛋白质检测操作规程最新《蛋白质检测操作规程》一、实验室安全操作规程1. 实验室应具备必要的安全设施，如安全淋浴器，消防器材，急救箱等。
2. 操作人员应穿戴好实验室服装、手套和护目镜，并在操作过程中避免接触有害物质。
3. 实验室内禁止饮食，操作台面应保持清洁整洁，避免交叉污染。
二、蛋白质检测操作规程1. 样品准备：取得待测样品，根据要求进行样品制备，如细胞抽提、蛋白质提取等。
2. 蛋白质浓度检测：采用比色法或荧光法等方法，测定待测样品中蛋白质的浓度，并根据需求稀释样品。
3. 凝胶电泳：将待测蛋白质样品加入凝胶样品槽，进行蛋白质分离，检测蛋白质的分子量。
4. Western blot：将分离的蛋白质转移到膜上，然后用特异性抗体探测需要的蛋白质。
5. 结果分析：根据Western blot结果，判断目标蛋白质的表达情况，经过定量分析，得出相应的实验数据。
三、实验记录和报告1. 操作人员应记录实验的详细过程、使用的试剂和仪器型号、操作步骤、实验数据等内容。
2. 实验完成后，应将实验记录整理成报告，包括实验目的、原始数据、结果分析和结论等部分。
四、仪器设备维护和清洁1. 实验后及时清洁和消毒使用过的实验仪器和设备，确保下次使用前的卫生安全。
2. 定期对实验室仪器进行检查和维护，保证仪器正常使用。
五、结果存档和数据管理1. 所有实验记录和报告要有相应的存档，并按照规定的时间要求保存。
2. 实验数据的管理应该做好备份，并防止数据丢失或篡改。
通过以上《蛋白质检测操作规程》，实验室可按照规程科学、规范的开展蛋白质检测工作，确保实验数据的准确性和实验室的安全运行。
蛋白质含量的测试方法
蛋白质含量的测试方法蛋白质是生物体生命活动所必需的重要营养物质之一、了解食物中蛋白质的含量对于饮食调控和营养评估非常重要。
蛋白质含量的测试方法可以根据不同的样品性质和需要，选择合适的方法进行定量分析。
以下将介绍几种常见的蛋白质含量测试方法。
一、低里氏试剂法低里氏试剂法是目前最常用的蛋白质含量测试方法之一、该方法利用氢氧化钠（NaOH）/硫酸铜（CuSO4）/低里氏试剂进行蛋白质的量化分析。
具体操作步骤如下：1.将待测样品溶解于含有氢氧化钠的试液中，加入硫酸铜和低里氏试剂。
2.进行加热反应，使还原蛋白质与低里氏试剂发生比色反应。
3.通过比色计（常见的是分光光度计）测定试液的吸光度，并与标准曲线对照，计算出样品中蛋白质的含量。
二、布拉得福法布拉得福法是另一种常用的蛋白质定量方法。
该方法利用显色剂最鲁丁（Coomassie Brilliant Blue G-250）与蛋白质分子之间的相互作用来定量测定蛋白质含量。
具体操作步骤如下：1.将待测样品与显色剂最鲁丁充分混合，并保持一定时间使其反应发生。
2.使用比色计测定混合液的吸光度，通过与标准曲线对照，计算出蛋白质的含量。
布拉得福法相对于低里氏试剂法更为敏感，对大多数蛋白质都有较好的定量效果。
三、生物素结合法生物素结合法是一种利用亲和力层析技术测定蛋白质含量的方法。
该方法基于生物素和亲和层析树脂之间的结合作用，通过测定结合蛋白质与酶标记物之间的信号强度，来定量测定蛋白质的含量。
具体操作步骤如下：1.将待测样品与含有生物素键合的亲和层析树脂充分混合，并进行孵育反应。
2.经过层析分离后，将酶标记物加入，通过测定酶标记物与生物素之间的信号强度，计算出蛋白质的含量。
生物素结合法一般适用于高通量的蛋白质含量测定，具有灵敏度高、准确度高的特点。
四、生物学方法在蛋白质含量测定中，生物学方法也具有一定的重要性。
例如，利用生物学方法如酶活性测定、氨基酸组分测定等，可以间接推测蛋白质的含量。
培训：食品中蛋白质的测定GB_5009.5-2010
蛋白质概况
➢ 蛋白质是含氮的有机化合物，分子量很大。主要由C、H、 O、N、S五种元素组成。某些蛋白质中还含有微量的 P、 Cu、Fe、I 等。
蛋白质检测方法简介
➢ 目前国家标准中用于检测食品中蛋白质的方法共有三 种：
1、凯氏定氮法（适用于各种食品中蛋白质的测定） 2、乙酰丙酮分光光度法（适用于各种食品中蛋白质的测 定） 3、燃烧法（适用于蛋白质含量在10 g/100 g 以上的粮食、 豆类、奶粉、米粉、蛋白质粉等固体试样的筛选测定）
➢ 不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质 的食品测定。
蛋白质检测方法简介
➢ 4、近红外光谱技术是20世纪80年代后期迅速发展起来 的一项物理测试技术。近红外透射或反射光谱具有分 析样品用量少、分析速度快和结果稳定等优点，在食 品分析领域已经逐步得到了应用。
➢ 5、杜马斯燃烧法比凯氏定氮法还早，近年来杜马斯燃 烧法测定饲料、肥料等农产品中氮含量在我国也有了 应用。
第一法：凯氏定氮法
➢ 原理：食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使 蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱 化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或者盐酸标准滴 定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白 质的含量。其反应方程式如下：
➢ 蛋白质+ H2SO4 → （NH4） 2SO4 ➢ （NH4）2SO4+NaOH=NH4OH+Na2SO4 ➢ NH4OH → H2O + NH3 → NH4OH ➢ NH3+(标准) H2SO4→（NH4）2SO4 ➢ (标准) H2SO4+NaOH→Na2SO4+H2O
蛋白质的速测技术—考马斯亮蓝法(Bradford法)和考马斯亮蓝速测管法
蛋白质的速测技术—考马斯亮蓝法(Bradford法)和考马斯亮蓝速测管法1．速测原理考马斯亮蓝法(Bradford法)按照蛋白质与染料相结合的原理设计。
G250(Coomassie G250)是一种甲基取代的，分子中磺酸基的蓝色染料。
考马斯亮蓝G250能与蛋白质通过范德华互相作用形成蛋白质-考马斯亮蓝复合物青蓝色溶液，在595nm处有最大汲取值，复合物溶液色彩的深浅与蛋白质的浓度成正比。
Bradford法敏捷度高，最低测试蛋白质量在1ug左右；测定迅速、简便，只需加1种试剂。
完成一个样品的测定，只需5 min左右。
因为染料与结合的过程，大约只要2min即可完成，其色彩可以在1h内保持稳定，且在5～20min之间，色彩稳定性好。
这种蛋白质测定法具有突出优点，正在得到广泛应用。
2．速测范围利用溶液色彩的差异举行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析，尤其适合于稀少蛋白质的微量分析。
3．试剂与材料 (1)标准蛋白质溶液。
用球蛋白G或牛血清清蛋白(BSA)，配制成1.0mg/mL和0.1mg/mL的标准蛋白质溶液。
(2)考马斯亮蓝G-250染料试剂。
称100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 95％的后，再加入120mL 85％的，用水稀释至1L。
(3)器材：可见光分光光度计，旋涡混合器，试管16支。
4．速测步骤 1)标准办法 (1)取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按挨次分离加入样品、水和试剂，即用1.0mg/mL的标准蛋白质溶液给各试管分离加入：0、0.01、0.02、0.040、0.06、0.08、0.1mL，然后用无离子水补充到0.1mL。
最后各试管中分离加入5.0mL考马斯亮蓝G-250试剂，每加完一管，立刻在旋涡混合器上混合(注重不要太强烈，以免产生大量气泡而难于消退)。
(2)加完试剂2～5 min后，即可开头用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光汲取值A595，空白对比为第一号试管，即0.1mL H2O加5.0mL G-250试剂。
蛋白质营养物质的鉴定方法
蛋白质营养物质的鉴定方法以下是 7 条关于蛋白质营养物质的鉴定方法：1. 双缩脲反应呀，这可是个超有用的办法！就像你能通过独特的特征一下子认出你的好朋友一样，双缩脲反应能帮我们认出蛋白质。
比如在检测的时候，看到溶液变成了紫色，哇塞，那不就说明有蛋白质在里面嘛！比如咱们平时喝的牛奶，用这个方法就能知道里面有没有蛋白质。
2. 还有考马斯亮蓝染色法呢！这个方法就好像是给蛋白质打上了一个特别显眼的标记。
哎呀，当看到染上蓝色的时候，就可以确定那就是蛋白质啦！就像你在一群人里一眼就能看到那个穿着最显眼衣服的人一样。
咱做肉的时候也可以用这个方法瞅瞅肉里蛋白质多不多。
3. 茚三酮反应也很棒呀！蛋白质遇到茚三酮就像遇到了知音一样会有反应哦。
就像听到熟悉的声音你就能知道是谁一样，看到特定的颜色出现，不就知道有蛋白质了嘛！像煮鸡蛋的时候，试试这个反应，不就知道鸡蛋里有多少蛋白质了嘛，多有趣啊！4. 你知道吗，紫外吸收法也很厉害呢！蛋白质在紫外光下会有特别的表现哦。
这就好像在黑暗中看到了一束独特的光，一下子就能发现它。
比如说去检测一些保健品，用这个方法不就能知道里面蛋白质是不是真的多啦，是不是很神奇？5. 福林酚试剂法也不能落下呀！这就像是一场特殊的派对，只有蛋白质才能在这个派对上大放异彩。
想象一下，测试液里有蛋白质的时候，出现的那种特别的反应，多么让人兴奋啊！像检测豆浆里的蛋白质，这个方法就很好用呢。
6. 电泳法也很实用哦！它能像给蛋白质排排队一样，把不同的蛋白质区分开来。
这不就像给同学们按照个子高矮排队一样清晰嘛！比如在研究一些生物样本的时候，用这个方法来鉴定蛋白质，那可太方便啦！7. 凯氏定氮法可是个经典的方法呢！它能精确地测定蛋白质的含量。
就像给一个物品精确称重一样，它能给蛋白质一个准确的“价值评估”。
像是在检测一些食品的营养价值时，这个方法绝对是个得力助手啊！我觉得这些方法都好有趣，能让我们更好地了解蛋白质呢！。
蛋白质化学综合测试题(新、选)
一．填空题：1.组成蛋白质分子的碱性氨基酸有、、和。
酸性氨基酸有和。
是带有芳香族侧链的极性氨基酸。
和是带有芳香族侧链的非极性氨基酸。
是含硫的极性氨基酸。
2.氨基酸在等电点时，主要以离子形式存在，在pH＞pI的溶液中，大部分以离子形式存在。
在pH＜pI的溶液中，大部分以离子形式存在。
3.通常可用紫外分光光度计测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的、、和三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
4.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生色物质。
5.在一些天然肽中含有、和环状等特殊结构。
这些结构在蛋白质中是不存在的。
很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。
6.常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有⑴还原法，常用的试剂为β-巯基乙醇。
⑵氧化法，常用的试剂为过甲酸或。
7.Pauling等人提出的蛋白质α-螺旋模型，每圈包含个氨基酸残基，高度为，每个氨基酸残基沿轴上升，并沿轴旋转度。
8.一般来说，球状蛋白质的疏水性氨基酸侧链位于分子内部，亲水性氨基酸侧链位于分子表面。
9.维持蛋白质构象的化学键有、、、、和。
10.血红蛋白（Hb）与氧结合的过程呈现正协同效应，是通过Hb的别构现象实现的。
11.当溶液中盐离子强度低时，可增加蛋白质的溶解度，这种现象叫盐溶。
当溶液中盐离子强度高时，可使蛋白质沉淀，这种现象叫盐析。
12.蛋白质受物理化学因素的影响级结构不变，改变，物化性质改变，降低或丧失。
13. α-螺旋结构，每个螺旋圈内包含个氨基酸残基，两个氨基酸残基轴向间距为埃，氢键是由每个残基上的N-H与后面个残基的C=O形成的，氢键近似地与长轴相。
14.维持蛋白质二级结构的主要作用力是；维持蛋白质三级结构的主要作用力是。
二．是非题：1.只有在很高或很低pH时，氨基酸才主要以非离子化形式存在。
错2.从某些微生物中分离得到的多肽抗菌素为环状肽链，并含有D-型氨基酸。
对3.具备三级结构的蛋白质就具有生物活性。
错4.两条以上具三级结构的多肽链通过共价键结合成四级结构的蛋白质。
5种蛋白质分析方法
蛋白质分析方法1、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1)2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2)(NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
评价：总氮-非蛋白氮=蛋白质氮——>蛋白质含量灵敏度低，误差大，耗时长。
2、双缩脲法（Biuret法）（一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris 缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml 的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。
蛋白质自测题附参考答案
蛋白质-自测题2（附参考答案）（一）是非题1．一个氨基酸在水溶液中或固体状态时是以两性离子的形式存在。
2．亮氨酸的非极性比丙氨酸大。
3．肽键能自由旋转。
4．一个可以解离的基团在pH高于pKa时，该基团有一半以上可以解离。
5．纸电泳分离氨基酸是根据它们的极性性质。
6．从理论上讲，可以用Edman降解法完全地测定任何非折叠的多肽链。
7．一个多肽的C末端为脯氨酸，那末羧肽酶A和羧肽酶B都可切下该多肽的C末端。
8．蛋白质中主链骨架由－CONHCONHCONH－和－NCCCNCCC－等组成。
9．蛋白质中所有氨基酸用浓盐酸处理后，除色氨酸外，其它氨基酸都能正确地被分析出来。
10．任何一条多肽链，它都能被胰蛋白酶在精氨酸和赖氨酸处切断。
11．每一种蛋白质的多肽链中，氨基酸都有一定的排列顺序，不是随机的。
12．蛋白质表面氢原子之间形成氢键。
13．从热力学上讲，蛋白质最稳定的构象是最低自由能时的结构。
14．浓NaCl易破坏离子键，浓尿素易破坏氢键。
15．亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸大多分布在球蛋白溶液分子内部形成疏水内核。
16．变性后，蛋白质溶解度降低是因为中和电荷和去水膜所引起的。
17．变性后的蛋白质分子量发生改变。
18．切开胰岛素分子中链间两对二硫键后，分子量并不改变。
19．肽键可以自由旋转，从而可出现多种空间构象。
20．蛋白质变性过程都是可逆的。
21. 蛋白质变性后的最显著特征是生物学活性丧失,分子量降低。
22. 具备有二级结构的蛋白质就有生物活性。
23．维持蛋白质二级结构的化学键是H键和盐键。
24．自然界里的蛋白质和多肽彻底水解后都产生L—型氨基酸。
25．某化合物与茚三酮反应生成紫色复合物，该化合物必是氨基酸、多肽或蛋白质。
26．一个未知蛋白质样品经酸水解后、可用异硫氰酸苯酯与之作用以准确测定它的所有氨基酸。
27．原则上用异硫氰酸苯酯法（Edmam降解法）可测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序。
28．双缩脲反应是测试多肽和蛋白质的一种方法，所以，凡是能发生双缩脲反应的物质必为多肽或蛋白质。
蛋白质含量测试题及答案
蛋白质含量测试题及答案一、单选题（每题2分，共10分）1. 蛋白质含量测试中，通常使用的测定方法是：A. 高效液相色谱法B. 紫外分光光度法C. 凯氏定氮法D. 质谱分析法答案：C2. 在蛋白质含量测定中，以下哪种试剂不是必需的？A. 硫酸B. 硫酸钾C. 硫酸铜D. 氢氧化钠答案：D3. 凯氏定氮法测定蛋白质含量时，样品中的氮元素转化为：A. 氨气B. 硝酸C. 亚硝酸盐D. 氮气答案：A4. 蛋白质含量测定时，样品消化过程中通常使用的催化剂是：A. 硫酸铜B. 硫酸钾C. 硒粉D. 硫酸亚铁答案：C5. 以下哪种方法不是蛋白质含量的测定方法？A. 凯氏定氮法B. 双缩脲法C. 酶联免疫吸附测定法D. 核酸染色法答案：D二、填空题（每空1分，共10分）1. 蛋白质含量测定中，样品消化后，通常使用_________来吸收氨气。
答案：硼酸2. 凯氏定氮法中，样品消化的目的是将样品中的有机氮转化为_______。
答案：氨气3. 在蛋白质含量测定中，测定氨气含量的方法是_______。
答案：滴定法4. 蛋白质含量测定时，样品消化过程中，硫酸的作用是_______。
答案：提供酸性环境5. 蛋白质含量测定的计算公式为：蛋白质含量 = （氨氮含量× 蛋白质换算系数） / （样品取样量 / 样品总体积）。
三、简答题（每题5分，共10分）1. 简述凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理。
答案：凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理是将样品中的有机氮转化为氨气，然后通过酸化、蒸馏、吸收、滴定等步骤，测定氨气含量，最后根据氮含量和蛋白质换算系数计算蛋白质含量。
2. 在蛋白质含量测定过程中，为什么需要使用催化剂？答案：在蛋白质含量测定过程中，使用催化剂是为了加速样品中有机氮转化为氨气的反应速度，提高测定的效率和准确性。
四、计算题（10分）某样品经凯氏定氮法测定，测得氨氮含量为1.2mg/L，样品取样量为10mL，样品总体积为100mL，蛋白质换算系数为6.25。
标准管法测定蛋白质含量
标准管法测定蛋白质含量
首先，准备样品。
样品的选择要代表性，需根据具体要求进行研磨或溶解处理，以保证后续测定的准确性。
接着，按照标准管法的要求，将样品进行酸水解或酶解处理，将蛋白质转化为氨基酸。
然后，利用氨基酸分析仪或其他适当的仪器，对氨基酸进行定量分析，得出样品中蛋白质的含量。
在进行标准管法测定蛋白质含量时，需要注意以下几点。
首先，操作人员需严
格按照操作规程进行操作，避免外界因素对实验结果的影响。
其次，仪器的选择和使用要符合标准要求，保证测定结果的准确性和可靠性。
此外，样品的处理和分析过程中，需注意实验条件的控制，避免温度、湿度等因素对实验结果造成影响。
最后，实验数据的处理和统计要准确可靠，确保结果的科学性和可信度。
总的来说，标准管法测定蛋白质含量是一种可靠、准确的方法，对于食品加工、医药研发等领域具有重要意义。
在实际操作中，操作人员需要严格按照标准要求进行操作，注意实验条件的控制，保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文的介绍能够对相关领域的研究人员有所帮助，促进相关工作的开展和发展。
生物化学蛋白质测试题
单元测试一：蛋白质化学班级：姓名：分数：一．填空题（每空1.5分，共30分）1.当溶液pH等于某种氨基酸的等电点时，其带_ 零 _电荷；当溶液pH大于某种氨基酸的等电点时，其带_ 负 _电；溶液pH小于某种氨基酸的等电点时，其带_ 正电。
2.盐浓度低时，盐的加入使蛋白质的溶解度_ 增大 _，称为_ 盐溶__现象。
当盐浓度高时,盐的加入使蛋白质的溶解度降低，称为盐析现象。
3.由甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸6种氨基酸残基组成的肽链有 5 个肽平面，有 3 个游离羧基。
4.蛋白质分子结构包括一级结构和二级结构。
蛋白质的一级结构是由氨基酸通过肽键连接而成的多肽链。
6.蛋白质分子的基本组成单位是氨基酸。
蛋白质的一级结构维持作用力是肽键。
蛋白质的分子结构决定蛋白质的性质和功能。
7.蛋白质二级结构主要有 a螺旋和B折叠形状，维持其稳定结构的化学键是氢键。
判断题1．用凝胶过滤(Sephadex G-100)柱层析分离蛋白质时，总是分子量大的先被洗脱下来，分子量小的后下来。
对2．变性后，蛋白质的溶解度增加（减小），这是因为电荷被中和（空间结构被破坏），以及水化膜破坏所引起的。
错3．变性后（物理变性不可逆，化学变性可逆，可复性）的蛋白质在一定条件下，有些还能复性，恢复其生物学功能。
对4．有机溶剂沉淀法分离纯化蛋白质的优点是有机溶剂容易蒸发除去，且不会使蛋白质变性。
错5.蛋白质分子的种类和差别，是由其空间结构决定的。
错（一级结构）6．蛋白质主要是由C、H、O、N四种元素组成。
对7．氨基酸通过肽键连接而成的化合物称为肽。
对8．天然蛋白质的基本组成单位主要是L-α-氨基酸。
对9．肽键(-CO-NH-)中的C-N键可自由旋转，使多肽链出现多种构象。
错（不可旋转）10．维持蛋白质二级结构的化学键是氢键及范德华力（不是）。
错11．蛋白质一级结构对空间结构起决定作用，空间结构的改变会引起功能的改变。
对12．维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是氢键。
蛋白质测定标准
蛋白质测定标准
蛋白质测定是生物化学和分子生物学中常见的实验操作，用于确定样品中蛋白质的含量。
以下是常见的蛋白质测定标准：Lowry法：Lowry法是最常用的蛋白质定量方法之一，基于蛋白质与某些重铜络合物的相互作用产生的颜色变化。
该方法灵敏度高，适用于含有大量蛋白质的样品。
Bradford法：Bradford法利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质之间的相互作用产生的颜色变化来测定蛋白质含量。
与Lowry法相比，Bradford法的操作更简单，但灵敏度略低。
Biuret法：Biuret法利用蛋白质与铜离子形成的络合物产生的紫色来测定蛋白质含量。
该方法比较粗略，适用于快速测定蛋白质含量。
BCA法：BCA（Bicinchoninic Acid）法是一种比较常用的蛋白质定量方法，利用蛋白质与铜离子和BCA试剂的反应产生的紫色螯合物来测定蛋白质含量。
光谱法：光谱法通过测量蛋白质在特定波长下的吸光度来确定其浓度。
UV-Vis分光光度计是常用的测量设备，通常在280 nm波长下进行测量。
荧光法：荧光法利用蛋白质在特定激发波长下发射荧光信号的特性来测定蛋白质含量。
例如，荧光素蛋白（fluorescamine）可与蛋白质中的氨基结合产生荧光，用于蛋白质的定量。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于样品的特性、实验条件以及所需的灵敏度和准确性。
通常，根据实验的具体要求和可用的设备，科学家可以选择最适合其实验目的的蛋白质测定方法。
1。
检验蛋白质的方法
检验蛋白质的方法首先，最常用的检验蛋白质的方法之一就是SDS-PAGE凝胶电泳。
这是一种通过电泳分离蛋白质的方法，其原理是利用SDS（十二烷基硫酸钠）对蛋白质进行线性变性，使得蛋白质呈现负电荷，然后在电场作用下，蛋白质根据其分子量的大小在凝胶中进行分离。
通过染色或Western blot等方法，可以对分离出的蛋白质进行进一步的检测和分析。
其次，免疫沉淀法也是一种常用的检验蛋白质的方法。
这种方法利用抗体与特定蛋白质结合的特异性，将蛋白质从混合物中沉淀下来，然后通过洗涤等步骤将非特异性结合的蛋白质去除，最终得到纯化的目标蛋白质。
这种方法对于检验特定蛋白质的含量和结构具有很高的特异性和灵敏度。
另外，质谱法也是一种常用的检验蛋白质的方法。
质谱法通过将蛋白质分子进行解离，然后利用质谱仪对其进行分析，可以得到蛋白质的分子量、氨基酸序列等信息。
这种方法对于检验蛋白质的组成和结构具有很高的分辨率和准确性，是一种非常重要的蛋白质分析方法。
最后，生物传感器技术也是一种新兴的检验蛋白质的方法。
生物传感器通过将生物分子与传感器相结合，利用生物分子与目标蛋白质的特异性结合来实现对蛋白质的检测。
这种方法具有操作简便、快速灵敏、实时监测等优点，对于一些实时检测蛋白质含量和活性的应用具有很大的潜力。
总之，检验蛋白质的方法有很多种，每种方法都有其特定的优点和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体的实验目的和条件选择合适的方法来进行蛋白质的检验。
希望本文介绍的方法对大家有所帮助，也希望大家在科研实验中能够取得理想的结果。
蛋白质含量测定方法
蛋白质含量测定方法
首先，我们来介绍最常用的蛋白质含量测定方法之一——比色法。
比色法是通过蛋白质与某种试剂发生化学反应产生有色产物，
然后利用分光光度计测定产物的吸光度来计算蛋白质含量的方法。
常用的试剂包括布拉德福试剂、伯里氏试剂等。
比色法操作简便，
结果准确，适用于多种类型的蛋白质样品。
其次，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是BCA法。
BCA法
是利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生还原反应，生成紫色螯
合物，然后利用分光光度计测定其吸光度来计算蛋白质含量的方法。
BCA法对于含有还原剂、胶体物质和表面活性剂的样品具有较好的
适用性，同时也具有较高的灵敏度和线性范围。
另外，还有一种常用的蛋白质含量测定方法是Lowry法。
Lowry
法是通过蛋白质与碱性铜离子和菲罗啉在碱性条件下发生络合反应，生成蓝色络合物，然后利用分光光度计测定其吸光度来计算蛋白质
含量的方法。
Lowry法对于各种类型的蛋白质样品均有较好的适用性，但操作相对复杂，需要较长的实验时间。
除了上述介绍的常用方法外，还有其他一些蛋白质含量测定方
法，如紫外吸收法、荧光法等。
这些方法各有特点，适用于不同类
型的蛋白质样品，实验人员可以根据实际情况选择合适的方法进行
测定。
总的来说，蛋白质含量的准确测定对于科学研究和实验室工作
至关重要。
在选择测定方法时，需要考虑样品的性质、实验条件、
仪器设备等因素，并且在操作过程中要严格按照方法要求进行操作，确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法能为您的实
验工作提供一些帮助，祝您实验顺利！。
蛋白质含量测试题及答案
蛋白质含量测试题及答案一、选择题1. 蛋白质的化学基础是什么？A. 碳水化合物B. 脂肪C. 氨基酸D. 维生素2. 以下哪种方法常用于蛋白质含量的测定？A. 紫外分光光度法B. 高效液相色谱法C. 凯氏定氮法D. 气相色谱法3. 蛋白质的生物合成过程发生在哪个细胞器中？A. 核糖体B. 线粒体C. 内质网D. 高尔基体二、填空题4. 蛋白质是由_________个或多个氨基酸通过肽键连接而成的大分子。
5. 蛋白质的功能包括_________、_________、_________等。
三、简答题6. 简述蛋白质在生物体内的主要功能。
四、计算题7. 如果在凯氏定氮法中测得样品中的氮含量为0.15g，假设样品中蛋白质的氮含量占16%，请计算样品中蛋白质的总量。
五、论述题8. 论述蛋白质在食品工业中的应用及其重要性。
答案：一、选择题1. C2. C3. A二、填空题4. 一5. 结构功能、催化功能、调节功能三、简答题6. 蛋白质在生物体内具有多种功能，包括但不限于：构成细胞和组织的基本结构材料；作为酶参与生物体内的催化反应；作为激素和信号分子参与调节生物体内的生理过程；以及作为运输蛋白参与物质的转运等。
四、计算题7. 样品中蛋白质的总量 = 0.15g / 0.16 = 0.9375g五、论述题8. 蛋白质在食品工业中具有广泛的应用，包括但不限于：作为食品的主要成分，提供必需氨基酸；作为食品添加剂，改善食品的质地和口感；作为功能性成分，具有特定的健康益处，如免疫调节、抗氧化等；在食品加工过程中，蛋白质还可用于稳定食品结构，提高食品的营养价值和感官品质。
蛋白质的重要性体现在其对人类健康和食品产业的多方面贡献。
《生命活动的主要承担者——蛋白质》测试题
《生命活动的主要承担者——蛋白质》测试题一、选择题（本题共16题，每题4分，共64分。
每小题只有一个选项符合题意。
）1．观察下列生物体内组成蛋白质的两种氨基酸，可以确定共同的结构特点是（）A．都只含有一个氨基（—NH2）B．都只含有一个羧基（—COOH）C．都只含有一个氢原子D．都含有一个氨基和一个羧基，有一个氨基和一个羧基连接在同一个碳原子上2．下图表示有关蛋白质分子的概念图，下列对图示分析不正确的是（）A．一个分子量大于10000的多肽中A的种类可能有20种B．蛋白质中的N元素主要存在B中C．多肽中A的数目一般大于B的数目D．蛋白质结构和功能的多样性取决于A的多样性3．下列关于氨基酸和蛋白质的叙述，错误的是（）A．酪氨酸几乎不溶于水，而精氨酸易溶于水，这种差异是由R基的不同引起的B．甜味肽的分子式为C13H16O5N2，则甜味肽是一种二肽C．某二肽的化学式是C8H14N2O5，水解后得到丙氨酸（R基为－CH3）和另一种氨基酸X，则X的化学式应该是C5H9NO4D．n个氨基酸共有m个氨基，则这些氨基酸缩合成的一个多肽中氨基数为m－n4．三鹿牌等不合格婴幼儿奶粉中掺入了一种“假蛋白”——三聚氰胺。
右图为三聚氰胺分子的结构式。
下列有关“假蛋白”的说法正确的是（）A．三聚氰胺可与双缩脲试剂发生紫色反应B．三聚氰胺中氮元素的含量比碳元素的含量还高C．在奶粉中添加三聚氰胺后提高了蛋白质的含量D．三聚氰胺分子中含有三个肽键5．如下图表示一个由153个氨基酸构成的蛋白质分子。
下列叙述正确的是（）A．该分子中含有152个肽键B．该分子形成过程中，产生了153个水分子C．该分子中有1个氨基酸侧链基团含硫D．该分子彻底水解将产生153种氨基酸6．催产素、牛加压素、血管舒缓素等多肽化合物的氨基酸数量相同，但其生理功能却不同，原因有（）①氨基酸种类不同②合成的场所不同③氨基酸的排列顺序不同④肽链的折叠盘曲方式不同A．①②③B．①③④C．②③④D．①②③④7．关于生物体内氨基酸的叙述正确的是（）A．氨基酸是蛋白质分子的单体，由氨基和羧基组成B．组成蛋白质的氨基酸共有的结构是C．每个氨基酸分子都只含有C、H、O、N四种元素D．组成人体的氨基酸都能在人体内合成8．胰岛素是胰岛素原通过蛋白酶的水解作用而生成的，那么胰岛素原水解所需的水中的氢用于（）A．形成－COOH和－SH B．形成－COOH和连接碳的－HC．形成－SH和－OH D．形成－NH2和－COOH9．丙氨酸的R基是－CH3，丙氨酸是由哪几种化学元素组成的？（）A．C、H、O B．C、H、O、NC．N、P、K、H、C D．C、H、O、N、P10．人体细胞中多种多样的蛋白质执行着各种特定的功能，抗体具有的主要功能是（）A．进行物质运输B．发挥免疫作用C．催化生化反应D．构成细胞成分11．某条肽链由88个氨基酸缩合而成，其中共有氨基6个，甲硫氨酸5个，且在肽链中的位置为3、25、56、78、88，甲硫氨酸的分子式为C5H11O2NS，以下叙述正确的是（）A．合成该多肽的氨基酸共有N原子数目94个B．去掉甲硫氨酸得到的肽链中，肽键数目会减少10个C．去掉甲硫氨酸得到6条肽链，氨基和羧基均分别增加5个D．特殊水解酶水解掉甲硫氨酸后，所得产物中氧原子增加5个12．人体的肌肉主要是由蛋白质构成的，但骨骼肌、心肌、平滑肌的功能各不相同，这是因为（）A．肌细胞形状不同B．在人体的分布位置不同C．支配其运动的神经不同D．构成肌细胞的蛋白质分子结构不同13．一种酶切除一种三十九肽中的所有丙氨酸，得其余氨基酸组成的肽链如下图，那么原肽链中的丙氨酸个数和新生成肽链中所有的肽键数是（）A．3 31 B．4 31 C．4 35 D．3 32 14．绿色荧光蛋白简称GFP，最初是从维多利亚多管发光水母中分离出来的结构蛋白。
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2. 今有一种植物的毒素蛋白，直接用SDS凝胶电泳分析时，它的区带位于肌红蛋白 （相对分子质量为16900）和β-乳球蛋白（相对分子质量37100）两种蛋白之间， 当这个毒素蛋白用β-巯基乙醇和碘乙酸处理后，在SDS凝胶电泳中仍得到一条区带，
但其位置靠近标记蛋白细胞素（相对分子质量为13 370），进一步实验表明，该
蛋白质测试题
1. 根据氨基酸侧链R基的极性和所带电荷，将20种编码氨基酸分为四 类，即______氨基酸、____氨基酸、____氨基酸和___氨基酸。其中酸 性氨基酸有_____和_____，碱性氨基酸有______、_____和_____。 2. 参与蛋白质组成的20种氨基酸，在_____区域都没有光吸收，但在 _____区域均有光吸收，在近紫外光区域（220nm-300nm）只有______， _______，________有光吸收。 3.动植物细胞中都有一种三肽，称_____型谷胱甘肽，用____表示，氧 化型的谷胱甘肽写为_____。谷胱甘肽作为_____剂，与有害氧化物作 用可保护含____基的蛋白质，还是某些酶的____，在体内氧化还原过 程中起重Glu-Val-Lys-Asn-Cys-Phe-Arg-Trp-Asp-LeuGly-Ser-Leu-Glu-Ala-Thr-Cys-Arg-His-Met-Asp-Gln-Cys-Tyr-Pro-Gly-GluGlu-Lys。 （1）如用胰蛋白酶处理，此多肽将产生几个肽？并解释原因（假设没有二硫 键存在）；
4. 蛋白质肽键 能否形成稳定的α-螺旋与它的氨基酸组成和排列顺序直接相关，如 肽链中有___时，α-螺旋因无多余氢离子形成氢键，α-C在五元环上Cα-N键会中断， 不能自由旋转。肽链中_____残基无R基的制约，难以形成α-螺旋所需的二面角， 不利于稳定α-螺旋的形成。肽链中有_____氨基酸残基时，由于静电排斥，也会 使α-螺旋不稳定。 5. 有a、b、c三种蛋白质，它们的等电点分别为8.5、4.0和10.5，当缓冲液的pH为 8.5时，它们在电场中电泳的情况为：a______， b_____ ，c_______。 6. 将相对分子质量分别为a (95,000)、b (40,000)、c (110,000)的三种球状蛋白质混 合溶液进行凝胶过滤层析，它们被洗脱下来的先后顺序是_ _____。
（2）在pH7.5时，此多肽的净电荷是多少单位？说明理由（假设pKa值：αCOOH4.0；α- NH3+6.0；Glu和Asp侧链基4.0；Lys和Arg侧链基11.0；His侧链
基7.5；Cys侧链基9.0；Tyr侧链基11.0）；
（3）如何判断此多肽是否含有二硫键？假如有二硫键存在，请设计实验确定5， 17和 23位上的Cys哪两个参与形成？
7. 镰刀状细胞贫血病是最早被认识的一种分子病，由于血红蛋白β亚基的第6位 的 性的 氨酸被 性的 氨酸所替代，引起脱氧血红蛋白的溶解度下降， 在细胞内聚集沉淀。
8. 下列哪种多聚氨基酸，在生理条件下易形成α-螺旋？（ ） A. poly-Val B. poly-Glu C. poly-Lys D. poly-Ala
4. 有一个A肽，经酸解分析得知为Lys、His、Asp、2Glu 、Ala以及Val、Tyr和 两个NH3分子组成。当A肽与FDNB试剂反应后得DNP-Asp；当用羧肽酶处理 后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时，得到两种肽， 其中一种（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在pH6.4时，净电荷为零，另一种 （His、Glu以及Val）可给出DNP-His，在pH6.4时，带正电荷。此外，A肽用 糜蛋白酶降解时，也得到两种肽，其中一种（Asp、Ala、Tyr）在pH6.4时全 中性，另一种（Lys、His、2Glu 以及Val）在pH6.4时带正电荷。问A肽的氨 基酸序列如何？ 5.（1）当Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合物在pH3.9进行纸电泳时， 哪些氨基酸移向正极？哪些氨基酸移向负极？（2）纸电泳时，带有相同电荷的 氨基酸常有少许分开，例如Gly可与Leu分开，试说明为什么？（3）设Ala、Val、 Glu、Lys和Thr的混合物pH为6.0，试指出纸电泳后氨基酸的分离情况。（pI值： Ala：6.02；Ser：5.68； Phe：5.48；Leu：5.98 ；Arg：10.76 ；Asp：2.97； His： 7.59）。
1. 答：（1）4个肽；（2）-2.5单位；（3）如果多肽中无二硫键存在，经胰蛋白酶水解后应得4个肽段；如果存在一 个二硫键应得3个肽段并且个肽段所带电荷不同，因此可用离子交换层析、电泳等方法将肽段分开，鉴定出含二硫键 的肽段，测定其氨基酸顺序，便可确定二硫键的位置。
2. 答：该毒素蛋白由两条不同的多肽链通过链间二硫键交联而成，每条多肽链的相对分子质量各在13000左右。 3. 答：[Asp、Thr、Gly、Leu、Lys]在pH3左右，氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是碱性氨基酸 (aa2+)>中性氨基酸(aa+)>酸性氨基酸(aa0)。因此氨基酸的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸，最后是碱性氨 基酸，由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用，所以其洗脱顺序为：Asp、Thr、Gly、Leu、Lys。 4. 答：[Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val] 1） N-末端分析：FDNB法得：Asp-； 2） C-末端分析：羧肽酶法得：-Val； 3）胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键，得到的是以Arg和Lys为C-末端残基的肽断。酸水解使 Asn→Asp+ NH4+，由已知条件（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）可得：Asn-( )-( )-( )-Lys-( )-( )-Val； 4） FDNB法分析N-末端得DNP-His，酸水解使Gln→Glu+NH4+由已知条件（His、Glu、Val）可得：Asn-( )-( )-( )Lys-His-Gln-Val； 5）糜蛋白酶断裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题，得到的一条肽（Asp、Ala、Tyr）结合 （3）、（4）可得该肽的氨基酸序列为：Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val 5. 答：（1）Ala、Ser、Phe和Leu以及Arg和His向负极，Asp移向正极；（2）电泳时，具有相同电荷的较大分子比较 小分子移动得慢，因为电荷/质量之比较小，因而引起每单位质量迁移的驱动力也较小。（3）Glu移向正极，Lys移向 负极，Val、Ala和Thr则留在原点。
毒素蛋白与FDNB反应并酸水解后，释放出游离的DNP-Gly和DNP-Tyr。关于此蛋白 的结构，你能做出什么结论？ 3. 将含有天冬氨酸(pI=2.98)、甘氨酸(pI=5.97)、亮氨酸（pI=5.98）、苏氨酸 (pI=6.53)和赖氨酸(pI=5.98)的柠檬酸缓冲液，加到预先用同样缓冲液平衡过的强 阳离子交换树脂中，随后用此缓冲液洗脱柱子，并分别收集洗脱液，这5种氨基酸 将按什么次序洗脱下来？
9. 用下列方法测定蛋白质含量时，哪种方法需要完整的肽键？（ ） A. 双缩脲法 B. 凯式定氮 C. 紫外吸收 D. 茚三酮反应 10. 加入哪种试剂不会导致蛋白质变性？（ ） A. 尿素 B. 盐酸胍 C. SDS D. 硫酸铵 11. 蛋白质分子中的主键是（ ）。 A. 肽键 B. 二硫键 C. 酯键 D. 盐键 12. 蛋白质的一级结构是指（ ）。 A. 蛋白质分子主链的走向 B. 蛋白质中氨基酸的排列顺序 C. 蛋白质分子多肽链的折叠盘曲 D. 包括A.B.C. 13. 下列哪一类氨基酸对于人体全部是必需氨基酸？（ ） A. 碱性氨基酸 B. 酸性氨基酸 C. 分支氨基酸 D. 芳香氨基酸