凯氏定氮法测定啤酒酵母水溶性多糖中蛋白质含量
凯氏定氮法测蛋白质含量
凯⽒定氮法测蛋⽩质含量凯⽒定氮法测蛋⽩质含量原理蛋⽩质是含氮的有机化合物。
⾷品与硫酸和催化剂⼀同加热消化，使蛋⽩质分解，分解的氨与硫酸结合⽣成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，⽤硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋⽩质含量。
1. 有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作⽤下，硝化⽣成（NH4）SO42反应式为：2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04（其中CuSO4做催化剂）2. 在凯⽒定氮器中与碱作⽤，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中反应式为:(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O3. ⽤已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因⼦，既得蛋⽩质的含量反应式为：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3试剂所有试剂均⽤不含氨的蒸馏⽔配制。
硫酸铜。
硫酸钾。
硫酸。
2%硼酸溶液。
混合指⽰液：1份0.1%甲基红⼄醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿⼄醇溶液临⽤时混合。
也可⽤2份0.1%甲基红⼄醇溶液与1份0.1%次甲基蓝⼄醇溶液临⽤时混合。
40%氢氧化钠溶液。
0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。
仪器定氮蒸馏装置：如图所⽰。
凯⽒定氮法仪器1.安全管2.导管3.汽⽔分离管4.样品⼊⼝5.塞⼦6.冷凝管7.吸收瓶8.隔热液套9.反应管10.蒸汽发⽣瓶操作⽅法1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移⼊⼲燥的100ml或500ml定氮瓶中，加⼊0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶⼝放⼀⼩漏⽃，将瓶以45度⾓斜⽀于有⼩孔的⽯棉⽹上，⼩⽕加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停⽌后，加强⽕⼒，并保持瓶内液体微沸，⾄液体呈蓝绿⾊澄清透明后，再继续加热0.5⼩时。
凯氏定氮法测定啤酒酵母碱溶性多糖中蛋白质的质量分数
Ｖ０ ． ８ Ｎｏ ４ １２ ．
Ｊ１ ２０ ｕ． ０ ８
文章编号：１０ — ８ （ ０ ８ ０ —０ ５ ０ ０ ７ ９３ ２０ ） ４ ０ ６ — １ ４
凯 氏定氮法测 定 啤酒酵母 碱溶性多糖 中
蛋 白质 的质量分数
于文 阁 ，张丽霞 ，张莲姬
（ ．大庆师范学院 生命科学系 ，黑龙江 大庆 １３ １ ；ｚ 延边大学 农学院，吉林 龙井 １３０ １ ６ ７２ ３４ ０）
的分支点主要是 一（ ，６ 糖苷键．酵母葡聚糖 由于在人的消化器官 中难 以被消化 ，可 以作为非卡路里 １ ） 食品添加剂 ，在冷冻甜点的生产 中作为脂肪替代物 ；由于具有高持水能力 ，可用于香肠等肉制品中作为持
水持油剂 ；也可作为膳食纤维来发挥作用．酵母葡聚糖作为一种功能因子 ，还具有独特生物活性．啤酒酵 母碱溶性葡聚糖具有抗肿瘤 、抗辐射损伤 、抗炎 、降低血脂等功能 ，可作为免疫调节剂 ，是一种 良好的生 物反应调节剂．葡聚糖的分离方法是引起葡聚糖分子量变化 的主要因素 ，在分离过程中将酵母葡聚糖进行
关键词：凯氏定氮法；蛋 白质 ；啤酒酵母碱溶性多糖 中 图分类 号 ：Ｑ ３ ９６ 文献 标识 码 ：Ａ
啤酒酵母 （ ａｃｓ ｍ ｃｓ ｅｅ ｓ ｅ 属真菌， Ｓｃｈ￣ ｙｅ ｒｆ ｉ ） ｏ ｅ ａ 是单细胞微生物 ．啤酒酵母中含有 ２％～ ０ ５ ３％酵母多糖 ，
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量简介凯氏定氮法（Kjeldahl method）是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它通过将样品中的有机氮转化为氨，然后将氨转化为氨基氮，再由氨基氮计算得出蛋白质的含量。
这个方法的优点是稳定可靠，适用于各种类型的样品。
实验原理凯氏定氮法的实验原理如下：1.样品预处理：将待测样品进行预处理，去除样品中的非氮有机物。
这样可以确保凯氏定氮方法只测定到蛋白质中的氮。
2.消化反应：将预处理后的样品与硫酸相结合，加热至沸腾。
在这个过程中，有机氮将被转化为氨。
3.碱化反应：将消化后的样品中的硫酸中和，加入过量的氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
4.蒸馏捕收：将碱化后的样品进行蒸馏，捕集捕集样品中的氨。
5.滴定：将捕集到的氨溶液与酸反应，使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定，直至中和反应结束，测定出反应过程中消耗的酸的体积。
6.计算：根据滴定所消耗的酸的体积，计算出样品中的氨的量，再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例，计算出样品中蛋白质的含量。
实验步骤以下是凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验步骤：1.准备样品：根据实验需要，准备待测样品。
样品的选择应根据实验目的和样品的特性进行。
2.样品预处理：将样品经过细碎、研磨等处理，去除样品中的非氮有机物。
3.消化反应：将预处理后的样品与浓硫酸相结合，加热至沸腾。
消化时间一般为2小时。
4.碱化反应：将消化后的样品中的硫酸中和，加入过量的氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
5.蒸馏捕收：将碱化后的样品进行蒸馏，捕集捕集样品中的氨。
6.滴定：将捕集到的氨溶液与酸反应，使用盐酸或硫酸等强酸进行滴定，直至中和反应结束。
7.计算：根据滴定所消耗的酸的体积，计算出样品中的氨的量，再根据氨和蛋白质含氮的摩尔比例，计算出样品中蛋白质的含量。
实验注意事项1.在进行样品消化时，必须控制好加热温度，避免样品的溢出和烧焦。
2.在进行滴定时，应注意控制滴液的速度，避免过量的酸滴入。
3.实验过程中需注意个人安全，避免触及强酸和强碱。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
凯氏定氮法测定蛋白质含量【凯氏定氮法测定蛋白质含量】引言：蛋白质是生物体中非常重要的一类有机物质，它在细胞结构、代谢调节、酶催化等方面都起到至关重要的作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于研究生物体的生理功能和代谢过程十分重要。
凯氏定氮法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它利用蛋白质中的氮元素与含氮化合物反应，通过测定反应生成物中的氨基氮含量来确定蛋白质的含量。
本文将一步一步地介绍凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理、实验步骤以及注意事项。
一、原理：凯氏定氮法的原理基于蛋白质是含有较高比例的氮元素的化合物。
测定蛋白质的含量可以通过测定样品中氨基氮的含量来实现，其中氨基氮与蛋白质的含量呈线性关系。
凯氏定氮法的核心步骤是将蛋白质样品与含有氧化剂的酸溶液一起加热，使蛋白质中的氮元素被氧化转化为氨基氮，然后用氨盐指示剂反应形成带有颜色的化合物，最后通过比色分析来测定蛋白质中氮元素的含量。
二、实验步骤：1. 实验前准备：根据实验需求准备蛋白质样品、凯氏试剂、氨盐指示剂等。
2. 样品制备：将蛋白质样品称取适量，加入酸性溶液中溶解，使其完全溶解。
注意保持溶液的酸性，并避免样品中的氨基酸被过度氧化。
3. 氮元素的氧化：将样品溶液与凯氏试剂混合，在适当的温度下加热，使样品中的氮元素被氧化转化为氨基氮。
反应时间根据样品的性质而定，一般为1-2小时。
4. 反应结束：冷却样品溶液，使其达到室温。
反应结束后，样品中的蛋白质会被转化为氨基氮。
5. 比色分析：将反应溶液与氨盐指示剂进行反应，形成带有颜色的化合物。
然后使用分光光度计测定化合物的吸光值。
通过与标准曲线进行比较，可以确定样品中氨基氮的含量，进而计算出蛋白质的含量。
三、注意事项：1. 样品的选择：样品的选择取决于实验的目的，可以是纯蛋白质样品，也可以是含有蛋白质的复杂混合物。
样品的含量和浓度应该适当，以保证实验结果的准确性。
2. 温度和时间的控制：样品与凯氏试剂的加热温度一般为75-105摄氏度，反应时间根据样品的性质而定。
凯氏定氮法测定蛋白含量原理解析
凯氏定氮法测定蛋白含量原理解析牛司锋，山东公司品管部凯氏定氮法是目前蛋白质测定最常用的方法，通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量。
由于样品中含有少量非蛋白质含氮化合物，如核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质的含氮化合物，因此，此法的结果称为粗蛋白质含量。
凯氏定氮法是测定总有机氮量较为准确、操作较为简单的方法之一，可用于所有动、植物食品的分析及各种加工食品的分析，可同时测定多个样品，故国内外应用较为普遍，是个经典分析方法。
凯氏定氮法的原理是食品与浓硫酸、催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据盐酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即可计算出食品中的蛋白质含量。
一、实验试剂1．40%氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠溶于60mL蒸馏水中；2．4%硼酸溶液：称取4g硼酸溶于蒸馏水中稀释至l00mL；3．0.1mol/L盐酸标准滴定溶液；4．甲基红次甲基蓝混合指示液：将次甲基蓝乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按1+2体积比混合；5．蒸馏水；6．硫酸铜；7．硫酸钾；8．浓硫酸。
二、实验步骤及相关原理1．样品处理称取充分混匀的固体试样0.2~2g、半固体试样2~5g或液体试样10~25g（约相当于30~40mg 氮），精确至0.0001g，移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜、6g 硫酸钾及20mL浓硫酸，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。
小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5~1h。
取下放冷，小心加入20mL水。
放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 实验报告
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告实验原理：
凯氏定氮法是通过测定含氮物质的数量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
凯氏试剂是含钾离子和官能羰基的化合物，它与蛋白质中的氨基酸进行反应，在碱性条件下，产生深蓝色的染色。
然后该样品通过消化样品中的蛋白质，并测定生成的氨基酸，从而确定蛋白质含量。
实验步骤：
1、将待测样品称取1.0g，加入100ml蒸馏水中，加压漏斗过滤，过滤液用量筒调整至100ml。
2、分别取3个15ml离心管，分别加入0.5ml、1.0ml、1.5ml的上述过滤液，加入10ml去离子水，倒入3个含3ml凯氏试剂的小烧杯中混匀。
3、将上述混合液加热至沸腾，然后降温至室温。
4、取10ml反应液加入预先消化好的咪唑试液，加0.6ml甲酸（25%质量比），加入2ml亚硝酸钠（0.6mol/L，pH7.6），使溶液变成黄绿色，插入预先调整好的滴定管，滴定0.1mol/L氢氧化钠溶液，直到溶液变成淡黄色。
5、重复2~4步骤，做三次平均。
实验结果：
测得0.5ml、1.0ml、1.5ml三组样品分别消耗10.8ml、21.4ml和32.1ml的0.1mol/L 氢氧化钠溶液。
计算得出每份样品中蛋白质的含量分别为3.24mg、3.22mg和3.18mg，平均值为3.21mg。
实验结论：
本实验通过微量凯氏定氮法测定出样品中蛋白质含量为3.21mg/g，该方法操作简单、准确、重复性好，是一种快速测定蛋白质含量的有效方法。
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
凯氏定氮法测定蛋白质含量公式
1 凯氏定氮法
凯氏定氮法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，由凯氏于1883
年提出。
它的原理是：将样品中的蛋白质氨基酸氧化分解为氨态水，
测定样品中氨态氮的含量，用凯氏定氮法公式计算蛋白质的实际含量。
2 凯氏定氮法的基本原理
凯氏定氮法的基本原理是将蛋白质氨基酸浓度通过离子交换树脂
提取，然后将氨基酸氧化分解为氨态水，再测定样品中氨态氮的含量，用凯氏定氮法公式计算蛋白质的实际含量，凯氏定氮法公式如下：
3 凯氏定氮法公式
蛋白质的实际含量=样品内的氨态氮的总量（毫克）÷6.25
其中6.25是认为蛋白质中的结构基元氨基酸的比例为1:6.25，也就是说，100毫克蛋白质中含有16毫克氨基酸，以此类推。
4 凯氏定氮法的优势
凯氏定氮法具有准确、快速、重现性好等特点，在实时测定立即
分析模式中，仍是最常用的技术。
从实验时间上看，凯氏定氮法比其
他定氮方式更加快捷，且准确率较高，受其实验程序简单、复杂材料
分离容易使用的优势受到广大研究人员的青睐。
5 凯氏定氮法的应用
凯氏定氮法大多用于测定含氨基酸的蛋白质，应用范围很广，一般应用在动物、植物的分子的氨基酸的分析，主要用于衡量蛋白质含量，便于计算组分，如果其他物质也能被氧化，也可以用它进行测定计算。
另外，凯氏定氮法也可以用于研究病毒、细菌等非蛋白质有机物的含氮量。
.凯氏定氮法
凯氏定氮法是一种测定食物、饮料或饲料中蛋白质含量的经典方法。
这个实验方法需要使用浓硫酸和催化剂，将样品中的有机氮转化为氨，然后通过蒸馏将氨分离出来，最后用酸滴定液滴定，计算出氮的含量。
凯氏定氮法的步骤如下：
1. 样品处理：将样品研磨并干燥，然后加入硫酸和催化剂，进行消化反应。
这个过程需要控制温度和时间，以免样品烧焦或硫酸过度氧化。
2. 蒸馏：将消化液进行蒸馏，使氨气从溶液中分离出来。
蒸馏过程中需要控制温度和压力，以确保氨气能够完全分离。
3. 滴定：将蒸馏后的溶液用酸滴定液进行滴定，根据颜色变化判断滴定终点。
终点判断需要准确控制，否则会影响测定结果。
4. 计算：根据滴定的酸滴定液的体积和浓度，计算出氮的含量。
凯氏定氮法的优点是准确性高、可重复性好，可以用于测定各种食物、饮料和饲料中的蛋白质含量。
但是，该方法也存在一些缺点，例如需要使用浓硫酸和催化剂，操作比较危险，而且实验过程中会产生有害气体。
此外，凯氏定氮法测定的是样品中的总氮含量，而并非所有的氮都以蛋白质的形式存在。
因此，在某些情况下，可能需要采用其他方法来测定样品中的蛋白质含量。
总之，凯氏定氮法是一种经典的蛋白质测定方法，具有较高的准确性和可重复性。
但是，在操作过程中需要注意安全问题，并且需要控制好各个实验条件，以保证测定结果的准确性。
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量
微量凯氏定氮法测定蛋白质含量1. 引言好啦，今天咱们来聊聊一个听上去有点儿高大上的东西——微量凯氏定氮法。
听名字就有点儿拗口吧？别担心，我们把它拆开说，就像拆开一个好吃的糖果，里头可是别有洞天呢！其实，这个方法主要是用来测定食品、饲料中蛋白质的含量。
你知道，蛋白质可是咱们身体里的小英雄，它帮助咱们构建肌肉、修复组织，简直是营养界的“超级英雄”啊！所以，搞清楚蛋白质含量，尤其是在咱们的日常饮食中，真的是很重要。
1.1 微量凯氏定氮法的原理说到微量凯氏定氮法，其实它的原理简单得不能再简单了。
它主要是通过测量食品中氮的含量来推算出蛋白质的含量。
你要知道，蛋白质的主要成分就是氨基酸，而氨基酸里又含有氮。
所以，咱们测氮，实际上就是在“间接”测蛋白质。
这就像是你在找个朋友的联系方式，结果发现他最爱用的方式就是在朋友圈里分享生活点滴，搞得你一头雾水，但最后还是能找到他。
嘿，这方法真是让人哭笑不得呀！1.2 为什么要用微量凯氏定氮法？说到这里，可能有人会问：“那为什么不直接测蛋白质呢？”这就要提到微量凯氏定氮法的好处了。
首先，它非常准确，基本上不会让人失望；其次，操作起来也不复杂，设备需求相对简单。
想想看，咱们在实验室里，那个试管、试剂瓶，都是些老朋友了，简直就是一群志同道合的“科研小伙伴”嘛！所以，微量凯氏定氮法一问世，立刻就成了不少实验室的“常客”。
2. 实验步骤接下来，让我们聊聊具体的实验步骤。
准备好了吗？来吧，跟我一起走进这个神奇的世界。
2.1 取样和准备首先，得先准备好样品。
无论是肉类、豆类还是奶制品，统统都能上桌。
把它们称量好，放进反应器里，像是给它们准备了一场“派对”。
接着，加入一些催化剂，通常是硫酸铜和硫酸钾，这俩家伙可是活跃分子，能帮忙催化反应，简单得很。
2.2 加热消化好了，准备工作完成，接下来就是大展拳脚的时刻——加热消化。
把反应器放进加热炉，开火！让它在高温下“热情洋溢”地消化一段时间。
凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量
凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量Kjeldahl Determination of Protein Content马 丹(勃利县质量技术监督局,黑龙江勃利154500)摘 要:本文主要介绍了凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量的原理和实验过程中需要注意的一些问题。
关键词:凯氏定氮;测定;食品;蛋白质食品种类很多,食品中pro的性质和含量各不相同,而且其他成分,如碳水化合物,脂肪和维生素的干扰成分很多,因此pro的测定通常利用经典的凯氏定氮法将样品消化成铵盐蒸馏,用标准酸液吸收,用标准酸或碱液滴定,由样品中含氮量计算出pro的含量。
由于食品中pro 含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法,但它们的基本原理都是一样的。
我们在检验食品中pro时,往往只限于测定总氮量,然后乘以pro核算等数,得到蛋白质含量,实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物,故称为粗pro。
1 凯氏常量定氮法不论常量、半微量以及微量定氮法它们的原理都是一样的,首先第一个步骤是消化:样品与硫酸一起加热消化,硫酸使有机物脱水。
并破坏有机物,使有机物中的C、H氧化为CO2和H2O蒸汽逸出,而pro则分解氮,则与硫酸结合成硫酸铵,留在酸性溶液中。
在消化过程中添加硫酸钾可以提高温度加快有机物分解,它与硫酸反应生成硫酸氢钾,可提高反应温度,一般纯硫酸加热沸点330 ,而添加硫酸钾后,温度可达400 ,加速了整个反应过程。
此外,也可以加入硫酸钠,氢化钾盐类来提高沸点。
其理由随着消化过程硫酸的不断地被分解,水分的逸出而使硫酸钾的浓度增大,沸点增加。
加速了有机的分解。
但硫酸钾加入量不能太大,否则温度太高,生成的硫酸氢铵也会分解,放出氨而造成损失。
为了加速反应过程,还加入硫酸铜,氧化汞或硒粉作为催化剂以及加入少量过氧化氢,次氯酸钾作为氧化剂。
但为了防止污染通常使用硫酸铜。
所以有机物全部消化后,出现硫酸铜的兰绿色,它具有催化功能,还可以作为碱性反应指示剂。
凯氏定氮法测定蛋白质含量
1、按图装好凯氏定氮装置。向蒸汽发生器中的水中 加数滴甲基红指示剂、几滴H2SO4及数粒沸石
2、移取10.0ml样品消化液，经进样口注入反应室内，用 少量水冲洗进样口，然后加入10ml 50% NaOH溶液于反 应室内，塞好玻璃塞，防止氨的逸出。从开始回流记时， 蒸馏4min，移动冷凝管下口使其离开接收液面。再蒸馏， 用纯水洗冷凝管下口，洗液流入吸收液内。 三、NH3的标定 用0.05mol.L-1HCl标准溶液滴定至暗红色为终点。 四、蛋白质含量的计算 蛋白质（%）=总氮量（%）×6.25
反应式为： H2SO4==SO2+H2O+[O]
R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3 NH3 R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O
3 2 4 4 2 ，收集于 4 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出 NH H3BO3 溶液 3 中。
2NH +H SO ==(NH ) SO
2008年当奥运圣火熄灭以后，我国各地的新闻版 面相继都在大篇幅的报道关于“大头娃娃”的新 闻。 根据医院的诊断，这些婴儿所患的都是营养不良 综合征，而扼杀这些幼小生命的“元凶”，正是 蛋白质等营养元素指标严重低于国家标准的劣质 婴儿奶粉。
导致“大头娃娃”出现的一个原因就是我们 在食品蛋白质检验过程中存在的问题：通常 我们利用凯氏定氮法测定食品中的氮含量， 再利用以下公式计算出食品中的蛋白质含量
四．解决凯氏定氮法弊端
解决问题的根本方法，是直接测试食品中的真蛋白
质含量。因为，如果能够一次直接测定食品中真蛋白质含 量，以真蛋白质含量为标准，那么就堵住了市场监管上的 漏洞，使伪劣产品无所遁形。因此添加假蛋白质物质，如
发酵液中的蛋白质含量测定
发酵液中的蛋白质含量测定
发酵液中的蛋白质含量可以通过多种方法进行测定，以下是其中一些常见的方法：
1. 考马斯亮蓝法（Bradford 法）：这是一种常用的蛋白质定量方法，基于考马斯亮蓝染料与蛋白质结合后在特定波长下的吸光度变化。
该方法具有快速、简便、灵敏的特点，但对不同类型的蛋白质可能存在一定的偏差。
2. 紫外吸收法：蛋白质在280nm 波长处有特征吸收，可以通过测定发酵液在该波长下的吸光度来估算蛋白质含量。
该方法简单快捷，但对于含有其他在该波长下有吸收的物质的发酵液可能不太准确。
3. bca 法：这种方法利用了bca（二喹啉甲酸）试剂与蛋白质结合后在特定波长下的吸光度变化。
bca 法常用于微量蛋白质的测定，具有较高的准确性和灵敏度。
4. 凯氏定氮法：这是一种经典的蛋白质定量方法，通过测定发酵液中氮的含量，并根据蛋白质的氮含量来计算蛋白质含量。
凯氏定氮法是一种较为准确的方法，但操作复杂，需要较长的时间。
选择合适的蛋白质含量测定方法应根据具体的实验需求和发酵液的特点来决定。
在进行测定时，应注意控制实验条件和操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。
用凯氏定氮法测定食品中的蛋白质含量
用凯氏定氮法测定食品中的蛋白质含量用凯氏定氮法测定食品中的蛋白质含量陈智慧1史梅1 王秋香2张晓红2(1.新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所新疆 830063; 2.新疆农业大学动物医学学院新疆 830052)[摘要]为了更加精确的运用凯氏定氮法检测分析食品中蛋白质的含量,本文分别用全量凯氏定氮法、微量凯氏定氮法和凯氏自动定氮仪来测定了食品中的蛋白质的含量,结果发现用两种方法对同一样品中的蛋白质含量得出数值高低不同,全量凯氏定氮法的结果更加精确，微量法次之。
[关键词]凯氏定氮法；精确；含量；蛋白质Method for determination of protein contentin foodsWangQiu-xiangAstract:In order to more precise use of Kjeldahlmethod of detecting the protein content in food, we were in fullvolume Kjeldahl, trace Kjeldahl law and Kay's automatic instrumentto measure the nitrogen in food protein The content, and found twoways of the same protein content in the samples drawn high and lowvalues, all of Kjeldahl method more accurate results. Trace oftimes.Key words: Kjeldahl; accurate; content offood，Protein前言测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算，如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等；另一类是利用化学方法来计算，如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等主要测定方法有：双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法.目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。
凯氏定氮法测定蛋白质的含量
凯氏定氮法测定蛋白质的含量一、原理：有机含氮化合物与浓硫酸共热消化，氮转化为氨，再与硫酸结合成硫酸铵。
硫酸铵与强碱反应，放出氨。
将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中，再用标准碱溶液进行滴定。
根据测得的氨量，计算样品的总氮量。
二、试剂与材料：浓硫酸、硫酸钾－硫酸铜粉末（称取80g硫酸钾和20g硫酸铜（五水），0.3g二氧化硒研细混合）、30％氢氧化钠溶液、2％硼酸溶液、0.01M标准盐酸、混合指示剂（田氏指示剂）储存液（取50ml0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1％甲基红溶液混合，储存于棕色瓶中备用。
此指示剂在PH5.2为紫色；PH为5.4为暗灰色或灰色；PH5.6为绿色；变色点为PH5.4）、硼酸－田氏指示剂混合液（100ml2％硼酸溶液，滴加约1ml田氏指示剂，摇匀后，溶液呈紫红色）、蛋白质样品、容量瓶、吸管、凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、微量滴定管、电炉浓硫酸500ml硫酸钾200g硫酸铜200g硼酸50g盐酸200ml甲基红0.5g溴甲酚绿0.5g三、操作方法1、样品处理：固体样品，应在105℃干燥至恒重。
液体样品可直接吸取一定量，也可经适当稀释后，吸取一定量进行测定，使每一样品的含氮量在0.2－1.0mg范围内。
2、消化：取一定量样品，于50ml干燥的凯氏烧瓶内。
加入300mg硫酸钾－硫酸铜混合粉末，再加入3ml浓硫酸。
用电炉加热，在通风厨中消化，瓶口加一小漏斗。
先以文火加热，避免泡沫飞溅，不能让泡沫上升到瓶颈，待泡沫停止发生后，加强火保持瓶内液体沸腾。
时常转动烧瓶使样品全部消化完全，直至消化液清澈透明。
另取凯氏瓶一个，不加样品，其它操作相同，作为空白试验，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，以对样品进行校正。
3、蒸馏：将微量凯氏蒸馏装置洗涤（先用水蒸气洗涤）干净。
将凯氏烧瓶中的消化液冷却后，全部转入100ml的容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。
吸取20ml稀释消化液，置于蒸馏装置的反应室中，加入10ml30％氢氧化钠溶液，将玻璃塞塞紧，于漏斗中加一些蒸馏水，作为水封。
蛋白质含量测定(凯氏定氮法)
食品中蛋白质含量测定（凯氏定氮法）一、目的与要求1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。
2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。
二、实验原理蛋白质是含氮的化合物。
食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。
因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、仪器与试剂硫酸铜（CuSO4·5H20）硫酸钾硫酸（密度为1.8419g/L）硼酸溶液（20g/L）氢氧化钠溶液（400g/L）0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。
混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。
微量定氮蒸馏装置：如图3-所示。
图3-微量凯氏定氮装置1、电炉；2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。
四、实验步骤1、样品消化称取样品约2.00g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。
试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。
2、定氮装置的检查与洗涤检查微量定氮装置是否装好。
在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。
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摘
要： 从啤酒酵母 中提取 出水溶性粗 多糖 Ｓ 进 一步纯化得 Ｓ １， Ａ， Ａ 采用 凯氏定 氮法 ， 经消化、 蒸馏 、 滴定后计算其
蛋 白质 含 量 ，分别 为 ７ ３ ％ 和 ２４ ％ ． ．６ ．５
关键词 ： 凯氏定 氮法；蛋 白质 ；啤酒酵母多糖 作者简介 ： 张丽霞（９ ２一） １７ ，女，黑龙江绥棱人 ，大庆 师范学院生命 科学系教 师，主要从事 多糖 生物化 学的研 究。 中图分类号 ：Ｑ ７ 文献标识 码 ： 文章编号 ：０ ６—２６ （０ ７ ０ ０ ０ ０ 收稿 日期 ：０６—１ Ｔ ｏ５ Ａ １０ １５ ２ ０ ）２－ １６－ ３ ２０ ２—２ ６ 蛋 白质 是 一 类 最 重 要 的 生 物 大 分 子 物 质 ， 构 成 细 胞 内原 生 质 的 主 要 成 分 ， 生 物 体 内 占有 特 殊 的 地 是 在
１ ３实 验 仪 器 ． Ｌ ＮＫ凯 氏定 氮 快 速 自动 蒸 馏 器 （ 国 宜 兴 市 科 教 仪 器 研 究 所 ）； ＮＫ 一８ ２型 多 功 能 快 速 消 化 器 （ 国 中 Ｌ ７ 中
位 。蛋 白质 分 子 是 由 ２ ０种 天 然 氨 基 酸 通 过 酰 胺 键 以 一 定 的 方 式 结 合 ， 具 有 特 定 的 空 间 构 象 的 高 分 子 化 并 合 物 。 组 成 蛋 白 质 的 化 学 元 素 主 要 为 ｃ、 ０、 在 某 些 蛋 白质 中还 含 有 Ｐ、 ｕ Ｆ 、 等 元 素 ， 氮 元 素 的 Ｈ、 Ｎ， Ｃ 、ｅ Ｉ 但 相 对 丰 度 基 本 稳 定 ， 区 别 于 其 它 有 机 化 合 物 的标 志 性 元 素 。 由 于 不 同 的 蛋 白 质 所 含 的 氨 基 酸 比 例 及 构 是
饰 ， 以 有 效 降 低 葡 聚糖 的 分 支 度 使 它 具 有 很 强 的免 疫 调 节 活 性 。 另 外 ， 聚糖 是 低 热 量 食 品 ， 易 消 化 ， 可 葡 不 因 而 可 以 减 少 血 糖 含 量 ， 防 糖 尿 病 。甘 露 聚 糖 可 以 防 止 病 源 菌 在 肠 道 里 繁 殖 ， 少 肠 道 疾 病 ， 可 以 作 预 减 也
啤 酒 酵 母 （Ｓ ｅｅ ｉｉｅ 属 真 菌 ， 单 细 一３ ％ 酵 母 多 糖 ， 要 是 葡 ．ｃ ｒｖｓａ ） 是 ５ ０ 主 聚 糖 和 甘 露 聚糖 （ ＭＯＳ） 葡 聚 糖 具 有 抗 肿 瘤 、 进 和 激 活 人 体 免 疫 力 等 作 用 ， 而 被 称 为 “ 化 反 应 ， 促 因 生 修饰 物 ” Ｂ （ ＲＦ） 它 主 要 由 Ｂ—Ｄ 一（ ， ） 苷 键 连 接 聚 合 而 成 ， 期 性 的 分 支 点 主 要 是 Ｂ一 （ ， 糖 苷 。 １３ 糖 周 １ ６） 键 。 葡 聚 糖 的 分 离 方 法 是 引 起 葡 聚 糖 分 子 量 变 化 的 主 要 因 素 ， 分 离 过 程 中 将 酵 母 葡 聚 糖 进 行 磷 酸 化 修 在
理 论基 础 。
１材 料和试 剂
１ ．１材 料
实 验 材 料 购 自广 东 丹 宝 利 酵 母 有 限 公 司 。
１２ 试 剂 ．
浓 硫 酸 （ 尔 滨 理 工 化 学 试 剂 有 限 公 司 工 厂 批 号 ：２ ０ ０ １ ０） 硫 酸 铜 （ 阳 市 东 兴 试 剂 厂 批 号 ： 哈 ０ ３ １７ ； 沈 ２ ０ ０ ５）； 酸 钾 （ 津 市 四 新 化 学 试 剂 厂 批 号 ：２ ０ ０ １ ０ ２１ ２ 硫 天 ０ ３ ７ ０）； 酸 （哈 尔 滨 市 化 工 试 剂 厂 批 号 ： 硼 ０ １ １ ； 基 红 （ 明 县 裕 安 裕 西 试 剂 厂 批 号 ： ２ ７ ６） 氢 氧 化 钠 （ 尔 滨 市 金 丽 化 工 试 剂 有 限 公 司 批 ５ ２ ０） 甲 崇 ８０ １ ； 哈 号 ： ６１ １ 盐 酸 （ 尔 滨 理 工 化 学 试 剂 有 限 公 司 工 厂 批 号 ：２ ０ ０ ２ ０）。所 有 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯 试 ０ ０ ８）； 哈 ０ ３ １３ 剂 ， 用 无氨蒸 馏 水配 制 。 均
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第２ ７卷
第 ２期
大庆 师 范 学 院 学 报
Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｏ Ａ Ｉ Ｇ Ｎ Ｒ Ｌ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ Ｏ Ｒ Ａ Ｆ Ｄ Ｑ Ｎ Ｏ ＭＡ Ｎ Ｖ Ｒ ＩＹ
Ｖｏ ． ７ Ｎｏ ２ １２ ． Ａｐ ｉ， ０ ７ ｒｌ２ ０
为 免疫 刺激 因子 ， 高 人体 免疫 力 。在对 啤酒酵 母水 溶性 多糖 进行 分离 纯化研 究 时发现 ， 粗多糖 和 纯化 提 在 后 的 单 一 级 份 多 糖 中都 含 有 一 定 量 的 蛋 白质 ， 文 主 要 通 过 对 啤 酒 酵 母 水 溶 性 多 糖 中 蛋 白 质 含 量 的测 定 ， 本 以进一 步 了解啤 酒酵母 水溶 性 多糖 的功 能 、 用价值 和作 用机 理 ， 为充 分 开发 和利用 这一 真菌 资源 提供 药 并
２ｏ ０ ７年 ４月
凯 氏 定 氮 法 测 定 啤 酒 酵 母 水 溶 性 多 糖 中 蛋 白质 含 量
张 丽 霞 张 雅 君 ，
（ ． 庆 师 范 学 院 生 命 科 学 系 ， 龙 江 大庆 １ ３ １ ；． 恺 农 业 技 术 学 院 生命 科 学 院 ， 东 广 州 ５ ０ ２ ） １大 黑 ６ ７ ２２ 仲 广 １２ ５