苏丹Ⅲ染色液使用说明
细胞染色剂
1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。
称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。
把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。
用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。
柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。
使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。
3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。
作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。
能杀死细胞固定。
6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。
常用染色液的配制
一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。
⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。
⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。
第四次实验 脂类化学—苏丹III染色法
在铺片时应掌握好力度，若用力过大，则肠系膜容易被撕破，铺片不成功；若用力过小，则细胞不能被铺呈单层，影响染色及观察。
【实验步骤】
1、断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠，将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪刀连同盖玻片和其上粘附的肠系膜剪下，反扣与载玻片上，由盖玻片一边滴入甲醛，使其渗入盖玻片与载玻片间的空隙里，固定20min。
2、吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体，以除去固定液。
3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
㈡实验中注意事项有：
1.在抓握小鼠时，应迅速掐住其两耳之间的皮肤，使其头部不可扭动，并用同一只手掐住其背部至尾巴的皮肤，使小鼠整个腹部皮肤紧绷，不能反击。
粪便苏丹Ⅲ染色检查
粪便苏丹Ⅲ染色检查简介粪便检查是医学临床诊断中常用的一种检查方法，通过对患者的粪便样本进行染色观察，可以帮助医生判断患者的肠道健康状况。
粪便苏丹Ⅲ染色检查是其中的一种检查方法，具有较高的特异性和敏感性，常用于检测肠道感染和炎症等疾病。
检查原理粪便苏丹Ⅲ染色检查是通过特殊染色方法将粪便样本中的脂质类物质染色，进而观察细胞结构和细胞内脂质沉积情况。
苏丹Ⅲ染色是一种脂类颗粒染色方法，能够使细胞内的脂质颗粒呈现红色或橙色，从而帮助医生判断细胞内脂质含量的丰富程度。
检查步骤1.采集粪便样本：在患者排便后，用无菌容器收集新鲜的粪便样本。
2.制备涂片：取少量粪便样本涂布在载玻片上，待干燥后固定。
3.苏丹Ⅲ染色：将固定的载玻片依次浸入苏丹Ⅲ染色溶液中，定时染色。
4.脱色：将染色后的载玻片在适当的脱色液中脱色。
5.干燥：在通风干燥处晾干载玻片。
6.镜检：在显微镜下观察载玻片，观察粪便细胞的染色情况及脂质颗粒的分布。
检查结果分析1.正常情况下，粪便细胞内脂质颗粒很少，呈现淡红色或橙色。
2.异常情况下，粪便中脂质颗粒增多，呈现较深的红色或橙色。
这可能是由于肠道感染、炎症或其他疾病引起的细胞内脂质变化。
应用领域粪便苏丹Ⅲ染色检查主要应用于以下领域：•检测肠道感染性疾病，如细菌性痢疾、阿米巴肠病等。
•评估炎症性肠病，如溃疡性结肠炎、克罗恩病等。
•判断肠道吸收功能，如脂肪吸收障碍等。
注意事项1.采集样本应避免杂质和尿液等其他物质的污染。
2.染色操作应按照标准操作规程进行，避免染色不均匀或过度染色。
3.检查结果需结合临床病史和其他检查结果进行综合分析，不能单凭染色结果做出诊断。
结语粪便苏丹Ⅲ染色检查是一种简单而有效的肠道检查方法，对于一些肠道疾病的筛查和诊断具有重要意义。
医务人员在使用该检查方法时应掌握操作技巧，准确解读检查结果，从而提高检查的准确性和临床应用价值。
人教版高中生物新教材常见实验材料使用注意事项总结
人教版高中生物新教材常见实验材料使用注意事项总结1.斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH溶液，乙液：质量浓度为）：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂0.05g/ml 的CuSO4注入待测组织样液，50-65℃水浴加热约2min，如待测组织样液中存在还原糖，则由蓝色转为砖红色沉淀。
2.双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH，B液：质量浓度为0.01g/ml）：向待测液中先注入双缩脲试剂A液1ml，摇匀，再向其中加入双缩脲的 CuSO4试剂B液4滴，摇匀。
如待测组织样液中存在多肽或蛋白质，则由浅蓝色转为紫色。
3.质量浓度为0.01g/ml的苏丹Ⅲ染液：取在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹染液，用吸水纸吸去染液，再滴加1-2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色。
检测脂肪，可将脂肪染成橘黄色。
4.碘液：鉴定淀粉，淀粉遇碘液变蓝。
5.健那绿（活性染色剂）：用于检测线粒体，使线粒体染色呈蓝绿色。
6.酒精：①体积分数为50%的酒精溶液：在苏丹Ⅲ染液检测脂肪实验中用于洗去浮色。
②70%的酒精溶液：用于菊花组织培养实验中对操作者双手、超净工作台台面及流水冲洗后的外植体消毒。
③体积分数为95%的酒精溶液：和质量浓度为15%的盐酸等体积混合，作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分散开来；在低温诱导植物细胞染色体数目变化实验中，用于洗去卡诺氏液。
④预冷的95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是不溶于体积分数为95%的预冷酒精，而细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，据此可以用于DNA的粗提取。
⑤100%的酒精溶液（无水乙醇）：用于色素的提取。
7.盐酸：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输。
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
③物质的量浓度为0.01mol/L的盐酸：用于影响酶活性的条件实验；用于模拟生物体维持pH 稳定实验。
④质量浓度为15%的盐酸：和体积分数为95%的酒精溶液等体积混合作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分离开来。
高中生物-染色剂
高中生物染色剂1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。
称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。
把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。
用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。
柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。
使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。
3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
4、苏丹Ⅲ :配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。
能杀死细胞固定。
6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。
实验室常用染色液
三、常用染料介绍（一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。
它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
脂类染色
脂类染色脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。
它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。
在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。
脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。
脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。
脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。
经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。
根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。
脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。
一、苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法：操作方法：（1）固定于10%甲醛的组织。
（2）水洗后采用冰冻或石蜡切片。
（3）经蒸馏水后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1-2分钟。
（4）自来水冲洗。
（5）水洗后，移入70%酒精5秒钟。
（6）投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间，置于56℃温箱中。
（7）在70%酒精中洗涤5-10秒钟。
（8）洗于蒸馏水中，然后将切片移于载玻片上。
（9）切片移于玻片上，将切片周围的水分小心擦掉。
（10）甘油明胶封固。
结果：脂肪呈橙红色或鲜红色或黑色，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。
试剂配制：1. 苏丹Ⅲ染液配法：将0.15克苏丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。
注：浸染时，容器必须盖好，否则酒精或丙酮挥发，染料沉淀。
2.甘油明胶配制：明胶 40g蒸馏水 210ml甘油 250ml石碳酸结晶 5ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间，然后加甘油和石碳酸，加热15分钟，摇搅直至混合液均匀为止。
二、苏丹Ⅳ(Sudan Ⅳ)染色法：苏丹Ⅳ又名猩红，是苏丹Ⅲ的衍生物，作为脂肪染剂，经各地实验证明，其结果优于苏丹Ⅲ。
百度文库-苏丹三染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司Http//苏丹Ⅲ染色液产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。
中性脂肪是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。
在正常情况下，除脂肪细胞外，其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。
产品组成：货号产品规格储存条件S-1524苏丹Ⅲ染色液50ml RT避光Harris苏木素染色液50ml RT避光-- 说明书1份实验前说明：1、要先做预实验，掌握基本操作。
2、石蜡切片不可用于脂肪染色，如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚一般为6-10um 。
过程说明：1.新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃，如标本为脂肪瘤，应调节至-30℃。
2.冰冻切片5-10um（6～8um为佳），贴于载玻片上。
3.滴入70%乙醇20s-30s，4.甩掉70%乙醇，放入苏丹Ⅲ染色液中，37℃烘箱10-20分钟。
5.吸取少量70%乙醇冲洗标本。
水洗。
6. Harris苏木素染核2-3分钟，返蓝，水洗，甘油明胶封片。
染色结果：肝组织×400结果判定：脂肪呈猩红色，细胞核呈蓝色。
苏丹Ⅲ染色液
苏丹Ⅲ染色液
简介： 中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑 B、油红 O 法等。苏丹染料
脂质染色的机理一般认 为纯属物理学的脂 溶作用和吸附作 用。苏丹类染料 由于在脂质中的 溶解度大于在有机溶剂 的溶解度，所以染 色时染料便从染 液中转移到被染 的脂质中去，使 脂质呈现出染液的颜色 。苏丹Ⅲ染色液主 要用于显示组织 器官的脂肪变性 和类脂质的异常 沉着，常发生于肝、肾 、心等实质脏器的 脂肪变性，细胞 内出现多数中性 脂肪滴；鉴别和 诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
组成：
名称
编号 DL0005 Storage
3×50ml
试剂(A): Mayer 苏木素染色液
50ml RT 避光
试剂(B): 苏丹Ⅲ分化液
50ml RT
试剂(C): 苏丹Ⅲ染色液
50ml RT 避光
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃。如样本为脂肪瘤，应调节至-30℃。 2、 冰冻切片 6～15μm(6～8μm 为佳)，贴于载玻片上。 3、 蒸馏水稍洗。 4、 入 Mayer 苏木素染色液复染核。 5、 自来水洗后，苏丹Ⅲ分化液分化数秒，流水洗至核为蓝色。 6、 蒸馏水冲洗后，入 70%乙醇稍微浸洗一下。 7、 入苏丹Ⅲ染色液浸染。 8、 70%乙醇分化数秒，自来水洗。 9、 用滤纸将切片及周围的水分吸去，让其稍微干燥。 10、 甘油明胶封固。
染色结果：
中性脂肪 细胞核
Байду номын сангаас
橘红色 淡蓝色
注意事项：
北京雷根生物技术有限公司
1、 标本丌宜采用含有乙醇的固定液、也丌宜用石蜡切片，需用冰冻切片。如需固定应采用 10%中性福尔马林固定液或 10%甲醛-钙液。
常用染色液的配制
常用染色液的配制1.吕氏(Loefflev)美蓝染色液A液:2%美蓝(Methylene blue)95%酒精溶液B液:10%KOH溶液取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。
2.石炭酸复红染色液A液:4%碱性复红(basic fuchsin)95%酒精溶液将碱性复红在研钵中研磨后,逐渐加入95%酒精,继续研磨使其溶解、配成A液。
B液:5%石炭酸溶液取A液10ml、B液90ml混合即可。
一般可将此溶液稀释5-10倍使用。
但稀释液易变质失效,一次不宜多配。
3.革兰氏(gram)染色液(1)草酸铵结晶紫染液:A液:1%结晶紫(Crystal violet)95%酒精溶液B液:1%草酸铵(Ammonium oxalate)溶液取A液20mlB液80ml,静置48/小时后使用。
(2)路哥氏(Lugol)碘液:碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液另,待碘全部溶解后,加够水即成。
(3)95%酒精溶液(4)蕃红(沙黄)复染液:2.5%蕃红(Safranlne O)95%酒精溶液。
取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。
4.芽孢染色液(1)5%孔雀绿(Malachite green)溶液。
(2)0.5%蕃红溶液。
(3)苯酚品红溶液称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。
再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
(4)黑色素(nigrosin)溶液10%黑色素溶液,置沸水浴中30min后,滤纸过滤二次,补加水到100ml, 然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
5.荚膜染色液(1)黑色素水溶液将黑色素在蒸馏水中煮沸5min,配成5%溶液,然后加入40%甲醛0.5%(v/v)作防腐剂。
(2)蕃红染色液与革兰氏染色液中的蕃红复染液相同。
6.鞭毛染色液A液:单宁酸5.0g、FeC131.5g、蒸馏水100ml,福尔马林(15%)2.0ml、NaOH(1%)1.0ml。
脂类细胞化学--苏丹Ⅲ染色法实验报告讲解
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目脂类细胞化学--苏丹III染色法【实验题目】脂类细胞化学--苏丹III染色法【实验目的】1. 了解脂肪染色的原理、掌握脂类标本制片；2. 学习用苏丹III染色法进行脂肪细胞的染色技术；3. 学会用断头法处理小白鼠以及小白鼠的解剖方法。
【实验材料与用品】1. 试剂：苏丹Ⅲ染液、70%乙醇溶液、甲醛钙2. 器具：显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀，解剖盘3. 材料：小白鼠【实验原理】脂类包括的范围很广，有单纯脂、复合脂、衍生脂等。
脂肪依其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂以及其他类脂质。
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪与类脂类和蛋白质结合时，往往不易显出，但用重铬酸钾、升汞、硝酸钴或硝酸铀氧化组织块或切片，可以显现出脂肪和类脂类。
脂类不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此脂类标本的制作，需用不含酒精或不能溶脂的液体固定，一般常用甲醛类固定剂。
脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV、苏丹黑或者苏丹红等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料也是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者：科目 细胞生物学实验 实验题目 脂类细胞化学--苏丹III 染色法配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
实验三 苏丹
实验三苏丹Ⅲ染色法染小鼠肠系膜脂肪细胞【实验目的】1、熟悉脂肪显示技术，了解脂肪在脂肪细胞中的分布2、用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。
【实验原理】脂类包括的范围很广，有单纯脂、复合脂、衍生脂等，脂肪依其性质可分中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、髓磷脂以及其他类脂质。
通常，各种脂与类脂质在体内不是单独存在，是以某种程度混合存在。
脂肪于类脂质和蛋白质结合时，往往不易显出，但用重铬酸钾、升汞、硝酸钴或硝酸铀氧化组织块或切片，可以显现出脂肪及类脂类。
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂类不溶于水，易溶于酒精、苯、乙醚、氯仿。
因此脂肪标本的制作，需要不含酒精或不能溶脂的液体固定。
一般常用甲醛类固定剂。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类，使用时，注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂溶性染料显示法即采用苏丹染料中的苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ或苏丹黑等溶于脂类使脂类显色的原理显示脂类，使用时，注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹Ⅲ的70%酒精饱和液或丙酮和70%酒精等量饱和液，可将脂肪染为橙红色。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片。
脂肪标本一般不用石蜡切片或火胶棉包埋，而用如下方法。
冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
脂肪细胞主要是贮存脂肪，而脂肪组织主要是由脂肪细胞组成，从而贮存能量。
主要由两种脂肪组织，白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT），它们是由两种不同的脂肪细胞组成，在小鼠的肠系膜中主要是WAT。
常用染色液的配制.
常用染色液的配制1.番红水液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。
2. 番红酒液番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。
4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。
5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
6.改良苯酚品红染液原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。
原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。
原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。
染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。
7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。
8. 中性红染液将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。
9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。
10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。
现常用结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。
11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g 洋红粉末（切记不可一次倒入）。
待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。
静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。
12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
配方Ⅱ：代氏苏木精（De larfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml丙液：甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
细胞生物学实验报告_小鼠肠系膜脂肪细胞苏丹Ⅲ染色
图 2. 染料苏丹Ⅲ的分子结构式。
山东大学细胞生物学实验报告小鼠肠系膜脂肪细胞苏丹Ⅲ染色2012/10/16实验目的：取小鼠肠系膜用脂类染料苏丹Ⅲ染色，观察肠系膜血管周围脂肪细胞的形态和分布，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理，熟悉脂类染色的操作方法。
实验原理：脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。
在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。
通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。
在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘（图1-B, 1-C, 1-D ）。
图1. 小肠肠系膜脂肪细胞的分布及人体内常见脂肪细胞的切面形态。
A. 肠系膜上微血管与脂肪细胞的分布及营养物质流通方向示意图。
脂肪细胞均匀分布在微血管周围，营养物质经小肠吸收后进入小肠外围毛细血管，经肠系膜血管汇总进入肝脏，肠系膜毛细血管外围脂肪细胞与脂质的储存有关。
B 、C 、D. 三种脂肪细胞的透射电镜切片（人为染色）。
B 为典型的白色脂肪细胞（单房细胞），细胞质中只有一个脂肪滴，细胞核扁平，位于细胞边缘；D 为典型的棕色脂肪细胞（多房细胞），细胞质中分散有多个脂肪滴，含有大量线粒体（染作绿色）；C 类细胞细胞质中脂肪滴未完全融合，介于B 与D 之间。
B 是肠系膜脂肪细胞的主要形态，偶尔也存在C 类脂肪细胞。
在小鼠肠系膜毛细血管和淋巴管周围，常有单层白色脂肪细胞（对应棕色脂肪细胞）存在（图1-A ）。
这些脂肪细胞的作用主要是以甘油三酸酯和胆固醇酯的形式储存毛细血管从小肠中吸收的部分脂质，待机体需要时再将贮存的脂肪释放到血液中，在特定组织降解并氧化供能。
褐色脂肪细胞由于本身含有大量线粒体，可在脂肪细胞内氧化脂类供能。
细胞中的脂肪不溶于水，易溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂，因此，对脂肪细胞的固定、染色不能使用脂溶剂。
高中生物实验所有染色剂及其性质详解
高中生物实验所有染色剂及其性质详解1斐林试剂检测可溶性还原糖原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现用现配,条件需要水浴加热.应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断,如糖尿病、肾炎.2苏丹Ⅲ、苏丹Ⅲ检测脂肪原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅲ+脂肪→红色注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察.应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪.3双缩脲试剂检测蛋白质原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色注意：双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温（不需要加热）.应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定.4碘液检测淀粉原理：淀粉+碘液→蓝色注意：这里的碘是单质碘,而不是离子碘.应用：检测食物中营养成分是不是含有淀粉5 DNA的染色与鉴定染色道理：DNA+甲基绿→绿色应用：能够显示DNA在细胞中的分布.鉴定道理：DNA+二苯胺→蓝色应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂.6吡罗红使RNA呈现红色原理：RNA+吡罗红→红色应用：能够显示RNA在细胞中的分布.注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色.7台盼蓝使死细胞染成蓝色原理：正常的活细胞,细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色.应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性.8线粒体的染色道理：健那绿染液是埋头性染线粒体的活细胞染料,能够使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色.应用：能够用高倍镜观察细胞中线粒体的存在.9酒精的检测原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色.应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶.10 CO2的检测原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄.应用：根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短,能够检测酵母菌造就液中CO2的产生情况.11染色体（或染色质）的染色道理：染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液）染成深色.应用：用高倍镜观察细胞的有丝盘据.12吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应道理：吲哚酚即2,6-二氯酚靛酚钠,其水溶液为蓝紫色,维生素C具有还原性,能将其褪色.应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C.13亚硝酸盐的检测出现玫瑰红原理：在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料.应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量.14脲酶的检测道理：细菌合成的脲酶能够将尿素分解成氨,氨会使造就基的碱性增强,使PH降低,从而使酚红唆使剂变红.应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂,培养某种细菌后,看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素.15伊红美蓝检测大肠杆菌原理：在伊红美蓝培养基上,大肠杆菌的代谢产物（有机酸）与XXX结合使菌落呈现黑色.应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量.16刚果红检测纤维素分解菌道理：刚果红是一种染料,它能够与像纤维素这样的多糖物资形成白色复合物,但其实不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应.当在含有纤维素的造就基中插手刚果红时,刚果红能与造就基中的纤维素形成白色复合物.当纤维素被纤维素分解菌分解后,刚果红-纤维素的复合物就没法形成,造就基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈.应用：筛选纤维素分解菌.弥补(有局部重复)：1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml,取10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml,取5gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等.还原性糖与斐林试剂发生作用,生成砖红色沉淀.如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等.2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中,冷却后,稀释到150毫升.称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克,加蒸馏水600毫升,加热使之溶解,冷却后,稀释到850毫升.把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中,搅匀后即为班氏尿糖定性试剂.用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成,故加入柠檬酸钠.柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂,它能与铜离子形成可溶性络盐）.利用方法同斐林试剂,所不同的是班氏试剂可长期利用.3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为0.1g/ml,取10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml,取1gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml利用时,先加A液,后加B液作用：鉴定蛋白质,蛋白质与双缩脲试剂发生作用,可产生紫色反应.也可用于鉴定多肽.4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ,溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪,脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅲ染成红色）.5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）.作用：用于洋葱根尖的解离,即使组织中的细胞相互分离开来.能杀死细胞固定.。
第四次实验 脂类化学—苏丹III染色法
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
但从图中也可看出，脂肪细胞多层叠在一起，且染色并不充分，细胞没有呈现出明显的桔红色，而是一种呈一种偏淡黄的颜色。造成这种现象可能的原因为：铺片时，没有将肠系膜铺的足够充分，导致脂肪细胞重叠，影响观察，进而影响了染色，因为细胞层数多，染液很难进入到细胞中，30min后，细胞依然没有呈现出桔红色。
在铺片时应掌握好力度，若用力过大，则肠系膜容易被撕破，铺片不成功；若用力过小，则细胞不能被铺呈单层，影响染色及观察。
3.材料：小鼠
【实验原理】
脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多，将会影响其正常功能。如脂肪肝。
实验结果图示脂肪染色局部放大图分析与讨论脂肪细胞血管脂肪细胞血管结果分析由以上三幅图可看出染色较为成功可以观察到脂肪细胞呈圆球形内充满橘色脂类物质并可以观察到小鼠肠系膜上脂肪细胞附着的血管
脂类化学—苏丹Ⅲ染色法2011年3月31日
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苏丹Ⅲ染色液使用说明
货号：G1510
规格：100ml/500ml
保存：室温避光保存，有效期12个月。
产品说明：
脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。
2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。
中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。
在正常情况下，除脂肪细胞外，其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅲ染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，细胞内出现多数中性脂肪滴；鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
标本不采用含有乙醇的固定液(如需固定可采用10%中性福尔马林)、也不采用石蜡切片，需用冰冻切片或碳蜡切片。
自备材料：
1、载玻片
2、70%乙醇
3、Mayer苏木素染色液
4、分化液
5、蒸馏水
6、显微镜
7、甘油明胶封固液
操作步骤（仅供参考）：
1.新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃。
如样本为脂肪瘤，应调节至-30℃。
2.冰冻切片6～15μm(6～8μm为佳)，贴于载玻片上。
3.蒸馏水稍洗。
4.入Mayer苏木素染色液，复染核1min。
5.自来水洗后，苏丹Ⅲ分化液分化数秒，流水洗至核为蓝色。
6.蒸馏水冲洗后，70%乙醇稍微浸洗一下。
7.入苏丹Ⅲ染色液，浸染30min。
8.70%乙醇分化数秒，自来水洗。
9.用滤纸将切片及周围的水分吸去，让其稍微干燥。
10.甘油明胶封固。
染色结果：
中性脂肪橘红色
细胞核淡蓝色
注意事项：
1、标本不宜采用含有乙醇的固定液、也丌宜用石蜡切片，需用冰冻切片。
如需固定应采用
10%中性福尔马林固定液或10%甲醛-钙液。
2、在染色过程中必须防止染料发生沉淀。
故切片入染液时应密封，勿不流动空气相接触，避免溶液挥发时发生沉淀。
3、冰冻切片较易着色，Mayer苏木素复染时应避免过染。
4、苏丹染料容易褪色，应密闭保存。
5、甘油明胶封固的样本，保存时间不长。
如需长期保存，可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。