慢病毒的浓缩与纯化——PEG-8000浓缩法

慢病毒的浓缩与纯化——PEG-8000浓缩法

实验试剂

1. NaCl

2. PEG8000

实验设备

1. 高压灭菌锅

2. 0.45μm滤头

3. 高速离心机

4. 低温冰箱

实验步骤

1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度30min 湿热灭绝30min；保存在4℃。

2. 使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液；

3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000 NaCl母液7.5 ml；

4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次；

5. 4度放置过夜；

6. 4度，4000 g，离心20min；

7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；

8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；

9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。