HRP辣根过氧化物酶稳定剂
辣根过氧化物酶(hrp)标记抗体的简易方法
辣根过氧化物酶(hrp)标记抗体的简易方法
过氧化物酶(hrp)标记抗体是用来表征可以探针凝集反应的特异性抗体，在临床实验研究中的应用得到广泛的认可。
它的应用范围十分广泛，比如体液免疫学分析、组织学病理学分析以及疾病诊断、计量检验研究等等。
简单说，hrp标记抗体是把过氧化物酶hrp与抗体联合在一起，通过特异性抗体与被检物质（抗原）之间的可凝集反应得以应用，通过hrp的过氧化反应，这种反应被放大从而易于检测（可见部分检测反应使用对抗联系）。
hrp标记抗体的简易方法主要包括直接标记（direct labeling）和间接标记（indirect labeling）两种方法。
直接标记就是直接在抗体上表征过氧化物酶，而间接标记则是用一种不活性的人工抗原（Artificial antigen）表征过氧化物酶，再将其与抗体结合之后实现标记。
不同的是，直接标记方式要求抗体具有足够的处理过氧化物酶hrp 的敏感性和穩定性，另外在反应过程中要确保hrp能均匀分布在抗体表面，而间接标记有利于hrp的均匀分布，能够有效改善抗体的表位，延长其在反应中的有效性。
虽然hrp标记抗体分析系统在实验室研究中受到广泛应用，但是其具体的标记方法却不断地发生变化。
为了确保标记过程的准确性，要首先确定优选的hrp、hrp连接剂和标记抗体，并根据原料质量和实验程序做出必要的改变以保证标记抗体的有效性和稳定性。
其次，在进行标记前要检查原料和实验设备是否合适，确保反应条件的正确性，并在延迟反应过程中加入缓冲剂和阻垢剂以延长抗体、hrp以及hrp连接剂的稳定性。
最后，建议实验人员按照规定的步骤进行实验，以保证结果的可靠性，并且确保标记抗体在模板或探针过程中不会造成污染。
HRP(辣根过氧化物酶)标记抗体的方法
(12) 透析袋，大、小烧杯，试管，吸管等。
简易过碘酸钠法
本法是以NaIO４先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所
获酶标记抗体的产率高，将近70％的HRP和Ig结合，99％的Ig与酶结合，酶与Ig的活性无重
大损失，是目前最常用的方法。
40,000 160,000 IgG量
(3) 本法标记步骤比较简单，重复性好。缺点是酶的利用率低，一般只有2～4％的
酶与蛋白质结合。
4. 试剂及器材：
(1) 0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，
(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。前者形成的产物为深桔黄色或棕色，后者产物为蓝绿
色，二者的可溶性均好，在避光处颜色稳定，空白可近于无色，灵敏度上据报道后者比前
者可高4倍以上。另外，还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺
酸)]，其反应产物呈蓝绿色，且灵敏度和稳定性均好。尤其是在致癌的潜在可能性方面，
2. 标记步骤:
(1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。
(2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO４溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3) 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0～9.5，然后立
(2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分
钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅
酶标记抗体
酶标记抗体
产品概述：
酶标记抗体,是一类广泛用于生物学和医学科学的许多领域，具有高特异性、高敏感性和安全的免疫化学试剂。
目前较为常用的辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体就是其中的一种，它是经过化学方法将辣根过氧化物酶（HRP）标记在抗体IgG分子上而制成的HRP－抗体结合物。
我公司向用户提供的各类辣根过氧化物酶标记产品均为本公司自主研发的产品，HRP 购于美国SIGMA公司的产品，根据本公司建立的目前较先进的过碘酸钠氧化法标记技术而成。
每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。
产品的工作浓度根据方法不同而别，用前最好-20℃冻存，避免反复冻融。
应用范围：
应用于抗原决定族的抗原性分析鉴定，各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
工作中应注意的问题：
1、包被抗体或抗原不适，易产生阳性值较小，或产生变异，即跳管现象。
2、用抗血清不纯化，或纯化程度太低的抗体包被，则阳性值较小，或没有阳性梯度。
3、封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
主要性能：
每只0.1ml液体，内含IgG约1mg/ml，1% BSA，0.01%庆大霉素。
-20℃保存，稳定期一年。
4℃保存约3～6个月，4℃可30天左右。
稀释液为：0.01mol/L pH7.4PBST。
工作效价：
ELISA法：1：5000～10000
免疫印迹法：1：500～5000。
辣根过氧化物酶(HRP)标记蛋白的方法
HRP 的NaIO4标记法一．原理：HRP为一种糖蛋白（glycoprotein），其所带的糖基上的糖环能被氧化开环，在2，3—位的—C—C—断开。
在适当的氧化条件下，2，3—位羟基能被氧化为醛基。
醛基在碱性条件下可与被标记物的自由氨基（—NH2）形成Shiff碱（—N=CH—），Shiff碱不稳定，可由逆反应解离。
Shiff碱可由还原剂还原成—CH2—NH—，在HRP与被标记物间形成稳定的共价交联。
HRP的NaIO4标记法所用氧化剂为NaIO4，还原剂采用NaBH4。
Note:1.产物A不稳定，故用NaBH4还原为产物B。
2.HRP的氧化要适度，氧化不够不能产生足够量的醛基，如氧化过度，醛基可被进一步氧化为羧基，同样也得不到够量的醛基。
可通过控制NaIO4的量或控制氧化的时间来调节HRP糖基的氧化度。
当糖基的氧化度为20～25%时，有较高的结合效率。
3.为了防止HRP的过度氧化，在整个标酶的过程中应尽量避光。
光照可加快过碘酸钠对HRP糖基的氧化，如在标记过程中不避光，则不可控因素太多。
4.反应的最后一步用NaBH4来还原的反应比较剧烈，对酶活性的影响比较大。
有时可考虑在酶与糖基之间添加一个手臂，如联苯胺反应。
二．酶量的确定：被标记物在本实验室主要为抗原与抗体。
抗原与HRP的比值通常为摩尔比1：1。
而抗体与HRP的比值通常为质量比1.6：1。
当然，这只是一个基点，可根据需要上下调整比率。
统计本次标记所需酶的总量，设为x mg。
三．酶的氧化（全过程避光，操作中力防污染。
酶的终浓度为10mg/mL，总体积为x/10mL）1.称取HRP x mg。
当HRP从-20℃取出后，一定要平衡到室温，否则HRP冻干品易潮解。
称量时不要用称量纸，不要用工具取HRP，应将HRP直接小心地倒入要用来溶解HRP的器具中。
在倒HRP时，不要在风口（如电风扇风，自然风，呼吸）操作，因为HRP冻干品质轻易飞扬；尽量不要说话，以防污染。
辣根过氧化物酶（HRP）标记蛋白的方法
辣根过氧化物酶（HRP）标记蛋⽩的⽅法HRP 的NaIO4标记法⼀．原理：HRP为⼀种糖蛋⽩（glycoprotein），其所带的糖基上的糖环能被氧化开环，在2，3—位的—C—C—断开。
在适当的氧化条件下，2，3—位羟基能被氧化为醛基。
醛基在碱性条件下可与被标记物的⾃由氨基（—NH2）形成Shiff碱（—N=CH —），Shiff碱不稳定，可由逆反应解离。
Shiff碱可由还原剂还原成—CH2—NH—，在HRP与被标记物间形成稳定的共价交联。
HRP的NaIO4标记法所⽤氧化剂为NaIO4，还原剂采⽤NaBH4。
Note:1.产物A不稳定，故⽤NaBH4还原为产物B。
2.HRP的氧化要适度，氧化不够不能产⽣⾜够量的醛基，如氧化过度，醛基可被进⼀步氧化为羧基，同样也得不到够量的醛基。
可通过控制NaIO4的量或控制氧化的时间来调节HRP糖基的氧化度。
当糖基的氧化度为20～25%时，有较⾼的结合效率。
3.为了防⽌HRP的过度氧化，在整个标酶的过程中应尽量避光。
光照可加快过碘酸钠对HRP糖基的氧化，如在标记过程中不避光，则不可控因素太多。
4.反应的最后⼀步⽤NaBH4来还原的反应⽐较剧烈，对酶活性的影响⽐较⼤。
有时可考虑在酶与糖基之间添加⼀个⼿臂，如联苯胺反应。
⼆．酶量的确定：被标记物在本实验室主要为抗原与抗体。
抗原与HRP的⽐值通常为摩尔⽐1：1。
⽽抗体与HRP的⽐值通常为质量⽐1.6：1。
当然，这只是⼀个基点，可根据需要上下调整⽐率。
统计本次标记所需酶的总量，设为x mg。
三．酶的氧化（全过程避光，操作中⼒防污染。
酶的终浓度为10mg/mL，总体积为x/10mL）1.称取HRP x mg。
当HRP从-20℃取出后，⼀定要平衡到室温，否则HRP冻⼲品易潮解。
称量时不要⽤称量纸，不要⽤⼯具取HRP，应将HRP直接⼩⼼地倒⼊要⽤来溶解HRP的器具中。
在倒HRP时，不要在风⼝（如电风扇风，⾃然风，呼吸）操作，因为HRP冻⼲品质轻易飞扬；尽量不要说话，以防污染。
HRP稳定剂
Tel:+86 571 2882 8608 Toll Free: 400 6721 600(China Only)Fax:+86 571 2882 8618 Website: 辣根过氧化物酶（HRP）偶联物稳定剂产品规格：Technical Service: service@ MultiSciences Biotech Co,. Ltd To place an order: order@ 1ST0011 辣根过氧化物酶（HRP）偶联物稳定剂 2mlST0012 辣根过氧化物酶（HRP）偶联物稳定剂 10mlST0013 辣根过氧化物酶（HRP）偶联物稳定剂 100ml简介：辣根过氧化物酶（HRP）是普遍用于免疫检测的一种酶。
本稳定剂能够显著延长HRP偶联物的有效期、并增加信号的强度。
加入该稳定剂，有利于延长HRP偶联物的稳定性，即使在HRP偶联物较低浓度下，也能够有效保护其活性成份，无需每次稀释的繁琐操作，且结果更加稳定可靠。
推荐用法：本稳定剂可用于各种需要HRP偶联物的实验中，如ELISA, Western Blotting, Immunohistochemistry等。
该稳定剂是一种即用的溶液，可作为HRP偶联物的储存液或稀释液，将HRP偶联物用该溶液稀释即可。
产品安全和操作：该产品根据HCS（Hazard Communication Standard）标准认定，无毒。
不要直接与皮肤和眼睛接触。
如不慎接触，请用大量清水冲洗。
贮存和稳定性：贮存于2~8度。
该稳定剂已用0.22um滤膜过滤，溶于无菌的双蒸水，不含动物成分和蛋白。
其防腐剂成分无毒、无汞。
避免冷冻保存。
示例：实时稳定性研究本过氧化物酶稳定剂对于HRP偶联物的长期稳定性本辣根过氧化物酶偶联物稳定剂可用于免疫分析，如普通的sandwich ELISA系统中，可长时间保存稀释后的HRP标记抗体，保留其活性。
上图显示了在室温或4度条件下，有稳定剂保护的HRP偶联物（1:10000稀释）在9个月后的活性依然能保留90%以上。
抗体的标记——辣根过氧化物酶(HRP)32
抗体的标记修饰抗体可以通过不同的化学试剂交联到酶（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）、荧光染料（FITC、PE、APC等）、生物素（Biotin）、胶体金等。
一、抗体/蛋白的辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体标记HRP最为经典的方法为NaIO4氧化法，先将HRP糖基氧化成醛基，醛基与抗体的-NH2反应生成希夫氏碱反应，抗体分子与HRP分子形成稳定结构。
标记的时候一般按照抗体分子与HRP分子摩尔比1:4的比例进行标记，此时,两者的质量约为1:1。
1. 抗体/蛋白的HRP标记（NaIO4氧化法）标记以2mg抗体为例。
1.1 抗体/蛋白的处理待标记抗体/蛋白在50mM碳酸盐缓冲液(0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH9.6) 中透析，其间换液2次，抗体/蛋白浓度调整为2mg/ml；或者将高浓度的抗体用0.5M碳酸盐缓冲液(0.15M Na2CO3,0.35M NaHCO3 ,pH9.6)稀释到2mg/ml，如果原抗体/蛋白溶液中含有Tris、NH4+等游离氨基的试剂，必须透析除去。
1.2 HRP酶的氧化1.2.1 称取2mg HRP干粉(Frdbio)溶于100 μL ddH2O 中。
1.2.2 称取NaIO4 21mg，溶于1 mL的ddH2O中，吸取100μL NaIO4溶液与100μL的HRP溶液缓慢混合，4℃下静置30min，此时溶液为绿色。
（注意：此后的操作均在避光条件下进行。
）1.2.3 吸取２µL乙二醇缓慢加入氧化后的HRP溶液，室温避光静置30min，此时溶液为褐色。
1.3 抗体的标记1.3.1 将氧化好的HRP溶液直接加入到已处理好的抗体/蛋白溶液中，室温反应２h。
1.3.2 称取0.4mg的NaBH4，溶解于20µL的ddH2O中，全部加入上步反应液中，4℃静置2h，每30min摇动一次。
1.3.3 PBS(pH7.2)透析过夜，标记液中加入体积比30%～50%的甘油，混匀后置于-20℃保存。
用于辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定保护剂,其制备方法及试剂
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011042325.8(22)申请日 2020.09.28(71)申请人 北京森康维特生物技术研究所地址 101499 北京市怀柔区杨宋镇凤翔一园23号(72)发明人 武子函 黄思斯 季志华 张雨 刘伯华 杨鹏 (74)专利代理机构 北京丰浩知识产权代理事务所(普通合伙) 11781代理人 李学康(51)Int.Cl.G01N 33/535(2006.01)G01N 33/58(2006.01)G01N 33/543(2006.01)(54)发明名称用于辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定保护剂，其制备方法及试剂盒(57)摘要本发明涉及体外检测领域，具体讲，涉及一种用于辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定保护剂，其制备方法及试剂盒。
该稀释稳定保护剂中含有缓冲液、防腐剂、3,3',5,5'‑四甲基联苯胺、二甲基亚砜和芳基硼酸。
本发明的稳定保护剂用于保存工作浓度的辣根过氧化物酶标记抗体，使工作浓度的辣根过氧化物酶标记抗体可置2～8℃环境下存放，并可长期保持辣根过氧化物酶标记抗体的催化活性以及抗原结合特异性。
权利要求书1页 说明书11页 附图1页CN 112285342 A 2021.01.29C N 112285342A1.一种用于辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定保护剂，该稀释稳定保护剂中含有缓冲液和防腐剂，其特征在于，所述稀释稳定保护剂中还含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺、二甲基亚砜和芳基硼酸。
2.根据权利要求1所述的稀释稳定保护剂，其特征在于，每1000mL所述稀释稳定保护剂中含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺2～10μM、二甲基亚砜0.2～2mL；优选的，每1000mL所述稀释稳定保护剂中含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺6μM，二甲基亚砜1.2mL。
辣根过氧化物酶
辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶 (Horseradish Peroxidase, HRP) 是一种非常重要且广泛应用于生物科学领域的酶类物质。
它可从辣根 (Armoracia rusticana) 的根部提取得到，具有极高的催化活性和稳定性。
辣根过氧化物酶的研究和应用领域十分广泛，包括生物化学、生物技术、生物传感器、药物研发、环境监测等。
辣根过氧化物酶是一种含有协同结构的催化酶，催化过程中可产生催化环境下所需的氧气和电子供体。
它主要通过催化底物和过氧化氢的反应来产生氧气，从而引发各种生化反应。
其分子量约为44kDa，具有两个主要结构域，一个是含有过氧化物的结构域，另一个是能够与底物结合的结构域。
辣根过氧化物酶的催化活性取决于其在特定条件下的结构稳定性，包括温度、pH值和离子浓度等因素。
辣根过氧化物酶在生物技术领域有着广泛的应用。
例如，它可以与特定抗原结合来进行酶标记免疫检测，用于检测和测定各种生物分子的含量，如蛋白质、激素、抗体等。
这种酶标记技术可以高灵敏度地检测到目标分子的存在，被广泛应用于医学诊断、生物药物研发等领域。
此外，辣根过氧化物酶还可以用于生物传感器的构建。
生物传感器是一类特殊的装置，它可以将生物过程转化为可测量的电信号。
利用辣根过氧化物酶对特定底物的高度选择性和灵敏性，可以构建出各种类型的生物传感器，实现对目标物质的检测和监测。
这在环境监测和食品安全等领域有着重要的应用价值。
辣根过氧化物酶在药物研发中也起着重要作用。
它可以用于药物代谢研究和药物筛选。
通过检测特定药物对辣根过氧化物酶的影响，可以评估药物的代谢活性和毒性。
此外，辣根过氧化物酶还可以作为药物的催化剂，促进特定化合物的合成和转化。
然而，辣根过氧化物酶也存在一定的局限性和挑战。
它在催化过程中对环境因素（如温度、pH值和离子浓度）的敏感性较高，这限制了其在一些特殊条件下的应用。
此外，辣根过氧化物酶的催化速率较慢，对底物的亲和力相对较低，这在一些需要高灵敏度和高选择性的应用中可能存在一定的局限性。
辣根过氧化物酶结构式
辣根过氧化物酶结构式【知识文章】辣根过氧化物酶结构式：探索辣根对身体的益处引言：在我们的日常饮食中，经常会遇到一种被称为辣根的调料。
辣根以其辛辣的味道和独特的香气为人所喜爱，不仅能为食物增添风味，还具有一定的保健功效。
辣根中的一种特定成分——辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）是辣根所特有的一种酶类物质。
本文将深入探讨HRP的结构式、其在食物中的存在形式、以及辣根对身体的益处。
一、辣根过氧化物酶结构式及特点1. 什么是辣根过氧化物酶？辣根过氧化物酶是一种由植物辣根中提取得到的酶类物质。
它是一种特殊的催化剂，能够促进氧化反应的进行。
2. HRP的结构式HRP的结构式为C18H12N2O4S2，它由多个氨基酸残基组成，形成一个复杂的螺旋结构，其中包含有铁原子。
3. HRP在辣根中的存在形式HRP在辣根中以囊泡的形式存在，这种囊泡能够保护HRP不受外界环境的影响，并在适当的条件下释放HRP。
二、HRP在食物中的益处1. 抗氧化作用HRP具有很强的抗氧化能力，可以中和体内的自由基，减轻氧化应激对身体的危害，降低患病风险。
2. 抗菌作用HRP对一些细菌具有很强的杀灭作用，可以有效预防食物中的细菌感染，保障食品安全。
3. 免疫调节作用HRP能够调节免疫系统的功能，增强人体对外界病原体的抵抗能力，提高免疫力。
三、个人观点与理解HRP作为辣根中的一种特殊成分，具有多种益处。
我个人认为辣根作为一种调味品，不仅能提升菜肴的美味，还能为我们的健康增添一份保障。
HRP的抗氧化、抗菌和免疫调节作用能够综合增强人体的防御能力，为我们预防疾病起到积极的作用。
总结回顾：通过对辣根过氧化物酶结构式、存在形式及其对身体的益处的探讨，我们了解到了HRP的重要性和作用。
HRP的存在可以提供强大的抗氧化和抗菌作用，同时也能够调节免疫系统的功能，保障我们的身体健康。
在我们的日常饮食中适量摄入辣根，可以提供充足的HRP，增强身体的免疫力，预防疾病的发生。
[集锦]hrp辣根过氧化酶的底物
![[集锦]hrp辣根过氧化酶的底物](https://img.taocdn.com/s3/m/c71c6c2d86c24028915f804d2b160b4e767f81e0.png)
酶的底物3.3.1 HRP的底物HRP催化过氧化物的氧化反应，最具代表性的过氧化物为H2O2，其反应式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O上式中，DH2为供氧体，H2O2为受氢体。
在ELISA中，DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。
常用的供氢体有邻苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。
OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，在492nm处有最高吸收峰，灵敏度高，比色方便，是HRP结合物最常用的底物。
OPD本身难溶于水，OPD•2HCL为水溶性。
曾有报道OPD有致异变性，操作时应予注意。
OPD见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。
在试剂盒中，OPD和H2O2一般分成二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶剂，使用更为方便。
过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用蒸馏水稀释。
先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02% H2O2的应用液,只需加入OPD后即可作为底物应用液。
TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。
TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。
另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。
酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为405nm。
ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。
另一种HRP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，经HRP 作用后，产物显荧光，可用荧光光度计测量。
免疫检验考试辅导：辣根过氧化酶
辣根过氧化酶（HRP）：HRP在蔬菜作物辣根中含量很高，纯化方法也不复杂。
它是一种糖蛋白，含糖量约l8%；分子量为44kD；是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的一种卟啉蛋白质。
主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰；辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。
HRP对受氢体的专一性很高，除H202外，仅作用于小分子醇的过氧化物和尿素的过氧化物。
后者为固体，作为试剂较H202方便。
许多化合物可作为HRP的供氧体，在ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺（OPD）、四甲基联苯胺（TMB）和ABTS.OPD为在ELISA中应用最多的底物，灵敏度高，比色方便。
其缺点是配成应用液后稳定性差，而且具有致异变性。
TMB无此缺点。
TMB经酶作用后由无色变蓝色，目测对比鲜明；加酸停止酶反应后变黄色，可在比色计中定量；因此应用日见增多。
ABTS，虽然灵敏度不如0PD和TMB，但空白值很低。
辣根过氧化物酶（HRP）标记鼠抗人TR单克隆抗体
辣根过氧化物酶（HRP）标记鼠抗人TR单克隆抗体中文名辣根过氧化物酶外文名 Horseradish Peroxidase, HRP描述：辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP），是临床检验试剂中的常用酶。
该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。
过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。
辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法:是过碘酸钠法。
其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG 后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。
为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。
氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff氏碱。
方法：(1)将5mg HRP溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3溶液中;加0.5ml 10mmol/L NaIO4溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2小时。
(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3混匀。
(3)加入0.75ml小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml)，混匀。
(4)称取Sephadex G25干粉0.3g，加入一支下口垫玻璃棉的5ml注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4℃过夜。
(5)用少许PBS将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V体积新鲜配制的5mg/ml NaBH4溶液，混匀，室温作用30分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4℃过夜)(6)将交联物过Sephadex g200或Sepharose 6B(2.6×50cm)层析纯化，分管收集峰。
(7)酶结合物质量鉴定：(8)HRP抗体结合物的保存：加入等量甘油后，小量分装-20℃存放，防止反复冻融;或加入等量60%甘油4℃保存;不宜加NaN3或酚防腐，否则会影响酶活性。
辣根过氧化物酶
用辣根过氧化物酶追溯周围神经联系法辣根过氧化物酶(Herseradish Peroxidase)最早由Richard(1960)等人[1]用来研究肾近端小管的早期吸收情况，将HRP注入鼠静脉内，离隔一定时间进行观察。
70年代Kristensen是将HRP用于神经系统联系的创妙人[2]，他的第一部分工作即是将HRP注入腓肠肌内而观察中枢（前角运动细胞）的HRP阳性标记颗粒。
1972年Lavai和Lavai et al[3]首次将HRP用于中枢神经系统。
他将HRP注入小鸡的中脑顶盖部分,30小时后取材, 观察视网膜节细胞内的HRP阳性标记细胞。
1973年以后, 此法用于中枢神经系统者逐渐增多。
将HRP注入周围神经末梢部分, 观察其向中枢的联系, 近年来开展了各方面的探索：里见肇及山本悌司等人进行的试验：是将HRP 注入胃壁包括胃体、胃底、幽门等处,观察延髓迷走背核及孤束核的内侧部的酶标颗粒, 以及将HRP注入猫心脏窦房结观察延髓迷走背核及孤束核的酶标颗粒[1,5]。
Dalsgaard, Elfvin(6)等人将HRP注入肠系膜下节及交感颈上节, 观察脊髓内五个交感核的酶标颗粒及其节段性。
至于用HRP法追踪周围神经联系的研究工作, 目前国内外开展很少。
只有Lowrence[7]将HRP注入一侧牙髓后观察同侧三叉神经半月神经节细胞内的HRP阳性颗粒；此外他还切断坐骨神经将断端浸入HRP液内, 在后根脊神经节细胞内找到HRP阳性颗粒。
Elfvin还将HRP 注入荷兰猪的肠系膜下节, 观察脊神经细胞内HRP阳性细胞的节段性。
国内从事HRP法研究的学者也多是研究中枢神经系内各核团的联系, 而用HRP法从事周围神经系联系者则鲜见。
因此我们用HRP法追溯胃交感内脏传入第一级神经元-脊神经节细胞内酶标颗粒和足三里穴区一级感觉神经元-脊神经节细胞内酶标颗粒。
建立了HRP追踪围围神经联系的方法, 开展了对胃交感内脏神经元的节段性问题的探讨。
葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶共固定化
葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的共固定化摘要：酶的共固定化是在原有的单酶固定化技术的基础上,将单酶体系改为双酶或多酶体系,或将酶同辅酶及其他与酶有相互作用的活性物质共同固定化在同一介质中形成偶联反应体系的过程。
因为要兼顾不同酶的不同最适pH值、最适温度、共固定比例以及固定化次序等问题,所以酶的共固定相对单酶固定化要复杂得多。
葡萄糖氧化酶(GOX)和辣根过氧化物酶(HRP)是常用的两种酶，前者多提取自黑曲霉发酵产物，而后者则来自天然植物辣根，两种酶在很多领域都有极为广泛的应用。
本文主要概述这两种酶的共固定化方法及对共固定化酶(HRP 是主酶,GOX提供H2O2是辅助酶)催化苯甲硫醚不对称氧化成苯甲亚砜的反应的应用。
酶的共固定化酶催化反应具有专一性强、效率高、作用条件温和等特点，因而在生物技术、生物医学，医药化工，食品等行业具有广泛的应用价值。
然而，酶制剂由于造价昂贵，将其以游离酶的形式用于生产过程，存在稳定性差，难以回收利用，产物分离难度高等缺点，天然游离酶已经越来越不能胜任规模化生产的要求，也难以同传统化工和发酵产业相抗衡。
酶的固定化不仅可以解决酶的回收，下游产物污染问题，还可以提高酶的稳定性，并在一定程度上加强了酶对高温，酸，碱乃至有机溶剂等条件的承受能力，拓宽了酶的应用范围，增强了酶的应用价值。
葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase，GOX)，属氧化还原酶类，产自真菌和某些昆虫（如蜜蜂）。
葡萄糖氧化酶分子量为160kDa，由两个亚基构成，每个亚基的分子量为80kDa，并且，每个亚基的上分别通过非共价键结合着一分子的辅酶——黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）。
辅酶FAD在酶反应过程中起着电子传递体的作用。
葡萄糖氧化酶的等电点（PI）为4.2，能选择性地在有分子氧的条件下，将β-D-葡萄糖氧化为1,5-葡萄糖酸内酯和过氧化氢，产物过氧化氢的积累，会对GOX 的活性起到产物抑制作用。
所以要保持GOX的活性，往往需要及时地去除或者消耗掉产生的过氧化氢。
酶联免疫反应常用底物
酶联免疫反应常用底物辣根过氧化物酶HRP底物辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）具有分子量小，标记方法简单，性质稳定等优点，是临床检验试剂中常用的酶。
该产品广泛用于各类生化检测项目及免疫类（ELISA）试剂盒。
中华试剂网辣根过氧化物酶的底物种类丰富，可满足不同的实验需求。
■ HRP的发色底物辣根过氧化物酶发色底物为过氧化物和供氢体（DH2），其真正底物是H2O2，但人们习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。
在ELISA中常用的供氢体有以下几种：1、OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体，酶作用后显黄色（最大吸收波长为492 nm），其灵敏度高，测定方便。
2、TMB是近年来常用的一种供氢底物，经酶作用后显天蓝色，目测对比度鲜明，加酸终止酶反应后变黄色（最大吸收波长为450 nm），易比色定量测定。
3、DBA供氢底物，其反应产物为不能溶解的棕色吩嗪衍生物，可用不同光镜观察。
此种多聚物能被还原和盐3-氨基-9-乙基咔唑3-Amino-9-ethylcarbazole, AEC红色、可溶性132-32-15 g25g4-氯-1萘酚Chloro-1-naphthol 蓝色、可溶性604-44-425g※小贴士：氧化物、硫化物、氟化物及叠氮化物等可抑制HRP的活性，故勿用这类试剂作为防腐剂。
■ HRP的发光底物鲁米诺（3-氨基邻苯二甲酰肼，Luminol）或其衍生物如异鲁米诺（4-氨基邻苯二甲酰肼，Isoluminol），是一类重要的发光试剂。
用HRP标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在HRP和起动发光试剂(NaOH+H2O2)作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
反应过程如下图所示：产品编号中文名称英文名称CAS纯度包装328061 鲁米诺Luminol 521-31-398%1 g 5 g 25 g分子式：C8H7N3O2分子量：433.63熔点：194-195℃储存条件： 2-8°C产品编号中文名称英文名称CAS号纯度包装A5300 异鲁米诺Isoluminol 3682-14-298%1 g 10 g分子量：177.16熔点：194-195℃储存条件： 2-8°C■配套产品中文名称英文名称CAS号纯度包装4-碘苯酚4-Iodophenol 540-38-5 99%5 g 25 g 100 g四苯基硼酸钠Sodium tetraphenylborate 143-66-8 99.5%(ACS)25 g 100 g 500 g牛血清白蛋白Bovine serum albumin [ FractionV], BSA9048-46-8 ——5 g25 g100 g十二烷基硫酸钠Dodecyl sulfate sodium salt, SDS 151-21-3 99% 100 g 500 g脱氧胆酸钠Sodium deoxycholate 302-95-4 98%25 g 100 g 500 g苯甲基磺酰氟化物Phenylmethylsulfonylfluoride, PMSF329-98-6 99%25 g100 g亮抑酶肽Leupeptin 103476-89-7 96.5% 10 mg 50 mg三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride, Tris-HCl1185-53-1 99%25 g100 g500 g吐温80 Polysorbate 80 9005-65-6 ——250 mL1 L碱性磷酸酶底物碱性磷酸酶(Alkaline phospharase, AP)是一种能够在碱性情况下将对应底物去磷酸化的酶，广泛分布于人体的各脏器器官中，以肝脏、骨骼、小肠中存在的量最多。
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使用注意事项： 1. 外观：白色至淡黄色结晶。 2. 本产品与大多数常用缓冲液系统（如磷酸盐、Tris、醋酸盐、Borate、HEPES 等缓冲液）相容。 3. 本产品可与 1-2 mg/ml BSA 配合共同使用。
按照终浓度为0.1%-0.5%(w/v)配制稀释液使用即可。
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产品简介： 辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)是应用最广泛的一种标记物，但其在低浓
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质量控制： 贝博对每批产品进行严格测试以确保产品质量一致。
知识产权： 贝博 TM BBproExtraTM 系列试剂盒及其使用方法包含专有技术。
注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
度下不稳定，极易失活。 贝博 HRP 酶稳定剂对 HRP 酶标试剂有强大的保护作用，使稀释的 HRP 酶标试剂在极
低浓度下室温保存稳定 12 个月以上。该试剂与低浓度 BSA（1-2 mg/ml）协同作用，保护 作用更强。
加入贝博 HRP 稳定剂的酶在 47℃存放 3 天后，酶的相对活力为 90%。在室温长期存放 3 个月以后，酶的相对活力为 59%。
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产品说明书
辣根过氧化物酶稳定剂
货号：BB-3101
试剂盒储存条件： 室温保存。
试剂盒组成：
产品组成 试剂 A：HRP 酶稳定剂
使用说明书
有效期： 一年。
BB-3522-1 20g 1
BB-3522-2 50g 1
பைடு நூலகம்
V2.16
BB-3522-2 100g 1
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