人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程

人凝血因子Ⅷ效价检验标准操作规程

1目的

严格规范操作者的检测方法，使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验操作，特制定本操作规程。

2适用范围

本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子Ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子Ⅷ的供试品效价检测。

3制定依据

《中华人民共和国药典》（2015年版）三部，附录3521人凝血因子Ⅷ效价测定法（一期法）。

4职责

4.1检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。

4.2复核人对检验中的计算进行复核。

4.3确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。

5仪器及器具

5.1仪器

5.1.1凝血仪

5.1.2电子天平

5.1.3电子分析天平

5.1.4漩涡混匀器

5.2器具

5.2.1微量移液器

5.2.2吸头

5.2.3移液管

5.2.4洗耳球

5.2.5试管

5.2.6试管架

5.2.7砂轮

5.2.8凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）

6试剂及试液

6.1试剂

6.1.1人凝血因子VIII国家标准品

6.1.2人凝血因子VIII比较品

6.2试液

6.2.1人凝血因子Ⅷ缺乏血浆

6.2.2稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）

6.2.3激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂

6.2.4氯化钙溶液

7操作步骤

7.1供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备

7.1.1供试品及比较品溶液的制备

7.1.1.1供试品及比较品的预稀释

用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml（冻干制品

先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g ，加水溶解约为20倍。

7.1.1.2 供试品预稀释液的工作稀释（供试品溶液）

将上述含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml 的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。具体稀释过程如下：

先取500μl 已预稀释成含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml 的供试品预稀释液，加500μl 稀释液，稀释成含人凝血因子Ⅷ约0.5IU/ml ，混匀，再分别从中取2

00μl 移到3支试管中，分别加400μl ，600μl 和800μl 稀释液。供试品稀释可根据本身效价高低及仪器环境等变化作适当适当调整。

7.1.2 标准品溶液的制备

7.1.2.1 预稀释：将标准品按标示量加入水溶解，取100μl 复溶品，加人凝

血因子Ⅷ缺乏血浆适量预稀释成约1IU/ml 。

7.1.2.2 工作稀释：将上述1IU/ml 的标准品用稀释液稀释2倍、4倍、8倍、

16倍、32倍。

7.2检验操作

7.2.1凝血仪准备：

7.2.1.1先打开凝血仪电源，在反应盘上放入比色盘，预热使反应仓温度

达到37℃。

7.2.1.2分别将激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙溶液加入

凝血仪的相应区域。

7.2.2上机测试凝固时间

7.2.2.1将供试品杯加到供试品盘上，并按要求在相应的供试品杯中加入

供试液（标准品、比较品和供试品稀释液）和相应试剂。具体加

入位置如下：

Dil杯加入稀释液；

18号杯加入人凝血因子Ⅷ缺乏血浆；

1~14号杯加入待测液；

7.2.2.2按仪器操作规程启动人凝血因子Ⅷ效价测定程序；

7.2.2.3测定结束后，记录返回的凝固时间

7.2.3测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否

则重测。

7.3结果处理

7.3.1标准曲线制作：

将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml），分别取对

数值；再将其各相应浓度所测得的凝固时间（秒，s），也分别取对数

值。然后按统计学方法作直线回归方程（用excel计算）：

logy = blogx+a

其中：x为人凝血因子Ⅷ效价，IU/ml；

y为测得相应凝固时间，秒（s）。

7.3.2供试品及比较品效价计算：

将3个不同浓度的供试品所得到凝固时间（秒）分别代入方程式计算

x值；然后将所得x值分别乘以相应的供试品稀释倍数，即得到3个

相应的效价（IU/ml）；计算这3个效价值的平均值作为供试品中人凝

血因子Ⅷ效价。

7.4注意事项

7.4.1标准曲线直线回归相关系数应不低于0.98。

7.4.2每个稀释度的标准品或供试品平行测定2管，2管之差不得超过均值

10%，否则重测。

7.4.3直接接触标准品、供试品和血浆的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品。

7.4.4应急预案

7.4.4.1仪器与电脑无法连接（仪器无法将实验数据传到电脑上不易于对

实验的考察及结果分析，试验过程中数据未能在电脑上读取）。检

查线接口，重新连接仪器电脑。

7.4.4.2如遇到供试品还未上机检验停电，则待来电后，检验照常进行。

如遇上机过程中断电在不影响检验结果的情况下继续检验直到结

束，否则重新检验。

7.4.4.3电源无法关闭，可能是电路短路，会导致机器死机。

7.4.4.4长期频繁的开关会导致仪器电源的松弛，仪器不容易关闭，应减

少开机次数，按仪器使用说明书定期维护。

7.4.4.5针头堵塞，操作仪器点击清洗，将针头冲干净。

8判定基准

检验结果的判定依据相应品种的质量标准进行

9生效日期

本规定自2015年12月01日起正式生效。