常用学习记忆障碍动物模型
动物行为实验专题大小鼠跳台实验方法
动物行为实验专题大小鼠跳台实验方法动物行为实验是行为学研究的重要手段之一，能够帮助研究人员了解动物的行为习性和认知能力。
其中，大小鼠跳台实验也是常用的一种实验方法，可以用于评估小鼠的学习和记忆能力。
本文将详细介绍大小鼠跳台实验的步骤和注意事项。
1.实验目的大小鼠跳台实验旨在评估小鼠的空间学习和记忆功能，通常用于研究与海马功能相关的学习和记忆障碍的动物模型。
2.实验仪器和材料（1）大小鼠跳台实验仪器：包括跳台、纸箱、光源、摄像机等。
（2）大小鼠：选择雄性或雌性健康的小鼠，年龄在8-12周之间。
（3）实验地点：保持适宜的环境温度和湿度，并确保安静无扰。
3.实验步骤（1）预备工作①准备跳台实验仪器，确保跳台、纸箱等都整洁干净。
②调整实验环境，确保温度和湿度适宜，并消除任何可能干扰实验的因素。
③在实验之前，将小鼠隔离，确保其处于饥饿状态，以增加其对实验中奖励的渴望。
（2）实验前训练①将小鼠置于纸箱中，并让其自由探索和熟悉环境，减少它们对新环境的恐惧感。
②将小鼠放入纸箱的一个角落，引导它们自主跳上跳台。
③如果小鼠成功跳上跳台，给予奖励如食物或水。
④重复上述步骤，直到小鼠能够熟练地跳上跳台。
（3）正式实验①将小鼠放入纸箱的一个角落，观察和记录小鼠的行为，特别是跳上跳台的行为。
②记录小鼠跳上跳台的次数和时间，并根据需要记录其他相关行为，如探索、活动等。
③每只小鼠的实验时间应该相同，通常为5-10分钟。
④实验完成后，可以进行数据处理和统计分析。
4.实验结果和数据分析实验结果应包括小鼠跳上跳台的次数、时间和其他相关行为数据。
可以通过计算平均值、标准差等统计指标来评估小鼠的学习和记忆能力。
此外，还可以使用适当的统计分析方法，如方差分析（ANOVA）等，来比较不同组别之间的差异。
5.注意事项（1）确保实验环境安静，以避免任何干扰实验的因素。
（2）在实验过程中要注意观察小鼠的行为，并及时记录相关数据。
（3）应将每只小鼠的实验时间控制在相同的范围内，以消除实验时间对结果的影响。
AD小鼠模型介绍
AD小鼠模型介绍AD小鼠模型，即阿尔茨海默病小鼠模型，是一种用于研究阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的动物模型。
阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病，主要表现为认知功能障碍和记忆力丧失。
目前还没有有效的治疗方法，因此研究AD的机制和治疗方法变得至关重要。
AD小鼠模型是研究该疾病的重要工具之一AD小鼠模型通常通过基因工程技术构建，根据不同的基因突变或操纵来模拟AD发病机制和临床表现。
这些小鼠通常表现出与人类AD患者相似的一些病理特征，如神经元损伤、β淀粉样蛋白沉积、tau蛋白磷酸化等。
通过对这些AD小鼠模型的研究，科学家可以更好地了解AD的发病机制，寻找新的治疗方法和药物靶点。
目前，AD小鼠模型已经被广泛应用于AD病理生理学研究、新药筛选和临床药物评估等领域。
下面将介绍一些常见的AD小鼠模型及其特点：1. APP/PS1双转基因小鼠：这是最常见的AD小鼠模型之一，它通过表达人类APP（β淀粉样前体蛋白）和PS1（presenilin-1）基因，模拟AD的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。
这种模型通常表现出记忆力损失、神经退化等AD病理生理学特征。
2. 3xTg-AD小鼠：这是一种同时表达人类APP、PS1和tau蛋白P301L基因的三转基因小鼠。
该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出早期记忆障碍和晚期神经元损伤等表型。
3.Tg2576小鼠：这是一种表达人类APP基因的转基因小鼠模型。
该模型主要用于研究β淀粉样蛋白在AD发病中的作用，通常表现出大量的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。
4. 5xFAD小鼠：这是一种表达人类APP、PS1和tau蛋白基因的五转基因小鼠模型。
该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出更加严重的神经元损伤和认知功能障碍等表型。
除了以上几种常见的AD小鼠模型外，还有许多其他基因操纵小鼠模型被用于AD的研究。
阿尔茨海默病和轻度认知障碍常用实验动物模型的初步评价
呆的一种中间过渡状态［１］。ＭＣＩ具有转化为 ＡＤ的高度危 险性，年转化率为 １０％ ～１５％，ＡＤ患者中有 ２／３由 ＭＣＩ转 化而来，是正常老年人的 １０倍［２－３］。目前，国际上还没有特 效 ＡＤ治疗药物，如果能在 ＭＣＩ阶段进行早期发现和有效干 预，将可能会大大降低 ＡＤ的发病率。
随着对 ＡＤ研究的深入，ＭＣＩ逐渐成为基础研究者的关 注焦点。为了进行 ＡＤ发病机制研究、药物筛选以及新药研 发等，成功建立具有 ＭＣＩ特征的动物模型是必须的。但目 前建立的 ＭＣＩ研究模型如何有效区别于 ＡＤ模型仍存在着 一定困难。故本综述从 ＡＤ和 ＭＣＩ的病理特征和诊断标准 入手，通过介绍常用 ＡＤ和 ＭＣＩ实验动物模型的研究进展， 从模型建立的角度对其进行总结和初步评价，为开展 ＡＤ和 ＭＣＩ的研究提供建议。 １ ＡＤ与 ＭＣＩ的特征 关于 ＡＤ的发病机制目前尚无定论，存在的假说有 β淀 粉样蛋白异常沉积、胆碱能损伤学说、Ｔａｕ蛋白过度磷酸化、 氧化应激、炎症以及胰岛素信号传导通路障碍等，比较公认 的是 β淀粉样蛋白异常沉积、Ｔａｕ蛋白过度磷酸化和胆碱能 损伤学说［４］。研究表明［１］，ＭＣＩ患者的 Ｍｅｙｎｅｒｔ基底核区胆 碱能神经元无减少，而早期 ＡＤ患者减少 １５％。此外，ＭＲＩ 结果发现，ＭＣＩ患者的海马和内嗅皮质的体积减少处于 ＡＤ 和正常老化 之 间，并 且 减 少 的 速 度 高 于 正 常 老 化 人 群［５］， ＭＣＩ病人的海马结构越小，ＡＤ转化率越高［１］，因此通过 ＭＲＩ 定量测量海马萎缩，可预测 ＭＣＩ转化为 ＡＤ的危险性。通过 ＶＢＭ 分析证实 ［６］，ＡＤ患 者 的 灰 质 在 海 马、海 马 旁 回、颞 极、 尾状核头、丘脑内侧、脑岛和杏仁核等部位发生退化，且左脑 灰质体积萎缩更为显著，而 ＭＣＩ患者始于颞叶与额叶的灰 质萎缩，导致听觉与记忆功能退化。
AD小鼠模型介绍
AD动物模型分类 5. APP/PS1转基因AD小鼠模型
该模型以C57BL/6J小鼠为背景,转入了含有瑞典型(Swedish) 突变位点的APP基因(K595N/M596L),同时还含有第9个外显子删 除的PS1突变基因
APP/PS1双转基因AD小鼠模型在3月龄时出现学习和记忆缺 陷,6月龄时脑内可见明显的老年斑沉积,12月龄时可见大量的老年 斑形成,具有和AD相似的病理表型
宗园媛, 王晓映, 王海林,等. APP/PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析 [J]. 中国比较医学杂志, 2008, 18(9):8-12.
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
通过将APPSwe和tauP 301L同时显微注射进PS1M 146V 基因敲入小鼠的单细胞胚胎中,得到了携带APPSwe, tauP 301L, PS1M 146V基因的三重转基因小鼠—3x Tg-AD小鼠
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
3x Tg-AD小鼠是目前最接近家族型阿尔茨海默病的动物模型, 它具有AD的主要神经病理学特征—SP和NFT,脑中出现神经元死 亡、突触丢失等AD的重要病理变化,且该转基因动物模型由于认 知障碍出现、病理发生较早,使得研究过程更加经济快速
祝艳秋, 张兰. 基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(2):61-66.
AD动物模型分类 3.腹腔注射东莨菪碱
东莨宕碱能选择性地阻断M受体，使突触后乙酰胆碱含 量变化，影响某些酶系变化，继而影响细胞内外钙离子含 量，导致神经细胞死亡，引起痴呆的病理生理变化。
董洪涛, 房繄恭. 多因素AD动物模型的建立及针刺对其学习记忆功能的影响[J]. 上海中医药杂 志, 2002, 36(5):43-46.
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法一、双侧颈总动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为250～300g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后仰卧位，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
颈部正中切口，钝性分离双侧颈总动脉，用1号线将其行结扎。
缝合切口后再行局部消毒，小心放回笼内(每笼一只待其完全清醒)。
局部伤口缝合前，可用庆大霉素3～5滴滴入局部伤口内防止感染。
术后正常饲养12周，自第13周起可开始分组给药治疗。
行为学检验可采用穿梭箱法和Morris水迷宫分析系统，进行定位航行实验和空间探索试验。
(2)模型特点术后的1～3周，陆续有动物死亡发生，其死亡率在20％～40％，因此需根据实验情况增加手术动物的总数。
(3)比较医学该模型由于阻断了双侧颈总动脉，造成了脑部急性供血不足，随后可通过基底动脉和基底动脉环血流调节以及逐渐形成的侧支循环所改善，但海马区达不到正常脑供血水平，形成慢性大脑缺血，模拟了人类由于血管粥样硬化使头颈动脉逐渐狭窄所致的慢性大脑供血不。
水迷宫实验显示，动物的定位航行和空间探索能力均降低，痴呆率达80％左右。
该模型可用于研究痴呆脑组织的形态及病理生理变化机制，也可用于判定某些治疗手段和药物的效果。
二、双侧颈总动脉、椎动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery with vertebral artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为300～350g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后俯卧位固定于立体定位仪上，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
行背侧颈部正中切口，逐层钝性分离暴露双侧第1颈椎横突小孔，用直径0.5mm的电凝针烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成闭塞。
神经实验3 小动物学习记忆行为检测模型
实验3 小动物学习记忆行为检测技术--避暗法一、实验目的1、学习小白鼠学习记忆行为检测方法2、学习BA-200小鼠避暗自动测试仪的使用方法。
3. 了解影响学习记忆功能的一些因素。
二、实验原理啮齿类动物系夜行性动物，喜欢黑暗的地方，而回避光亮之地。
它将设法逃向暗处，此时在暗处给予其电刺激，小鼠会被迫逃回明亮处，并获得记忆。
根据此原理设计的实验为一次性被动回避反应实验。
被动回避反应(Passive Avoidance Response)为二十世纪60年代后期发展起来的、普遍用于检测小动物学习记忆能力的一种动物模型。
反应特征：动物必须学会躲避可怕的事件，而抑制其天然本性。
被动回避反应有：避暗法（又称步入法step-through test）、跳台法（又称步下法step-down test）等。
三、实验器材小白鼠常用手术器械、亚硝酸钠、东莨菪碱（scopolamine，Scop.）、生理盐水、35 %酒精。
四、实验步骤1. 实验仪器BA-200小鼠避暗自动测试仪购自成都泰盟科技有限公司，由控制器和活动箱两部分组成，可同时对6只小鼠进行实验。
明暗实验箱之间有一小门供动物进出，当动物进入暗室被电击时，它可自动记录小鼠第一次从明室进入暗室的潜伏期和受到电击的次数，还可通过按键灵活地选择刺激电压和设置实验时间。
2. 实验程序：2.1适应：将动物头朝室壁放入明室，两室之间的门洞敞开，让动物在两室内自由活动2-3分钟，取出后放回饲养笼。
2.2训练：第二天, 将动物放入明室, 它很快钻入暗室, 连接两室的门洞关闭，同时启动电刺激器, 动物足部受电击。
如果动物在第一次训练时超过100秒不进暗室, 淘汰之或用手把它轻轻赶进暗室。
记录指标：（1）记录动物自明室进入暗室的潜伏期，可作为判断给药后动物行为是否有变的一个指标。
若药物致使动物镇静，则潜伏期显著长于对照组。
（2）记录动物受到电击后的反应，如剧烈嘶叫并跳跃，评为A级反应；微弱尖叫，评为B级反应；不叫，评为C级反应。
阿尔茨海默症动物模型
饮食诱导AD 模型
高脂饮食诱导模型
有报道指出动物给予高脂饲料饲养可降低大脑对葡萄糖的摄取，诱导动物模型 产生糖耐量降低及胰岛素抵抗，亦可损伤神经元胰岛素受体功能，引起tau 蛋白 过度磷酸化，从而导致 NFT。
方法：8周龄C57小鼠，通过给予硫胺素剥夺饮食结合腹腔注射硫胺素焦磷酸激 酶抑制剂—吡啶硫胺制作硫胺素缺乏模型，造模13d后取脑，模型组小鼠内侧丘 脑出现典型的对称性针尖样出血，小鼠皮质、海马及丘脑均出现Aβ沉积，tau蛋 白磷酸化。TD可引起Aβ沉积、tau蛋白磷酸化增加等 AD的特征性病理改变。
方法：将大鼠固定于脑立体定位仪上，在前卤后 1.5 mm，矢状 缝侧方 1.5 mm处钻孔，微量进样器注射 STZ 3 mg·kg-1，于手术 的第 1天和第 3 天分别二次向侧脑室注射。小剂量 STZ 侧脑室注 射可以制备痴呆模型。
此模型优点：模拟了散发性老年痴呆病的许多重要的特点。 缺点：造模过程中动物的死亡率较高。
国内外 AD 动物模型研 究进展
01
02
以衰老为基础 的AD模型
自然衰老的动 物模型
快速老化小鼠 模型
各种因素诱 发的AD模型
化学损伤 物理损伤 饮食诱导
03
转基因AD模型
APP 转基因模型 PS1 转基因模型 tau 相关模型 多重转基因模型
以衰老为基础的AD 模型
AD 是一个与年龄密切相关的疾病，衰老因素在AD 发病过程中起着重要作用。以衰 老为 AD 发病基础的动物模型成为实验研究中不可或缺的部分
阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述_薛斌
基金项目:成都医学院“实验室开放基金课题”资助(S YSKF200748)。
作者简介:薛斌(1984-),男,成都医学院2005级临床本科班学生,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。
△通讯作者:荣成(1980-),男,助教,成都医学院基础医学实验技术中心科研秘书,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。
阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述薛 斌1 荣 成 张 晓2 杨 拯2 江红丽2(1.成都医学院2005级临床本科甲班 2.成都医学院实验技术教研室)[摘 要]学习记忆能力障碍是老年性痴呆(Alzheimer ’s disease,AD)的主要临床症状和特征,而目前对阿尔茨海默病的发病机制有三种有影响力的学说。
因此理想的阿尔茨海默病AD 动物模型,对研究该病的发病机制及治疗具有重要意义,本文就目前几种有影响力的AD 的动物模型研究现状作一综述。
[关键词]阿尔茨海默病 穹窿海马伞 胆碱能神经元 T au 蛋白 β-淀粉样肽 阿尔茨海默病(Alzh eimer ’s disease ,AD )是一种临床常见的中枢神经系统变性疾病,目前其发病机制有三种影响力的学说,如淀粉样蛋白学说、乙酰胆碱能学说、线粒体损伤学说。
现关于AD 疾病的研究日益受到国内外学者的高度重视。
其建立一个可靠的A D 动物模型是研究AD 的重要环节。
有关AD 动物模型建立的方法较多,各有利弊,本文针对这几种学说的AD 动物模型的建立和新的动物模型的建立作一综述。
一、自然衰老认知障碍AD 动物模型AD 是一个与年龄相关的疾病,衰老因素在AD 发病过程中扮演着重要角色,衰老所特有的病理生理变化及其它病变的影响,是用年轻动物制作的动物模型所不能替代的。
通过行为筛选的方式,选择带有认知和记忆严重缺失的个体,它们的行为损害与老年人和A D 患者的认知损害相类似,同时还可出现某些相应的脑组织病理改变[1]。
故是研究AD 较好的动物模型。
但存在以下缺点:①老年动物神经系统的发病与A D 的发病机制过程不完全一致,因此神经化学方面的改变也是不同的。
[指导]常用学习记忆障碍动物模型
![[指导]常用学习记忆障碍动物模型](https://img.taocdn.com/s3/m/b7ee5d34580102020740be1e650e52ea5518ce12.png)
常用学习记忆障碍动物模型药理研究中常用学习记忆障碍动物模型的行为学分析(1)摘要:目的本研究对老年、基底前脑损伤、东莨菪碱注射和双侧颈总动脉结扎大鼠四种药理研究中常用的学习记忆障碍动物模型的行为学表现进行了分析。
方法采用水迷宫及旷场分析法对上述四种动物模型组及正常青年对照和假手术组进行了研究,数据采用多因素方差分析法处理。
结果发现老年动物学习记忆能力减弱, 对新环境的紧张程度增强,但空间认知能力及兴奋性无明显改变; 基底前脑损伤动物的学习记忆及空间认知能力明显下降,但兴奋性及情绪反应正常; 东莨菪碱动物模型不但学习记忆及空间认知能力明显下降, 而且兴奋性异常增强;双侧颈总动脉结扎动物的学习记忆及空间认知能力明显下降, 但兴奋性及情绪反应正常。
结论从行为学角度将上述四种动物模型进行了比较,为药理学研究应用这些模型提供了背景资料。
关键词:老年性痴呆; 动物模型; 行为学老年痴呆主要包括Alzheimer. s病和血管性痴呆, 是老年人致残最严重的疾病之一, 并且随着人口的老龄化, 患者日益增多, 将给家庭和社会带来沉重的负担。
因此对老年性痴呆药物的寻求和研究是当前医学界的一个紧迫问题。
良好的动物模型是进行该病研究的基础。
目前作为老年痴呆的药理学研究常用动物模型主要有: M受体阻断剂东莨菪碱或樟柳碱致动物学习记忆障碍模型, 兴奋性氨基酸基底前脑注射致动物学习记忆障碍模型, 正常老年动物模型, 以及双侧颈总动脉结扎动物模型等。
为更好地了解这四种模型动物的行为学表现,我们采用了水迷宫及旷场分析方法对这四种动物模型进行了比较观察, 水迷宫是一种较好地评定动物空间学习记忆能力的方法, 而旷场分析能对动物对新异环境的兴奋性、适应性、探究、紧张、记忆等行为进行评价。
1 材料和方法1.1.1 动物SD大鼠, 雄性, 由北京实验动物研究中心提供( 许可证编号SCXK( 京) 2002-2003) 。
1.1.2 试剂氢溴酸东莨菪碱注射液( Scopolaminehydrobromide) 为上海禾丰制药有限公司产品( 批号:950901) , 鹅膏覃氨酸( Ibotenic acid, IBO) 为美国Sigma公司产品。
阿尔茨海默症动物模型
代
是目前最广泛用于制备阿尔茨海默病模型的动物。
国内外 AD 动物模型研究进展
01
以衰老为基础的
AD模型
自然衰老的动物模型 快速老化小鼠模型
02
各种因素诱发 的AD模型
化学损伤 物理损伤 饮食诱导
03
转基因AD模型
APP 转基因模型
PS1 转基因模型
tau 相关模型 多重转基因模型
以衰老为基础的AD模型
AD 是一个与年龄密切相关的疾病，衰老因素在AD 发病过程中起着重要作用。以衰老为 AD 发病基础的动物模型成
为实验研究中不可或缺的部分
自然衰老AD模型
自然衰老动物模型脑内神经元萎缩，胆碱能功能低下，同时表现为感觉、运动以及 学习记忆力等多种功能的减退，这符合 AD 患者的临床表现。 造模方法：将1~2月龄小鼠或3~5月龄大鼠，雌性或雄性，饲养在屏障环境的动物
转基因AD模型
转基因模型是研究 AD 发病机制及相关药物研发的较理想工具，同时也成为了近年研究的热点。
神经元纤维缠结、tau 相关模型
AD 患者大脑皮质及海马区出现NFT的主要原因是tau蛋白的过度磷酸化。因此认为tau基因突变
将直接影响tau蛋白的结构和功能，引发神经系统疾病，可能是诱发 AD 的因素之一。 JNPL3 小 鼠 是将人 类 FTDP-17 突 变 tau 基 因导 入 B6D2 （ F1 ） 小 鼠，然 后 将其 下 一代小 鼠 与 C57BL/6回交而获得。
化学损伤致 AD 模型
东莨菪碱诱导的模型
乙酰胆碱（ acetylcholine ，ACh ）是一种重要的中枢神经递质，在学习、记忆方面起 着非常重要的作用。AD患者基底前脑胆碱能神经元大量损伤或死亡、突触前乙酰胆碱的 合成、Ch AT的活性及对胆碱的摄取能力都明显下降。这些变化的程度与患者认知功能损 害的程度呈正相关。
促智药 药效学指导原则
促智药一、动物选择必须健康，成年(除非根据研究特定目标，选用幼鼠或老年鼠)，雌雄均可用。
常用小鼠(品系不限)，体重20—24克和大鼠(品系不限)，体重200—250克。
二、模型及方法(一) 跳台法(Step down test) 小鼠实验装置为一长方形反应箱，将动物放入反应箱内适应环境3分钟，然后立即通以36V交流电。
动物受到电激，其正常反应是跳回平台以躲避伤害性刺激。
多数动物可能再次或多次跳至铜栅上。
受到电击后又迅速跳回平台。
每次训练5分钟，并记录每鼠受到电击的次数或错误次数，以此作为学习成绩。
24小时后重做试验，此即记忆保持测验。
记录受电击的动物数，第一次跳下平台的潜伏期和3分钟内的错误总数。
(二) 避暗法(Step through test) 实验装置分明、暗两室。
两室之间有一圆洞。
将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。
动物穿过洞口进入暗室受到电击。
取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。
24小时后重作测验，记录进入暗室的动物数，潜伏期和5分钟内的电击次数。
(三) 迷津(Maze) 迷津种类和装置繁多，但不外乎以下三个基本组成部分：起步区—放置动物；目标区一放置食物或系安全区；跑道—有长有短，或直或弯，至少有一个或几个交叉口供动物选择到达目标区的方向或径路。
1．Y型迷路该装置一般分成三等份，分别称之为I、II、III臂。
如以I臂为起步区，则II臂(右侧)为电击区，III臂(左侧)为安全区。
训练时将小鼠放入起步区，操纵电击控制器训练小鼠获得遭遇电击时直接逃避至左侧安全区为正确反应，反之则为错误反应。
训练方法有以下几种：1. 固定训练次数10—15次，记录正常和错误反应次数。
2. 动物连续获得二次正确反应前所需的电击次数。
3.动物学习成绩以达到9/10次正确反应前所需的电击次数表示。
24小时后测验记忆成绩。
国外也常用八臂放射状迷宫。
迷宫试验中要注意的几个问题：(1) 如在目标区放置食物，则动物需于实验前禁食，使其体重减至体重的85％，此时动物才具有摄取食物的驱力或动机。
神经实验3 小动物学习记忆行为检测模型
实验3 小动物学习记忆行为检测技术--避暗法一、实验目的1、学习小白鼠学习记忆行为检测方法2、学习BA-200小鼠避暗自动测试仪的使用方法。
3. 了解影响学习记忆功能的一些因素。
二、实验原理啮齿类动物系夜行性动物，喜欢黑暗的地方，而回避光亮之地。
它将设法逃向暗处，此时在暗处给予其电刺激，小鼠会被迫逃回明亮处，并获得记忆。
根据此原理设计的实验为一次性被动回避反应实验。
被动回避反应(Passive Avoidance Response)为二十世纪60年代后期发展起来的、普遍用于检测小动物学习记忆能力的一种动物模型。
反应特征：动物必须学会躲避可怕的事件，而抑制其天然本性。
被动回避反应有：避暗法（又称步入法step-through test）、跳台法（又称步下法step-down test）等。
三、实验器材小白鼠常用手术器械、亚硝酸钠、东莨菪碱（scopolamine，Scop.）、生理盐水、35 %酒精。
四、实验步骤1. 实验仪器BA-200小鼠避暗自动测试仪购自成都泰盟科技有限公司，由控制器和活动箱两部分组成，可同时对6只小鼠进行实验。
明暗实验箱之间有一小门供动物进出，当动物进入暗室被电击时，它可自动记录小鼠第一次从明室进入暗室的潜伏期和受到电击的次数，还可通过按键灵活地选择刺激电压和设置实验时间。
2. 实验程序：2.1适应：将动物头朝室壁放入明室，两室之间的门洞敞开，让动物在两室内自由活动2-3分钟，取出后放回饲养笼。
2.2训练：第二天, 将动物放入明室, 它很快钻入暗室, 连接两室的门洞关闭，同时启动电刺激器, 动物足部受电击。
如果动物在第一次训练时超过100秒不进暗室, 淘汰之或用手把它轻轻赶进暗室。
记录指标：（1）记录动物自明室进入暗室的潜伏期，可作为判断给药后动物行为是否有变的一个指标。
若药物致使动物镇静，则潜伏期显著长于对照组。
（2）记录动物受到电击后的反应，如剧烈嘶叫并跳跃，评为A级反应；微弱尖叫，评为B级反应；不叫，评为C级反应。
术后认知功能障碍动物模型的评价指标
术后认知功能障碍动物模型的评价指标1. 评价指标的重要性术后认知功能障碍是一种常见的并发症，特别是在老年患者中。
为了更好地理解、预防和治疗这一病症，科研人员通常会利用动物模型进行相关研究。
而对于这些动物模型的评价指标，是十分重要的。
因为只有确保评价指标的科学性和准确性，才能保证研究结论的可信度和可靠性。
2. 行为学评价指标（1）空间学习和记忆能力：在动物模型中，常用的评价指标包括Morris水迷宫测试、Y型迷宫测试等。
这些测试可以评估动物的空间学习和记忆功能，从而判断术后认知功能是否受到影响。
（2）对象识别能力：通过目标物体识别测试，可以评估动物对于新对象的识别和记忆能力，从而了解认知功能的变化情况。
3. 生物化学评价指标（1）脑组织样本的检测：通过检测脑组织中相关蛋白质的含量，如APP、Tau蛋白等，可以判断神经元损伤和炎症情况，从而评估认知功能的变化。
（2）神经递质检测：通过检测脑组织中神经递质的含量，如乙酰胆碱、多巴胺等，可以评估神经传导功能的变化情况。
4. 形态学评价指标（1）神经元形态学：通过对脑组织进行病理学检测，可以评估神经元的数量、形态和受损情况，从而了解认知功能的变化。
（2）突触密度：通过电镜技术等手段，评估脑组织中突触的数量和密度，从而判断神经元连接情况和传导效率。
总结回顾术后认知功能障碍动物模型的评价指标包括行为学、生物化学和形态学等多个方面的指标，通过综合评价可以更准确地了解认知功能的变化情况。
在未来的研究中，可以加强对这些评价指标的应用和改进，以更好地推动术后认知功能障碍相关研究的发展。
个人观点在进行术后认知功能障碍相关研究时，评价指标的选择和应用非常关键。
只有合理选取科学准确的评价指标，才能确保研究结论的可靠性。
我认为在今后的研究中，需要不断完善和改进术后认知功能障碍动物模型的评价指标体系，以推动相关领域的深入发展。
通过以上对术后认知功能障碍动物模型的评价指标的探讨，希望你能对这一主题有更深入的了解，并在未来的研究中能够更好地应用相关知识。
记忆障碍动物模型的制作及方法
记忆障碍动物模型的制作及方法引起动物的记忆障碍有多种方法，包括电休克、缺血缺氧、某些化学药品等。
对记忆障碍的测定则采用学习记忆的实验方法。
在此先介绍常用的学习记忆实验法。
1学习、记忆实验法(learn and memory test)人们和动物的精神活动、心理状态都是无法直接观察到的。
为了研究这些活动的发生过程，科学家们只能根据可观察到的刺激反应进行推测。
对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔时间，测量他们的操作成绩或反应时间，由此来衡量这些过程的编码形式、储存量、保持时间以及它们所依赖的条件等。
学习、记忆实验方法的基础是条件反射，各种各样的方法均由此衍生而来。
现简介常用的动物学习、记忆实验方法。
1.1跳台法(step down test)(1)实验方法大鼠和小鼠跳台法均较常用。
实验装置为1只长方形实验箱，箱内用黑色塑料板分隔成独立的5个小间，每个小间的规格为12cm×12cm×20cm(小鼠)或23cm×25cm×40cm(大鼠)。
反射箱底部是间距为1cm的铜栅，可以通电，电压强度可由一变压器调控，一般采用40V电压。
每间内有一可自由移动的、高和直径均为4.5cm的平台(小鼠)或高为5cm、直径为8cm(大鼠)，一般置于左后或右后角。
将动物放入反射箱内适应环境3min，然后予以通电。
动物受到电击后，其正常反应是寻找躲避伤害性刺激的可能，因此很快会跳上平台。
多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练5min，记录仪将记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。
24h后重作测试：将小鼠放在平台上，然后予以通电，动物自平台跳至铜栅上的时间为次跳下平台的潜伏期，此即记忆保持测验。
记录受电击的动物数、每鼠次跳下平台的潜伏期和3min内的错误总次数。
(2)模型特点和比较医学该模型属回避性条件反射实验，本法简便易行，一次可同时测试5只动物。
丁香酚吸嗅对血管性痴呆模型大鼠学习记忆障碍改善的实验研究
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动物学习记忆试验常用方法分析
动物学习记忆试验常用方法分析审评四部八室王庆利随着老龄社会的到来，有关老年病治疗药物的开发成为一个热点，其中老年性痴呆治疗或改善学习记忆的药物就是其中一个例子，该方面的新药申报品种日渐增多。
从国内外的研究现状看尚无真正能治疗“痴呆”的药物，目前已上市的或开发过程中的药物主要是改变痴呆的学习记忆功能，其临床定位也主要为改善痴呆患者的学习记忆功能。
在非临床有效性研究过程中，主要采用行为学试验研究药物对动物学习记忆功能的影响。
人和动物的内部心理过程是无法直接观察到的，只能根据可观察到的刺激反应来推测脑内发生的过程，对脑内记忆过程的研究只能从人类或动物学习或执行某项任务后间隔一定时间，测量他们的操作成绩或反应时间来衡量这些过程的编码形式、贮存量、保持时间和它们所依赖的条件等等。
学习、记忆实验方法的基础是条件反射，各种各样的方法均由此衍化出来。
目前已经建立了大量的学习记忆研究的行为学方法，各有优缺点。
现将常用的动物学习、记忆实验方法简述如下。
一、抑制性（被动）回避在记忆研究中，一个最重要的动物模型就是抑制模仿活动或学习习惯。
被动回避实验通过动物学会去掉某种特定的行为而逃避某种讨厌的事情。
1. 跳台实验原理：在一个开阔的空间，动物大部分时间都在边缘与角落里活动。
在方形空间中心设置一个高的平台，底部铺以铜栅，铜栅通电。
当把动物放在平台上时，它几乎立即跳下平台，并向四周进行探索。
如果动物跳下平台时受到电击，其正常反应是跳回平台以躲避伤害性刺激。
多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台。
观察指标：首次跳下平台的潜伏期、一定时间内受电击的次数（错误次数），24小时后受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和一定时间内的错误总数。
优缺点：简便易行，根据试验设备的不同，一次可同时试验多只动物，可实现组间平行操作。
既可观察药物对记忆过程的影响，也可观察对学习的影响。
有较高的敏感性，尤适合于药物初筛。
缺点是动物的回避性反应差异较大，因此需要检测大量的动物。
阿尔茨海默症动物模型课件
03
阿尔茨海默症动物模型 的实验方法
CHAPTER
实验动物的饲养管理
饲养环境
饲料与饮水
动物健康监测
实验操作流程
模型建立
实验分组
给药方式
观察指标
实验数据的记录与分析
01
数据记录
02
数据整理
03
数据分析
04
结果呈现
04
阿尔茨海默症动物模型 的研究进展
CHAPTER
基因工程动物模型的研究进展
转基因小鼠模型 转基因大鼠模型 基因敲除小鼠模型
阿尔茨海默症动物模 型课件
目 录
• 阿尔茨海默症概述 • 阿尔茨海默症动物模型 • 阿尔茨海默症动物模型的实验方法 • 阿尔茨海默症动物模型的研究进展 • 阿尔茨海默症动物模型的挑战与展望
contents
01
阿尔茨海默症概述
CHAPTER
定义与特点
定义 特点
阿尔茨海默症的病因
01
02
遗传因素
环境因素
03 神经生物学因素
阿尔茨海默症的症状与表现
记忆障碍
认知障碍
行为异常
02
阿尔茨海默症动物模型
辑技术 环境因素诱导
动物模型的评估指标
学习与记忆能力
通过迷宫测试、避障测试等方法 评估动物的学习和记忆能力。
神经元损伤
检测动物脑部神经元的形态和数 量变化，以及相关蛋白的表达情
况。
炎症反应
检测动物脑部炎症细胞的数量和 相关炎症因子的表达水平。
动物模型在阿尔茨海默症研究中的应用
药物筛选
行为学分析
利用动物模型筛选具有治疗潜力的药 物，为临床试验提供依据。
利用动物模型分析阿尔茨海默症患者 的行为特点和认知障碍。
行为药理学方法与技术简介
第九节行为药理学实验方法与技术简介行为药理学主要研究药物对大脑学习、记忆功能及情绪活动（如焦虑、抑郁等）的影响，也包括药物依赖性的实验评价。
一、学习、记忆实验法和记忆障碍动物模型简介学习和记忆是脑的重要功能之一。
学习是指新行为（经验）获得和发展，记忆就是使获得的经验保持和再现。
人类记忆区可分为三种存贮系统，即感觉记录系统，短时存贮系统和长时存贮系统。
目前关于学习记忆的机制，认为“感觉记忆”即感知事物后在极短时间内的记忆，与脑的电活动有关；“短时记忆”和“长时记忆”可能与脑的神经细胞的突触效能或脑的化学变化有关，即学习、记忆有赖于全脑的整合功能，完成记忆的过程离不开知觉、情绪、注意、意图等心理功能，也离不开早已贮存的知识和经验。
（一）动物学习、记忆实验方法及模型：1、跳台法（step down test）简便易行，有较高的敏感性，尤适合于初筛药物。
可同时观察药物对记忆过程及对学习的影响。
2、避暗法（step through test）利用鼠类的嗜暗习性而设计。
简便易行，对记忆过程特别是对记忆再现有较高的敏感性。
3、穿梭箱（shuttle box）可同时观察被动和主动回避性反应。
4、爬杆法（pole-jump text）适用于大鼠或小鼠。
观察非条件刺激和条件刺激对动物逃避行为的影响。
5、迷津(maze) 学习、记忆的经典实验，至今仍经常采用。
常用的装置有Y型迷路、水迷路和Morris水迷津。
6、小鸡的一次性味觉----回避学习行为的动物模型Cherkin等人（1969）在前人研究的基础上，根据小鸡在自然环境中先天性的自发啄食行为而建立的小鸡一次性味觉－回避学习行为(one-trial-avoidance task)的实验模型。
其优点：建立模型快，记忆保持良好；脑内注射方便；实验重复性好；实验成本低等。
7、操作式条件反射（operant conditioned reflex）在巴甫洛夫经典的条件反射的基础上创立的一种实验方法，通过动物完成压杆或按键反应的特定活动来研究动物的学习行为。
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常用学习记忆障碍动物模型
药理研究中常用学习记忆障碍动物模型的行为学分析(1)
摘要:目的本研究对老年、基底前脑损伤、东莨菪碱注射和双侧颈总动脉结扎大鼠四种药理研究中常用的学习记忆障碍动物模型的行为学表现进行了分析。
方法采用水迷宫及旷场分析法对上述四种动物模型组及正常青年对照和假手术组进行了研究,数据采用多因素方差分析法处理。
结果发现老年动物学习记忆能力减弱, 对新环境的紧张程度增强,但空间认知能力及兴奋性无明显改变; 基底前脑损伤动物的学习记忆及空间认知能力明显下降,但兴奋性及情绪反应正常; 东莨菪碱动物模型不但学习记忆及空间认知能力明显下降, 而且兴奋性异常增强;双侧颈总动脉结扎动物的学习记忆及空间认知能力明显下降, 但兴奋性及情绪反应正常。
结论从行为学角度将上述四种动物模型进行了比较,为药理学研究应用这些模型提供了背景资料。
关键词:老年性痴呆; 动物模型; 行为学
老年痴呆主要包括Alzheimer. s病和血管性痴呆, 是老年人致残最严重的疾病之一, 并且随着人口的老龄化, 患者日益增多, 将给家庭和社会带来沉重的负担。
因此对老年性痴呆药物的寻求和研究是当前医学界的一个紧迫问题。
良好的动物模型是进行该病研究的基础。
目前作为老年痴呆的药理学研究常用动物模型主要有: M受体阻断剂东莨菪碱或樟柳碱致动物学习记忆障碍模型, 兴奋性氨基酸基底前脑注射致动物学习记忆障碍模型, 正常老年动物模型, 以及双侧颈总动脉结扎动物模型等。
为更好地了解这四种模型动物的行为学表现,我们采用了水迷宫及旷场分析方法对这四种动物模型进行了比较观察, 水迷宫是一种较好地评定动物空间学习记忆能力的方法, 而旷场分析能对动物对新异环境的兴奋性、适应性、探究、紧张、记忆等行为进行评价。
1 材料和方法
1.1.1 动物SD大鼠, 雄性, 由北京实验动物研究中心提供( 许可证编号SCXK( 京) 2002-2003) 。
1.1.2 试剂氢溴酸东莨菪碱注射液( Scopolaminehydrobromide) 为上海禾丰制药有限公司产品( 批号:950901) , 鹅膏覃氨酸( Ibotenic acid, IBO) 为美国Sigma公司产品。
1.1.3 模型制备
1.1.3.11 老年动物组: 正常24月龄雄性SD大鼠; 青年对照组为3月龄大鼠。
1.1.3.12 基底前脑损伤大鼠: 采用3月龄SD大鼠,1%戊巴比妥钠麻醉, 脑立体定位仪固定, 平颅头位,按大鼠脑定位图谱, 在AP( 前囟后) : 018mm; ML( 中线旁) : 310mm; DV( 自脑表面深度) : 710mm; 双侧注射1LL鹅膏覃氨酸( 10LgPLL, 溶于生理盐水中) 。
假手术对照组注射等量生理盐水, 手术后1个月进行实验。
1.1.3.13 东莨菪碱模型: 3月龄大鼠, 按5mgPkg体重于实验前20min腹腔注射氢溴酸东莨菪碱溶液。
以上述青年对照组为对照。
1.1.3.14 双侧颈总动脉结扎大鼠模型: 采用3月龄SD大鼠, 1%戊巴比妥钠麻醉, 分离双侧颈总动脉,用丝线结扎, 缝合皮肤。
雄性动物在该体重下的死亡率约为20%, 假手术对照组, 分离颈总动脉后即缝合皮肤。
存活动物术后一个月进行实验。
1.1.4 仪器
1.1.4.11 morris水迷宫: 安徽正华生物仪器设备有限公司研制。
由医用ABS工程塑料制作，,水深40cm, 水温控制在22e ~ 25e 之间。
本装置共设4个盲端, 终点有台阶, 动物可通过台阶上岸躲避溺水威胁。
1.1.4.12 旷场分析箱: 铝合金箱,箱底划成25方格( 20cm*20cm) , 沿墙格称为外周格, 其余为中央格。
1.1.5 实验方法
1.1.5.11 动物学习记忆能力测定: 各模型及对照组动物依次进行水迷宫实验, 第1d 路径包括2个盲端,第2d有3个盲端, 第3、4、5、6d均为4个盲端。
每天训练两次, 记录每只动物在游泳中进入盲端的次数及游出时间, 如果120s内未上岸, 按120s计算。
1.1.5.12 旷场分析: 将动物放入正中格中, 观察5min内动物活动情况。
室内为暗光, 实验过程有轻微噪声。
每次实验后需将屎尿清除。
采用单盲法, 设两位观察者, 分别观察每组50%动物。
观察指标包括: 方格穿行次数( 三爪以上跨入邻格的次数) 、中央格内停留时间、站立次数( 两前肢离地1cm以上) 和粪便粒数.
1. 5.13 统计学分析: 以上实验结果均使用STATISTICA软件( 美国, StatSofi, Inc) 完成。
对于水迷宫项指标首先采用多因素方差分析( 因素包括各处理组、观测天数) 对所有数据进行分析, 如果各处理组间有显著性差异, 再采用post_HocFisher LSD检验各组间两两比较。
对于旷场分析结果采用t 检验, 进行组间比较。
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