非小细胞肺癌患者血清和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变的探讨

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EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌个体化治疗中的意义

区与ＥＭＬ４．ＡＬＫ融合基因的催化活性密切相关，被视为ＥＭＬ４．ＡＬＫ产生效应的关键区域【２Ｊ。ＡＬＫ为跨膜受体酪氨酸激酶，属于胰岛素受体超家族【３】，能与ＴＧＦ、ＫＩＦ５Ｂ、ＮＰＭ、ＴＰＭ４、ＫＬＣＩ、ＥＭＬ４等多种基因
间变性淋巴瘤激酶（ａｎａｐｌａｓｔｉｃｌｙｍｐｈｏｍａｋｉｎａｓｅ，ＡＬＫ）阳性的
学特征
ＡＬＫ融合基因阳性的非小细胞肺癌已经成为ＮＳＣＬＣ特定
的病理亚型。研究证实［】２］：该基因在年轻、腺癌、不吸烟或者轻度吸烟者阳性率较高，不能从ＥＧＦＲ．ＴＫＩｓ中获益。
局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者，ＮＳＣ组织学转为靶向治疗，从组织学分型到分子学分型
的演变。
～
、
ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合基因的分子结构和功能
２００７年Ｓｏｄａ等【２１从１例６２岁吸烟的肺腺癌患者肿瘤组织
中扩增出由３９２６ｂｐ组成的ＤＮＡ片段，并证明该ｃＤＮＡ是ＥＭＩＡ和ＡＬＫ的融合产物。
检测，该融合基因的发生率为１１．６％，ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ均为野
生型的不吸烟／轻度吸烟者高达４２．８％。
棘皮动物微管相关蛋白样４（ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｎｍｉｅｒｏｍｂｕｌｅａｓ．ｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ．１ｉｋｅ４，ＥＭＩＡ）属于棘皮动物微管相关蛋白样蛋白质家族成员，其结构组成包含一个Ｎ端基本区，一个疏水的棘皮动物微管相关蛋白样蛋白域和ＷＤ重复区。其中Ｎ端基本

存在EML4-ALK融合基因非小细胞肺癌患者的临床和病理学特征

刘晓晴，任医师、授，主教解放军３７医院全军肿瘤中心肺癌科０
主任。中国抗癌协会临床肿瘤专业委员会执行委员．中国老年肿瘤专业委员会执行委员，国女医师协会肿瘤专业委员会委员，国抗癌中中
协会化疗专业委员会委员。从事肿瘤专业２年，３尤其致力于肺癌的
因。以往研究中发现，ＭＩＡＫ融合基因在ＮＣＣＥＡ— ＬＳＬ患者中发生率较低，有１５６７，仅．％～．％目前针对ＥＡ— ＬＭＩＡＫ融合基因的靶向治疗药物的临床试验
化疗、放疗和生物靶向治疗等方面的研究，发表文章８０余篇，参编专著７部，参与多项临床科研工作，获军队科研成果一、、二三等奖各ｌ
项，担全军 “ ・ ” 承然科学 “ 、基金、国家“ ・ ” 大科技专项课题。加多项国际、国多中心新十五重参全
研究二：ｈｗＡ，ｅｐＢＭｉｏＫｎｄｏＳａＹａＹ，ｎ —ｅｕｓｎＭ，
ｅ１ｔａ．Ｃｌｎｃｌｆａｕｅｎｕｃｍｅｏｔｅｓｗｉｉｉａｅｔｒｓａｄｏｔｏｆｐａｉｎｔｔｈｎｎ・ｍａｌｃｌｕｃｎｅｗｈｏｏ－ｓｌ－ｅｌｎｇａｃｒ－ｌｈａｂｒｒｏＥＭＬ－Ｋ４－ＡＬ
Ｊ一
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小细胞肺癌ｎｎｓａｅｎａｃｒＮＣＣ作ｏ－ｌｃｌｌｇｃｎｅ，ＳＬ）ｍｌｌｕ
刘晓晴，．等存在Ｅ４ＡＫ融合基因非小细胞肺癌患者的临床和病理学特征ＭＬ一Ｌ

EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌组织中的表达和其临床意义

分类号密级学校代码U D C 编号学号学位论文EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义Expression and clinical significance of EML4-ALK fusion gene in Non Small Cell Lung Cancer论文类别：学术研究型作者姓名指导教师姓名申请学位级别硕士学位授予单位学科专业内科学研究方向肺癌论文答辩时间2012年5月学位授予日期2012年6月答辩委员会主席：论文评阅人：2012年5月目录中文摘要 (1)英文摘要 (2)1 前言 (4)2 材料与方法 (5)3 结果 (14)4 讨论 (21)5 结论 (25)6参考文献 (26)7致谢 (32)8附录 (33)8.1 附录A 英中文术语缩略语对照表 (33)8.2 附录B 常用试剂配制 (34)8.3附录C综述 (35)EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义中文摘要目的：检测EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌人群中的发生率并分析其临床特征及其意义。

方法：收集..........第一附属医院符合非小细胞肺癌诊断标准的石蜡标本220例，应用突变体富集qPCR法（Enrich mutation-PCR）检测220例非小细胞肺癌(NSCLC)石蜡组织的EML4-ALK mRNA的表达情况，同时免疫组织化学检测EML4-ALK蛋白表达水平。

其中qPCR结果应用直接测序法验证。

结果1、220例NSCLC中免疫组化检测出EML4-ALK蛋白18例，突变体富集qPCR 法检测出EML4-ALK融合基因12例，融合类型6个v1/v6, 6个v3a/v3b，因此EML4-ALK融合基因的检出率为5.45%（12/220），通过直接测序验证后变异体融合类型为4个v1(33.3%,4/12),2个v6(16.7,2/12)),6个v3a(50%,6/12)。

非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测结果的初步分析

２１０００２南京南京军区南京总医院病理科印永祥，时姗姗，马恒辉，陈凯，章如松，周晓军，王建东
：ｌ：
【摘
要】目的
探讨非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织棘皮动物微管样蛋白４一间变淋巴瘤激酶（ＥＭＬ４一ＡＬＫ）融合基因的突变
采用突变扩增阻滞系统检测２６例ＮＳＣＬＣ组织中ＥＭＩＡ — ＡＬＫ融合基因
情况，及其与ＮＳＣＬＣ临床病理特征和预后的关系。方法特征和总生存期（０ｓ）的关系。结果
的９种突变和表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的１８、１９、２０、２１外显子突变，进一步分析ＥＭＬ４一ＡＬＫ融合基因突变与ＮＳＣＬＣ临床病理２６例ＮＳＣＬＣ患者中检测到６例ＥＭＩＡ — ＡＬＫ融合基因突变。ＥＭＩＡ— ＡＬＫ融合基因突变与ＮＳＣＬＣ中ＥＭＬ４一ＡＬＫ融年龄、吸烟史、临床分期、组织分化和ＥＧＦＲ突变有关，与病理类型、性别、标本类型和血清癌胚抗原无关（Ｐ＞０．０５）。ＥＭＩＡ — ＡＬＫ融合基因阳性者的中位０ｓ为９个月，低于阴性者的１２个月，但差异无统计学意义（Ｐ＝０．４６０）。结论
ｎａｓｅ（ＥＭＩＡ— ＡＩＫ）ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｉｎｎｏｎ — ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ），ａｎｄａｎａｌｙｚｅｉｔｓｍｕｔａｔｉｏｎｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ

非小细胞肺癌转化EML4-ALK融合基因的鉴定

国抗癌协会肺癌专业委员会委员，国临床肿瘤学会（ＳＯ）欧美ＡＣ、洲肿瘤内科学会（ＳＥＭＯ）国际肺癌研究协会（ＡＬ）员，国抗、ＩＳＣ会中
癌协会临床肿瘤学协作专业委员会（ｓｏ）行委员，海医学会ｃｃ执上
选择，并且取得了很好的治疗效果。携带酪氨酸激
酶ＥＦ突变的ＮＣＣ亚群对ＥＦＧＲＳＬＧＲ抑制剂（如
ＴＩ治疗敏感，Ｋ）包括吉非替尼与厄洛替尼｜３近期２】＿。
研究结果表明，晚期初治突变阳性患者中，在吉非
２１年８月００
循证医学
ＴｅＪｕｎｌｏｉｅｃ — ａｅｄｃｎｈｏｒａｆｄｎｅＢｓｄＭｅｉｉｅＥｖ
Ａｕｇ２０．０１Ｖ１１Ｎｏ．ｏ．Ｏ４
第１第４期０卷
非小细胞肺癌转化Ｅ４ＡＫ融合基因的鉴定ＭＬ．Ｌ
１文献来源
Ｓｄ，ｈｉｏａＭＣｏＹＬ，ｎｍｏｏＭ，ｔ１ＩｅｔｉａｉｎＥｏｔｅ．ｄｎｉｃｔａｆｏ
ｏｈｔａｆｒｎＥＭＩ－Ｋｆｓｏｇｎｅｎｏ－ｆｔｅｒｎｓｏｍｉｇＡ・ＡＬｕｉｎｅｉｎｎ—
息来指导，床治疗１名
尽管晚期非小细胞肺癌患者绝大多数接受细
胞毒化疗药物治疗，近源自来针对酪氨酸激酶靶点为

EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌的研究新进展

苷酸１３序列区形成变体７（ｖａｒｉａｎｔ７），外显ｉａｎｔ７），外显子１８与
ＡＬＫ融合形成变体９（ｖａｒｉａｎｔ９）［４］。９种变体中，最长见的是变体１与变体３，分别占到３３和２９。
肺癌是全球恶性肿瘤导致死亡的最主要原因，每年有超过１００万人死于肺癌ｌ＿】］。肺癌全球每年新增病例约１６０万，其中非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）约占８０。虽然化疗仍是晚期肺癌治疗的主要方法之一，但其副作用大，且疗效已遇瓶颈。随着ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ等研究的不断深入，以这些特殊分子的靶向治疗，因其毒性小，疗效突出，现已成为肺癌治疗的新热点。近几年在非小细胞肺癌发现的棘皮动物微管相关蛋白样４和间变淋巴瘤激酶融合基因（ＥＭＬ４一ＡＬＫ）可能成为继ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ后新的研究热点。现就ＥＭＬ４－ＡＬＫ的结构及亚型、检测方法、针对该靶点的最新治疗情况以及耐药状况进行综述。
体２（ｖａｒｉａｎｔ２）。它与外显子６融合成变体３ａ（ｖａｒｉａｎｔ３ａ），外显子６及１１个氨基酸插入形成变体３ｂ。
外显子１４及１４个未知来源的核苷酸插入至ＡＬＫ外显子核苷酸５０序列区形成变体４（ｖａｒｉａｎｔ４）。它与ＥＭＬ外显子２形成变体５（ｖａｒｉａｎｔ５），与外显子ｌ３形成变体６（ｖａｒｉａｎｔ６）。外显子１４融合至ＡＬＫ核

非小细胞肺癌中九基因联合检测突变分析

网络出版时间：２０２０－６－２８１３：４１　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２００６２８．０８４８．００８．ｈｔｍｌ非小细胞肺癌中九基因联合检测突变分析邓　庆，罗　韬，葛　佳，刘　锋，李　磊，汪黎鸿，王　姣，阎晓初摘要：目的　通过ＡＲＭＳＰＣＲ法联合检测非小细胞肺癌（ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓ，ＮＳＣＬＣ）中９个驱动基因（ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＲＥＴ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＨＥＲ２、ＰＩＫ３ＣＡ、ＮＲＡＳ和ＢＲＡＦ）的突变情况，分析其突变状态及临床意义。

方法　采用ＡＲＭＳＰＣＲ技术检测２０１８年２月～２０１９年２月陆军军医大学第一附属医院病理科存档的５２２例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中的９个驱动基因的突变情况。

结果　５２２例ＮＳＣＬＣ中ＡＬＫ、ＲＯＳ１和ＲＥＴ的融合突变率分别为５１７％、１３４％、１３４％，ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ＨＥＲ２、ＰＩＫ３ＣＡ、ＮＲＡＳ和ＢＲＡＦ的突变率分别为４７３２％、７２８％、１７２％、１７２％、０９５％和０５７％。

女性患者中ＥＧＦＲ突变和ＡＬＫ融合突变率明显高于男性患者（Ｐ＜０００１），而ＫＲＡＳ突变率低于男性患者（Ｐ＜０００１）。

ＥＦＧＲ和ＫＲＡＳ突变在肺腺癌中显著高于肺鳞癌（Ｐ＜０００１）。

无吸烟史患者中ＥＧＦＲ突变和ＡＬＫ融合发生率均高于吸烟患者（Ｐ＜０００１），ＫＲＡＳ突变在吸烟患者的发生率显著高于无吸烟史患者。

利用ＡＲＭＳ法联合检测９个基因在单点检测ＥＧＦＲ基础上增加了１０１５％的患者可使用靶向药物（Ｐ＜００１）。

结论　在９个驱动基因突变中，ＥＧＦＲ突变、ＡＬＫ融合、ＫＲＡＳ突变与患者性别、吸烟以及组织学类型密切相关，其它较为罕见驱动基因突变并未发现与组织学类型、患者性别及吸烟与否相关。

九基因联合检测可作为ＮＳＣＬＣ更简便适用的药物靶向检测方法。

EML4-ALK融合基因与非小细胞肺癌分子靶向治疗的研究现况

等方面的最新进展做简要综述。
一
、
ＥＭＩＡ — ＡＬＫ的生物学特性
２００７年，来自日本的学者Ｓｏｄａ及其同事等。。在１名６２
岁有吸烟史的男性肺腺癌患者的肿瘤组织中首次发现ＥＭＩＡ—
二、ＥＭＬ４一ＡＬＫ的临床特征
肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一。据统计，每年
新发肺癌患者中有大约８５％为非小细胞肺癌，而其中又有
７０％的患者在确诊时已存在局部晚期或远处转移… 。近年来随着对癌症发病机制的深入研究和分子生物学的发展，出
ＥＭＩＡ— ＡＬＫ阳性表达率较低，多项集中于亚裔患者的研究显
号外显子突变而开发的酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼、厄洛替尼等已经被广泛应用于临床治疗，且给部分ＮＳＣＬＣ患者带
来了明显的疗效，患者病情可以得到缓解甚至长期带瘤生
ｐｌａｓｔｉｃｌｙｍｐｈｏｍａｋｉｎａｓｅ，ＡＬＫ）基因引起了广泛关注。人们发现，ＡＬＫ基因中包含许多重要的生物学信号通路，影响着肿瘤细胞增殖、分化与凋亡Ｊ。而在Ｉ一 Ⅱ期临床试验中，以ＥＭＬ４一ＡＬＫ融合基因为靶点晚期ＮＳＣＬＣ个体化治疗取得了令人瞩目的疗效。本文对ＥＭＬ４一ＡＬＫ融合基因的临床特

FISH法对肺腺癌穿刺标本EML4-ALK融合基因的检测

FISH法对肺腺癌穿刺标本EML4-ALK融合基因的检测成克伦;周永松;陈秀婵;熊云刚;邹阳强;姜森;邓刘丹【摘要】目的探讨采用肺腺癌穿刺活检标本检测棘皮动物微管相关类蛋白4(EML4)与间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因(EML4-ALK)的可行性.方法对20例肺腺癌经皮肺穿刺标本应用荧光原位杂交(FISH)法检测EML4-ALK融合基因.结果20例标本中,19例通过FISH检测成功,检测成功率为95.00％.其中阳性2例,阳性率为10.00％.结论肺腺癌穿刺活检标本可用作检测EML4-ALK融合基因,为靶向治疗提供参考依据.【期刊名称】《哈尔滨医药》【年(卷),期】2017(037)004【总页数】3页(P314-316)【关键词】荧光原位杂交;肺腺癌;EML4-ALK融合基因;经皮肺穿刺【作者】成克伦;周永松;陈秀婵;熊云刚;邹阳强;姜森;邓刘丹【作者单位】贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;贵州航天医院病理科,贵州遵义563000;广州安必平医药科技股份有限公司技术部,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率位居恶性肿瘤之首，老年人发病比较多见。

最常见的类型是鳞癌和腺癌，腺癌的发病率近年来有所上升，已占到60%左右[1]。

腺癌的治疗除手术和放、化疗外，分子靶向药物应用是目前的一个热点，本研究通过FISH法，探索肺腺癌穿刺标本EML4-ALK检测的可行性，为靶向治疗作一参考。

1.1 一般资料：收集2015年1月至6月在贵州航天医院经皮肺穿刺的肺腺癌活检标本20例，镜检癌细胞数均＞50个。

在20例患者中，男13例，女7例，年龄43～78岁，中位年龄61岁。

实性为主性腺癌5例，腺泡为主性腺癌12例，黏液为主性腺癌2例，乳头为主性腺癌1例。

EML4-ALK在非小细胞肺癌中的研究进展

［ｂｔｃ］ＥＩ—Ｌｎｎｅｉｕｅｓｎｇｎ，ｈｈａｆｓｄｃｖｒｐｎｉ２０．ＳｄｓｈｗｔｔＡｓａｔＭＡＡＫｉａｕｇａｃｒｎｃｆｉｅｅｗｉｓｒｉｏｅｄｎａａ７ｔｉｏａｒｓｌｃ —ｄｄｕｏｃｗｔｓｅｉＪｉｎ０ｕｅｓｈ
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ＺＨＡＯｎｇｒｖｅｎＭｉｅｉｗｉｇ，ＳＯＮＧｎｇｃｅｋｎＹｏｈｃｉｇ
（ｅａｔｅｔｆＲｓｉｔｙＤｉａｅＭｅｉｌＳｈｏｏＮｎｉｎｖｒｔＤｐｒｎｅｒｏｓｓ，ｄｃｃｏｌｍｏｐａｒｅａａｊｇＵｉｓｙ／ＮｎｉｅｅｌｏｉｌＮｎｉｆｎｅｉａｊｇＧｎｒｓｔａｊｇｎａＨｐａｏｆｎＭｉｔｒｏａｄＰ，ａｊｇ２００，ｉｇｕｈｎ）ｌａｙＣｍｍｎ，Ｎｎｉ１０２Ｊｎｓ，Ｃｉｉｎａａ
３种变异体占大多数，其他变异体相对较少。目前尚无标准的、快速简便的检测Ｅ４ＡＫ的方法，ＭＬ－Ｌ使其临床应用推广受到限
制，待进一步研究。新近的临床研究发现，Ｍ４Ｌ有ＥＬ－Ｋ阳性率和患者是否吸烟高度相关，Ａ也与年龄、腺癌以及表皮生长因子

《NCCN非小细胞肺癌临床实践指南》解析

《NCCN非小细胞肺癌临床实践指南》解析随着美国国立综合癌症网络（NCCN）2011版《非小细胞肺癌（NSCLC）临床实践指南》（简称《指南》）的发布，中国专家组也在今年4月召开的第4届NCCN亚洲学术会议上对《指南》（中国版）进行了讨论和修订，两者连同我国卫生部近日推出的肺癌规范化诊治指南（简称《规范》）成为目前国内肺癌诊治的指导指南。

本文就英文版《指南》的更新内容及其与《指南》（中国版）和《规范》的异同作一简要介绍。

《指南》（英文版）更新内容肺癌预防新版《指南》指出，约85%~90%的肺癌是由直接或间接吸烟引起，长期吸烟易导致第二原发癌、治疗并发症、药物相互作用、其他吸烟相关疾病、生活质量下降及生存期缩短。

因此，新版《指南》加强了戒烟的推荐力度，将“建议戒烟”修订为“戒烟劝告、辅导以及药物治疗”。

预测和预后分子标志物继表皮生长因子受体（EGFR）、RNA核苷酸还原酶1（RRM1）、切除修复交叉互补组1 （ ERCC1）及KRAS后，EML4-ALK作为新的分子生物标志物越来越受到关注，新版《指南》也将其纳入。

在美国人群中，EML4-ALK融合基因的发生率为2%~7%，而在中国约为16%。

携带EML4-ALK融合基因的NSCLC患者对EGFR-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药，而这两种突变的高发人群均为腺癌、不吸烟或轻度吸烟者，且这两种基因突变相互排斥。

因此，在上述高发人群中进行EML4-ALK突变的检测尤为重要。

但新版《指南》并未推荐标准的EML4-ALK突变检测方法。

目前，crizotinib是针对EML4-ALK的靶向治疗新药，其是ALK和生长因子受体蛋白（MET）的TKI，crizotinib对EML4-ALK突变型晚期NSCLC患者的疾病控制率可达90%。

该药目前尚处在临床试验阶段，其应用前景值得期待，EML4-ALK也有望成为继EGFR后另一种有明确疗效预测作用的分子标志物。

早期NSCLC治疗对于早期NSCLC（Ⅰ、Ⅱ期），根治性手术±辅助化疗仍是标准的治疗模式，新版《指南》并未过多改动，主要更新点有以下两方面。

EML4_ALK阳性表达非小细胞肺癌患者的临床特征及治疗现状_孙霞

，最常见的为 E13 ： A20 （变体 1 ）和 E6a： A20 （变体
岛素受体超家族，具有受体酪氨酸激酶的经典结构：细胞外
* 1
3a）。体外克隆转化实验及体内实验均证实，不同融合变体
基金项目：国家自然科学基金资助项目（ 81000980 ）；江苏省卫生科研资助项目（ H200968 ） Email： baoruiliu@ hotmail． com 通讯作者，
PCR ）和反转录聚合酶链反应（ RT法为免疫组化法（ IHC ）、荧光免疫杂交（ FISH）。除上述 3 种方法，还有基因组外显子阵列剖面等。2009 年有学者运用该方法在乳腺癌和结肠癌 ALK 中首次检测到该融合基因的存在，除上述提到的 EML4变体 1 型（ E13 ： A20 ），在结肠癌中还发现新的变体型，即 E21 ： A20［5］。随后在 2010 年研究者通过免疫组化 IAEP 法最终证实为在 2 例肾癌患者中也检测到 ALK 融合基因， TPM3ALK 及 EML4ALK 基因型［6］。至目前为止， EML4ALK 融合基因已可以在多种肿瘤中被检测出，除常见的肺癌，还包括乳腺癌、结肠癌、肾癌、间变型弥漫大细胞淋巴瘤 ALK 和 IMT。最近还发现在非肿瘤组织中亦存在 EML4［7 ］
· 78·
临床肿瘤学杂志 2013 年 1 月第 18 卷第 1 期
Chinese Clinical Oncology， Jan． 2013 ， Vol． 18 ， No． 1
EML4- ALK 阳性表达非小细胞肺癌 * 患者的临床特征及治疗现状
210008 南京南京医科大学鼓楼临床医学院南京大学医学院附属南京市鼓楼医院肿瘤中心 1 孙霞，魏嘉，刘宝瑞

浅述ALK融合突变及其检测方法（上）

浅述ALK融合突变及其检测方法（上）作者：闵ALK融合突变是非小细胞肺癌常见驱动基因突变之一，因其靶向药使用时间长，平均生存期长，也被病友们戏称为“钻石突变”。

由于ALK融合突变发生概率仅5%-7%左右，不少病友都很羡慕ALK阳性的幸运儿，也希望同样的运气降落在自己身上，于是如何认识ALK 融合突变、如何检测ALK突变以及如何看懂结果就成了需要回答的问题。

有很多病友会奇怪自己的基因检测报告上有ALK突变却被告知不能吃靶向药，或者为什么自己的病理报告上写着ALK（+）还要做基因检测？想回答这些问题，我们需要去了解什么是ALK融合突变，究竟是怎么检测的。

什么是ALK融合突变？让我们先了解一下主角ALK融合突变到底是怎么回事。

ALK基因全称为间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK），总共有29个外显子。

为了方便理解，各位可以将它想象成一辆名为ALK的高铁列车，而29个外显子就是列车的29节车厢，那么“融合突变”就是指ALK 的某节车厢断裂并且与其他班次的列车车厢相接变成一个新的列车，最常见的是从ALK号列车的20号车厢处断裂，并与另一辆名为“EML4”的基因重新拼接，如下所示。

已发现的所有ALK基因融合突变都是在ALK基因外显子20处发生断裂，而EML4断裂点有外显子2/6/13/14/15/17/18/20，即上图中与断裂后的ALK基因20号外显子重新连接的不但可以是EML4基因13号外显子，也可以是其他外显子。

上面例子可简称为“E13:A20”，即代表EML4外显子13与ALK 外显子20融合，有些基因检测报告的结果也采用这种缩写。

不同的融合类型使用靶向药的效果也不同，这是后话在此不过多赘述。

随着研究进步，更多的ALK基因融合伴侣被发现，ALK基因20外显子断裂后不仅可能与EML4基因融合，还可能有与KIF5B基因、KLC1基因、TFG基因、HIP1基因等等融合，此类也成为罕见ALK融合突变。

EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌中的研究

聚合酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｉｒｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ — ＰＣＲ）、免疫组化（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＩＨＣ）、荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａ・
ＮＳＣＬＣ患者病变组织ＥＭＩＡ— ＡＬＫ融合基因的检测技术。该技术灵敏度较高，并可用于ＥＭＩＡ．ＡＬＫ融合基因亚型的鉴别。可以用患者病变的石蜡组织进
ＥＭＩＡ－ＡＬＫ。
ＥＭＩＡ分别在ｌ３号、６号、２０号、ｌ４号、ｌ８号、
一
ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＣＩＳＨ）、快速ｃＤＮＡ末端扩增聚合酶链
反应（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅＤＮＡｅｎｄｓｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｌ５号、２号、ｌ７号外显子处发生断裂形成片段，其均与ＡＬＫ的２０号外显子的断裂处相结合，形成Ｅｌ３；
Ａ２０、Ｅ６；Ａ２０、Ｅ２０；Ａ２０、Ｅｌ４；Ａ２０、Ｅ１８；Ａ２０、Ｅｌ５；
行检ｉ贝０，由于基因的扩增暗示存在ＡＬＫ的重排，因而存在一定的假阳性。因为ＲＮＡ容易降解，所以在取标本时要迅速将离体标本放入液氮或一８０％中保存，而且取标本的器械最好是用ＤＥＰＣ水（ｄｉｅｔｈｙｐｙ．ｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ焦碳酸二乙酯，经过处理并给予高温、高压消毒的超纯水）处理过。故为提高准确性，建议用新鲜冰冻的组织标本做ＲＴ — ＰＣＲ检测。

非小细胞肺癌与EML4-ALK融合基因的关系及其检测方法

非小细胞肺癌与EML4-ALK融合基因的关系及其检测方法目前，肺癌已经成为世界范围内发病率及死亡率最高的肿瘤之一。

随着分子生物学研究的飞速进展，肺癌的内科治疗已经从传统的化疗、放疗发展为个性化的靶向治疗。

针对多种靶基因突变的靶向治疗为肺癌患者延长生命、提高生活质量带来希望。

此文就最新的非小细胞肺癌靶基因EML4-ALK相关问题进行综述。

[Abstract] Today, lung cancer is the most commonly diagnosed cancer and the leading causes of tumor-related deaths in the world. Along with the fast progress of molecular biology, the traditional treatment methods, chemotherapy and radiotherapy gradually have been development to individual therapy. Strategies to maximize treatment benefit have centered on individualizing treatment according to the molecular profile of the non-small cell lung cancer. This review describes the relative information of the newest oncogenic drivers, EML4-ALK fusion protein, have also been implicated as in the pathogenesis of the non-small cell lung cancer.[Key words] Lung cancer; Individual therapy; Gene; EML4-ALK fusion protein; EGFR目前，肺癌已经成为发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一。

alk-eml4融合原理

alk-eml4融合原理在科学研究中，ALK-EMl4融合是一种常见的基因突变，它在肺癌的发生和发展中起到重要作用。

ALK代表“Anaplastic Lymphoma Kinase”，EMl4代表“Echinoderm Microtubule-Associated Protein Like 4”。

当这两个基因融合在一起时，将产生一种特殊的融合蛋白，称为ALK-EMl4融合蛋白。

ALK-EMl4融合的发现是由科学家们通过对肺癌组织样本的基因测序分析而得出的。

这一突变的发现为肺癌的治疗提供了新的方向。

研究表明，ALK-EMl4融合在一些肺癌患者中相对较常见，尤其是非小细胞肺癌。

这一突变可以导致细胞信号传导通路的异常激活，进而促进肿瘤的生长和扩散。

对于ALK-EMl4融合阳性的肺癌患者，靶向药物治疗已经成为一种重要的治疗策略。

目前，临床上已经有一些针对ALK-EMl4融合蛋白的靶向药物被批准上市，如克唑替尼、艾瑞妥布等。

这些药物可以选择性地抑制ALK-EMl4融合蛋白的活性，从而抑制肿瘤的生长和扩散。

然而，ALK-EMl4融合阳性肺癌患者的治疗仍面临一些挑战。

一方面，长期使用靶向药物容易导致耐药性的产生，使治疗效果降低。

另一方面，由于ALK-EMl4融合的异质性和多样性，不同患者对靶向药物的敏感性也存在差异。

因此，如何更好地预测患者对靶向药物的敏感性，并寻找新的治疗策略，是当前研究的热点和难点。

为了解决这些问题，科学家们正在开展相关研究。

他们通过基因测序、蛋白质组学等技术手段，深入研究ALK-EMl4融合的生物学特性和分子机制，以期找到更好的治疗方法。

同时，一些研究还尝试将靶向药物与免疫治疗相结合，以提高疗效。

尽管ALK-EMl4融合的研究仍在进行中，但已取得了一定的进展。

科学家们相信，随着对ALK-EMl4融合的深入研究，将有越来越多的治疗策略被发现，为肺癌患者带来新的希望。

总结起来，ALK-EMl4融合是一种常见的肺癌基因突变，它在肺癌的发生和发展中起到重要作用。

EML4_ALK融合基因在非小细胞肺癌中的研究进展

研究表明，EML4-ALK 融合基因在 NSCLC 患者中阳性比例较低。Solomon 等［8］发现不加选择的 NSCLC 患者 EML4-ALK 融合基因总发生率为 0． 4% ～ 13． 5% ，这部分患者多为非吸烟者，且大多数是肺腺癌。2009 年 Wong 等［9］对 266 例手术切除的原发性肺癌患者的标本进行了检测，在 13 例 NSCLC 患者（ 4． 9% ）标本中检出了融合基因，并发现融合基因更易发生于不吸烟、年轻以及 EGFR，K-ras 野生型的肺癌患者。Shaw 等［10］为提高融合基因的阳性率，他们以女性、亚裔、轻度或者不吸烟的腺癌中至少符合 2 项为标准，挑选了 141 例 NSCLC，使用荧光原位杂交技术（ fluorescent in situ hybridization，FISH 技术）检测 EML4ALK、EGFR 以及 K-ras 突变情况。结果表明，13% （ 19 例）患者为 EML4-ALK 阳性，上述 3 种突变没有重叠。与 EGFR 突变（ 31 例）和 EGFR、ALK 突变均阴性的野生型（ 91 例）相比，EML4ALK 阳性的患者更年轻（ P ＜ 0． 001），多为男性（ P = 0． 036），轻度或者不吸烟（ P ＜ 0． 001），这些临床特征有助于 EML4-ALK 的识别和肺癌的早期诊断。为了更好地了解中国人群中该融合基因的表达情况，Zhang 等［11］在 103 例非小细胞肺癌中将 RACE 偶联 PCR 测序技术（ RACE-coupled PCR sequencing）检测 ALK 融合基因的频率，发现中国的非选择性 NSCLC 患者中该融合基因的发生率为 11． 6% ，但肺腺癌患者可升至 19． 2% ，从不吸烟者为 19． 2% ，EGFR 和 K-ras 均为野生型的肺腺癌患者则高达 42． 8% 。该研究表明，EML4-ALK 融合基因与以下 3 个因素有关：无吸烟史（ P = 0． 03），年纪较轻初发者（ P = 0． 03），无 EGFR / KRAS 突变的肺腺癌（ P = 0． 04）。并且，EML4-ALK 融合基因阳性的肺癌中 ALK 的 mRNA 水平要高于该融合基因阴性的患者，但是 EML4 的表达在 EML4-ALK 融合基因阴性组与阳性组中无差别，因此 EML4-ALK 融合基因可能与 ALK 的的表达水平有着密切的关系。2010 年，Sun 等［12］对东亚地区非吸烟肺腺癌中的突变基因进行研究。分析从单一群体中（复旦大学附属上海肿瘤医院，中国上海）切除的 52 例无吸烟史的肺腺癌并发的基因突变： KRAS，NRAS，HRAS，HER2，BRAF，ALK，PIK3CA， TP53 和 LKB1。结果发现 41 例肿瘤存在 EGFR 突变，3 例存在 EML4-ALK 融合基因，2 例存在 FER2 插入，1 例存在 KRAS 突变。BRAF，NRAS，HRAS，LKB1 突变未被发现。此项研究是首