Annexin A2基因沉默对肺癌细胞转移能力的影响-论文

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靶向livin基因沉默对胰腺癌PANC1细胞增殖凋亡影响的实验研究的开题报告

靶向livin基因沉默对胰腺癌PANC1细胞增殖凋亡影响的实验研究的开题报告一、研究背景与意义胰腺癌是一种高度侵袭性的恶性肿瘤，因其缺乏明显的早期症状而易于漏诊和迟诊，使得其预后十分不良。

目前，化疗、手术和放疗等传统治疗方式对胰腺癌的疗效并不理想。

近年来，越来越多的研究表明，靶向某些癌细胞特有的基因，能够有效地抑制肿瘤的生长和扩散，具有重要的治疗价值。

Livin基因是一种可以特异性表达于多种肿瘤细胞的抗凋亡蛋白，其过度表达已被证实与许多肿瘤的发生、发展和预后密切相关，因此作为一种潜在的治疗靶点，针对Livin基因的沉默可能成为一种新的治疗策略。

目前，有多项研究表明，靶向Livin基因的RNAi技术可以显著抑制肿瘤细胞增殖、降低其抗凋亡能力，对一些常见肿瘤如肺癌、乳腺癌和胃癌等也已有初步研究。

但针对胰腺癌的实验研究，特别是靶向Livin基因的沉默对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响尚缺乏系统研究。

因此，本研究将利用RNAi技术针对Livin基因进行靶向沉默，并通过体外实验研究其对胰腺癌PANC1细胞的增殖和凋亡影响，探究Livin基因作为治疗靶点的可行性和疗效。

二、研究方法1.实验对象：人胰腺癌PANC1细胞株2.shRNA设计：使用软件设计与Livin靶向序列配对的合适shRNA对Livin基因进行沉默。

3.细胞培养：将PANC1细胞分为实验组和对照组，分别接种shRNA 和空载体转染。

利用MTT实验、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况，并进行Western blotting和real-time PCR检测Livin基因表达。

4.结果分析：通过比较实验组和对照组细胞的增殖和凋亡情况，以及Livin基因表达情况，评估靶向Livin基因沉默对PANC1细胞增殖和凋亡的影响。

三、预期结果及意义我们预期通过RNAi技术成功沉默Livin基因，观察到PANC1细胞的增殖受到明显抑制，凋亡率上升。

同时，实验结果也将为证实Livin基因作为治疗靶点的可行性提供新的证据，为胰腺癌的治疗研究提供新的思路和线索。

siRNA沉默EZH2对HL-60细胞迁移、增殖能力的影响及其机制

论著㊃基础研究 d o i :10.3969/j.i s s n .1671-8348.2021.10.007网络首发 h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /50.1097.R.20201127.1227.010.h t m l (2020-11-27)s i R N A 沉默E Z H 2对H L -60细胞迁移㊁增殖能力的影响及其机制*朱秋花,潘学谊,曾文彬,周兰兰,关则兵ә(广东药科大学附属第一医院血液内科,广州510080) [摘要] 目的探讨人类同源基因2(E Z H 2)对人急性早幼粒细胞白血病细胞系H L -60细胞迁移㊁增殖能力的影响及其机制㊂方法通过慢病毒转染技术用s i R N A s 沉默H L -60细胞的E Z H 2基因,用实时荧光定量P C R (qR T -P C R )及W e s t e r n b l o t 验证3个不同序列的s i R N A 敲除E Z H 2的效果并筛选出最佳序列㊂随后用C C K -8和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和凋亡,并用T r a n s w e l l 迁移小室试验检测细胞的迁移能力,用W e s t e r n b l o t 方法检测细胞迁移㊁增殖及凋亡相关蛋白的表达水平㊂结果在H L -60细胞中用s i R N A s 敲除E Z H 2后其增殖能力下降(P <0.05),凋亡增加(P <0.05)㊂T r a n s w e l l 迁移小室试验结果显示,H L -60细胞敲除E Z H 2组(s i E Z H 2组)的下室细胞比例比H L -60野生株细胞组(w i l d 组)和空病毒组(N C 组)明显降低;苏木素染色后发现s i E Z H 2组膜上细胞基数明显低于w i l d 组和N C 组㊂W e s t e r n b l o t 检测显示,s i R N A 沉默E Z H 2后细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MM P -2)表达下调,E -钙黏蛋白(E -c a d h e r i n)上调,增殖及凋亡相关蛋白B 淋巴细胞瘤-2(B c l -2)基因下调,而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(c a s p a s e -3)上调㊂结论在H L -60细胞中敲除E Z H 2基因后其增殖㊁迁移能力下降,凋亡增加㊂[关键词] 急性早幼粒细胞白血病;H L -60;人类同源基因2;细胞迁移;髓外浸润[中图法分类号] R 557+.3[文献标识码] A[文章编号] 1671-8348(2021)10-1653-05E f f e c t a n d m e c h a n i s m o f s i R N A s i l e n c i n g E Z H 2o n m i gr a t i o n a n d p r o l i f e r a t i o n a b i l i t y of H L -60c e l l s *Z HU Q i u h u a ,P A N X u e y i ,Z E N G W e n b i n ,Z H O U L a n l a n ,G U A N Z e b i n g ә(D e p a r t m e n t o f H e m a t o l o g y ,F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f G u a n g d o n g P h a r m a c e u t i c a l U n i v e r s i t y ,G u a n g z h o u ,G u a n g d o n g 510080,C h i n a ) [A b s t r a c t ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t a n d m e c h a n i s m o f E Z H 2o n t h e m ig r a t i o n a n d p r o l i f e r a -t i o n a b i l i t y o f a c u t e p r o m y e l o c yt i c l e u k e m i a H L -60c e l l s .M e t h o d s s i R N A s w e r e u s e d t o s i l e n c e t h e E Z H 2g e n e i n H L -60c e l l s b y l e n t i v i r a l t r a n s f e c t i o n .T h e e f f e c t o f t h r e e d i f f e r e n t s e q u e n c e s o f s i R N A k n o c k i n g ou t E Z H 2w a s c o n f i r m e d b y q u a n t i t a t i v e r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e -p o l ym e r a s e c h a i n r e a c t i o n (Q R T -P C R )a n d W e s t -e r n b l o t ,m o r e o v e r t h e o p t i m a l s e q u e n c e w a s s c r e e n e d o u t .S u b s e q u e n t l y ,t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n a c t i v i t y a n d a p-o p t o s i s w e r e d e t e c t e d b y c e l l c o u n t i n g k i t -8(C C K -8)a n d f l o w c y t o m e t r y ,t h e c e l l m i g r a t i o n a b i l i t y wa s d e t e c -t e db y T r a n s w e l l m i g r a t i o n a s s a y ,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f m i g r a t i o n ,p r o l i f e r a t i o n a n d a p o pt o s i s a s s o c i a t e d p r o t e i n s w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t .R e s u l t s A f t e r s i R N A s k n o c k i n g ou t E Z H 2i n H L -60c e l l s ,t h e p r o l i f -e r a t i o n a b i l i t y w a s d e c r e a s e d (P <0.05)a n d a p o p t o s i s w a s i n c r e a s e d (P <0.05).T h e T r a n s w e l l m i gr a t i o n c h a m b e r t e s t r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e r a t i o o f m i g r a t e d c e l l s i n t h e l o w e r c o m p a r t m e n t s i n E Z H 2g r o u p(s i E Z H 2g r o u p )w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d c o m p a r e d w i t h t h a t i n t h e H L -60w i l d c e l l s g r o u p (w i l d g r o u p )a n d e m p t y v i r u s g r o u p (N C g r o u p ),a n d t h e c e l l sb a s e n u m b e r o n t h e m e m b r a n e i n t h e s i E Z H 2g r o u p w a s s i g-n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e w i l d g r o u p a n d N C g r o u p a f t e r H e m a t o x y l i n s t a i n i n g .T h e W e s t e r n b l o t d e -t e c t i o n f o u n d t h a t a f t e r s i l e n c i n g E Z H 2b y s i R N A ,t h e e x p r e s s i o n o f m i gr a t i o n -r e l a t e d p r o t e i n MM P -2w a s d o w n -r e g u l a t e d a n d E -c a d h e r i n w a s u p -r e g u l a t e d ;a n d t h e p r o l i f e r a t i o n a n d a p o pt o s i s r e l a t e d p r o t e i n B -c e l l l y m p h o m a -2(B c l -2)g e n e w a s d o w n -r e g u l a t e d ,w h i l e c a s p a s e -3w a s u p -r e gu l a t e d .C o n c l u s i o n A f t e r E Z H 2k n o c k i n g o u t E Z H 3g e n e i n H L -60c e l l s ,i t s p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n a b i l i t y i s d e c r e a s e d a n d a p o pt o s i s i s i n c r e a s e d .3561重庆医学2021年第50卷第10期*基金项目:广东省自然科学基金项目(2017A 030313664);广州市越秀区科技计划项目(2017-W S -008)㊂作者简介:朱秋花(1989 ),住院医师,硕士,主要从事白血病及其髓外浸润的研究㊂ ә 通信作者,E -m a i l :z e b i n g gu a n @126.c o m ㊂[K e y w o r d s]a c u t e p r o m y e l o c y t i c l e u k e m i a;H L-60;e n h a n c e r o f z e s t e h o m o l o g2;c e l l u l a r m i g r a t o r y;e x-t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n初诊的急性髓系白血病(AM L)患者中有30%~ 40%可伴有髓外浸润(E M I),E M I主要表现为淋巴结肿大㊁皮肤结节㊁齿龈增生㊁中枢神经系统的侵犯及肝脾肿大等[1]㊂急性早幼粒细胞白血病(A P L)占成人AM L的10%~15%,具有特殊的生物学和遗传学特征㊂A P L常起病较凶险,有10%~20%的患者死于早期出血㊂E M I在A P L中发生不少见,且研究显示E M I与AM L患者预后差相关[2]㊂作为多梳家族蛋白(P c G)中具有催化活性的亚基,果蝇z e s t e基因增强子的人类同源基因2(E Z H2)是主要起组蛋白甲基转移酶的作用,通过甲基化修饰核小体组蛋白H3K27位点赖氨酸调节细胞分化㊁增殖及肿瘤的形成[3-4]㊂有研究发现,E Z H2在多种恶性实体肿瘤如肾癌㊁肺癌及甲状腺癌迁移及预后差相关[5-7],且有研究报道E Z H2抑制剂在体外有抗白血病作用[8]㊂但是E Z H2在白血病的作用及其参与E M I的机制研究较少㊂本课题前期研究证实人A P L细胞系H L-60和K a s u m i-1细胞均高表达E Z H2,且已通过实验证实在K a s u-m i-1细胞株中E Z H2促进其细胞迁移㊁增殖,抑制其凋亡[9]㊂本研究旨在探究E Z H2对H L-60细胞迁移㊁增殖能力的影响及可能的机制,以为A P L的表观遗传学治疗提供理论依据㊂1材料与方法1.1材料及试剂55例初治AM L患者骨髓单个核细胞标本来源于南方医院血液科㊂H L-60细胞购自天津血液病研究所㊂细胞的培养基为含有10%新生牛血清(杭州四季青公司,中国)的R P I M-1640培养基(H y c l o n e, U S A),并添加100U/L青霉素㊁100μg/L链霉素;在含有37ħ㊁5%C O2饱和湿度条件进行培养㊂R N A 提取试剂T r i z o l试剂盒及逆转录试剂盒均购自中国T a R a R a公司㊂E Z H2和β-a c t i n基因引物均由上海英俊捷基公司设计并合成㊂核蛋白/胞浆蛋白试剂盒购自中国弗德生物公司,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (c a s p a s e-3)单抗㊁E Z H2单抗㊁基质金属蛋白酶2 (MM P-2)单抗㊁H3K27m e3单抗㊁E-钙黏蛋白(E-c a d-h e r i n)单抗㊁B淋巴细胞瘤-2(B c l-2)单抗㊁G A P D H单抗均购自美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y(C S T)公司,二氨基联苯胺(D A B)显色液购自中国D A K O公司㊂能够敲除E H Z2的3种不同序列小干扰R N A(s i R-N A-1:A A C A G C T G C C T T A G C T T C A,s i R N A-2:A A C A G C T C T A G A C A A C A A A,s i R N A-3: G G A T A G A G A A T G T G G G T T T)及对照组空病毒(N C:T T C T C C G A A C G T G T C A C G T)购自中国吉凯基因㊂1.2方法1.2.1实时荧光定量P C R(q R T-P C R)方法检测E Z H2表达q R T-P C R方法检测AM L患者骨髓E Z H2m R-N A的表达水平,并分析其表达与临床特征的关系㊂1.2.2建立敲除E Z H2的H L-60细胞株6孔板接种对数生长期的H L-60细胞,使每个孔细胞数为1ˑ105个,H L-60细胞分别用3种不同序列s i R N A的慢病毒(分别为s i R N A-1组㊁s i R N A-2组㊁s i R N A-3组)及空载体慢病毒(为N C组,而未转染的H L-60则为w i l d组)转染,培养72h后在荧光显微镜下拍照㊂随后流式细胞术用来检测细胞的绿色荧光蛋白(G F P)转染率,并筛选出G F P阳性的细胞,用q R T-P C R及W e s t e r n b l o t验证3个不同序列的s i R N A敲除E Z H2的效果并筛选出最佳序列记为s i E Z H2组,体外扩大培养㊂1.2.3 T r a n s w e l l实验检测细胞迁徙能力细胞的迁移能力用T r a n s w e l l迁移小室实验来检测,小室基底膜的孔径为8μm㊂H L-60的3个处理组细胞株(w i l d㊁N C和s i E Z H2组),用磷酸缓冲盐溶(P B S)分别洗涤细胞2次,R P I M-1640培养基重悬细胞使细胞浓度为3ˑ106个/L㊂分别取3ˑ105个细胞接种到T r a n s w e l l小室的上室㊂下室加入500μL 各自细胞所需含有血清的正常培养基,在含有37ħ㊁5%C O2饱和湿度条件下培养18h后,对迁移到下室的细胞进行计数㊂同上处理各组细胞,培养时间为10 h㊂取出小室,用苏木素对小室膜上细胞进行染色,选择相同位置的5个视野进行计数并拍照㊂上述实验均重复3次㊂1.2.4 C C K8检测细胞增殖活性C C K8实验用来检测细胞的增殖活性,将H L-60的w i l d㊁N C㊁s i E Z H23组对数生长期的细胞接种于96孔板,调整每孔细胞数为1ˑ104个,各组设3个复孔㊂分别于0㊁24㊁48㊁72㊁96h后加入C C K8试剂,培养3h后在酶标仪下测定各孔450n m吸光度(A)值,以上试验重复3次㊂1.2.5流式细胞术检测细胞凋亡细胞凋亡用细胞凋亡双标检测试剂盒膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(A n n e x i n V-A P C/P I)检测,用P B S液漂洗w i l d㊁N C㊁s i E Z H23组细胞,1ˑB i n d i n g B u f f e r漂洗细胞1次离心弃上清液,随后用100μL1ˑB i n d i n g B u f f e r重悬3组细胞,加5μLA n n e x i n V-A P C,室温光孵育15m i n㊂1ˑB i n d i n gB u f f e r漂洗细胞1次之后离心弃上清液,在200μL 1ˑB i n d i n g B u f f e r重悬的3组细胞中加入5μL P I;用流式细胞仪来检测细胞凋亡㊂1.2.6q R T-P C R及W e s t e r n b l o t方法检测相关基4561重庆医学2021年第50卷第10期因及蛋白表达采用q R T -P C R 方法检测相关基因表达,具体方法同本课题组前期研究[10-11]㊂W e s t e r n b l o t 方法用来测定相关蛋白,取H L -60的w i l d ㊁N C ㊁s i E Z H 23组细胞提取蛋白,蛋白浓度用二喹啉甲酸(B C A )法检测,行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(S D S -P A G E )之后转膜,加入一抗在4ħ冰箱孵育过夜,次日洗膜之后加入二抗孵育2h ㊂以G A P D H 为内参,化学发光显色后拍照分析E Z H 2㊁组蛋白H 3第27位赖氨酸上三甲基化(H 3K 27m e 3)㊁MM P -2及E -c a d -h e r i n 蛋白表达水平㊂1.3 统计学处理数据用S P S S 13.0软件分析,用2-ΔC T 表示E Z H 2m R N A 表达水平,计量资料以x ʃs 表示,符合正态分布的两组比较采用t 检验(方差齐时)或校正t 检验(方差不齐时);多组间比较采用O n e -W a y A N O V A检验,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 AM L 患者E Z H 2表达水平与临床特征的关系55例AM L 患者E Z H 2表达与临床特征的关系,在AM L 中高表达E Z H 2患者E M I 发生率明显升高(P <0.01),见表1㊂2.2 各组细胞E Z H 2的表达水平比较在H L -60细胞中转染载有不同s i R N A 片段的慢病毒,培养72h ,荧光显微镜下拍照,见图1㊂q R T -P C R及W e s t e r n b l o t 检测E H Z 2基因及蛋白表达均下调㊂s i R N A -1组E Z H 2m R N A (0.0030ʃ0.0002)明显低于s i R N A -3组(0.0043ʃ0.0001)和s i R N A -2组(0.0064ʃ0.0006),差异均有统计学意义(P <0.001)㊂其中以s i R N A -1(序列A A C A G C T G C C T TA G C T T C A )下调H L -60细胞的E Z H 2最明显,W e s t e r n b l o t 检测结果与P C R 结果一致,流式筛选s i R N A -1组G F P 阳性细胞体外扩大培养用于后续实验,随后检测N C ㊁s i E Z H 2㊁w i l d 3组细胞E Z H 2的表达,qR T -P C R 及W e s t e r n b l o t 结果均显示,s i E Z H 2组E Z H 2表达均明显低于N C 组及w i l d 组(P <0.001),见图2㊂2.3 各组H L -60细胞增殖活性及凋亡率比较C C K 8实验提示在H L -60细胞中敲除E Z H 2后s i E Z H 2组的增殖能力明显下降(P <0.05)㊂通过流式细胞术检测细胞凋亡,发现s i E Z H 2组细胞凋亡明显增加(P <0.05),见图3㊂ A :s i R N A -1组;B :s i R N A -2组;C :s i R N A -3组㊂图1 荧光显微镜下拍照观察细胞G F P 表达(ˑ200) a :P <0.001,与w i l d 组比较;bP <0.001,与s i R N A -1组比较㊂图2 W e s t e r n b l o t 和q R T -P C R 检测E Z H 2的表达水平表1 AM L 患者E Z H 2表达与临床特征关系项目n低表达(n =23)高表达(n =32)χ2/ZP性别(男/女)555/1821/1110.3400.001年龄һ5531.0925.781.2130.225B M%һ5526.3929.16-0.6310.526P B %һ5422.5031.21-2.0120.044W B Cһ5522.1132.23-2.3120.021L D H (正常/升高)478/123/243.8590.049E M I (无/有)5518/57/2517.1600.001核型(正常/复杂)3812/223/10.2420.623续表1 AM L 患者E Z H 2表达与临床特征关系项目n低表达(n =23)高表达(n =32)χ2/ZP预后(低/中/高)472/15/24/22/20.2780.870诱导(D A /I A)#5510/1318/140.8730.350巩固(a /b /c )446/6/615/1/107.4950.024һ:平均秩;#:诱导方案中8例H A 合并到D A ,3例MA 合并到I A ;B M%:骨髓原始细胞比例;P B %:外周血原始细胞比例;a :诱导方案联合小于4个疗程的中㊁大剂量阿糖胞苷(M D /H D -A r a -C );b :诱导方案联合大于或等于4个疗程M D /H D -A r a -C 或自体造血干细胞移植(a u t o -H S C T );c :诱导方案联合异基因H S C T (a l l o -H S C T )㊂5561重庆医学2021年第50卷第10期2.4 各组H L -60细胞敲除E Z H 2后细胞迁移能力比较T r a n s w e l l 迁移实验中s i E Z H 2组的下室细胞比例[(4.50ʃ0.26)%]明显低于w i l d 组[(9.05ʃ0.30)%]和N C 组[(9.03ʃ0.27)%],差异有统计学意义(P <0.001);苏木素染色后发现s i E Z H 2组小室膜上细胞基数比w i l d 组和N C 组明显降低,差异有统计学意义(P =0.001),见图4㊂ a:P <0.05,与s i E Z H 2组比较㊂图3 C C K 8及流式细胞术检测H L -60细胞增殖及凋亡a:P <0.001,与s i E Z H 2组比较㊂图4 T r a n s w e l l 实验检测H L -60细胞的迁移能力2.5 各组H L -60细胞敲除E Z H 2后H 3K 27m e 3和MM P -2蛋白水平比较在H L -60细胞中敲除E Z H 2,H 3K 27m e 3和MM P -2蛋白均明显下调(P <0.05),而E -c a d h e r i n 则上调(P <0.05),同时发现E Z H 2下调后抗凋亡蛋白B c l -2亦下调,而细胞凋亡途径关键蛋白c a s p a s e -3上调,见图5㊂图5 W e s t e r n b l o t 检测相关蛋白表达3 讨论E Z H 2作为P c G 蛋白家族成员之一,在多种肿瘤中起原癌基因作用㊂E Z H 2参与调节细胞分化㊁增殖及肿瘤的形成[3],有研究显示E H Z 2与多种实体肿瘤迁移能力相关[5-7]㊂A P L 为白血病中一种特殊类型,E M I 发生率较高,E M I 中以中枢浸润较常见,一旦发生中枢侵犯预后较差㊂目前国内外有关A P L 与E Z H 2的关系及其E M I 机制研究极少㊂本课题组前期研究已证实在AM L 细胞株H L -60及K a s u m i -1存在E Z H 2高表达,且在K a s s u m i -1细胞中证实敲除E Z H 2细胞凋亡增加,增殖减慢,机制研究显示E Z H 2通过调控E -c a d h e r i n 蛋白及p -E R K /p -c m yc /MM P -2通路影响细胞迁移[9-10]㊂且T A N A K A 等[11]研究显示,在H L -60细胞中下调E Z H 2可抑制其增殖㊂因此,本研究猜测E Z H 2与A P L 细胞增殖㊁凋亡及迁移相关㊂本研究旨在探究在H L -60中敲除E Z H 2对细胞的增殖㊁凋亡及迁移的影响及其可能的机制㊂相对于实体肿瘤的迁移而言,在白血病中则表现为E M I ,白血病一旦发生E M I 则预后较差㊂MM P s ㊁黏附分子㊁趋化因子及E -c a d h e r i n 异常表达均可影响白血病细胞E M I ㊂当骨髓中白血病细胞表面的黏附因子表达异常时其黏附能力下降促使细胞趋化黏附于血管内皮上,进而分泌MM P s 促使细胞外基质降解,最终细胞迁移至骨髓外导致E M I[12-14]㊂相关研究6561重庆医学2021年第50卷第10期表明,在AM L中E M I的发生亦与MM P s表达增加密切相关[15-16]㊂E Z H2可通过甲基化肾癌㊁口腔癌细胞核小体组蛋白下调E-c a d h e r i n表达从而增强细胞的转移能力[5,17]㊂本研究结果显示,在H L-60细胞中敲除E Z H2后E-c a d h e r i n表达上调,MM P-2下调,细胞迁移能力减弱㊂因此,本研究认为E Z H2可能通过上调H L-60细胞的MM P-2降解细胞外基质或通过下调E-c a d h e r i n来增强A P L细胞迁移能力㊂E Z H2主要通过甲基化周期蛋白㊁抑癌基因等靶基因参与调节细胞分化增殖及肿瘤的形成[4]㊂林璐慧等[18]研究发现,敲除E Z H2后H L-60细胞中H3K27m e3亦下调从而导致B c l-2下调促进细胞凋亡㊂B c l-2是一种癌基因,具有抑制凋亡的作用㊂有研究报道,在H L-60细胞存在B c l-2过表达,抑制B c l-2的表达能够增加细胞凋亡关键基因c a s p a s e-3活性,进而抑制细胞增殖并促进其凋亡[19]㊂本研究发现,敲除E Z H2后H L-60细胞的增殖减弱㊁凋亡增加㊂本研究认为,敲除E Z H2后对组蛋白H3K27的甲基化作用减弱,进而其对靶基因抑制作用减弱,从而引起B c l-2下调及c a s p a s e-3上调㊂综上所述,E Z H2可能通过上调B c l-2及下调c a s p a s e-3促进H L-60细胞增殖并抑制其凋亡㊂临床中使用去甲基化药物如地西他滨及阿扎胞苷治疗白血病可能基于表观遗传学调控,这为将来使用E Z H2抑制剂或其他类型去甲基化药物治疗白血病提供一定理论基础,更深的机制研究仍需进一步探究㊂在A P L细胞株(H L-60)中敲除E Z H2能有效抑制其增殖和迁移能力,并促进其凋亡,且E Z H2可能通过MM P-2及E-c a d h e r i n影响H L-60细胞的迁移能力, E Z H2可能通过调节B c l-2及c a s p a s e-3影响H L-60细胞增殖凋亡,这将为A P L表观遗传学治疗提供新靶点㊂参考文献[1]H IÇSÖNM E Z G,ÇE T I N M,T U N C E R A M,e ta l.C h i l d r e n w i t h a c u t e m y e l ob l a s t ic l e u k e m i ap r e s e n t i n g w i t h e x t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n:t h ee f f e c t s o f h i g h-d o s e s t e r o i d t r e a t m e n t[J].L e u kR e s,2004,28(1):25-34.[2]K O B A Y A S H I R,T A W A A,H A N A D A R,e t a l.E x-t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n a t d i a g n o s i s a n d p r o g n o s i si n c h i l d r e n w i t h a c u t e m y e l o g e n o u s l e u k e m i a[J].P e-d i a t r B l o o d C a n ce r,2007,48(4):393-398.[3]C A O R,WA N G L,WA N G H,e t a l.R o l e o f h i s-t o n e H3l y s i n e27m e t h y l a t i o n i n P o l y c o m b-g r o u p s i l e n c i n g[J].S c i e n c e,2002,298(5595):1039-1043.[4]N A K A G AWA S,O K A B E H,S A K AMO T O Y,e t a l.E n h a n c e r of z e s t e h o m o l o g2(E Z H2) p r o m o t e s p 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基因沉默的原理及应用

基因沉默的原理及应用一、基因沉默的原理基因沉默是指通过RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）技术，特异性地抑制特定基因的表达。

基因沉默在生物学研究中具有重要的应用价值，其原理主要包括以下几个方面：1. siRNA的合成与靶向短干扰RNA（short interfering RNA，简称siRNA）是基因沉默的关键分子。

在细胞内，siRNA会与RNA诱导靶向耗竭（RNA-induced silencing complex，简称RISC）结合，形成RNA-蛋白复合体，然后通过匹配特定序列，将复合体定位到目标mRNA上，最终导致mRNA降解、剪接或抑制翻译。

2. miRNA的生成和功能微小RNA（microRNA，简称miRNA）是一类长度约为21-23个核苷酸的非编码RNA分子。

miRNA产生于细胞内，通过与RNA诱导靶向耗竭结合，实现对mRNA的调控。

miRNA主要通过与mRNA的3’非翻译区域互补配对，诱导mRNA的降解或抑制翻译，从而实现目标基因的沉默。

3. RISC的功能和调控RISC是RNA干扰过程中的一个重要复合体，其主要成员包括siRNA或miRNA，以及相关的蛋白质。

RISC在基因沉默中起到关键的作用，通过与靶向RNA结合，实现对mRNA的调控。

RISC中的蛋白质能够辅助siRNA或miRNA与靶向RNA的杂交，并促进靶向RNA的降解或抑制翻译。

二、基因沉默的应用基因沉默技术已经在许多领域展现出广阔的应用前景，一些典型的应用包括：1. 研究基因功能基因沉默可以通过抑制特定基因的表达，来研究该基因在生物体中的功能。

通过沉默特定基因后，研究人员可以观察到沉默基因对生物体的影响，从而揭示出特定基因在生物体发育、代谢、免疫等方面的作用，为相关研究提供有力的证据。

2. 治疗基因相关疾病基因沉默技术在治疗基因相关疾病方面具有巨大的潜力。

通过针对病因基因进行沉默，可以有效地抑制病因表达，从而达到治疗目的。

REGγ基因沉默对甲状腺癌生长、周期及凋亡的影响的开题报告

REGγ基因沉默对甲状腺癌生长、周期及凋亡的影响的开题报告甲状腺癌是一种较为常见的恶性肿瘤，目前仍缺乏针对其治疗的有效手段。

REGγ是一种重要的蛋白质，它参与了肿瘤细胞的生长、周期以及凋亡等生物学过程。

而目前有研究表明REGγ基因的沉默可能对甲状腺癌生长、周期及凋亡产生影响。

因此，本文旨在探究REGγ基因沉默对甲状腺癌生长、周期及凋亡的影响机制。

本研究将采用细胞实验方法，利用CRISPR-Cas9技术对甲状腺癌细胞中REGγ基因进行沉默处理，并对沉默和对照组的甲状腺癌细胞进行比较研究。

具体的实验内容如下：1. 建立甲状腺癌细胞系在甲状腺癌患者体内提取甲状腺癌组织样本，经过细胞培养和传代后建立起甲状腺癌细胞系。

2. 利用CRISPR-Cas9技术对甲状腺癌细胞中的REGγ基因进行沉默采用CRISPR-Cas9技术靶向甲状腺癌细胞中的REGγ基因，设计相应的sgRNA，并构建sgRNA和Cas9基因表达载体进行转染。

3. 判断REGγ基因沉默效果利用Western blot方法检测沉默和对照组细胞中REGγ蛋白表达水平的差异。

4. 研究REGγ基因沉默对甲状腺癌生长的影响采用CCK-8实验检测沉默和对照组细胞的生长曲线，并通过克隆形成实验和肿瘤形成实验，研究REGγ基因沉默是否影响甲状腺癌的生长能力。

5. 研究REGγ基因沉默对甲状腺癌周期的影响采用流式细胞术检测沉默和对照组细胞的细胞周期分布情况，分析REGγ基因沉默是否影响甲状腺癌细胞周期。

6. 研究REGγ基因沉默对甲状腺癌细胞凋亡的影响采用Annexin V-FITC/PI双染实验检测沉默和对照组细胞的凋亡率，进一步研究REGγ基因沉默是否影响甲状腺癌细胞凋亡。

该研究将探究REGγ基因沉默对甲状腺癌生长、周期及凋亡等生物学过程的影响机制，为进一步应用REGγ基因相关治疗手段提供理论依据。

基因沉默机制的研究

基因沉默机制的研究人类身体内的每个细胞都含有相同的基因组，但不同类型细胞的表达基因差异很大，这是如何实现的呢？其中一个关键机制就是基因沉默。

基因沉默指某些基因在细胞内不能正常表达，这是生命科学领域热门的一个研究方向。

本文将深入探讨基因沉默机制研究的重要性、研究方法、应用前景等方面。

一、基因沉默机制研究的重要性基因沉默机制是指通过胞质RNA转运到核内，以RNA降解或硬化的方式在转录后水平抑制基因表达的机制。

在生物体内，基因沉默机制负责调控基因表达，维持正常生理和病理生理状态。

然而，当这个机制出现异常，就会引发多种疾病，如癌症、心血管疾病、神经系统疾病以及一系列的遗传病等。

因此，对于基因沉默机制的研究十分重要，可以从分子层面揭示这些疾病的发生机制，为治疗和预防这些疾病提供理论依据。

二、基因沉默机制的研究方法1. 转录后沉默RNA干扰技术( RNA interference, RNAi ) 是一种简单又行之有效的基因沉默技术，它能够通过RNA引物的介导，抑制细胞内的特定RNA分子，从而抑制基因表达。

RNAi 可以用于原代细胞、细胞系和动物上的病变细胞中，用于诱导沉默的RNA体文件可以人工合成、体外转录和化学合成，具有种属选择性、病理特异性，同时也是一种可逆性的基因沉默技术。

2. DNA甲基化沉默DNA甲基化是一种常见的基因沉默机制。

在甲基化过程中，DNA甲基转移酶在DNA上转移一个甲基基团，可以使基因表达下降，从而实现基因的沉默。

这种控制技术通常应用于发病机制和普通基因的调控中，从而为疾病治疗和药物研发提供理论依据。

三、基因沉默机制的应用前景1. 高效基因治疗基因沉默技术可以实现特定基因的靶向沉默，从而为基因治疗的安全性与有效性提供理论依据。

如适用于影响多种疾病的基因治疗等领域。

2. 测序技术基因沉默技术是分子生物学领域的一个热门话题，它代表了在研究自发表达和常规表达基因过程中，深入研究基因调控机制的创新思路。

RNA干扰与基因沉默

RNA干扰与基因沉默在分子生物学领域中，RNA干扰（RNA interference，简称RNAi）被广泛应用于研究基因功能、调控基因表达以及对抗病毒感染等方面。

RNAi是一种通过特异性降解靶向mRNA分子的机制，使得目标基因的表达水平下降或沉默。

本文将介绍RNA干扰的原理、应用以及其在基因沉默中的作用机制。

一、RNA干扰的原理RNA干扰是一种由双链RNA介导的基因沉默过程。

在RNA干扰中，首先通过酶类（Dicer）作用将长的外源双链RNA或内源pre-miRNA等RNA前体分子切割成短的小干扰RNA（small interfering RNA，简称siRNA）或小RNAs（microRNAs，简称miRNA）。

然后这些小RNA结合到RNA诱导的靶向复合物（RNA-induced silencing complex，简称RISC）中，以靶向特定的mRNA分子。

通过RISC诱导的选择性降解或抑制靶向mRNA的翻译过程，从而实现对基因表达的调控。

二、RNA干扰的应用RNA干扰技术已被广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和农作物改良等领域。

1. 基因功能研究：通过人为干扰目标基因的RNAi方法，可以研究该基因对于细胞生长、发育和代谢等方面的影响。

通过靶向不同基因的RNA干扰，可以获取大量有关基因功能的信息。

2. 疾病治疗：RNA干扰技术被广泛应用于治疗各种疾病，例如癌症、传染病和遗传病等。

通过特异性地沉默与疾病相关的基因，RNA干扰可以抑制病毒复制、遏制肿瘤生长以及修复遗传缺陷。

3. 农作物改良：RNA干扰技术可以应用于改良农作物的抗病性、抗虫性和耐逆性等特性。

通过使用RNA干扰技术抑制特定基因的表达，可以增强作物对病菌或害虫的抵抗能力。

三、RNA干扰与基因沉默RNA干扰通过特异性降解或抑制靶向mRNA来实现基因沉默。

基因沉默是细胞中一种常见的调控机制，对于维持正常细胞功能至关重要。

RNA干扰作为一种重要的基因沉默机制，发挥着重要的生物学功能。

基因沉默的研究进展

基因沉默的研究进展基因沉默是指在细胞内，一些基因的表达被抑制，这些基因产生的蛋白质无法正常表达。

基因沉默过程可以发生在多种生物中，包括植物和动物，是一种重要的基因调控机制。

在过去的几十年中，基因沉默的研究吸引了大量的研究者，这其中，RNA干扰技术是一种应用广泛的方法。

RNA干扰是一种DNA片段和RNA分子的“静默”机制，通过RNA分子介导的RNA-DNA或RNA-RNA间相互作用，抑制特定基因的表达。

RNA干扰技术可以被用于检测基因功能，筛选基因表达调节因子，开发基因治疗策略等研究中。

RNA干扰技术使得探究基因调节机制变得更加深入和高效。

在基因沉默的研究中，RNA干扰技术发挥了重要作用。

RNA干扰一般分为外源RNA干扰和内源RNA干扰两种类型。

而内源RNA干扰又叫做RNA介导的基因沉默，是生物内部特异性基因抑制的重要机制。

许多生物体通过RNA干扰来进行内源基因沉默，起到清除宿主病毒、抵抗外源侵染等作用。

在RNA干扰技术的应用中，siRNA分子是一种最常用并且最有效的RNA干扰体。

siRNA双链分子包括两个异源链，一条链是外源的，一条链是内源的，分别称为“导引链（guide）”和“打靶链（passenger）”。

打靶链成为siRNA的一个关键特征，siRNA分子无论是在体内还是体外都能非常有效地抑制靶基因的表达。

因此，研究者们开始探索siRNA分子在基因疾病治疗中的应用。

siRNA技术主要分为两种：体内和体外。

在体内siRNA技术中，siRNA分子往往通过直接注射或载体介导的递送进入患者的细胞。

体外siRNA技术则是通过紫外线或酶切等方法制备siRNA，并将其添加到体外细胞培养基中，使得靶基因的表达受到抑制。

这些方法都提供了控制基因表达的可能性，开拓了临床应用前景的空间。

除了RNA干扰技术，基因编辑技术也被广泛用于研究基因沉默。

基因编辑技术是指利用人工合成的核酸分子，将其导入到细胞内平推或在基因组中进行操纵，改变或替换人类基因。

沉默基因的原理及应用研究

沉默基因的原理及应用研究引言沉默基因是指在基因组中存在的一类特殊基因，其表达被抑制或降低，从而影响相关功能的正常发挥。

近年来，沉默基因的研究引起了广泛的关注，其原理和应用也逐渐得到了深入的探索。

本文将介绍沉默基因的原理以及其在生物科学研究和应用领域中的一些重要进展。

原理沉默基因的原理主要涉及RNA干扰（RNA interference）机制，即通过RNA分子的介入干扰基因表达的过程。

其一般过程包括以下几个关键步骤：1.siRNA产生： siRNA（小干扰RNA）是沉默基因的关键分子，在RNA干扰机制中发挥重要作用。

siRNA由一条双链RNA分子在细胞内产生，并被酶切成20-25个核苷酸的小片段。

2.RISC复合体形成： siRNA进入细胞质后，与RISC（RNA导向的RNA内切复合体）相结合，形成RISC复合体。

RISC复合体是发挥RNA干扰作用的关键复合物。

3.靶基因沉默： RISC复合体通过与靶基因mRNA相互作用，引发RNA降解或抑制翻译等过程，从而导致靶基因的表达受到抑制或降低。

应用研究沉默基因的发现为生物科学研究和应用领域带来了许多新的机会和挑战。

以下是一些目前常见的沉默基因应用研究领域和实际应用场景：1. 基因功能研究沉默基因技术为研究基因功能提供了一种有力的工具。

通过沉默基因的靶向抑制或降低，研究人员可以快速验证和分析基因对生物体发育、生长、代谢等过程的影响。

这种方法广泛应用于模式生物和植物等领域，可以帮助科学家们更好地理解基因的功能和相互作用。

2. 遗传病治疗沉默基因技术在遗传病治疗中也有广泛的应用前景。

许多遗传病都是由于某个基因表达异常或突变引起的，通过沉默具有病理性的基因，可以有效地减轻或治愈疾病症状。

例如，研究人员利用沉默基因技术成功治疗了一些遗传性失聪病例，为相关疾病的治疗提供了新的思路和方法。

3. 农作物改良沉默基因技术在农业领域中被广泛应用于农作物的改良和优化。

通过抑制特定基因的表达，可以提高作物的抗病性、耐逆性、产量等性状。

MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响的开题报告

MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响的开题报告
题目：MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响
背景和意义：
乳腺癌是女性中常见的恶性肿瘤之一，目前对乳腺癌的研究主要集中于信号通路变化、基因突变、DNA损伤修复等方面。

科学家以前的研究表明，MTDH (metadherin) 基因在许多人类癌症中表达上调，参与信号的传递、细胞增殖、细胞分化、抑制基因和恶性转化等方面的作用。

MTDH基因通常在乳腺癌中表达高，且与耐药性有关。

因此，本研究计划通过MTDH基因沉默的方法来研究MTDH基因在乳腺癌细胞生物学中的作用，并探讨MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-
7ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响。

研究内容和方法：
1.选择siRNA靶向MTDH基因进行沉默；
2.通过Western blot分析MTDH沉默的效果；
3.采用MTT法检测MTDH基因沉默对MCF-7ADR细胞增殖的影响；
4.利用流式细胞术检测MTDH基因沉默对MCF-7ADR细胞周期的影响；
5.检测MTDH基因沉默是否能够提高MCF-7ADR对化疗药物的敏感性。

预期结果：
1.成功地沉默MTDH基因并评估其效果；
2.证明MTDH基因沉默可以抑制MCF-7ADR细胞的增殖，同时影响
细胞周期；
3.发现MTDH基因沉默可增强MCF-7ADR细胞对化疗药物的敏感性。

结论：
本研究可进一步探讨MTDH基因在乳腺癌中的作用机制，为研究乳
腺癌的发生、发展和治疗提供重要的理论和实践基础。

Annexin A1介导小细胞肺癌细胞跨脑内皮细胞迁移入脑的作用机制研究的开题报告

Annexin A1介导小细胞肺癌细胞跨脑内皮细胞迁移入脑的作用机制研究的开题报告一、研究背景和意义小细胞肺癌是一种高度侵袭性、具有远处转移倾向的恶性肿瘤。

临床上发现，小细胞肺癌的最常见远处转移部位是脑。

这种转移早期没有明显症状，也不易被检测到，但是一旦出现头痛、失语、瘫痪等症状时，常常已经到达晚期，治疗效果较差。

因此，研究小细胞肺癌的脑转移机制，对发现肿瘤早期转移并早期干预具有重要意义。

Annexin A1 是一种可溶性磷脂酰肌醇结合蛋白，参与多种生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、炎症、免疫反应等，同时它也与多种人类肿瘤的发生、转移和预后密切相关。

近期研究表明，Annexin A1 在小细胞肺癌细胞转移中发挥重要作用，但其调控机制受到很少的研究。

本研究拟探究Annexin A1在小细胞肺癌细胞跨越血脑屏障进入脑组织中的作用机制，有助于揭示小细胞肺癌细胞脑转移的分子机制，为小细胞肺癌脑转移的早期诊断和治疗提供新的思路和方法。

二、研究内容1. 确定小细胞肺癌细胞入侵血脑屏障的机制。

实验将采用 in vitro原代胶质细胞培养、Transwell 细胞迁移试验以及体内的实验模型等方法，传统化学法和定量荧光PCR等技术检测样品中伟哥的含量，探究Annexin A1在小细胞肺癌细胞跨越脑内皮细胞进入脑组织中的作用机制。

2. 研究Annexin A1与VEGF-A相互作用的调节机制及其对VEGF-A表达的影响。

实验将采用Western blot、co-immunoprecipitation技术等方法，检测Annexin A1和VEGF-A的相互作用，以及Annexin A1对VEGF-A表达的调控作用。

3. 探究Annexin A1对小细胞肺癌细胞生长和增殖的影响。

实验将采用CCK-8细胞增殖和荧光染色技术等方法，评估Annexin A1对小细胞肺癌细胞生长和增殖的影响。

三、研究预期结果本实验通过建立小细胞肺癌细胞跨过血脑屏障的体内、体外实验模型，探究Annexin A1的作用机制。

转基因沉默

在转基因作物研发过程中，有个现象一直困扰着转基因科学家们，基因虽然转入了植物体，但是外源基因不能稳定表达，甚至完全不表达，这就是转基因沉默现象。

转基因沉默现象的发生，反映了生物体在基因调控水平上的一种自我保护。

这种保护机制可以让生物体避开生活过程中随机进入细胞核内，甚至整合到基因组上的外源基因干扰，保持生命体征的稳定，维持物种在一个相当长时间内的稳定。

然而其背后的分子机理是什么？科学家们发现，转基因沉默有很多机理。

但是各种机理归根结底都离不开DNA-DNA、DNA-RNA 和RNA-RNA相互作用。

例如，DNA以及其启动子的甲基化，在之前提到的1986年的烟草实验中的转基因沉默即是这种原因。

植物细胞中DNA甲基化水平是很高的，核基因组中大约20-30%的胞嘧啶都处于甲基化状态。

植物DNA甲基化引起外源基因失活，可能是一种有效识别并抵制外来DNA的防御机制。

植物染色体上四种碱基A、T、G、C的组成是不均一的，某些区段常有确定的GC含量。

外源DNA的插入破坏了其原有的组织结构，引起了植物的抵抗机制。

随着对转基因沉默机制的研究，科学家还发现了一种称为RNA干扰的基因调控机制。

RNA 干扰可以有效地解释Jorgensen的矮牵牛花实验。

在Jorgensen实验中，外源的查尔酮合成酶基因已经被成功地转入矮牵牛植物体中，并且基因发生了转录，产生了mRNA，然而基因的表达却停止在了这一步，没有继续向下进行，产生的mRNA很快被降解掉，不能维持在一个稳定的数量上。

产生这种现象的原因在于矮牵牛植物体内本身就存在查尔酮合成酶基因，这个基因和转入的外源基因有着序列上的同源性。

为什么转入一个植物体自身也有的外源基因就这么麻烦，不能产生1+1=2的效果，反而成了1-1近似于0？科学家推测，生物体可能有一套自我保护机制，不允许某个基因过度表达，产生太多的某种蛋白质，因此提出了RNA阈值模型。

即细胞只能容纳或者处理一个特定阈值之下的特定基因转录的mRNA。

siRNA干扰沉默 NUF2基因对肝癌 HCCLM3细胞迁移和侵袭的影响

siRNA干扰沉默 NUF2基因对肝癌 HCCLM3细胞迁移和侵袭的影响郭云韬;喻超;陈礼闻;孙诚谊【摘要】Objective:To investigate the disturbing effect of siRNA on the expression of NUF2 gene in human hepatoma HCCLM3 cells and its influence on migration and invasion of these cells. Methods:HCCLM3 cells were transfected with siRAN,and the expression of NUF2 protein in these cells was measured by western blot assay. Wound-healing assay and transwell chamber invasion assay were used to measure the HCCLM3 migration and invasion ability after transfected by siRNA. Results:The expression level of NUF2 protein in cells transfected with siRNA were significantly lower than that in control group cells( P<0 . 05 ). The migration and invasion of HCCLM3 cell transfected with NUF2 siRNA were dramatically lower than that of control group cells( P<0 . 05 ). Conclusion:Down-regu-lation of NUF2 expression can significantly inhibit HCCLM3 cell migration and invasion,thus NUF2 might become a novel therapeutic target for hepatocellular carcinoma.%目的：探讨siRNA干扰对人肝癌HCCLM3细胞细胞分裂相关基因NUF2蛋白表达及细胞迁移与侵袭能力的影响。

Annexin A7在高癌家系鼻咽癌人群中的表达水平

Annexin A7在高癌家系鼻咽癌人群中的表达水平唐浩斌;邓太海;谷婷婷;陈舒华【摘要】目的检测膜联蛋白A7(Annexin A7)在高癌家系鼻咽癌组织中的表达情况,以期探讨高癌家系鼻咽癌患者与Annexin A7之间的关系.方法采集门诊患者鼻咽组织标本(高癌家系鼻咽癌组织标本、散发性鼻咽癌组织标本及鼻咽黏膜慢性炎症患者组织标本各15例),应用RT-PCR及Western blot检测Annexin A7在各组标本的mRNA及蛋白质水平的表达情况.结果在高癌家系鼻咽癌患者、散发性鼻咽癌患者及鼻咽黏膜慢性炎症患者鼻咽组织中,Annexin A7 mRNA的相对表达量依次为0.828±0.046、0.459±0.048、0.312±0.072,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).在高癌家系鼻咽癌患者、散发性鼻咽癌患者及鼻咽黏膜慢性炎症患者鼻咽组织中,Annexin A7蛋白相对表达量依次为0.867±0.068、0.624±0.065、0.392±0.087,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).Annexin A7蛋白在鼻咽癌组织中的表达与TNM分期及淋巴结转移有关,与患者的年龄、性别无关.结论 Annexin A7在高癌家系鼻咽癌患者鼻咽组织中表达明显上调.Annexin A7的表达和肿瘤的分期和淋巴结转移有关.【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2019(040)008【总页数】4页(P1078-1081)【关键词】鼻咽癌;高癌家系;RT-PCR;Western blot;膜联蛋白A7【作者】唐浩斌;邓太海;谷婷婷;陈舒华【作者单位】广东医科大学研究生学院广东湛江524000;赣南医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科江西赣州341000;佛山市第二人民医院耳鼻咽喉头颈外科广东佛山528000;佛山市第二人民医院耳鼻咽喉头颈外科广东佛山528000【正文语种】中文【中图分类】R739.6;R394.3鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是源于鼻咽部的恶性肿瘤，是我国广东地区的高发癌症[1]，男性年龄标准化发病率(ASR)为30/10万，女性ASR为13/10万，远超世界其他地区(ASR<1/10万)[2]，具有明显的地域性，早有学者提出地域性的基础源于家族的遗传性，可追溯至先秦时期的百越先民[3]。

Annexin A1与胰腺癌细胞迁移、转移关系的研究的开题报告

Annexin A1与胰腺癌细胞迁移、转移关系的研究的
开题报告
开题报告:
题目：Annexin A1与胰腺癌细胞迁移、转移关系的研究
研究背景:
胰腺癌是一种恶性肿瘤，具有高度侵袭性和强烈的转移倾向。

许多分子机制被发现能够促进或抑制胰腺癌细胞的迁移和转移。

Annexin A1 是一种磷脂酰肌醇结合蛋白，已被证明在多种肿瘤中具有重要作用。

然而，Annexin A1 在胰腺癌细胞迁移和转移中的具体作用仍不清楚。

研究目的:
本研究旨在探讨 Annexin A1 在胰腺癌细胞迁移、转移过程中的作用机制，并寻找在抑制胰腺癌转移方面的潜在治疗目标。

研究方法:
1.在不同的胰腺癌细胞系中，通过 Annexin A1 基因沉默和过表达技术，研究其对细胞迁移和转移的影响。

2.通过实验验证，探讨 Annexin A1 参与的信号通路。

3.结合体内和体外实验，评估限制 Annexin A1 表达对胰腺癌细胞迁移、转移的影响。

4.通过对临床样本的分析，验证 Annexin A1 在临床上的价值。

预期结果:
本研究有望进一步阐明 Annexin A1 在胰腺癌细胞迁移、转移过程中的具体作用机制，并验证其作为靶向治疗的潜在价值。

研究意义:
该研究有望深入探讨肿瘤转移和侵袭的分子机制，为开发新的治疗手段提供依据；同时，为胰腺癌治疗提供新的思路。

基因沉默研究进展

基因沉默研究进展基因沉默研究进展摘要：基因沉默(gene silencing)是指生物体中特定基因由于种种原因不表达或者表达减少的现象。

基因沉默是基因表达调控的一种重要方式 ,是生物体在基因调控水平上的一种自我保护机制 ,在外源 DNA 侵入、病毒侵染和DNA 转座、重排中有普遍性。

对基因沉默进行深入研究,可帮助人们进一步揭示生物体基因遗传表达调控的本质,在基因工程中克服基因沉默现象,从而使外源基因能更好的按照人们的需要进行有效表达;利用基因沉默在基因治疗中有效抑制有害基因的表达 ,达到治疗疾病的目的 ,所以研究基因沉默具有极其重要的理论和实践意义[1]。

关键词：基因沉默，转录水平基因沉默，转录后水平基因沉默，病毒介导的基因沉默.基因沉默(gene silencing)是指生物体中特定基因由于种种原因不表达。

一方面,基因沉默是遗传修饰生物(genetically modified organisms )实用化和商品化的巨大障碍 ,另一方面 ,基因沉默是植物抗病毒的一个本能反应,为用抗病毒基因植物工程育种提供了具有较大潜在实用价值的策略—RNA介导的病毒抗性(RNA-mediated virus resistance ,RMVR)[2～4]。

基因沉默现象首先在转基因植物中发现，接着在线虫、真菌、水螅、果蝇以及哺乳动物中陆续发现。

基因沉默主要发生在两种情况，一种是转录水平上的基因沉默（transcriptional gene silencing, TGS）,另一种是转录后基因沉默（post- transcriptional gene silencing, PTGS）。

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是近几年发展起来的转录后基因阻断技术，RNAi在2002年被Science评为全球十大科技突破之一,作为一种在细胞水平的基因敲除工具,RNAi 正在功能基因组学领域掀起一场革命[5]。

沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

《中国癌症杂志》2020年第30卷第6期 CHINA ONCOLOGY 2020 Vol.30 No.6435欢迎关注本刊公众号·论　著·通信作者：卢仁泉 E-mail: lurenquan_fudan15@沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响童　颖，余怡雯，谢素红，王砚春，卢仁泉，郭　林复旦大学附属肿瘤医院检验科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032［摘要］背景与目的：肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma ，ccRCC ）是最常见的肾癌类型，它与代谢密切相关。

探讨沉默信息调节因子4（silent information regulator 4，SIRT4）过表达或谷氨酰胺（glutamine ，Gln ）剥夺对ccRCC 细胞增殖、凋亡的影响。

方法：慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y 过表达的Caki-2细胞株，利用无Gln 的培养基来构建Gln 剥夺模型，并通过体外增殖活力实验［细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）］和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响；利用DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species ，ROS ）水平进而评估Gln 代谢对细胞ROS 含量的影响；进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法（Western blot ）检测凋亡相关分子，分析SIRT4过表达以及Gln 剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响。

结果：过表达SIRT4可抑制Gln 代谢从而抑制Caki-2细胞增殖，另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate ，NADPH ）的生成减少能够增加细胞内ROS 含量，促进细胞凋亡。

DNA-PK基因沉默对卵巢癌细胞细胞凋亡的影响

DNA-PK基因沉默对卵巢癌细胞细胞凋亡的影响赵静;陈珂【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2014(018)002【摘要】目的探讨DNA-PK基因对沉默卵巢癌细胞凋亡的影响及机制.方法DNA-PK shRNA以脂质体介导转染卵巢癌细胞株Skov3,24h后接受2Gy X射线照射,继续培养48 h.收集细胞,标记Annexin Ⅴ/PI,流式细胞术分析细胞凋亡情况,同时,RT-PCR检测p53和p21 mRNA的表达量.结果2Gy辐射引起2.40％±1.53％Skov3细胞凋亡,高于对照组(t=2.618,P=0.026),而转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,凋亡细胞为18.74％±4.15％,明显高于单纯2Gy照射组(t=9.052,P＜0.001)及DNA-PK shRNA转染组(2.77％±1.73％)(t=8.869,P＜0.001).RT-PCR检测结果显示,2Gy照射组,Skov3细胞p53 mRNA表达量高于对照组,而DNA-PKshRNA转染的Skov3细胞接受2Gy照射,其p53 mRNA表达量降低,接近正常水平,单独转染DNA-PK shRNA组p53 mRNA表达量无明显变化.转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,其p21 mRNA表达量低于2Gy 照射组接近正常组水平,单独转染DNA-PK shRNA组Skov3细胞p21 mRNA表达水平与正常对照组相当.结论 DNA-PK shRNA可增加辐射后巢癌细胞株的细胞凋亡,其可能机制是通过下调p53和p21 mRNA表达,而启动细胞凋亡.【总页数】3页(P200-202)【作者】赵静;陈珂【作者单位】南京明基医院南京医科大学附属医院妇产科,江苏南京210000;南京明基医院南京医科大学附属医院妇产科,江苏南京210000【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.慢病毒介导HMGN5基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究 [J], 孙娟; 信艳萍; 张国梅; 田晓娜; 刘会敏2.沉默细胞分裂相关基因NUF2的表达对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响 [J], 任梦;赵晓婷;岳文涛3.ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性影响[J], 石巍;王俊耐;张慧芳4.结肠癌转移相关基因1沉默对卵巢癌细胞生长与迁移的影响 [J], 吴金兰;万福生5.结肠癌转移相关基因1沉默对卵巢癌细胞生长与迁移的影响 [J], 吴金兰;万福生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RNA沉默survivin基因及其对启动子甲基化的影响的开题报告

RNA沉默survivin基因及其对启动子甲基化的影响的开题报告研究背景和意义survivin是一种在肿瘤细胞中高度表达的IAP蛋白，具有抗凋亡和促增殖的功能。

因此，survivin已成为肿瘤治疗中的重要靶点。

RNA干扰技术是一种有效的治疗肿瘤的方法之一，因为它能特异性地降低某一基因的表达，包括survivin。

而且，启动子甲基化是被认为是导致基因沉默的一种重要方式。

因此，研究RNA沉默survivin基因及其对启动子甲基化的影响的机制，对于深入理解survivin在肿瘤发生和发展中的作用，以及肿瘤治疗方面的推广应用都具有重要的意义。

研究内容和方法本研究拟采用RNA干扰技术对人肺癌A549细胞中survivin基因进行沉默，通过Western blot和Real-time PCR检测survivin蛋白和mRNA 的表达水平，验证RNA干扰的效果。

同时，采用甲基化特异性PCR （MSP）和甲基化敏感的限制酶切分析（MSRE）检测survivin基因启动子区域的甲基化状态，定量分析survivin启动子区域的甲基化水平的变化。

最后，通过CCK-8试验和Transwell实验检测RNA干扰survivin基因对A549细胞增殖和迁移的影响，以及甲基转移酶抑制剂5-Aza对RNA干扰survivin基因的影响。

研究预期结果预计RNA干扰可有效地降低A549细胞中survivin的表达，同时，survivin基因启动子区域的甲基化水平将发生显著的变化，且甲基转移酶抑制剂5-Aza可影响RNA干扰survivin基因的效果。

最终，本研究可深入探讨survivin基因在肺癌中的作用机制，为寻找治疗和预防肺癌的新靶点提供重要的理论依据。