关于氨基酸的定量分析

• 称取干燥后的试样 称取干燥后的试样0.13 g (精确至 精确至0.000 2 精确至 g) ,加氢氧化钠溶液 mL 移入 加氢氧化钠溶液10 移入100 mL 容 加氢氧化钠溶液 量瓶中,加水稀释至刻度 摇匀。 加水稀释至刻度,摇匀 量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀。 • 吸取该溶液 吸取该溶液25.0 mL于碘量瓶中 加溴液 于碘量瓶中,加溴液 于碘量瓶中 50.00 mL ,加盐酸 mL ,立即加盖 摇匀， 加盐酸10 立即加盖,摇匀 加盐酸 立即加盖 摇匀， 于暗处放置10 于暗处放置 min • 再在冰浴中冷却 min 以上 加碘化钾 再在冰浴中冷却3 以上,加碘化钾 加碘化钾5mL , 立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡 黄色,加入淀粉溶液 加入淀粉溶液2 黄色 加入淀粉溶液 mL ,继续滴定至蓝色 继续滴定至蓝色 消失为终点,同时做空白试验 同时做空白试验。 消失为终点 同时做空白试验。
( v1 − v2 ) c × 0.02403 x= × 100 25 m× 100
V1 ———空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴 空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴 定溶液的体积/ 定溶液的体积 mL ; V2 ———试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液 试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液 的体积/ 的体积 mL ; C ———硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度 mol/ 硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度/ 硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度 L; m ———试样的质量 g ; 试样的质量/ 试样的质量
H
H COO
R
C NH3
HCHO
OH
R
C N
COO CH2
亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定,从而得 亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定 从而得 到样品中总氨基酸的含量。 到样品中总氨基酸的含量。 但是，甲醛法准确度差,终点较难掌握 终点较难掌握。 但是，甲醛法准确度差 终点较难掌握。 我们还学过凯氏定氮法， 我们还学过凯氏定氮法，测定样品中 总氮的含量。虽然准确度高,但操作步骤 总氮的含量。虽然准确度高 但操作步骤 复杂,试剂耗量多 测定周期长。 试剂耗量多,测定周期长 复杂 试剂耗量多 测定周期长。
130 ℃
茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达 2 ×10 - 10～5 ×10 - 10mol/ L ,衍生 衍生 物稳定性较好。 物稳定性较好。衍生剂能同时与一 级和二级氨基酸反应并同步检测 但是，衍生反应条件要求较高,需附 但是，衍生反应条件要求较高 需附 设加温衍生装置,仪器造价高并专一 设加温衍生装置 仪器造价高并专一 性强。分析时间长,分析成本高 工作 性强。分析时间长 分析成本高,工作 分析成本高 效率低。 效率低。
L - 胱氨酸含量的测定
水解液—中和 沉淀过滤 粗品—酸溶 水解液 中和—沉淀过滤 粗品 酸溶 除Fe等杂 中和 沉淀过滤—粗品 酸溶—除 等杂 脱色—中和 沉淀过滤—干燥 精制品。 质—脱色 中和 沉淀过滤 干燥 精制品。 脱色 中和—沉淀过滤 干燥—精制品
COOH COOH 溴能将胱氨酸氧化成 α- 氨基 氨基-β- 磺基 丙酸 磺基- 丙酸, H2N H H2N C H C 过量的溴又将碘化钾中碘 H2C S S CH2 离子氧化成游离碘,用碘量 离子氧化成游离碘 用碘量 法测定碘的量,从而可进行 法测定碘的量 从而可进行 L - 胱氨酸的间接测定。 HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH 胱氨酸的间接测定。
C C C O OH OH
ห้องสมุดไป่ตู้
茚三酮
O C C C O O C C C O O C OH C C OH O O C C C O N H C C O O C H OH R COOH OH H3N
C
H
OH
NH3
CO2
RCHO
H
O C C C O N
亮黄色化合物
紫色化合物
衍生反应
溶液的pH pH5 - pH6 的弱酸性
关于氨基酸的 定量分析
03化学 班 化学3班 化学 杨曦 03081095
氨基酸的分析方法
化学分析法——甲醛滴定法 甲醛滴定法 化学分析法 甲醛滴定法用于氨基氮的 测定, 测定 可以测出样品中总氨基酸 的含量,其原理是在中性或弱碱 的含量 其原理是在中性或弱碱 性水溶液中,氨基酸的 氨基酸的α—氨基与醛类反应生成 性水溶液中 氨基酸的 氨基与醛类反应生成 Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚 碱 氨基酸与甲醛反应生成亚 甲基亚氨基衍生物
• 氢氧化钠溶液:10 g/ L ,盐酸 碘化钾溶 氢氧化钠溶液 盐酸,碘化钾溶 盐酸 液:450 g/ L , • 用时配制 溴液 C(Br2) = 0.1 mol/ L ,称取 用时配制,溴液 溴液: 称取 溴酸钾3 溴酸钾 g , • 溴化钾 g ,加水溶解成 000 mL ,置于棕 溴化钾15 加水溶解成 加水溶解成1 置于棕 色瓶中保存， 色瓶中保存， • 淀粉溶液 g/ L , 淀粉溶液:5 • 新鲜配制 硫代硫酸钠标准滴定溶液 新鲜配制,硫代硫酸钠标准滴定溶液 硫代硫酸钠标准滴定溶液: C(Na2S2O3) = 0.1 mol/ L 。
羊毛水解液中氨基酸含量的测定
• 氨基酸总的含量可以 用甲醛滴定法
—NH2 与甲醛结合,其 与甲醛结合,其 碱性消失。这样就可以 碱性消失。 用碱来滴定—COOH 基, 用碱来滴定 并用间接的方法测定氨 基酸的含量。 基酸的含量。
• 不同种类的氨基酸需 要用不同的方法来测 例如： 定，例如：
用三硝基苯磺酸法测定赖 氨酸…… 氨酸
KBrO3 + 5KBr + 6HCl ——3Br2 + 6KCl + 3H2O S —CH2 —CHNH2 —COOH 5Br2 + ︱ + 6H2O S— CH2— CHNH2 —COOH ——2HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH+ 10HBr Br2 + 2KI—— I2 + 2KBr I2 + 2Na2S2O3—— 2NaI +Na2S4O6
0. 024 03 ———与1. 00 mL 硫代硫酸钠标准滴定溶 与 液[ C(Na2S2O3) = 1. 00 mol/ L 相当的,以g 表示的L 相当的 以 表示的 胱氨酸的质量
分光光度法——茚三酮法 茚三酮法(nin - hydrin) : 分光光度法 茚三酮法 茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区 有吸收的衍生试剂。 有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是 经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮 混合,经加热反应后 经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫 混合 经加热反应后 一级胺与之生成蓝紫 色化合物,二级胺与之生成黄色化合物 二级胺与之生成黄色化合物。 色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两 种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测, 种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测 检测波长分别为570nm 和436nm。 检测波长分别为 。