单链抗体表达研究进展_邓亮
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
scFv 的 表 达 载 体 受 体 多 种 多 样 ， 有 细 菌 、真 菌 、动 物 细 胞 （COS 细 胞 、CHO 细 胞、昆虫细胞）、植物细胞等。
最 常 用 的 表 达 受 体 为 大 肠 杆 菌 （E． coli），大 肠 杆 菌 作 为 表 达 受 体 表 达 具 有 生 长快速、易于操作、转化和转导效率高，可 在短时间内大规模地生产抗体蛋白，便于 纯化、分析和应用。 然而，大肠杆菌不能对 重组抗体进行翻译后的糖基化、磷酸化修 饰，不能完成多聚体的组成和二硫键的形 成 。 在 植 物 中 表 达 的 scFv 通 常 称 为 植 物 抗体（plantibody）。 Brereton 等 通 ［１１］ 过 基 因 枪 轰 击 转 基 因 商 业 小 麦 Westonia， Westonia 能 表 达 大 鼠 胸 腺 表 面 CD４ 和 CD２８ 两 种 scFv，成 熟 的 种 子 保 存 １ 年 后 scFv 仍 保 持 较 高 活 性 ， 转 基 因 种 子 提 取 的 scFv 具 有 内 毒 素 污 染 小 、 易 于 纯 化 和 收 集 。 Putalun 等 针 ［１２］ 对 药 用 植 物 喀 西 中 的药理活性成分澳州茄碱糖苷 （solasodine glycosides） 制 备 了 单 克 隆 抗 体 ，通 过 载 体 转 化 发 根 农 杆 菌 插 入 Ri 质 粒 T-DNA 中 感 染 喀 西 茄 植 株 ， 诱 导 scFv 在毛状根表达。 ３ 基因转染技术
Auf der Maur 等［８］报 道 了 一 种 新 型 胞 内的抗体文库筛选系统， 这些经选择后 的 scFv 能 够 在 还 原 环 境 下 保 持 稳 定 ， 并 且无论在细胞内还原环境还是细胞外的 正常环境下都表现出较高的生化稳定 性、可溶性、抗原识别能力。
Emadi 等 ［９］ 将 噬 菌 体 表 面 呈 现 展 示 技 术 和 原 子 动 力 显 微 镜 （atomic force microscopy） 生 物 筛 选 技 术 结 合 成 一 种 新 的生物淘筛技术， 仅使用最小量的目标 抗原， 就能够筛选特异性结合 α－ synuclein 的 scFv。
Lee 等 ［６］ 利 用 噬 菌 体 表 面 呈 现 技 术 和 抗 体 库 技 术 ，将 SARS-CoV 蛋 白 免 疫 小 鸡 后 ， 提 取 脾 B 淋 巴 细 胞 ５ × １０７ 个 克 隆 ， 数 轮 Panning 淘 筛 、 洗 脱 、 富 集 后 ， 抗 体 数 量 增 加 １０ 倍 ，发 现 独 特 scFv 表 达 噬 菌体和噬菌体表面呈现系统结合可以提 高 scFv 的 产 量 和 亲 和 力 。
scFv 表 达 是 scFv 制 备 的 关 键 步 骤 。 将基因通过表达载体整合入受体宿主基 因 内 ， 依 靠 宿 主 的 转 录 和 翻 译 系 统 ，scFv 片 断 完 整 表 达 于 产 物 中 。 本 文 将 就 scFv 表达技术及其进展做一综述。 １ 表达载体
常 用 的 scFv 表 达 载 体 包 括 ： 质 粒 载 体、噬菌体载体、腺病毒载体等。 １．１ 质 粒 载 体 质 粒 （plasmid）是 以 超 螺 旋状态存在于细菌细胞质中的一种能够 自主复制的遗传成分， 多以共价闭合环 状的 DNA（covalently closed circular DNA） 分 子 形 式 存 在 ［３］。 质 粒 载 体 借 助 于 物 理 或 化学的作用导入细胞内，依据质粒在宿 主细胞内是否具有自我复制能力分为 整 合 型 和 附 加 体 型 两 种 。 Jurado 等 ［４］以 Sigma-５４ 依 赖 的 分 解 性 TOL 质 粒 为 表 达 载 体 ，在 M１３ 噬 菌 体 文 库 中 表 达 的 scFV 含量增高且与受体结合活性增强。 １．２ 噬菌体载体 噬菌体表面呈现展示 技 术 （phage display techniques）， 是 近 年 来建立和发展的利用噬菌体表达外源基 因的一项新技术。 它以改建的噬菌体为 载体， 将编码外源肽或抗体可变区的 DNA 片 段 定 向 插 入 噬 菌 体 外 壳 蛋 白 质 基
基因转染技术主要有磷酸钙共沉淀 技术、电穿孔方法、脂质体法。 ３．１ 磷 酸 钙 共 沉 淀 技 术 将 氯 化 钙 、 RNA （ 或 DNA） 和 磷 酸 缓 冲 液 混 合 ， 沉 淀 形 成 包 含 DNA 且 极 小 的 不 溶 的 磷 酸 钙 颗 粒 。 磷 酸 钙－DNA 复 合 物 黏 附 到 细 胞 膜 并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。 沉 淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成
322
实 用 医 学 杂 志 ２００９ 年 第 ２５ 卷 第 ２ 期
功至关重要。 针对磷酸钙共沉淀法低产 量 、 低 转 染 效 率 的 特 点 ，Olton 等 ［１３］ 报 道 了 单 分 布 CaP-Pdna 粒 子 合 并 优 化 Ca ／ P 比 率 的 方 法 来 提 高 效 率 ，当 Ca ／ P 比 率 介 于 １００ ～ ３００ 时 可 达 最 大 的 转 染 效 率 。 ３．２ 电穿孔法 电穿孔通过将细胞暴露 在短暂的高场强电脉冲中， 细胞悬浮液 置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差 异， 这种电压差异会导致细胞膜暂时穿 孔 ，外 源 性 DNA 可 通 过 穿 孔 处 进 入 细 胞 内 。 ［１４］ 电 脉 冲 和 场 强 的 优 化 对 于 成 功 的 转染非常重要， 因为过高的场强和过长 的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而 裂解细胞。
实 用 医 学 杂 志 ２００９ 年 第 ２５ 卷 第 ２ 期
［２２］ Kaya R A， Aydin Y． Modified transpedicular approach for the surgical treatment of severe thoracolumbar or lumbar burst fractures ［J］． Spine，２００４，４
１．３ 腺病毒载体 腺病毒由于其基因结 构、功能清楚，易于制备、纯化、浓缩，宿 主范围广、感染率高、理化性质稳定、不 整合宿主基因组、 遗传毒性和免疫毒性 低 的 特 点 。 Ad２ 和 Ad５ 是 目 前 应 用 最 广 的 两 种 腺 病 毒 血 清 型 。 Hedley 等 ［１０］将 腺 病 毒 和 ５６６FF-scFv 重 组 ， 并 转 染 ２９３T ／ １７ CHO 细 胞 （中 国 仓 鼠 卵 巢 细 胞 ），发 现 ５６６FF-scFv 准 确 转 染 入 CHO 细 胞 并 且 获 稳定表达。 ２ 表达载体受体
目 前 常 用 的 噬 菌 体 载 体 为 pComb３ 及 Pcantablf， 组 成 噬 菌 体 抗 体 （phage antibody）库 ，库 中 每 一 个 噬 菌 体 在 其 表 面 可 表 达 一 种 特 异 性 抗 体 （Fab 或 scFv）。 由 于噬菌体抗体既可以识别相应抗原并与 其结合，又能够感染宿主菌进行扩增，重 复“吸附－洗脱－扩增”过程，可筛选容量 为 １０８ 以 上 的 噬 菌 体 抗 体 库 。
（收 稿 ：２００８－０７－０８ 编 辑 ：徐 荣 远 ）
单链抗体表达研究进展
邓亮 综述 舒建昌 审校
单 链 抗 体 （single-chain antibody fragment， scFv） 由 抗 体 重 链 可 变 区 和 轻 链 可 变 区 通 过 １５ ～ ２０ 个 氨 基 酸 的 短 肽 （linker）连 接 而 成 。 在 目 标 特 定 的 scFv 上 连接放射性核素、生物毒素、药物，将极 大 增 强 对 靶 细 胞 的 杀 伤 能 力 。 Kanter 等［１］ 研 究 发 现 将 个 体 基 因 型 scFv 和 细 胞 因 子 粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子或免疫 刺激肽组成融合蛋白， 是一种有效治疗 淋 巴 瘤 的 疫 苗 。 Wang 等 ［２］通 过 抗 脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌 烯 醇 （DON）和 抗 单 端 孢 霉 毒 素 （ZEN）scFv 基 因 融 合 ， 表 达 为 抗 DON 和 抗 ZEN scFv， 结 果 显 示 双 功 能 抗 体 成 功 构 建 ，并 可 应 用 于 DON 和 ZEN 检 测 。
Bejjani 等 ［１５］研 究 发 现 短 暂 而 高 强 度 的电流脉冲能获得更高的寡核苷酸序列 和质粒的转化效率， 这种方法能安全有 效地在体外进行目标基因转化， 而离子 渗透法则只对分子量小的核酸片段 （如 SiRNA）有 转 化 作 用 。 ３．３ 脂质体法 脂质体介导的细胞转染 主 要 是 通 过 脂 质 体 DNA 复 合 物 与 细 胞 融 合 而 将 DNA 导 入 细 胞 ，使 用 该 方 法 达 到的转染效率较高， 但只能转染分子量 大 的 抗 体 ，适 用 性 不 广 。 钱 锋 等 研 ［１６］ 究 发 现 脂 质 体 DNA 复 合 物 对 细 胞 有 毒 性 ，随 着 DNA 量 增 加 以 及 DNA－脂 质 体 复 合 物 作用时间延长，细胞毒性逐渐加重，细胞 存活率下降，转染效率降低。 ４ 表达形式
scFv 在 大 肠 杆 菌 中 的 表 达 形 式 主 要 有融合表达、胞内表达、分泌表达三种。 分泌表达是常用的表达方式， 在信号肽 Mel、Om-pA、PelB、PheA 的 引 导 下 ，scFv 被分泌至大肠杆菌外周质或培养液中， 并完成二硫键的形成和肽链折叠， 成为 有 活 性 的 可 溶 性 表 达 产 物 。 Strube 等 通 ［１７］ 过 将 scFv 和 Fc 片 段 融 合 ， 构 建 了 scFvFc 融 合 胞 内 小 体 ， 发 现 可 以 降 低 细 胞 内 表 达 scFv 蛋 白 的 不 稳 定 性 ， 而 维 持 亲 和 力不变。 无论是融合表达、胞内表达、分 泌表达， 还是降低培养温度、 改变诱导物 IPTG 的浓度，表达产物都是以包涵体形式 存在。 包涵体需要经过溶解、变性、复性，最 终才能获取有活性的 scFv 蛋白，包涵体溶 解的方法主要有超声破碎和酶溶 。 ［１８］ ５ 结语
Hamasaki 等 ［７］报 道 了 一 种 新 改 进 的 免 疫 胶 体 分 子 筛 技 术 （immunogelbiopanning）。 新 改 进 immunogelbiopanning 技 术 有 两 个 特 征 ：（１） 在 蛋 白 电 泳 后 进 行 胶 体 切 片 ，使 用 immunoplates coate 将 不 同 片 断 带 的 蛋 白 洗 提 ；（２）通 过 使用噬菌体克隆作为探针， 产物对目标 分子的敏感性的检测经生物学放大可以 极大提高。
作 者 单 位 ：５１０２２０ 广 州 市 红 十 字 会 医 院消化内科
因区， 使外源多肽或蛋白质表达并展示 于噬菌体表面， 进而通过亲和富集筛选 表达有特异肽或蛋白质的噬菌体， 并得 到 大 量 富 集 ， 然 后 进 行 DNA 序 列 测 定 。 它将基因型、表型、分子结合活性与噬菌 体的可扩增性结合在一起， 是一种高效 的 筛 选 系 统 ［５］。
（２）：２０８－２１７． ［２３］ Maciejczak A， Barnas P， Dudziak P， et
al． Posterior keyhole corpectomy with percutaneous pedicle screw stabilization in
321
the surgical management of lumbar burst fractures ［J］． Neurosurgery，２００７， ６０ （４ Supp百度文库 ２）：２３２－２４１； discussion ２４１－２４２．
最 常 用 的 表 达 受 体 为 大 肠 杆 菌 （E． coli），大 肠 杆 菌 作 为 表 达 受 体 表 达 具 有 生 长快速、易于操作、转化和转导效率高，可 在短时间内大规模地生产抗体蛋白，便于 纯化、分析和应用。 然而，大肠杆菌不能对 重组抗体进行翻译后的糖基化、磷酸化修 饰，不能完成多聚体的组成和二硫键的形 成 。 在 植 物 中 表 达 的 scFv 通 常 称 为 植 物 抗体（plantibody）。 Brereton 等 通 ［１１］ 过 基 因 枪 轰 击 转 基 因 商 业 小 麦 Westonia， Westonia 能 表 达 大 鼠 胸 腺 表 面 CD４ 和 CD２８ 两 种 scFv，成 熟 的 种 子 保 存 １ 年 后 scFv 仍 保 持 较 高 活 性 ， 转 基 因 种 子 提 取 的 scFv 具 有 内 毒 素 污 染 小 、 易 于 纯 化 和 收 集 。 Putalun 等 针 ［１２］ 对 药 用 植 物 喀 西 中 的药理活性成分澳州茄碱糖苷 （solasodine glycosides） 制 备 了 单 克 隆 抗 体 ，通 过 载 体 转 化 发 根 农 杆 菌 插 入 Ri 质 粒 T-DNA 中 感 染 喀 西 茄 植 株 ， 诱 导 scFv 在毛状根表达。 ３ 基因转染技术
Auf der Maur 等［８］报 道 了 一 种 新 型 胞 内的抗体文库筛选系统， 这些经选择后 的 scFv 能 够 在 还 原 环 境 下 保 持 稳 定 ， 并 且无论在细胞内还原环境还是细胞外的 正常环境下都表现出较高的生化稳定 性、可溶性、抗原识别能力。
Emadi 等 ［９］ 将 噬 菌 体 表 面 呈 现 展 示 技 术 和 原 子 动 力 显 微 镜 （atomic force microscopy） 生 物 筛 选 技 术 结 合 成 一 种 新 的生物淘筛技术， 仅使用最小量的目标 抗原， 就能够筛选特异性结合 α－ synuclein 的 scFv。
Lee 等 ［６］ 利 用 噬 菌 体 表 面 呈 现 技 术 和 抗 体 库 技 术 ，将 SARS-CoV 蛋 白 免 疫 小 鸡 后 ， 提 取 脾 B 淋 巴 细 胞 ５ × １０７ 个 克 隆 ， 数 轮 Panning 淘 筛 、 洗 脱 、 富 集 后 ， 抗 体 数 量 增 加 １０ 倍 ，发 现 独 特 scFv 表 达 噬 菌体和噬菌体表面呈现系统结合可以提 高 scFv 的 产 量 和 亲 和 力 。
scFv 表 达 是 scFv 制 备 的 关 键 步 骤 。 将基因通过表达载体整合入受体宿主基 因 内 ， 依 靠 宿 主 的 转 录 和 翻 译 系 统 ，scFv 片 断 完 整 表 达 于 产 物 中 。 本 文 将 就 scFv 表达技术及其进展做一综述。 １ 表达载体
常 用 的 scFv 表 达 载 体 包 括 ： 质 粒 载 体、噬菌体载体、腺病毒载体等。 １．１ 质 粒 载 体 质 粒 （plasmid）是 以 超 螺 旋状态存在于细菌细胞质中的一种能够 自主复制的遗传成分， 多以共价闭合环 状的 DNA（covalently closed circular DNA） 分 子 形 式 存 在 ［３］。 质 粒 载 体 借 助 于 物 理 或 化学的作用导入细胞内，依据质粒在宿 主细胞内是否具有自我复制能力分为 整 合 型 和 附 加 体 型 两 种 。 Jurado 等 ［４］以 Sigma-５４ 依 赖 的 分 解 性 TOL 质 粒 为 表 达 载 体 ，在 M１３ 噬 菌 体 文 库 中 表 达 的 scFV 含量增高且与受体结合活性增强。 １．２ 噬菌体载体 噬菌体表面呈现展示 技 术 （phage display techniques）， 是 近 年 来建立和发展的利用噬菌体表达外源基 因的一项新技术。 它以改建的噬菌体为 载体， 将编码外源肽或抗体可变区的 DNA 片 段 定 向 插 入 噬 菌 体 外 壳 蛋 白 质 基
基因转染技术主要有磷酸钙共沉淀 技术、电穿孔方法、脂质体法。 ３．１ 磷 酸 钙 共 沉 淀 技 术 将 氯 化 钙 、 RNA （ 或 DNA） 和 磷 酸 缓 冲 液 混 合 ， 沉 淀 形 成 包 含 DNA 且 极 小 的 不 溶 的 磷 酸 钙 颗 粒 。 磷 酸 钙－DNA 复 合 物 黏 附 到 细 胞 膜 并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。 沉 淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成
322
实 用 医 学 杂 志 ２００９ 年 第 ２５ 卷 第 ２ 期
功至关重要。 针对磷酸钙共沉淀法低产 量 、 低 转 染 效 率 的 特 点 ，Olton 等 ［１３］ 报 道 了 单 分 布 CaP-Pdna 粒 子 合 并 优 化 Ca ／ P 比 率 的 方 法 来 提 高 效 率 ，当 Ca ／ P 比 率 介 于 １００ ～ ３００ 时 可 达 最 大 的 转 染 效 率 。 ３．２ 电穿孔法 电穿孔通过将细胞暴露 在短暂的高场强电脉冲中， 细胞悬浮液 置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差 异， 这种电压差异会导致细胞膜暂时穿 孔 ，外 源 性 DNA 可 通 过 穿 孔 处 进 入 细 胞 内 。 ［１４］ 电 脉 冲 和 场 强 的 优 化 对 于 成 功 的 转染非常重要， 因为过高的场强和过长 的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而 裂解细胞。
实 用 医 学 杂 志 ２００９ 年 第 ２５ 卷 第 ２ 期
［２２］ Kaya R A， Aydin Y． Modified transpedicular approach for the surgical treatment of severe thoracolumbar or lumbar burst fractures ［J］． Spine，２００４，４
１．３ 腺病毒载体 腺病毒由于其基因结 构、功能清楚，易于制备、纯化、浓缩，宿 主范围广、感染率高、理化性质稳定、不 整合宿主基因组、 遗传毒性和免疫毒性 低 的 特 点 。 Ad２ 和 Ad５ 是 目 前 应 用 最 广 的 两 种 腺 病 毒 血 清 型 。 Hedley 等 ［１０］将 腺 病 毒 和 ５６６FF-scFv 重 组 ， 并 转 染 ２９３T ／ １７ CHO 细 胞 （中 国 仓 鼠 卵 巢 细 胞 ），发 现 ５６６FF-scFv 准 确 转 染 入 CHO 细 胞 并 且 获 稳定表达。 ２ 表达载体受体
目 前 常 用 的 噬 菌 体 载 体 为 pComb３ 及 Pcantablf， 组 成 噬 菌 体 抗 体 （phage antibody）库 ，库 中 每 一 个 噬 菌 体 在 其 表 面 可 表 达 一 种 特 异 性 抗 体 （Fab 或 scFv）。 由 于噬菌体抗体既可以识别相应抗原并与 其结合，又能够感染宿主菌进行扩增，重 复“吸附－洗脱－扩增”过程，可筛选容量 为 １０８ 以 上 的 噬 菌 体 抗 体 库 。
（收 稿 ：２００８－０７－０８ 编 辑 ：徐 荣 远 ）
单链抗体表达研究进展
邓亮 综述 舒建昌 审校
单 链 抗 体 （single-chain antibody fragment， scFv） 由 抗 体 重 链 可 变 区 和 轻 链 可 变 区 通 过 １５ ～ ２０ 个 氨 基 酸 的 短 肽 （linker）连 接 而 成 。 在 目 标 特 定 的 scFv 上 连接放射性核素、生物毒素、药物，将极 大 增 强 对 靶 细 胞 的 杀 伤 能 力 。 Kanter 等［１］ 研 究 发 现 将 个 体 基 因 型 scFv 和 细 胞 因 子 粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子或免疫 刺激肽组成融合蛋白， 是一种有效治疗 淋 巴 瘤 的 疫 苗 。 Wang 等 ［２］通 过 抗 脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌 烯 醇 （DON）和 抗 单 端 孢 霉 毒 素 （ZEN）scFv 基 因 融 合 ， 表 达 为 抗 DON 和 抗 ZEN scFv， 结 果 显 示 双 功 能 抗 体 成 功 构 建 ，并 可 应 用 于 DON 和 ZEN 检 测 。
Bejjani 等 ［１５］研 究 发 现 短 暂 而 高 强 度 的电流脉冲能获得更高的寡核苷酸序列 和质粒的转化效率， 这种方法能安全有 效地在体外进行目标基因转化， 而离子 渗透法则只对分子量小的核酸片段 （如 SiRNA）有 转 化 作 用 。 ３．３ 脂质体法 脂质体介导的细胞转染 主 要 是 通 过 脂 质 体 DNA 复 合 物 与 细 胞 融 合 而 将 DNA 导 入 细 胞 ，使 用 该 方 法 达 到的转染效率较高， 但只能转染分子量 大 的 抗 体 ，适 用 性 不 广 。 钱 锋 等 研 ［１６］ 究 发 现 脂 质 体 DNA 复 合 物 对 细 胞 有 毒 性 ，随 着 DNA 量 增 加 以 及 DNA－脂 质 体 复 合 物 作用时间延长，细胞毒性逐渐加重，细胞 存活率下降，转染效率降低。 ４ 表达形式
scFv 在 大 肠 杆 菌 中 的 表 达 形 式 主 要 有融合表达、胞内表达、分泌表达三种。 分泌表达是常用的表达方式， 在信号肽 Mel、Om-pA、PelB、PheA 的 引 导 下 ，scFv 被分泌至大肠杆菌外周质或培养液中， 并完成二硫键的形成和肽链折叠， 成为 有 活 性 的 可 溶 性 表 达 产 物 。 Strube 等 通 ［１７］ 过 将 scFv 和 Fc 片 段 融 合 ， 构 建 了 scFvFc 融 合 胞 内 小 体 ， 发 现 可 以 降 低 细 胞 内 表 达 scFv 蛋 白 的 不 稳 定 性 ， 而 维 持 亲 和 力不变。 无论是融合表达、胞内表达、分 泌表达， 还是降低培养温度、 改变诱导物 IPTG 的浓度，表达产物都是以包涵体形式 存在。 包涵体需要经过溶解、变性、复性，最 终才能获取有活性的 scFv 蛋白，包涵体溶 解的方法主要有超声破碎和酶溶 。 ［１８］ ５ 结语
Hamasaki 等 ［７］报 道 了 一 种 新 改 进 的 免 疫 胶 体 分 子 筛 技 术 （immunogelbiopanning）。 新 改 进 immunogelbiopanning 技 术 有 两 个 特 征 ：（１） 在 蛋 白 电 泳 后 进 行 胶 体 切 片 ，使 用 immunoplates coate 将 不 同 片 断 带 的 蛋 白 洗 提 ；（２）通 过 使用噬菌体克隆作为探针， 产物对目标 分子的敏感性的检测经生物学放大可以 极大提高。
作 者 单 位 ：５１０２２０ 广 州 市 红 十 字 会 医 院消化内科
因区， 使外源多肽或蛋白质表达并展示 于噬菌体表面， 进而通过亲和富集筛选 表达有特异肽或蛋白质的噬菌体， 并得 到 大 量 富 集 ， 然 后 进 行 DNA 序 列 测 定 。 它将基因型、表型、分子结合活性与噬菌 体的可扩增性结合在一起， 是一种高效 的 筛 选 系 统 ［５］。
（２）：２０８－２１７． ［２３］ Maciejczak A， Barnas P， Dudziak P， et
al． Posterior keyhole corpectomy with percutaneous pedicle screw stabilization in
321
the surgical management of lumbar burst fractures ［J］． Neurosurgery，２００７， ６０ （４ Supp百度文库 ２）：２３２－２４１； discussion ２４１－２４２．