组织培养实验指导书
《植物 组织培 养实验 指导》.
有不同的要求，常用的消毒剂有漂 溶液(800~1500 倍)，
粉（1%~10%的溶液） ，次氯酸 （HgCl 0.1~1%）酒精 70% ，
钠液（0.5~10%） 水(3~10%)等。 (1) 尖、 及
等的消毒，因
将上述溶液
酸度计或精密 PH 试纸 和 1N HCL 调 (7) (8) 定容到 1L 分装： （一般 (9) 。
定培养基的 PH 一般要求 5.8~6.0，过酸过碱
用 1N NaoH
热装培养基，1000ml 培养基分装 50 个三角瓶，即 试管、三角瓶容量 1/4~1/3 ）注：培养基 明培养基 试管
洗涤。带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去，再用汽油擦洗干净，然后用热 肥皂水煮沸半小时，刷洗后，自来水冲干净。若带有石蜡，可在玻璃器皿下垫几层 废纸，放入 60－70℃温箱中 1 加热－2 小时，待石蜡融化后，再用废纸反复擦 2－3 次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净若有 胶布粘着物，先用 70%酒精棉球擦数遍，溶解粘胶物，并用少许去污粉刷抺，再用洗 衣粉煮沸半小时，刷洗干净，自来水冲洗，晾干，再泡入洗液。 (2) 金属器皿
7
30g/L，6BA 0.5mg/L, NAA 0.2mg/L
溶解为止。
脂的 300ml 蒸馏水中。
(5)
各种母液的吸取 母液（A+ B）100ml 盐（C ）:5ml、微量 （D）10 ml，微量
① 用 100ml 量筒量取大量 ② 分
用 10ml 移液管或吸管吸取 （E ）1 ml 母液
③ 用 10ml 移液管或吸管吸取有机物（F）10ml ④ 用 5ml 移液管吸取生长 (6) 混 及调 PH 混合于 脂与 溶液中，混合 后，加热 80℃ ，用 6BA （0.5mg/L） ：2.5ml；NAA（0.2mg/L）1.0ml。
月季的植物组织培养
月季的植物组织培养一．实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、巩固无菌操作技术二．实验器皿及试剂1.仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1（诱导）培养基、MS+6BA2+NAA2（继代）培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。
三．实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养1.皿中。
2.取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，加入3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。
3.将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1 个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口（每皿3—5个）。
4.标记好后，放入培养室中培养（2周左右）。
5.配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。
6.挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
7.标记好后，放入培养室培养。
继续观察愈伤组织的生长情况。
四．实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。
接种过程中有三个平皿出现污染现象。
五．问题分析及解决1.三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养皿、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器皿的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾50g，加1L蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器皿的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器皿先将器皿中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3～4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤(一) 组培工厂的参观1．参观组培实验中心2．组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3．各室内仪器设备的种类及摆放(二) 设计一200m2组培工厂，要求绘出大概的布局图。
植物组织培养实验(2)
（二）实验原理
在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶 等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤 组织。
（三）实验材料和用具
实验材料：黄瓜无菌苗 实验药品： MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、
1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯 用酒精、70％酒精、无菌水 。 灭菌培养基：MS1 （MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）
实验用具：
天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三 角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。
无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、 解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 滴管、记号实验步骤
1. 配制以下培养基各100ml ： MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAA MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAA MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA ① 取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和
4. 接种 ① 进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒
精灯。 ② 解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。 ③ 再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润
湿。 ④ 在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊
子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。 ⑤ 剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后
剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。 每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。 ⑥ 光照培养箱25℃暗培养。
作业
1. 1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿 内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染 菌原因。
菊花的组织培养实验设计
菊花的组织培养实验设计引言概述：菊花的组织培养实验是一项重要的研究工作，通过培养菊花组织，可以获得大量的优质菊花种苗，为菊花的繁殖和栽培提供了新的途径。
本文将详细介绍菊花的组织培养实验设计，包括材料准备、培养基配方、培养条件、培养步骤和结果分析等五个部分。
一、材料准备1.1 菊花材料的选择：选择菊花的优质品种作为实验材料，确保实验结果的准确性和可靠性。
1.2 菊花茎段的获取：从健康的菊花植株中选择茎段作为培养的材料，茎段的选择应具备一定的生长活力。
1.3 杀菌用具的准备：准备好消毒酒精、无菌培养器皿、无菌手套等杀菌用具，确保实验环境的无菌。
二、培养基配方2.1 基本培养基的配制：根据菊花的生长特性，配制适合菊花组织培养的基本培养基，包括植物激素和营养物质的添加。
2.2 辅助培养基的添加：根据实验需求，可以添加一些辅助培养基，如生长调节剂、抗生素等，以促进菊花组织的生长和发育。
2.3 pH值和温度的调节：调节培养基的pH值和温度，使其适合菊花组织的生长和发育。
三、培养条件3.1 光照条件的控制：菊花组织培养需要适当的光照条件，可以选择自然光或人工光源，保持适当的光照强度和光照时间。
3.2 温度和湿度的控制：菊花组织培养需要适宜的温度和湿度条件，一般在25-28摄氏度的温度下，相对湿度保持在60-70%。
3.3 氧气和二氧化碳的供应：菊花组织培养需要充足的氧气和适量的二氧化碳供应，可以通过通风和培养器的设计来实现。
四、培养步骤4.1 材料表面消毒：将菊花茎段放入消毒酒精中浸泡，然后用无菌水洗净，使其表面彻底消毒。
4.2 茎段切割和培养：将消毒后的茎段切割成适当的大小，放入培养基中进行培养，培养基中应包含适量的植物激素和营养物质。
4.3 培养条件的控制：将培养器放置在适当的光照条件下，保持适宜的温度和湿度，同时定期通风和补充培养基。
五、结果分析5.1 菊花组织的生长情况：观察菊花组织在培养过程中的生长情况，包括生长速度、形态特征等。
组织培养实验教案
一、实验目的和要求：植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每一个学生必须学好这套基本功。
在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、仪器设备：天平、烧杯、容量瓶、量筒、移液管、培养瓶、烘箱三、试剂：过氧化氢、高锰酸钾、漂白粉、次氯酸钠、酒精四、实验步骤：1. 讲解实验室的构建情况。
2. 讲解内部仪器设备的名称及作用。
3. 组培实验室常用器械的洗涤和灭菌。
(一)玻璃器皿的洗涤1. 新购置的玻璃器皿的洗涤(学习、操作)因有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸浸泡一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。
2. 已用过玻璃器皿先将残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或者洗衣粉洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。
3. 对一些不宜刷洗的玻璃器皿如：吸管，滴管及较脏的器皿等先用去污粉和去油剂刷洗，自来水冲干净后，晾干，再浸入硫酸－重铬酸钾洗液中浸泡若干小时，用夹子取出在自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1－3 遍，稍晾不滴水后置于干燥箱内烘干备用。
4. 对带有凡士林，石蜡，或者胶布的器皿选用特殊方法处理后，再用常规方法洗涤。
带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去，再用汽油擦洗干净，然后用热肥皂水煮沸半小时，刷洗后，自来水冲干净。
若带有石蜡，可在玻璃器皿下垫几层废纸，放入60－70℃温箱中加热1－2 小时，待石蜡融化后，再用废纸反复擦2－3 次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净若有胶布粘着物，先用70%酒精棉球擦数遍，溶解粘胶物，并用少许去污粉刷抺，再用洗衣粉煮沸半小时，刷洗干净，自来水冲洗，晾干，再泡入洗液。
植物细胞组织培养-实验操作
植物细胞组织培养一．实验目的植物细胞和组织培养的技术性强，要求无菌操作，通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术，加深对无菌操作的了解。
二．实验原理植物的全能性：植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物的全能性。
植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。
植物组织培养按其原始意义，就是指愈伤组织培养。
但发展至今，其范围日益扩大，已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。
因此，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。
本实验选择豌豆为材料，豌豆（Pisum sativum）属豆科植物，是粮食、饲料和重要的蔬菜作物，也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物，豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体，皆可形成愈伤组织，其中茎尖、幼胚、幼叶等器官可成功的再生成植株。
茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织（生长点）和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。
在实践应用上，常采用生长点的培养使患病植物去病毒，以达到挽救优良品种，提高产量和质量之目的。
三．实验材料仪器设备：1．酒精灯、三角烧瓶，培养皿；2．镊子、剪刀、剖针；3．双筒解剖显微镜；4．光照培养箱或温室；材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。
试剂（1）MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等；（2）饱和漂白粉液（次氯酸钠）；（3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；（4）无菌水四．实验步骤豌豆苗的茎尖培养⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株，简取1厘米左右的茎尖，浸入70%的酒精中1分钟，再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟，（此步以后要求无菌）用无菌水中冲洗5次，在灭菌的滤纸上吸干水分，放入灭菌的培养皿中。
⑵在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥，用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。
⑶将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-苄基腺嘌呤（6-BA）的培养基上诱导愈伤组织形成，用封口膜将培养皿封好。
组织培养实验指导书
实验一组培器皿及器械的洗涤、灭菌及环境的消毒一、实验目的通过实验，使学生了解并掌握组织培养用实验器皿及器械的洗涤、灭菌，环境的消毒方法。
二、实验原理实验仪器及器械的清洗、消毒和灭菌是组织培养成功的关键所在，是外植体免受污染的前提。
由于灭菌剂的种类不同，所以选择消毒剂既要考虑良好的消毒、杀菌作用，同时易被蒸馏水冲洗掉。
无菌的环境是植物组织培养成功的前提，因为绝大多数操作程序要求在无菌条件下进行。
三、实验操作步骤（一）器皿与用具的洗涤1、玻璃器皿的洗涤新购置的玻璃器皿或多或少都含有游离的碱性物质。
使用前要先用1%稀HCL 浸泡一夜，再用肥皂水洗净，清水冲洗后，再用蒸馏水冲洗1次，晾干后备用。
用过的玻璃器皿，用清水冲洗，蒸馏水冲洗一次，干后备用即可。
对于已被污染的玻璃器皿则必须在高压蒸汽灭菌后，倒去残渣，用毛刷刷去瓶壁上的培养液和病斑后，再用清水冲洗干净，蒸馏水冲淋一遍，晾干备用，切忌不可用水直接冲洗，否则会造成培养环境的污染。
清洗后的玻璃器皿，瓶壁应透明发亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。
2、金属用具的洗涤新购置的金属用具表面上有一层油腻，需擦净油腻后再用热肥皂水洗净，清水冲洗后，擦干备用。
用过的金属用具，用清水洗净，擦干备用即可。
3、每人清洗部分玻璃器皿清水洗净→浸入洗衣粉溶液中洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。
对于较脏玻璃器皿的洗涤：采用先碱后酸的方法，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→浸入酪酸洗液（一种强氧化剂，去污能力强，配制方法：重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml粗制浓硫酸），浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。
对于带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
（二）玻璃器皿、用具及环境的灭菌1、玻璃器皿和用具的灭菌（1）采用干热灭菌法：将洗干净晾干后的培养皿、三角瓶、吸管等玻璃用具和解剖针、解剖刀、镊子等金属器具，用纸包好，放进电热烘干箱，当温度升至100℃时，启动箱内鼓风机，使电热箱内的温度均匀。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养》实验指导书实验性质：设计性武汉工业学院生物科学与制药工程系《生物工程实验》课程组编写二零零五年六月植物组织培养实验性质：设计性实验学时：8分组人数：2人1.1实验目的和要求（1）了解植物细胞和组织培养技术的定义和基本要求（2）熟悉无菌操作的要求，初步掌握无菌操作技术（3）初步掌握常规的植物组织培养技术1.2实验原理细胞分化(cell diferentiation)指细胞后代在形态、结构和功能等发生变化的过程，归根结底是某些功能基因的开启或者关闭。
一般说来，终端分化细胞已经失去分化潜能，只具有单能性；而大部分细胞只保留了部分分化潜能，称为多能性。
对于动物而言，只有部分干细胞仍保留了分化的全能性。
而植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物细胞的全能性(totipotency)。
植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。
植物组织培养最原始的意义是指愈伤组织培养，但发展至今，其范围已经扩展至植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养：植株培养。
指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）作为外植体的无菌培养。
胚胎培养。
指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
器官培养。
指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。
组织培养。
指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。
这是狭．义的组织培养．．．．．．。
细胞培养。
指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
《植物组织培养》实践教学指导书教程
《植物组织培养》实践教学指导书目录实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器设备的构造及使用实验二无菌操作技术（选做）实验三接种训练实验四组培苗的移栽驯化实验五试管苗的转接与扩繁（选做）实验六生根培养（选做）实验七胡萝卜离体根的培养（选做）实验八茎尖的组织培养（选做）实验九茎段的组织培养实验十百合鳞茎的组织培养（选做）实验十一叶片的组织培养（选做）实验十二花药培养实验十三西葫芦子房的培养（选做）实验十四苹果胚（embryo）培养（选做）实验十五黄瓜下胚轴愈伤组织的诱导（选做）实验十微茎尖的剥离训练专业实训部分实训一培养基的制作实训二器官培养技能实训三果树、蔬菜、经济类植物组织培养一、果树类组织培养（一）苹果的组织培养（二）草莓微茎尖培养（三）枣的组织培养（四）树莓的组织培养二、蔬菜类组织培养（一）芦笋的组织培养（二）无籽西瓜的组织培养（三）大蒜的组织培养（四）马铃薯组织培养三、经济类组织培养（一）香石竹的组织培养（二）菊花茎段的组织培养（三）菊花微茎尖的组织培养（四）唐菖莆的组织培养（五）串红的组织培养（六）蝴蝶兰的组织培养附1：观看组织培养实验室和组培工厂化生产的录像或课件附2：组培技能考核标准实验实训部分实验一植物组织培养实验室及常用仪器的构造及使用一、目的要求（一）一般掌握组织培养常用仪器设备的结构与维护；（二）熟练掌握常用仪器设备的正确使用方法。
二、常用仪器设备分析天平；灭菌器；蒸馏水器等。
三、方法步骤（－）岛津进口电子分析天平的构造及使用1．构造：岛津进口电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。
2．使用：（1）调平天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内；（2）自检在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4→0，CAL，END，CAL，OFF；（3）全显示按“ON／OFF”键，液晶屏进入全显示态；（4）这时再按“ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验教案实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验四动物细胞培养的培养基配制灭菌与仪器操作培训实验五鸡胚原代细胞的培养实验六动物细胞的传代培养实验七动物细胞的冻存与复苏实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
植物组织培养实验
植物组织培养实验植物组织培养是指将植物的一些组织细胞分离出来，在特殊的培养基中进行培养和生长，目的是繁殖和获取大量的纯种植物。
本次实验通过试验实现相应的目标。
实验材料及器械：1. 培养基：MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamborg培养基）、N6培养基（Chu培养基）、KN培养基（Knudson培养基）等；2. 植物组织：初代愈伤组织，生长点、芽，小叶片；3. 水平台，无菌工作台，培养箱，显微镜，中性纸，平板培养瓶，筛网，剪刀，酒精灯，卷尺，移液枪，枪头等。
实验步骤：1. 资料准备：对不同材料的特点、培养基的制备方法及组成、实验的目的等进行归纳、总结和分析。
2. 组织处理：先将绿色植物的各种组织根据类型进行分离，选取具有分化能力的愈伤组织或生长点进行培养。
去除杂质后，取少量组织接种到平板培养瓶中，有的需要进行酶解，提高细胞分裂能力。
3. 培养基准备：按照MS、B5、N6、KN等培养基制备方法，称取培养基粉末，加入适量的蔗糖、植物激素等，将pH调整到5.8-6.2。
接种前对制备的培养基冷藏保存。
4. 组织接种：取出平板培养瓶，用无菌水加热消毒后，将组织以均匀的分布覆盖于培养基表面。
将试管装入培养箱中，控制温度、湿度、光照等条件进行培养。
5. 观察记录：每隔一段时间拿出培养样本，进行显微镜观察。
观察组织细胞的形态、颜色、大小、分化程度、生长情况等。
根据实验进程记录主要观察的实验数据。
实验结果及分析：1. 愈伤组织培养：初始培养时，愈伤组织的生长状况不同，在不同的培养条件下，细胞分化能力、再生器官的形成也有所不同。
初步培养的愈伤组织有不同的再生能力和生长状态：生长状况下降、枯死、增殖等。
愈伤组织需要在适宜温度、适宜光照的情况下进行培养，严格执行无菌操作，才能获得大量高质量的细胞。
在不同的培养环境下，诱导他们进行特定细胞分化，从而提高愈伤组织再生的成功率。
2. 生长点培养：生长点培养时，需要先将其消毒，以免污染飞溅到培养基上。
植物组织培养技术实验指导
植物组织培养技术实验指导植物组织培养技术实验指导马铃薯⽣产与加⼯教研室编写⽣化系2013.09⽬录实验实训⼀组培实验室的识别与设计 (3)实验实训⼆组培常⽤设备仪器的使⽤ (4)实验实训三玻璃器⽫及⽤具的洗涤 (6)实验实训四MS培养基母液的配制 (10)实验实训五MS固体培养基的配制与灭菌 (14)实验实训六试管苗的茎段转接（继代培养） (16)实验实训七试管苗叶⽚接种 (18)实验实训⼋茎尖、茎段外植体接种培养 (20)实验实训九外植体叶⽚接种培养 (22)实验实训⼗⽣根培养 (24)实验实训⼗⼀驯化 (25)实验实训⼗⼆微茎尖脱毒培养 (27)实验实训⼗三花器官的培养 (28)实训⼗四胚和种⼦培养 (30)实验实训⼀组培实验室的识别与设计⼀、实训⽬标能够正确识别组培实验室及育苗⼯⼚的基本组成并能叙述其主要功能。
⼆、实训内容通过参观或观看组培实验室和育苗⼯⼚的录像，掌握实验室的基本结构和各区的主要功能。
三、实验器材和试剂准备设计平⾯图所需的铅笔、红蓝记号笔、尺、纸、橡⽪等⽂具⽤品或直接⽤CAD软件进⾏组培实验室和育苗⼯⼚的设计和绘图。
四、实验内容和步骤在教师带领下对组培实验室的各个分区进⾏参观，并讲解其功能或观看录像，然后⾃⼰动⼿设计实验室。
实验实训⼆组培常⽤设备仪器的使⽤⼀、实训⽬标认识植物组织培养必需的仪器、器⽫，掌握⼏种主要设备的使⽤⽅法。
⼆、实训内容植物组织培养必需仪器的使⽤三、实验器材与试剂（⼀）常⽤仪器1.蒸馏⽔器2.⼿提式⾼压消毒锅、⽴式⾼压消毒锅3.天平，包括药物天平、粗天平（1/10）、分析天平（精密度1/10000）4.超净⼯作台5.电热⼲燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱7.电冰箱8.显微镜和解剖镜，包括⼿提式解剖镜、⽴体解剖镜和普通显微镜9.离⼼机（学习、使⽤、操作）（⼆）必要的器⽫、器械1.玻璃器⽫，具体包括试管、三⾓烧瓶（锥形瓶）、培养瓶（罐头瓶）、培养⽫、凹⾯载玻⽚2.盛装器⽫，具体包括试剂瓶、烧杯、计量器⽫、量筒、容量瓶、吸管、移液管3.其他器⽫，具体包括滴瓶、称量瓶、漏⽃、玻璃管、注射器等实验室常⽤器⽫。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L 的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
然后紫外线消毒。
2.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
3.用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
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实验一组培器皿及器械的洗涤、灭菌及环境的消毒一、实验目的通过实验，使学生了解并掌握组织培养用实验器皿及器械的洗涤、灭菌，环境的消毒方法。
二、实验原理实验仪器及器械的清洗、消毒和灭菌是组织培养成功的关键所在，是外植体免受污染的前提。
由于灭菌剂的种类不同，所以选择消毒剂既要考虑良好的消毒、杀菌作用，同时易被蒸馏水冲洗掉。
无菌的环境是植物组织培养成功的前提，因为绝大多数操作程序要求在无菌条件下进行。
三、实验操作步骤（一）器皿与用具的洗涤1、玻璃器皿的洗涤新购置的玻璃器皿或多或少都含有游离的碱性物质。
使用前要先用1%稀HCL 浸泡一夜，再用肥皂水洗净，清水冲洗后，再用蒸馏水冲洗1次，晾干后备用。
用过的玻璃器皿，用清水冲洗，蒸馏水冲洗一次，干后备用即可。
对于已被污染的玻璃器皿则必须在高压蒸汽灭菌后，倒去残渣，用毛刷刷去瓶壁上的培养液和病斑后，再用清水冲洗干净，蒸馏水冲淋一遍，晾干备用，切忌不可用水直接冲洗，否则会造成培养环境的污染。
清洗后的玻璃器皿，瓶壁应透明发亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。
2、金属用具的洗涤新购置的金属用具表面上有一层油腻，需擦净油腻后再用热肥皂水洗净，清水冲洗后，擦干备用。
用过的金属用具，用清水洗净，擦干备用即可。
3、每人清洗部分玻璃器皿清水洗净→浸入洗衣粉溶液中洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。
对于较脏玻璃器皿的洗涤：采用先碱后酸的方法，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→浸入酪酸洗液（一种强氧化剂，去污能力强，配制方法：重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml粗制浓硫酸），浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。
对于带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
（二）玻璃器皿、用具及环境的灭菌1、玻璃器皿和用具的灭菌（1）采用干热灭菌法：将洗干净晾干后的培养皿、三角瓶、吸管等玻璃用具和解剖针、解剖刀、镊子等金属器具，用纸包好，放进电热烘干箱，当温度升至100℃时，启动箱内鼓风机，使电热箱内的温度均匀。
当温度升至150℃时，定时控制40min（或120℃定时120min）,达到灭菌目的。
（2）采用高压蒸汽灭菌法：即用手提式高压灭菌锅，在1.2个大气压下保持15～20分钟。
有些如聚丙烯、聚甲基戊烯等类型的塑料用具也可以进行高温消毒。
（3）灼烧灭菌：用于无菌操作的镊子、解剖刀等用具除高压蒸汽灭菌外，在接种过程中还常常采用灼烧灭菌，将镊子、解剖刀等从浸入95%酒精中取出，置于酒精灯火焰上灼烧，借助酒精瞬间燃烧产生高热来达到杀菌等目的。
操作过程中要反复浸泡、灼烧、放凉、使用，操作完毕后，用具应擦拭干净后再放置。
2、环境的消毒（1）地面、墙壁和工作台的灭菌每次使用前，将配好的20%新洁尔灭（苯扎溴铵）溶液倒入喷雾器中，对接种室地面、墙壁、角落均匀地喷雾。
在喷房顶时间，注意不要让药液滴入眼睛。
然后开启紫外灯开关，照射15～30min，一般紫外线消毒后不要立即进入，应在关闭紫外灯15-20min后进入室内。
（2）无菌室和培养室的灭菌消毒灭菌的方法：首先将房子关闭，定期用甲醛和高锰酸钾2：1的比例定期熏蒸灭菌24h或用70%的酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒。
操作时要戴好口罩和手套，用甲醛与高锰酸钾配比时要注意避开烟雾，封闭消毒期间不宜进入消毒空间。
三、实验报告1．将本次实验内容整理成实验报告。
2.试阐述为什么要对器皿和用具进行严格的洗涤和灭菌？1实验二培养基母液的配制与保存（MS培养基）一、实验目的通过学习MS培养基母液的配制与保存，掌握培养基母液浓度的换算、配制与母液的保存方法。
二、实验原理培养基制备之前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当制备培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
三、实验仪器、用具及试剂（一）实验仪器、器皿及用具电子天平（感量为0.0001g、0.01g）,烧杯（1000ml，100ml，50ml）、量筒（1000ml，100ml，50ml）、容量瓶（1000ml，500ml，200 ml，100ml，50ml）、棕色或白色广口瓶（1000ml，500ml，200 ml，100ml）、药匙、玻璃棒、称量纸、标签、冰箱。
（二）试剂MS培养基所需各种试剂、IAA、IBA、NAA、6-BA、2,4-D、GA3、KT、蒸馏水、重蒸馏水。
四、实验步骤与方法母液的配制是按所使用药品的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素、钙盐、镁盐和铁盐等。
配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如Ca2+和SO42-,Ca2+,Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。
配制母液时要用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都要准确，各种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。
现以MS培养基(Murashige和Skoog,1962)为例叙述如下：(一)、大量元素母液（浓缩10倍）的配制MS培养基配方中大量元素共有5种（表1-1），按照培养基配方的用量，各种化合物扩大10倍，用电子天平分别称好，分别用50ml烧杯称量，加30-40ml 蒸馏水溶解。
5种化合物分别充分溶解后，按顺序混合定容在1000ml量筒中，注意在混合定容时，一定要最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾形成磷酸2三钙，磷酸钙之类是不溶于水的沉淀（也可将钙盐与镁盐单独配成母液存放），将配好的定容溶液倒入1000ml广口瓶中，贴好标签保存于冰箱的冷藏室中。
配置培养基时，每配1L培养基取此母液100ml。
表1-1 Murashige和Skoog大量元素的称量及定容化合物名称培养基配方用量(mg/L) 扩大10倍称量(mg) 用于定容KNO31900 19000NH4NO31650 16500MgSO4·7H2O(无水MgSO4) 370（190）3700（1900）KH2PO4170 1700CaCl2·2H2O(无水CaCl2) 440（330）4400（3300）（二）、微量元素母液（浓缩100倍）的配制MS培养基配方中微量元素共有7种（表1-2），按表中称取用量，用感量为0.0001g电子天平，分别称取后，均放入1000ml的一个烧杯中，加蒸馏水溶解，然后定容到1L容量瓶。
贴好标签，放入冰箱保存。
配置培养基时，每配制1L培养基取此母液10ml。
表1-2 微量元素母液各化合物用量化合物名称培养基配方用量(mg/L) 扩大100倍称量(mg)用于定容MnSO4·4H2O (MnSO4·H2O) 22.3(16.9) 2230(1690)ZnSO4·7H2O 8.6 860CuSO4·5H2O 0.025 2.5H3BO3 6.2 620Na2MoO4·2H2O 0.25 25KI 0.83 83CoCl2·6H2O 0.025 2.5(三)、铁盐母液（浓缩200倍）的配制目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。
这种螯合物使用起来方便，比较稳定，又不易发生沉淀。
配制方法是：用感量为0.01g的电子天平称取硫酸亚铁2.78g和乙二胺四乙酸二钠3.73g分别溶解在200ml蒸馏水中，两种溶液混合定容至500ml，用棕色广口瓶盛装，贴标签，放入冰箱保存。
注意：两种盐用热水分别溶解,然后混合，放置于室温下10小时以上看是否有沉淀产生，然后才能使用。
配置培养基时，每配制1L培养基取此母液5ml。
3(四)、有机物母液（浓缩100倍）的配制在MS培养基中，有机物配方成份有维生素和氨基酸（表1-3）。
按表1-3中的用量用电子天平进行称量，分别溶解，混合定容至100 ml。
贴标签，放入冰箱保存。
配置培养基时，每配制1L培养基取此母液10ml。
表1-3 有机物母液的称量化合物名称培养基配方用量(mg/L) 扩大100倍称量(mg)VB1(硫胺素) 0.4 4.0 VB5（盐酸吡哆醇）0.5 5.0(NaOH溶解) VB6（烟酸）0.5 5.0(NaOH溶解) 肌醇100 1000甘氨酸 2 20（五）、生长调节物质（激素）母液的配制（浓度1mg/ml）激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种类和目的而定。
为了操作方便，节约时间，激素也可如同配制上述母液一样，先配成浓缩母液（1mg/ml），这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
生长调节物质一般不溶于水，可先用少量不同的溶剂来溶解。
例如，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（Ze）可先用少量95%酒精助溶，然后再加蒸馏水定容至刻度。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（6-BA）可先溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解（见附表2）。
用电子天平分别称量各种生长调节物质50mg，并先用相应的少量有机溶剂进行助溶，再加蒸馏水定容至50ml，可得到浓度为1mg/ml的生长调节物质母液,即配制的母液每毫升含有生长调节物质1.0mg。
贴好标签，写明配制的激素浓度，存于冰箱保存（0~4℃）。
配制培养基时，如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取0.5ml母液即可。
注意：各种母液配制好后应存放在4℃冰箱中，使用中防止污染和沉淀（贮存温度过低时会产生针状结晶），发现有沉淀或霉团时，则不能继续使用。
五、实验报告1、将本次实验内容整理成实验报告。
2、制备母液时应注意哪些问题？为什么？3、根据所给母液浓度、蔗糖、琼脂用量、PH值，按MS配方计算各种母液吸取量，填入下表：4表1-5按MS配方需要量和母液浓度计算各种母液吸取量并填入下表药品名称MS配方需要量母液浓度配制培养基母液吸取量/ml1000ml 500 ml 300ml大量元素10倍液微量元素1000倍液铁盐5ml/LVB1(硫胺素) 0.4mg/L 1mg/LVB6（烟酸）0.5mg/L 1mg/LVB5（盐酸吡哆醇）0.5mg/L 1mg/L甘氨酸2mg/L 2mg/L肌醇100mg/L 20mg/L2，4-D 0.5mg/L 1mg/LKT 1mg/L 0.5mg/L蔗糖20g/L琼脂8g/LPH值 5.85实验三 MS固体培养基的配制及灭菌一、实验目的通过MS培养基的配制，学习培养基配制与灭菌的操作方法。
二、实验原理植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的组成成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基，因此，在进行大量工作之前，对不同培养基应进行分析、比较、试验，选择一个符合实验材料需要的适宜培养基。