土壤中芽孢杆菌的分离与筛选

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从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案实验方案：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验目的：分离产淀粉酶的芽孢杆菌，用于后续淀粉酶相关研究。

实验步骤：1.样品采集：选择含有潜在产淀粉酶的土壤样品，如农田土壤或果园土壤。

2.稀释培养：将采集的土壤样品用无菌PBS缓冲溶液稀释，并进行均匀悬浮。

3.接种装置：将土壤悬浮液均匀涂布在含有淀粉的固体培养基上，使用毛细管或平面接种棒操作，确保样品均匀地接种在培养基上。

4.培养条件：将接种好的培养基培养皿在适宜的培养条件下培养。

适宜的培养条件包括温度、湿度和氧气供应等。

一般来说，菌株生长的适宜温度为30-37摄氏度，湿度为60-70%。

5.纯化分离：通过制备出来的细菌菌落将产酶菌株分离出来。

可以使用毛细管、骨牌、环针等工具，分别挑取单个菌落并将其转移到含有淀粉的培养基上。

6.传代培养：将分离出来的产酶菌株进行传代培养，以确保其菌落的特性稳定。

7.筛选鉴定：通过淀粉酶活性分析等方法，对分离出来的菌株进行筛选鉴定。

一般来说，可采用滴定法或I2-KI法测定淀粉酶活性。

根据颜色变化或者酶活性指标的变化，筛选出淀粉酶产量较高的菌株。

8.鉴定菌株：对产淀粉酶的菌株进行鉴定，确定其属于芽孢杆菌的种属。

可以采用传统的形态学和生理生化特性鉴定方法，如菌落形态观察、革兰染色、氧需气性、形状和运动情况等。

9.鉴定纯化：最后，对鉴定出来的菌株进行纯化培养，以获得纯种淀粉酶产生菌。

实验注意事项：1.采集样品时要避免采集过于含油的土壤，以免对实验造成干扰。

2.在操作过程中要做好防护，戴手套，避免污染样品。

3.在培养过程中注意严格无菌操作，以避免外源菌的污染。

4.在菌株的鉴定过程中，要仔细观察菌株的形态特征，并结合多种鉴定方法综合分析。

5.实验过程中要注意做好记录，包括实验步骤、结果、观察和记录等。

总结：通过上述实验方案，我们可以从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。

这有助于开展后续淀粉酶相关的研究，包括酶的生物化学性质、作用机制等。

土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法

土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法一、实验目的1.学习掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征2.学习并掌握荚膜染色法并了解荚膜的形态特征3.学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征4.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理1.细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。

2.芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色又难以脱色这一特点而设计的。

3.所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。

4.染色方法：改良后的Schaeffer-Fulton氏染色法三、实验仪器及材料1.菌种：枯草芽孢杆菌2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器或其他用具：Eppendorf管架、载玻片、显微镜、电磁炉、搪瓷杯等。

四、实验步骤1.制备菌悬液：在EP管中滴两滴生理盐水，挑取2-3环菌苔加入到含生理盐水的EP管中，混合均匀。

2.染色：在EP管中滴加2-3滴孔雀绿染液，盖紧EP管，将EP管插入浮筏中，放进沸水中加热15-20分钟，加热过程需要有人看护，随时控温，防止沸水进入EP管。

3.涂片固定：取半滴经孔雀绿染色的菌悬液在载玻片的中央，用接种环将菌液涂抹均匀，将载玻片用法电风机冷风吹干，经过酒精灯火焰固定三次。

4.脱色：待玻片冷却后，水洗脱色。

5.复染：滴加数滴0.5%番红水溶液在菌膜上，染色2min，再水洗。

6.镜检：将晾干后放在显微镜下观察。

五、实验结果结果描述：大部分菌体被染成红色，少部分被染成绿色，说明有芽孢产生，但是芽孢的数量没有菌体多，芽孢被染成绿色，菌体被染成红色，由绿色芽孢的外面还包裹着一层淡红色带可知，该芽孢是内生芽孢，芽孢呈椭圆形，位于菌体的中央，是中央生的芽孢，同时可以观察到枯草芽孢杆菌的大小比平常的小得多。

第四组微生物大实验实验报告

微生物大实验——土壤中芽孢杆菌的分离及鉴定实验报告学院：生命科学学院专业：生物技术班级：组数:学号:姓名:前言芽孢杆菌是能形成芽孢(内生孢子)的杆菌。

芽孢是休眠体，不是繁殖体。

绝大多数是一个菌体仅形成一个芽孢芽孢位于菌体内,由核心、皮层、芽孢壳和外壁组成。

核心是芽孢的原生质体，内含DNA、RNA、可能与DNA相联系的特异芽孢蛋白质以及合成蛋白质和产生能量的系统。

芽孢杆菌属是大的(4–10um), 革兰氏阳性，严格需氧或兼性厌氧的有荚膜的杆菌。

该属细菌的重要特性是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽孢。

芽孢杆菌属可分为以下亚群：多粘芽孢杆菌、枯草杆菌（包括蜡样杆菌和地衣芽孢杆菌）、短芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌。

芽孢杆菌是一种耐高温、高压及低PH值的有益微生物，本实验从土壤中分离出15株芽孢杆菌，从中挑选出一株芽孢杆菌进行生理生化鉴定，以及分子鉴定。

通过进一步的实验，了解到其生理生化特点。

一、实验目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离、鉴定方法和技术。

将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。

二、实验原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。

，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。

三、实验仪器材料：1、仪器：显微镜、培养皿、试管、三角瓶、烧杯、移液管、涂布棒、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱、电泳仪、PCR仪、提取DNA 试剂盒2、材料：培养基：LB培养基、淀粉培养基、孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH 溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇、硝酸盐、葡萄糖、甘露醇、阿拉伯糖、木糖四、实验步骤：（一）、菌种的分离和纯化1、取样2、LB培养基的配制：1L水、10g蛋白胨、5g牛肉膏、10g Nacl、15g琼脂、120℃灭菌30分钟待用3、平板及斜面的制备4、制备土壤菌悬液：称取土样约1g土壤放入盛有9ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置于摇床上150r/min,振荡10min。

芽孢杆菌的分离鉴定2

芽孢杆菌的分离与鉴定实验器材：铲子（1）,盆（1）,电子天平（1），洗耳球(1)，接种勾和环（1）,1ml吸管（7）,玻璃涂棒（1）,平皿（12）,250ml带玻璃珠三角瓶（1）,双层纱布（1）,试管（7），标签纸（1）,恒温箱，显微镜（4）。

实验试剂：无菌水，1mol/L NaOH、1mol/L HCL、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、复红液、5%孔雀绿、沙黄、乙醚、吲哚试剂、40%NaOH、肌酸牛肉蛋白胨培养基：牛肉膏1g，蛋白胨2g，Nacl 1g，水200ml，ph7.2，琼脂3.0-4.0g；生孢培养基：0.1%蛋白胨，0.1%葡萄糖，0.07%酵母粉，0.02%硫酸镁晶体（七水），0.02%硫酸铵，0.1%磷酸氢二钾（3水），1.5%琼脂；一、土壤中芽孢杆菌的筛选A.培养基配置步骤：（1）称量：按比例称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，共置于烧杯中；（2）溶解：先加入适量无菌水，加热使其溶解，再补足水至总量；（3）调pH：用1mol/L NaOH或1mol/L HCL调PH至7.6；（4）过滤：用滤纸过滤；（5）融化琼脂：加入3.5克琼脂，继续加热至完全溶解，补足因加热蒸发失去的水分；（6）分装与包扎：摆斜面（7）灭菌：121℃，灭菌20minB.实验步骤：（一）采集土样: 每个采样点选取土壤较肥沃、有代表性的地块约0．2 cm2，五点法采集。

取5～10cm深土壤，每一个土样约500 g。

将土样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型，4℃保存备用。

（二）土壤悬液制备：称取10g土样，放入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的250ml三角瓶中，振荡摇晃20min，使土样与水充分混合，将细胞分散，两层纱布过滤，然后将锥形瓶置于90℃水浴锅，加热20min，制备成土壤悬液。

（三）土壤悬液稀释：用一支1ml的无菌吸管从锥形瓶吸取过滤的土壤悬液1ml加入盛有9ml 无菌水的大试管中，震荡均匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一只盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1 、 10-2 、 10-3、 10-4、10-5、 10-6 不同的稀释度。

土壤中芽孢杆菌的分离与筛选

实验十、土壤中芽孢杆菌的分离与筛选——培养基配制及样品采集一、实验目的学习和掌握菌种选育技术中从自然界中采样的技术，掌握芽孢杆菌筛选的特异性培养基配制方法。

二、实验原理自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数量十分可观。

但总体来讲土壤样品的含菌量最多，土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。

从土壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是首选的采集目标。

但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。

因此，在分离菌株前要根据分离筛选的目的，到相应的环境和地区去采集样品。

三实验材料1. 采样器具：灭菌的牛皮纸袋、小铲刀（或不锈钢勺）、温度计、pH试纸、记号笔等。

2. 筛选培养基：肉汤琼脂培养基四、操作步骤1. 采样：用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好，或事先灭菌处理的牛皮纸袋、玻璃器皿内。

北方的干燥土壤，可在10～30cm处取样。

给牛皮纸袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。

一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。

（注意：一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充足，且土壤成团粒结构，通气饱水性能好，因而，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合于细菌、放线菌生长。

山坡上的森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适合霉菌、酵母菌生长繁殖，微生物数量相应也比较少。

从土层的纵剖面看，1～5cm的表层土由于阳光照射，蒸发量大，水分少，且有紫外线的杀菌作用，因而微生物数量比5～25cm土层少；25cm以下土层则因土质紧密，空气量不足，养分与水分缺乏，含菌量也逐步减少。

因此，采土样最好的土层是5～25cm。

一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。

枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定

枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定一、目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。

将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。

二、原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。

，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。

三、材料和器皿：显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉汤琼脂培养基孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇四、操作步骤菌种的分离和纯化（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。

（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒入6个平板上。

（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后静止5分钟。

吸取上层液0.5ml加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后分别吸取10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养基平板上，每种稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1~2天。

（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是否是芽孢杆菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置37℃培养1~2天备用。

菌种的鉴定1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌种的形态（2）菌种形态的观察2.革兰氏染色3.芽孢染色4.菌体大小测验5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定一、淀粉水解一、原理许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案报告

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案报告实验方案报告：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌一、实验目的：本实验旨在从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌，为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供材料基础。

二、实验原理：产淀粉酶的芽孢杆菌主要存在于土壤中，它们具有高效分解淀粉的能力。

本实验通过稀释土壤样品，制备土壤悬浮液，然后采用平板和液体培养基法进行分离纯化。

三、实验步骤：1.土壤样品的采集2.土壤样品制备将土壤样品采样袋中的土壤倒入无菌的研钵中，使用无菌铁锹将土壤表面的杂质去除，然后将土壤样品与等量无菌蒸馏水混合浸泡2小时。

使用无菌玻璃棒搅拌1分钟，然后过滤土壤悬浮液，得到土壤样品的0.1倍稀释液。

3.平板培养基分离将制备好的土壤样品0.1倍稀释液分别取0.1mL均匀涂布在含有淀粉的固体培养基平板上，用无菌的铁锹均匀摊开。

将培养皿倒立放置在培养箱中，以30℃恒温培养。

4.鉴定单菌菌落在培养平板上观察菌落生长情况，挑选形态不同的菌落，并进行分离培养。

将单个菌落挑选到含有淀粉的液体培养基中，用无菌胶头移液管进行吸取和移植。

5.验证淀粉酶活性将挑选分离得到的菌株分别接种在含淀粉的液体培养基中，并进行培养。

通过观察培养基颜色的变化、液体浑浊度的变化以及淀粉浓度的定量检测，判断菌株产淀粉酶的能力。

四、实验结果：根据实验步骤所述，从土壤中成功分离得到了产淀粉酶的芽孢杆菌。

通过观察培养基的颜色变化和液体浑浊度的变化，可以初步判断杆菌产淀粉酶的能力。

五、实验讨论与结论：通过本实验的步骤操作，成功分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。

该实验为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供了材料基础。

此外，实验中还可以对分离得到的菌株进行基于16SrRNA基因的鉴定，对其进行淀粉酶的基本特性、产酶条件和产酶规律等方面的研究。

这对于我们深入了解淀粉酶功能机制，以及在饲料、食品、生物工程等领域的应用具有重要意义。

六、实验心得：通过本次从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌的实验，我学会了土壤样品的制备和分离培养的方法，掌握了菌株的挑选和鉴定技巧，对淀粉酶产生的条件和酶活性的检测有了初步了解。

一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定

一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定2董鹤娟1’2，丁轲蚍～，恒子钤2，彭春平2，罗伟光hf1．河南省动物疫病与公共安全院士工作站，河南，洛阳471003；2．河南科技大学宏翔发酵饲料实验室，河南，洛阳471003)摘要：为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌，从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份，利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌，采用3，5．二硝基水杨酸法测定纤维素酶活，结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16S rDNA序列进行鉴定。

结果表明：从分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B．LY02，纤维素酶活力可达0．5351 U／mL。

该菌株呈短杆状，革兰氏染色阳性，能形成芽孢。

基于16S rDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus lic henifo rmis s tr ain CICCl0095的亲缘关系最近，基因序列的同源性为96．5％，因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。

关键词：纤维素酶；芽孢杆菌；分离；鉴定我国是粮食大国，纤维素资源极为丰富，每年仅农作物秸秆产量就高达7．0亿吨，约占世界的20 ％[1—2】。

但是秸杆的成分主要是较难降解的纤维素，所以目前秸杆仅有极少部分用于反刍动物饲料，绝大多数都被燃烧，不仅造成了资源的浪费，而且还会带来环境污染[3—4】。

另一方面，由于我国大规模发展畜牧业，人畜争粮的现象已很严重。

所以研究将秸杆中的纤维素降解成畜禽可利用的多糖、蛋白质或其他营养成分已成为当务之急。

目前最可能利用的手段就是筛选高效纤维素酶分解菌，我们认为秸杆纤维素的降解不是单一菌种能够解决的，因为秸杆的降解需要p．葡聚糖酶、内切p一葡聚糖酶和 p一葡萄糖苷酶等多种纤维素酶共同参与才能完成【4]。

已有的研究主要集中在真菌方面，如里氏木霉、绿色木霉、白腐菌、米曲霉等is一71，对细菌方面研究的较少。

而且真菌存在活性不稳定和生物安全隐患等问题，但是芽孢杆菌具有产酶能力强，耐高温、强酸，环境适应能力强等特点，所以很适宜作为秸杆发酵用菌种。

从土壤,果实里筛选生防芽孢杆菌实验方案

从土壤,果实里筛选生防芽孢杆菌实验方案
从土壤和果实中筛选生防芽孢杆菌实验方案可以按照以下步骤进行：
1. 样本收集：从不同农田或果园收集土壤和果实样本。

确保样本来自不同地点和不同植物种类。

2. 样本处理：将土壤样本分为不同的小样本，将果实切块或切碎，以增加样本表面积。

3. 分离芽孢杆菌：使用适当的培养基，如蔗糖蛋白胨琼脂（PDA）、营养琼脂（NA）等，在室温下进行分离培养。

将土壤样本稀释后涂布在培养基上，并将果实样本直接放置于培养基表面。

4. 筛选生防菌株：观察培养皿上生长的菌落，筛选出具有抑制病原菌生长能力的菌株。

这可以通过观察形态特征、颜色、菌落大小等进行初步筛选。

5. 病原性测试：对初步筛选出的菌株进行病原性测试，验证其对目标病原菌的抑制效果。

可以采用小范围的接种试验或体外抑菌试验等方法进行。

6. 体外液态培养：对筛选出的生防菌株进行液态培养，以获得更多的培养物。

可以使用适当的培养基和培养条件。

7. 保存和鉴定：对有效的生防菌株进行保存和鉴定。

常见的保存方法包括低温冷冻保存和制备菌种备库。

以上是一般的筛选生防芽孢杆菌实验方案，具体的步骤和方法可以根据实验目的和条件进行调整。

在进行实验时，请遵守实验室的安全操作规范，并按照相关法律法规进行处理和处置实验废弃物。

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定一、引言芽孢杆菌（Bacillus）是一类广泛存在于土壤中的细菌，具有较高的耐受性和适应能力。

研究土壤中芽孢杆菌的分离和鉴定，对于了解土壤微生物群落的多样性和功能具有重要意义。

本文旨在介绍土壤中芽孢杆菌的分离方法及初步鉴定步骤，以供参考。

二、芽孢杆菌的分离方法2.1 采样1.选择适当的采样地点，如农田、林地或草地等。

2.使用无菌铁铲或无菌采样袋等工具采集土壤样品，避免污染。

3.采集多个不同位置的土壤样品，以增加样品的代表性。

2.2 分离培养基的选择1.常用的分离芽孢杆菌的培养基有营养琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基等。

2.培养基中可以添加适当的抑菌剂，如青霉素或链霉素，以抑制其他细菌的生长。

2.3 分离培养1.取适量土壤样品加入到分离培养基中，均匀涂布于琼脂平板上。

2.使用无菌鉴别环或无菌棉签，在培养基表面划线，以分离不同的菌落。

3.将琼脂平板倒置放入恒温培养箱中，培养温度一般为30°C。

4.观察培养基上的菌落形态，并进行初步鉴定。

三、芽孢杆菌的初步鉴定步骤3.1 形态特征观察1.观察菌落的形状、颜色和质地等特征。

2.观察菌落的边缘形态，如光滑、凹凸不平或褶皱等。

3.观察菌落的直径和高度等参数。

3.2 石蜡切片染色1.从培养基上挑取一颗纯培养的菌落，用无菌的刮片将其转移到玻璃片上。

2.在玻璃片上加入一滴碘酒，静置片刻。

3.用无菌的刮片将菌落与碘酒混合均匀。

4.加入一滴无菌水，冲洗碘酒。

5.加入一滴甲苯，使细胞透明化。

6.加入一滴碱性溴甲酮，染色。

7.加入一滴甲苯，清洗溴甲酮。

8.加入一滴封片剂，加盖封片。

3.3 微观形态观察1.使用光学显微镜观察石蜡切片。

2.观察细胞形态、大小、排列方式等特征。

3.观察细胞内部结构，如芽孢、胞内颗粒等。

3.4 生理生化特性测试1.进行革兰氏染色，观察细胞壁结构。

2.进行氧需求实验，观察芽孢杆菌的氧耐受性。

3.进行酸碱度测试，观察芽孢杆菌的酸碱耐受性。

广大-土壤中分离芽胞杆菌 - 副本

综合性实验方案土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定一、摘要本实验通过从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，试验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌手册鉴定其中的种属。

实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线对初筛选菌株进一步分离纯化；然后再用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉酶，以及产芽孢的杆菌，最后通过对产淀粉酶芽孢杆菌做相关的生理生化实验，将筛选出来的菌株进行鉴别，鉴别到了地衣芽孢杆菌和环状芽孢杆菌。

关键词：芽孢杆菌淀粉酶酶活测定二、实验目的要求1、了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用的方法和技术；2、掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3、掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4、培养学生自行设计实验方案流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5、对所学习过的微生物实验方法井陉综合技能训练；6、从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各种淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况；三、实验原理土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。

其基本原理是选择适合与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由有一个细胞繁殖而成的集合体。

因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线等技术完成。

土壤中苏云金芽孢杆菌的分离纯化与初步鉴定

采集自我国黑龙江省部分地区的土样，采集时
作者简介：王立（１９８１一），男，哈尔滨人，大学本科，助理工程师．
间为２００９年ｌＯ月２－２００９年ｌ０月４日。供试土样详细来源以及相应采集条件见表ｌ。
表１供试土样来源
土壤中苏云金芽孢杆菌的分离纯化与初步鉴定
王立刘利檬张思雅
（哈药集团生物工程有限公司１５００２０）
苏云金芽孢杆菌是于１９０１年从德国苏云金城面粉厂的某批染病地中海粉暝中分离出的杆菌。苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）是广泛分布的革兰氏阳性细菌，《伯杰氏细菌鉴定手册》中列为第２类第１８群芽孢杆菌属。
牡丹江铁岭河南山
Ｍｄｊ００１１０月４日１４：２０黄豆地，睛
绥化是北林区腰房村
ＳＨＯＯ１１０月４日９：Ｏ０马铃薯地，晴
佳木斯市常青乡五一村ＪｍｓＯ０１１０月４日１３：Ｏ０农田，多云
１．２试剂ＢＰ固体培养基配方为牛肉膏３克，蛋白胨ｌＯ
苏云金芽孢杆菌最初由自然死亡昆虫的虫尸中分离获得。１９８７年从土壤中找到新的苏云金芽孢杆菌，改变了只有从找到死虫体中才能找到这些细菌的历史。至今，已从世界各地采集的昆虫、土壤、蚕渣、仓库灰尘、植物体表面等基质上分离到数万株苏云金芽孢杆菌。

土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选

土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选2021023123刘倩倩一、实验目的1.掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。

2.了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。

根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。

二、实验原理枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。

菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。

需氧菌。

有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。

广泛分布在土壤及腐败的有机物中。

选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。

利用稀释涂布法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。

然后，进行初筛与纯化，利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。

再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。

三、实验材料（1）选择培养基本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。

配方：牛肉膏 5.0g蛋白胨 10.0g 氯化钠 5.0g 可溶性淀粉 10.0g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml调整pH至7.2 配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。

（2）溶液或试剂牛肉膏 1.25g 蛋白胨 2.5g 氯化钠 1.25g 可溶性淀粉 2.5g 琼脂 5g碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克， 100毫升0.01NHCL。

（3）仪器或其他用品平板培养皿 10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定(1)

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定标题：深入探索土壤中芽孢杆菌的分离与初步鉴定一、引言土壤是生物多样性的宝库，其中芽孢杆菌作为一种广泛存在的微生物，具有重要的生态和应用价值。

芽孢杆菌具有强大的生存能力，能够在恶劣环境中形成芽孢，从而实现种群的繁衍和传播。

对土壤中芽孢杆菌的分离和初步鉴定，有助于我们更好地了解土壤微生物群落的结构和功能，为农业、环保等领域提供科学依据。

二、芽孢杆菌的分离1.土壤样品的采集与处理：为了获取丰富的芽孢杆菌资源，我们需要对不同类型的土壤进行采样。

采样后，将土壤样品进行适当的处理，如研磨、悬浮等，以便后续的分离实验。

2.分离培养：将处理后的土壤样品涂布在富含营养物质的培养基上，如牛肉膏蛋白胨培养基。

通过筛选具有特定性状的菌落，如颜色、形状等，初步筛选出芽孢杆菌。

3.纯化菌落：对初步筛选出的菌落进行纯化，以获得单一的芽孢杆菌菌株。

纯化方法通常采用平板划线法或液体摇瓶法。

三、芽孢杆菌的初步鉴定1.形态观察：通过光学显微镜观察菌落的形态特征，如菌落大小、形状、颜色等，初步判断菌株的种类。

2.革兰氏染色：对菌株进行革兰氏染色，观察细菌的形态和结构，进一步确认菌株的分类地位。

3.生化实验：进行一系列生化实验，如氧化酶试验、硝酸还原试验等，根据实验结果判断菌株的生理特性。

4.分子生物学鉴定：采用分子生物学方法，如16S rRNA基因测序，对菌株进行分子鉴定，确立其在物种水平上的分类地位。

四、结论与展望通过对土壤中芽孢杆菌的分离和初步鉴定，我们可以了解土壤微生物资源的多样性，为农业、环保等领域提供有益的信息。

未来研究可以进一步探讨芽孢杆菌的生物学功能，如固氮、溶磷、产生抗生素等，以期为我国土壤微生物资源的研究和利用奠定基础。

综上所述，深入探索土壤中芽孢杆菌的分离与初步鉴定，有助于我们更好地认识土壤微生物群落的结构和功能，为多个领域提供重要的理论支撑。

枯草芽孢杆菌的分离及筛选

枯草芽孢杆菌的分离及筛选枯草芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，广泛存在于自然环境中，可发酵多种有机物，在生物降解、环境清洁等方面有广泛应用。

本文将介绍枯草芽孢杆菌的分离及筛选方法。

一、土样采集与处理选择土壤样品时应注意，最好是新鲜土壤，不含过多杂质和残留农药、化学物质等。

首先，将土壤样品放入干净无菌试管中，并加入生理盐水，与搅拌器进行搅拌，使土壤悬浮于生理盐水中。

然后将其过滤，再将过滤液离心，离心后上清液即处理好的样品。

取样品1ml加入小培养皿中，加入适量的20%固体土壤样品，混匀后将其平均涂布于营养琼脂平板上，再进行孵育。

通常，孵育温度为30-37℃，培养基的选择可根据实验需要进行不同的调配。

通过枯草芽孢杆菌的鉴定，可判断其种类和特性。

可采用革兰染色法、形态学观察法、生理生化测定法等多种方法进行鉴定。

1. 革兰染色法：将菌落划入微滴水中，然后将其固定，加入革兰染色液，约定时间后用水冲净，用镜片沥干，用显微镜观察。

2. 形态学观察法：通过对菌落的形态、色素、形状、运动方式等特征进行观察，再与已知菌株进行对照，确定其种类和特性。

3. 生理生化测定法：可通过测定该菌株的生理生化特性，如酸碱反应、氧需求等，进一步确定其种类和特性。

1. 抗生素筛选：将分离得到的枯草芽孢杆菌接种于含有不同抗生素的墨汁琼脂平板上进行筛选，观察不同菌落的生长情况并记录，最终确定其抗性水平。

2. 发酵产物筛选：通过枯草芽孢杆菌的发酵产物、酶活性等特性，进行筛选。

将菌株接种于适当的发酵培养基中，培养一定时间后采集发酵产物进行分析。

3. 生化代谢产物筛选：通过分离并鉴定菌株代谢产物，确定其产物种类和达到的水平，寻找有价值的代谢产物。

综上所述，枯草芽孢杆菌的分离和筛选具有重要的应用价值，为生物降解、环境治理等领域开拓了新的途径。

希望本文对有关人员能够提供一些参考和帮助。

芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程

芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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芽孢杆菌筛选实验报告

一、实验目的1. 了解芽孢杆菌的基本特性。

2. 掌握从土壤中筛选芽孢杆菌的方法。

3. 学习微生物的纯化与鉴定技术。

二、实验原理芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌，具有较强的抗逆性和生存能力。

在土壤中，芽孢杆菌广泛分布，具有丰富的种类。

本实验通过选择含有淀粉的培养基，利用芽孢杆菌产生淀粉酶的特性，从土壤中筛选出芽孢杆菌，并对筛选出的菌株进行纯化和鉴定。

三、实验材料1. 实验仪器：培养皿、移液枪、玻璃棒、天平、酒精灯、高压灭菌锅、恒温培养箱等。

2. 实验试剂：淀粉、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、葡萄糖、碘液等。

3. 实验土壤：采集于校园周边土壤。

四、实验步骤1. 土壤样品的处理：将采集的土壤样品进行充分混匀，称取1g土壤置于无菌烧杯中，加入10ml无菌水，用玻璃棒搅拌后静置30分钟，取上清液备用。

2. 稀释涂布：将土壤样品上清液进行10倍梯度稀释，取适量稀释液分别涂布于含淀粉的培养基平板上。

3. 培养与观察：将涂布好的平板倒置，置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。

4. 初步筛选：挑选生长良好的菌落进行纯化培养，采用平板划线法进行纯化。

5. 菌株鉴定：对纯化后的菌株进行形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定。

6. 淀粉酶活性测定：采用淀粉酶活力测定试剂盒对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定。

五、实验结果与分析1. 土壤样品处理：经过充分混匀和搅拌，土壤样品上清液呈现浑浊状态，表明土壤中存在大量微生物。

2. 稀释涂布：涂布后的平板在培养箱中培养24小时后，观察到菌落生长良好，表明土壤中存在大量芽孢杆菌。

3. 初步筛选：通过平板划线法，成功纯化出多个菌落。

4. 菌株鉴定：经过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。

5. 淀粉酶活性测定：对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定，结果显示其中一株菌株的淀粉酶活性较高。

六、实验结论1. 成功从土壤中筛选出芽孢杆菌。

2. 通过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定

３号菌＋／－
＋／－
－／－
－／－
－／－＋＋－
４号菌＋／－
－／－
－／－
－／－
－／－＋＋－
２．３抗药性试验培养１２ｈ后，可见明显的抑菌环出现。根据抑菌环直径大小可知，４种芽孢杆菌对所试７种抗生素均敏感。其中１号菌对氯霉素，卡那霉素，环丙沙星，链霉素，四环素为高度敏感（直径大于１．５ｃｍ）；对复方新诺明，氨苄青霉素为中度敏感（直径大于１ｃｍ，小于１．５ｃｍ）。３结论及讨论
纳氏石炭酸复红液，９５％乙醇，察细菌菌落的形态特征。用革兰脂平板中，于３７ ℃培养箱中培
碱性美蓝液；抗生素药敏片，购氏染色法及芽孢染色法在光学养４８ｈ，然后用碘溶液覆盖平
自杭州天和微生物试剂有限公显微镜下观察菌体形态及芽孢板，观察菌落周围是否有透明圈
胨，１％ＮａＣｌ；生孢培养基：０．１％种环分别于ＬＢ琼脂平板上划ＮａＯＨ溶液１０～２０滴，并用牙
蛋白胨，０．１％葡萄糖，０．０７％酵线接种，于３７ ℃培养箱中培养，签挑入约０．５～１ｍｇ微量肌酸，
母粉，０．０２％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，０．０２％（ＮＨ４）２ＳＯ４，０．１％Ｋ２ＨＰＯ４·３Ｈ２Ｏ，１．５％琼脂；Ｔ２培养基：１％蛋白
的土样中分离出了４种枯草芽
孢杆菌，但其具体属于哪个菌种
还有待进一步鉴定。通过生理生

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案【范本模板】

土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定设计性实验方案一、综述:淀粉酶是淀粉降解酶。

它们广泛存在于微生物、植物和动物体中.它们将淀粉及相关的聚合物分解为带有具体淀粉分解酶特征的产品。

淀粉酶广泛存在于动植物和微生物中,是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一.淀粉酶种类繁多，特点各异,可应用于造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂]等多种领域。

在酿造发酵工业如酒精生产、啤酒制造、发酵原料液化及糖化工艺过程中均有重要价值,如添加淀粉酶分布非常广泛,是人们经常研究的一种酶。

从纺织工业到废水处理,这些酶都有不同规模的应用【1】。

常见产淀粉酶的主要为芽孢杆菌属。

其中的常见产淀粉酶的芽孢杆菌菌种有：地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌【2】、凝结芽孢【3】。

由于芽孢杆菌属是一类好氧或兼性厌氧、产生抗逆性内生抱子的杆状细菌，许多为腐生菌，主要分布于土壤和植物体表面及水体中【4】。

所以此次实验从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌。

二、实验目的要求1．了解生物分离提纯的原理和方法技术2．掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理和方法3。

掌握微生物摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理和方法4。

培养学生的综合应用微生物实验方法的能力5.培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。

三、实验原理自然界中,土壤是微生物生活最适宜的环境。

土壤具有微生物进行生长繁殖和生命活动中所需的各种条件。

土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。

一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm~30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌的数量减少【5】。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。

其基本原理是选择适合与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物.值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养.因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到.芽孢杆菌属的共同特征是：革兰氏阳性；接触酶阳性；水解淀粉；VP试验阳性;不产生吲哚；苯甲氨酸不脱氨；分解酪素；不分解酪氨酸;不产生二羟丙酮；营养体的最高生长温度大约从25℃到75℃以上；最低生长温度大约5℃到45℃；生长最低pH值，从7.5—8到2左右;耐盐范围从低于2％的NaCl到25%NaCl；营养明胶（22℃)7天内液化1厘米或1厘米以上。