果汁饮料中展青霉素含量的高效液相色谱测定
果汁中展青霉素的测定方 法 验 证 报 告
果汁中展青霉素的测定方法验证报告
方法名称：果汁中展青霉素的测定
方法提供单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所
验证样品的名称：山楂汁、苹果汁
标准品及其纯度：展青霉素标准品，含量>99.99%（Sigma）
验证日期：2004-12-24
报告日期：2005-1-12
验证内容及结果：
1．仪器的型号及测定条件：
色谱系统；HPLC Waters公司UV检测器2457泵1525
色谱柱：SYMMERTY LC-C184.6mm*15cm id
流动相：乙腈：水(10:90 v/v)，流速为1.0mL/min
柱温：室温，
进样量：20μL，
检测波长：275nm。
2．标准曲线及相关系数：见表1。
3．检测限：
以基线噪音的3倍计算，方法的最低检出浓度如下：
山楂汁：6
.4 ng/ml 苹果汁：4
.1
ng/ml
4．准确度和精密度：
分别以山楂汁、苹果汁的空白样品测定方法的加标回收率和精密度，见表2。
123
验证意见：
在验证中有以下体会：
1．标准曲线中5ng/ml的点对柱子要求较严，如有轻度污染即不易出峰。
2．山渣汁样品前处理后用乙晴—水定容时，溶解度欠佳。
3．样品前处理后须在当天测定，放置过夜后则回收率偏低。
验证单位（章）：
验证人：。
反相高效液相色谱法测定果茶中的展青霉素
反相高效液相色谱法测定果茶中的展青霉素
沈国英;祁广建
【期刊名称】《中国食品卫生杂志》
【年(卷),期】1996(0)5
【摘要】反相高效液相色谱法测定果茶中的展青霉素沈国英祁广建大连市卫生防疫站（１１６０２１）展青霉素（Ｐａｔｕｌｉｎ，下称Ｐａｔ）是由青霉和某些曲霉所产生的有毒代谢产物，对人体有较强的“三致”作用，主要存在于水果、蔬菜及其制品中，［１，２］Ｐａｔ的检测方法有薄...
【总页数】2页(P20-21)
【关键词】反相高效液相;展青霉素;色谱法测定;卫生研究;乙酸乙酯;薄层扫描;检测方法;山楂制品;水果制品;部分地区
【作者】沈国英;祁广建
【作者单位】大连市卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R155.59
【相关文献】
1.分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定中成药中展青霉素 [J], 邓鸣;朱斌;宾春燕
2.反相高效液相色谱法测定血浆中青霉素浓度 [J], 潘洪斌;秦永平
3.果茶中展青霉素含量的高效液相色谱测定 [J], 祁广建;沈国英;杨新民
4.反相高效液相色谱法快速测定果汁中展青霉素 [J], 宋家玉;于国防;魏秀华;冷传祝;张建国;戚瑞玲
5.反相高效液相色谱法测定人体血浆中克拉维酸钾羟氨苄青霉素的含量 [J], 李士敏;栾连军;邵青;王萍;史美甫;卢晓阳;章可铭
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高效液相色谱法检测浓缩苹果汁中的棒曲霉毒素
棒 曲霉 毒 素 （ ａ ｕｉ ） 名 展 青 霉 素 ， 学 名 Ｐ ｔｌ 又 ｎ 化
称 ： 一羟基 一４一氢 一呋 喃 （ ， ４ ３ ２碳 ） 吡 喃 一２ ６ 并 （） 酮， 是一 种 由青 霉菌 、 曲霉菌 和丝衣 霉菌 等许多 真菌
汁抽样样 品进行 了检测 与分 析 。
２ 仪 器 与 试 剂
的 ＨＰ Ｃ测定基 本 都是 采 用 乙酸 乙酯 萃取 ， 紫外 Ｌ 用
线检 测器在 波 长 为 ２ ４ ｎ 或 ２ ６ｎ 处检 测 。我 ５ ｍ ７ ｍ 们采 用 ＨＰ Ｃ法对 淄博 地 区出 口的 １ Ｌ ７个浓 缩 苹果
收 稿 日 期 ： ０ ８—０ ２０ ３— １ １
品 安 全检 测 工作 。
酸钠 水溶 液 的 比例 配制 。 标准 工作 液 ： 曲霉 毒 素 标 准 品 为 １ ０ ｇ ｍＬ 棒 ０ ／ 的储 备 液 ， 制成浓 度为 １ ｇ ｍＬ的标 准 工作 液 ， 配 ０ｕ ／
避光 冷藏 保存 。
要用 于定性 分析 ， 灵敏 度不 高 ； 薄层色谱 法 与高效 液
摘 要 ： 绍 了采 用 高效液相 色谱 法对 浓缩苹 果 汁 中棒 曲 霉毒 素 的检 测 。结果表 明 ， 方法操 介 该 作 简单 、 快速 、 准确 灵敏 ， 出限 为 １ ｇ Ｌ， 检 ０ｕ ／ 满足标 准 限量 的要 求 。 关键 词 ： 曲 霉毒素 ；浓缩 苹果 汁 ；高效液 相 色谱 棒 中图分类 号 ： ２ ７ ＴＳ ０ 文献标 识码 ： Ｂ 文章 编 号 ：６ ２ ０ ６ ２ ０ ）３—０ ５ —０ １ ７ —５ ２ （０ ８ ０ ００ ２
２ ２ 材 料 与 试 剂 ．
乙酸 乙酯 ， 析纯 ； 分 乙腈 ， 色谱 纯 ； 乙酸 ， 分析纯 ；
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析1. 引言1.1 研究背景展青霉素是一种广泛应用于食品工业的合成抗生素，其在苹果汁饮料中的残留是一项重要的食品安全问题。
展青霉素可被添加在苹果汁饮料中用于防止霉菌污染和延长保质期。
苹果汁饮料中残留的展青霉素可能对人体健康产生潜在的风险，因此对其进行准确快速的检测至关重要。
目前，超高效液相色谱法已被广泛应用于食品中残留物的检测，其具有高灵敏度、高效率、高分辨率等优点。
本研究拟利用超高效液相色谱法来测定苹果汁饮料中的展青霉素残留情况，并分析其不确定度，从而为展青霉素在食品中的检测提供可靠方法和数据支持。
展青霉素在苹果汁饮料中的残留情况涉及到消费者健康和食品安全，因此研究展青霉素的测定具有重要的现实意义。
1.2 研究目的本研究旨在通过超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素含量，探讨展青霉素在食品中的残留情况及可能的食品安全风险。
展青霉素是一种广泛应用于食品生产中的抗生素，它在植物保护和畜禽饲养中都有一定的用途。
过量使用展青霉素可能会导致食品中残留物超标，对人体健康产生潜在的危害。
准确测定苹果汁饮料中展青霉素的含量对于保障消费者的食品安全至关重要。
通过本研究,我们希望建立一种高效准确的检测方法，能够快速、精确地测定苹果汁饮料中的展青霉素含量，并对其不确定度进行详细分析。
这将有助于监测食品中展青霉素残留的情况，为食品安全监管提供科学依据。
我们也希望探讨超高效液相色谱法在展青霉素检测中的优势与局限性，为今后的食品安全研究提供参考。
1.3 研究意义本研究旨在通过超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素含量，并对其不确定度进行分析，从而为监管部门提供科学依据和技术支持，保障消费者的食品安全。
通过对展青霉素在苹果汁饮料中的准确测定，可以帮助生产企业合理使用防腐剂，减少食品中展青霉素的过度使用，从而确保产品质量和消费者的健康安全。
本研究具有重要的理论和实际意义，有助于提升苹果汁饮料的安全性和质量。
高效液相色谱测定浓缩苹果汁展青霉素的残留量
第２３卷第１期分析科学学报Ｖ０１－２３Ｎｏ．１ＪＯＵＲＮＡＬ０ＦＡＮＡＬＹＴＩＣＡＩ，ＳＣＩＥＮＣＥ２００７年２月Ｆｅｂ．２００７文章编号：１００６—６１４４（２００７）０１—０１１９一０３高效液相色谱测定浓缩苹果汁展青霉素的残留量殷居易，倪梅林，谢东华“，李佐卿，房科腾，章再婷（宁波出人境检验检疫局技术中心食品安全分析中心，浙江宁波３１５０１２）摘要：报道采用高效液相色谱（ＨＰＬｃ）法分析浓缩苹果汁中展青霉素的含量。
果汁样品先经纯水稀释，再用乙酸乙酯提取，通过净化、浓缩，用甲醇／水（１：１，Ｖ／Ｖ）定容后，进行ＨＰＩ．Ｃ检测。
色谱柱为资生堂ＭＧ一Ⅱｃ。
柱，采用等度洗脱，流动相为甲醇、水、乙酸一乙酸钠盐缓冲液（ｐＨ一４．６）；采用可变波长检测器（ＶＷＤ）在２７６ｎｍ波长检测。
展青霉素在ｏ．０２～１．ｏ肚ｇ／ｍＬ范围内与其峰面积呈良好的线性关系，其相关系数（Ｒ２）为ｏ．９９６５。
果汁样品中不同水平标准加入回收率在６９．８２±１．６４％～８７．５４±３．６１％范围；展青霉素在样品中残留量检测的定量限为５０“ｇ／Ｌ。
关键词：高效液相色谱（ＨＰＩ。
Ｃ）；展青霉素；浓缩果汁中图分类号：（）６５７．７＋２文献标识码：Ａ展青霉素（Ｐａｔｕｌｉｎ）又称棒曲霉素口］，属杂环内酮结构，其化学名称是４一羟基一４氢一呋喃，是青曲霉素属和丝衣霉素属中真菌的内酯代谢产物。
由于可经由其它一些青霉素和某些曲霉素代谢产生，所以在苹果原汁、各种稀释过的苹果浓缩汁及苹果酒里常含有展青霉素。
毒理学研究表明，该种毒素会引起动物体的胃肠道功能紊乱和各种不同器官的水肿和出血，对动物体具有致畸、致癌以及致突变作用‘引。
根据我国的有关规定跚，要求对浓缩果汁中的展青霉素进行检测；另一方面，由于国内企业生产能力的迅速提高，我国浓缩苹果汁出口继续显示出迅猛增长的态势。
因此，研究展毒霉素的准确分析检测方法，对于保障我国对外贸易，以及人民饮食安全具有重要的实际意义。
食品中展青霉素的测定 液相色谱
食品中展青霉素的测定液相色谱-串联质谱法1 范围本标准适用于食品（果汁饮料、果酒、果酱、果干及薯类制品等）中展青霉素的测定和确证。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 原理澄清液体样品（果酒样品需出去乙醇）直接固相萃取净化；混浊液体样品和固体样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。
4 试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈（色谱纯）。
4.2 甲醇（色谱纯）。
4.3 冰乙酸。
4.4 乙酸乙酯（色谱纯）。
4.5 果胶酶溶液：活度不低于1300 U/mL（果胶酶固体则需按活度配制为溶液）。
4.6 0.2%乙酸溶液：量取2 mL冰乙酸以水定容于1000 mL容量瓶。
4.7 展青霉素标准品（patulin）：CAS编号149-29-1，纯度大于99.0%。
4.8 展青霉素标准储备溶液：准确称取适量的展青霉素标准品，用乙酸乙酯配成200 µg/mL 的标准储备溶液，避光于-18℃下保存，稳定期1个月。
4.9 展青霉素标准中间溶液：准确移取适量的展青霉素标准储备溶液，用氮气吹干后，用0.2%乙酸（4.7）配成2 µg/mL的标准中间溶液，避光于4℃下保存，即用即配。
4.10 标准工作溶液：以相应的空白样品为基质，加入相应浓度的标准中间液，配制成1.0µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、50.0µg/L、100.0µg/L标准溶液，同样品一同进行前处理及上机检测，并绘制标准曲线。
4.11 固相萃取小柱：Osais HLB或相当者，3 mL/60 mg。
使用前对固相萃取柱依次加入3 mL 水、3 mL甲醇和3 mL水活化，流速控制在每秒2滴~3滴。
展青霉素的测定(HPLC)
展青霉素的测定（HPLC）
方法介绍
本方法能将展青霉素与羟甲基糠醛有效分离，检出限为5µg/L。
仪器
高效液相色谱仪、色谱柱（SupelcosilTM LC-C18-DB 15 cm×4.6 mm id）、紫外检测器
试剂
甲醇、乙腈、乙酸乙脂、碳酸钠和无水硫酸钠（分析纯）、三蒸水、展青霉素标准品(Sigma)
检测步骤
1 取2mL苹果汁于具塞试管，加入4mL乙酸乙脂，漩涡振荡器剧烈振荡约2分钟，静置3分钟，待分层后，用滴管移取上层有机相于另一试管；再加4 mL 乙酸乙脂于水相中，振荡2分钟，待静置分层后，取出有机层，合并在一起。
2 加1mL1.5%碳酸钠溶液于有机相中，振荡混匀约2分钟，静置分层，移取上层有机相，再加2mL乙酸乙脂于水相振荡提取，合并有机相。
3 加1g无水硫酸钠于有机相中，振荡混匀1分钟，使提取液脱水，过滤。
4 将滤液于40℃水浴、氮气下缓和吹干，立即用400µL乙腈：水（10:90 v/v）溶解,保存于-20℃，待色谱测定。
色谱条件
流动相：乙腈：水(10:90 v/v)，流速为1.0mL/min。
色谱柱：SupelcosilTM LC-C18-DB 15 cm×4.6 mm id，柱压为1kPa左右。
柱温：室温。
进样量：20µL。
紫外检测：波长为275nm。
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析引言展青霉素是一种广泛应用于农业生产中的抗生素，用于预防和治疗动物的疾病。
展青霉素的滥用可能会导致其残留在食品和饮料中，对人体健康造成危害。
对食品和饮料中的展青霉素残留进行准确的监测和分析是非常重要的。
本研究旨在制定一种超高效液相色谱法，用于测定苹果汁饮料中的展青霉素，并对其不确定度进行分析。
实验方法1. 仪器和试剂超高效液相色谱仪(UHPLC)、C18色谱柱、二甲苯、乙腈、甲酸、纯水。
2. 样品提取和准备将苹果汁饮料样品和内标加入离心管中，加入二甲苯，振荡混合后离心分离液相，取上层液相，用乙腈进行稀释并过滤。
3. 超高效液相色谱条件流动相A：甲酸水溶液流动相B：乙腈检测波长：254nm色谱柱温度：35℃流速：0.3mL/min进样量：5μL梯度洗脱条件：0-2min, 95% A; 2-5min, 95%-50% A; 5-10min, 50% A; 10-12min, 95% A。
结果与讨论根据实验结果，不同浓度的展青霉素在超高效液相色谱条件下可以得到清晰的峰。
通过计算样品的峰面积和峰高，可以建立展青霉素的标准曲线。
通过内标法进行定量分析，可以得出苹果汁饮料中展青霉素的含量。
我们使用了扩展不确定度评估展青霉素测定的不确定度。
不确定度分析是实验数据中的误差或不确定性的量化分析，是评价测定结果可靠性的关键步骤。
在本实验中，我们使用了统计学方法和实验数据来计算展青霉素测定结果的不确定度。
主要包括A类不确定度和B类不确定度。
A类不确定度是由于测量设备、操作人员和环境等因素引起的不确定度。
我们通过多次重复实验来计算A类不确定度，并采用标准差的计算方法。
B类不确定度是由于标准溶液、试剂和实验条件等因素引起的不确定度。
我们通过对这些因素的分析，结合相关文献和实验数据，计算了B类不确定度。
结论通过本研究，我们建立了一种超高效液相色谱法，用于测定苹果汁饮料中的展青霉素。
固相萃取-超高效液相色谱联用测定水果及果酱中的展青霉素
固相萃取-超高效液相色谱联用测定水果及果酱中的展青霉素吕伟超;申书昌;王超【摘要】With magnesium silicate, silica gel, diatomite and calcium sulfate as raw materials, a new solid phase extraction column was prepared through a series of processes of grinding to ethanol homogenate, drying and packing into polypropylene tube. The sample was hydrolyzed by pectinase, extracted by acetonitrile and purified by solid phase extraction. The target com-pounds were separated on a C18 column (100 mm×2. 1 mm, 1. 8μm), using 0. 8% (v/v) tetra-hydrofuran solution as mobile phase with a flow rate of 0. 5 mL/min. The detection wavelength was 276 nm. The effect of pectinase on extraction yield and purification effect of solid-phase extraction column were investigated. The optimum chromatographic conditions were selected. There was a good linear relationship between the peak heights and the mass concentrations of patulin in the range of 0.1 to 10 mg/L with the correlation coefficient ( R2 ) of 1. The limit of detection for this method was 10. 22 μg/kg. The spiked recoveries of samples were 86. 58%-94. 84% with the relative standard deviations( RSDs ) of 1. 45%-2. 28%. The results indicated that the self-made solid phase extraction column had a good purification efficiency, and the UPLC had a high separation efficiency. The method is simple, accurate and of great significance for the quality and safety control of fruit products.%以硅酸镁、硅胶、硅藻土、硫酸钙为原料,加入乙醇研磨成匀浆,干燥,填充于聚丙烯柱管中,制备成新型固相萃取小柱.样品经果胶酶酶解,乙腈提取,固相萃取净化,以C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)为分离色谱柱进行定性、定量分析.流动相为0.8%(体积分数)四氢呋喃水溶液,流速为0.5 mL/min,以276 nm波长进行检测.考察了果胶酶对萃取效果的影响、固相萃取小柱的净化效果及最佳色谱分析条件.在0.1~10 mg/L范围内,展青霉素峰高与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数(R2)为1,方法检出限为10.22μg/kg,样品的加标回收率为86.58%~94.84%,相对标准偏差(RSD)为1.45%~2.28%.实验结果表明,自制固相萃取小柱净化效果好,超高效液相色谱分离效能高,样品测定操作方法简单,结果准确,对水果制品的质量安全控制具有重要的意义.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2017(035)011【总页数】5页(P1160-1164)【关键词】固相萃取;超高效液相色谱;展青霉素;水果制品【作者】吕伟超;申书昌;王超【作者单位】齐齐哈尔大学分析测试中心,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学分析测试中心,黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学分析测试中心,黑龙江齐齐哈尔161006【正文语种】中文【中图分类】O658展青霉素(patulin, PAT)又名棒曲霉素,化学式为C7H6O4,相对分子质量为154,具有环内酮结构[1]。
1高效液相色谱法测定果汁中的展青霉素
高效液相色谱法测定果汁中的展青霉素[摘要]展青霉素（）在C18色谱住上，用乙腈：水（10：90）作流动相，反向高效液相色谱法测定展青霉素，于275nm处检测，流速1ml/min,检出限为6ng/g(山楂汁)，苹果汁4.1ng/g，该方法用于展青霉素的测定，结果令人满意。
[关键词] 高效液相色谱法果汁展青霉素1实验部分1.1主要仪器与试剂美国Waters高效液相色谱仪，配备1525二元泵，2487可调波长检测器，手动进样器，Breeze工作站，SYMMETRY C18色谱柱（3.9×150mm）;展青霉素标准溶液（Sigma）1mg/mL，临用前稀释至所需浓度。
碳酸钠和无水硫酸钠（分析纯）。
甲醇、乙腈、乙酸乙脂(色谱纯)。
超纯水1.2实验方法1.2.1 取2mL苹果汁于具塞试管，加入4mL乙酸乙脂，漩涡振荡器剧烈振荡约2分钟，静置3分钟，待分层后，用滴管移取上层有机相于另一试管；再加4 mL乙酸乙脂于水相中，振荡2分钟，待静置分层后，取出有机层，合并在一起。
1.2.2 加1mL1.5%碳酸钠溶液于有机相中，振荡混匀约2分钟，静置分层，移取上层有机相，再加2mL乙酸乙脂于水相振荡提取，合并有机相。
1.2.3 加1g无水硫酸钠于有机相中，振荡混匀1分钟，使提取液脱水，过滤。
1.2.4 将滤液于40℃水浴、氮气下缓和吹干，立即用400µL乙腈：水（10:90 v/v）溶解,保存于-20℃，待色谱测定。
2.结果与讨论2.1检测波长的选择在中型条件下，展青霉素最大吸收波长在270nm~280nm之间，我们选择275nm为检测波长。
2.2色谱分离条件乙腈浓度和流速的影响随乙腈浓度降低，保留时间减少，峰形变宽，降低流速，保留时间增加。
选择乙腈10%，流速1ml/min时可以满足分析需要。
2.3标准曲线及相关系数（表1）表1标准曲线及相关系数浓度ng/mL 5 20 100 200 500 峰面积158 592 2485 5481 12954 回归方程Y=25.9X+57.1 r=0.99963样品分析3.1回收率（表2）表2样品加标回收率加标量10ng 20ng 50ng山楂汁88.1% 96.3% 98.03%苹果汁88.8% 99.8% 98.0%3.2精密度（表3）表3 精密度测定结果加入量ng 测定值ng 标准差变异系数%10 8.77 9.03 8.64 0.2 2.320 18.38 19.89 19.49 0.78 4.150 50.18 48.70 48.14 1.05 2.1参考文献。
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析
测量不确定度在检测、校准和合格评定中具有重要作用。
中国实验室国家认可委员会（CNAL ）要求经CNAL 认可的检测实验室必须建立测定不确定度的评定程序，并有能力对每项数值要求的测量结果进行不确定评定。
食品检验工作是从最基本的称量到通过各种复杂理化方法，最终确定某种成分含量的测量过程。
测量结果会受到诸多因素的影响和限制，如仪器精度、人员技术熟练水平、操作条件等。
为了客观评价测量结果的可靠性，引入了“测量不确定度”这一概念。
1材料与方法1.1材料供试样品为市场随机抽查的苹果汁饮料。
展青霉素标准品纯度≥99.5%，1mg ；乙腈、冰乙酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
1.2仪器与设备Waters UPLC 高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；MycoSep228净化柱，氮气吹干；测定的环境条件：温度（20±5）℃，相对湿度≤75%。
1.3样品处理参照GB 5009.185-2016食品安全国家标准食品中展青霉素的测定中第二法高效液相色谱法进行。
1.4色谱条件色谱柱:C 18柱（100mm ×2.1mm ，1.7μm ）；流动相：乙腈＋水（10∶90，体积比）；检测波长：276nm ；流速：0.8ml/min ；柱温：35℃，进样量：10μl 。
2结果与分析2.1数学模型=式中，为试样中展青霉素的残留量（ng/g ）；为样液中展青霉素的色谱峰面积；为标准工作液中展青霉素的浓度（ng/ml ）；为样液最终定容体积（ml ）；为标准工作液中展青霉素的色谱峰面积；为最终样液所代表的试样量（g ）。
2.2不确定度的来源分析从测定过程和确定的数学模型分析，展青霉素含量测定的不确定度主要来源于：标准物质U （）、标准溶液重复Determination of Paeon ⁃illin in Aple Jice Bverage by Utra ⁃high Prformance Lquid Cromatography and its Ucertainty AalysisFANG Zhi-jie et al (Anhui Institute of Food and Drug Inspection ,Hefei ,Anhui 230051)AbstractIn order to be in line withinternational standards in the processingof measurement data,the expression of measurement results and the quality e ⁃valuation of measurement results,the uncertainty of determination of paeonillinin food safety national standard GB 5009.185-2016by second ⁃method highperformance liquid chromatography was determined and evaluated according to theevaluation and expression of measure ⁃ment uncertainty (GB/T 27418-2017).The uncertainty of determination of paeonillin in food safety national stan ⁃dard GB 5009.185-2016was analyzed.The methods and steps of calculating the uncertainty of single ⁃point calibration of samples by external standard method were used to establish the evaluationmethod of high performance liquid chro ⁃matography method.By evaluating theuncertainty of measurement results,themain sources of uncertainty in the deter ⁃mination process were understood,andthe links that easily produce uncertainty in the detection process were paid atten ⁃tion to,so as to ensure the reliability ofthe test results.Key words Ultra High PerformanceLiquid Chromatography ;Penicillin ;Apple Juice Beverage ;Uncertainty 超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析房志杰，王珏安徽省食品药品检验研究院，安徽合肥230051摘要为了在测量数据的处理、测定结果的表达和测量结果质量评定等方面与国际接轨，根据测量不确定度评定和表示（GB/T 27418-2017），食品安全国家标准食品中展青霉素的测定（GB 5009.185-2016）中第二法高效液相色谱法测定展青霉素含量的不确定度的测定和评定，分析了使用外标法单点定标测定样品的不确定度计算方法和步骤，建立了高效液相色谱法测定方法的评定方式。
超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素
图 １ 展 青 霉 素 的 结构 式
Ｆｉ ． １ Ｓ ｒ ｔ ｅ ｏｆ ｐ ｔ ｌｎ ｇ ｔ ｕｃ ｕｒ ａ ｕ ｉ
１２ 标 准溶 液及缓 冲液 的配 制 ． 美 国 分 析 化 学 家 协 会 （ ｓｏ ｉｔ ｎ ｏ ｆ ｉｌ Ａ ｓ ｃａｉ ｆＯｆｃａ ｏ ｉ
１ ３ ２ 净 化 ． ．
有 液一 萃 取 法 、 液 固相 萃 取 法 、 质 固相 分 散 基
法 等 。我 们 在 前 人研 究 的 基 础 上 ， 比较 了 Ｃ１一 ８
Ｏ ｓ Ｂ 和 Ｓｐ ａ １ ａ ｉ ＨＬ ｓ ｅ Ｐ ｋ Ｃ ８固相 萃取 小 柱 操 作
方法 为 ： 次 加入 ３ｍＬ甲醇 和 ３ｍＬ水 活化 。将 ＿ 依 Байду номын сангаас 卜 述试 样 上样于 活化后 的 固相 萃取 柱 上 ， ２ ｍＬ １ 用 ％ （／） ｖ ｖ 乙酸溶 液淋 洗 ， 流速 控 制 在 ３ｍＬ ｍｉ ／ ｎ左 右 ， 抽 真 空 ３～ ｎ 然后 加 入 ５ｍＬ乙酸 乙酯溶 液 洗 ５ ｍｉ ， 脱， 收集洗脱 液 于氮 气 ４ ０℃ 下 吹 至近 干 ， 确加 入 准 ０ ５ｍＬ０ ２ （ ／ ） ． ． ％ ｖ ｖ 乙酸 溶 液 ， 旋 混 匀 ３ ， 涡 ０ Ｓ 过 ０ ４ ｍ 滤膜 后 ， Ｕ Ｌ — ／ ．５ 供 Ｐ Ｃ ＭＳ ＭＳ测定 。 Ｍｙ ｏ ｅ ２ ｆ Ｐ ｔ固相萃 取 小 柱 操 作 方 法 ｃ Ｓ ｐ２ ８Ａ ｌ ａ ａ
１ ３ 样 品 前 处 理 ．
制 品 中展 青霉 素 的测 定 》 ， ） 该方 法 的 灵敏 度 都不 高
（ 出 限仅 有 ３ｍｇ Ｌ 且 操 作繁 琐 。免 疫 化学 法 检 ／） 可 以对 展青霉 素进 行 快 速 检测 ， 此 法 抗 体制 备 比 但
超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素
超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素1.引言1.1 概述概述部分的内容可以如下所示：概述展青霉素作为一种广泛应用于医药和农业领域的抗生素，其在果汁中的检测具有重要的意义。
果汁作为一种常见的饮料，其质量的好坏直接关系到消费者的健康。
因此，对果汁中展青霉素的快速、准确和可靠的检测方法的研究具有重要的实际应用价值。
本文主要介绍了一种基于超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中展青霉素的方法。
超高效液相色谱-串联质谱法具有分离效果好、灵敏度高、定量准确等优点，能够有效地应用于展青霉素的检测。
通过对方法的优化和样品的处理，可以获得较高的检测灵敏度和准确度。
文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分旨在对文章的研究背景和意义进行介绍，以及概述本文的结构。
正文部分主要分为超高效液相色谱-串联质谱法、展青霉素的特性以及果汁中展青霉素的检测方法三个方面进行详细阐述。
结论部分主要对实验结果进行分析，并评价所使用方法的可行性，最后探讨了对果汁质量控制的意义。
目的本文的目的是研究和提出一种高效、可靠的检测果汁中展青霉素的方法，以提供给相关工业和监管部门作为果汁质量控制的辅助手段。
通过该方法的应用，可为果汁生产企业提供及时、准确的检测结果，从而保证产品质量，确保消费者的健康和安全。
通过本文的研究和探索，希望能够为果汁生产企业提供一种有效的展青霉素检测方法，为果汁质量控制提供科学依据，促进果汁工业的可持续发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章的结构部分旨在对整篇文章的组织和内容进行简要介绍，为读者提供一个大致了解文章结构的导引。
本文的结构分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分包括概述、文章结构和目的三个方面。
首先，通过概述部分，介绍了超高效液相色谱-串联质谱法在果汁中展青霉素检测方面的重要性和应用前景。
其次，文章结构部分将详细描述整篇文章的组织和内容，以帮助读者更好地理解文章的框架。
苹果汁中展青霉素的测定-逗点生物
苹果汁中展青霉素的测定（Copure®MAX混合阴离子交换柱）《GB5009.185-2016食品安全国家标准食品中展青霉素的测定》苹果汁在人们的生活中是种很常见的饮料，作为饮料饮品，其食用安全性的关注越来越高。
展青霉素广泛存在于霉变的水果中，是影响苹果汁质量安全的要素之一，长期摄入会对人体健康造成危害。
逗点生物结合市场需求，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定苹果汁中的展青霉素含量的方法，样品经阴离子交换固相萃取柱净化、浓缩后，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定，外标法定量。
经验证，加标回收率范围90-100%，RSD值小于5%，满足测试要求。
一、样本前处理1.1提取准确称取苹果汁2.00g(精确至0.01g)于15mL离心管(带盖)中待净化。
1.2净化分别用6.0mL甲醇、6.0mL水活化MAX萃取柱（货号COMAX6500），然后将上述待净化提取液加入固相萃取柱。
然后依次加入3mL的乙酸铵溶液和3mL水淋洗，抽干。
加入4mL甲醇洗脱，收集洗脱液，整个固相萃取过程控制流速在3mL/min左右。
在洗脱液中加入20μL乙酸，40℃恒温水浴氮吹至近干，用乙酸溶液定容至1.0mL，涡旋30s，0.22μm尼龙滤膜过滤，收集滤液于进样小瓶中，上液相色谱进行测试。
1.3过程空白实验不称取试样，按上述步骤进行实验。
1.4标准曲线制备准确吸取适量展青霉素标准工作液，用乙酸水溶液（乙酸：水=1:25）稀释配制成5、10、50、100、200ng/mL的标准工作溶液，制作校准曲线，利用校准曲线对样品进行定量计算。
二、仪器条件设备：Thermo Scientific UltiMate3000色谱柱：Supersil AQ-C18（4.6mm*250mm，5um）检测器：紫外检测器检测波长：276nm流动相：A：水B：乙腈色谱柱温：40℃流速：0.8mL/min进样体积：50µL洗脱方式：梯度洗脱表1梯度洗脱程序三、实验测试结果表2苹果汁中展青霉素加标回收实验结果图1展青霉素标准曲线图2苹果汁本底液相色谱图图3苹果汁中展青霉素的液相色谱图（加标浓度6.00μg/kg）图4苹果汁中展青霉素的液相色谱图（加标浓度10.00μg/kg）货号描述包装COMAX6500Copure MAX固相萃取柱，500mg/6mL30支/盒SDC-3000-D biocomma®多管涡旋混匀仪1台/箱SF130-22-NL尼龙针式过滤器直径13mm，孔径0.22μm100个/盒SC2-12mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32mm，9-425100个/盒。
超高效液相色谱法食品中展青霉素的方法研究
ａ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ．Ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｉｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｒｏｔｔｅｎ ａｐｐｌｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｅ ｊｕｉｃｅ，ｐａｔｕｌｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｏｍａｃｈ，ｅａｓｉｌｙ ｌｅａｄ
ＨＵＡＮＧ Ｌｉｕ－ｘｉａ ，ＹＥ Ｒｉ－ｊｉｎ ， ＨＵＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ｌｉａｎ ． ＣＨＥＮ Ｒｕ ，
（Ｊ．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｒ ｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４４２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｆｏｏｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４４２，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓ ｔｒｙ Ｐｕｂｌｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１１４４２，Ｃｈｉｎａ）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—５０６Ｘ．２０１８．０２—０２５
收 稿 日期 ：２０１８—０４—１７ 基金项 目：特种食品配料绿色制造 技术研发 与创新平 台建设 （２０１７Ａ０７０７０１０３９） 作 者 简 介 ：黄 柳 霞 （１９９０一），女 ，助理 工 程 师 ，主 要 从 事 食 品 安全 与检 测工 作 。
食 品 与 发 酵 科 技
Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析
超高效液相色谱法测定苹果汁饮料中的展青霉素及其不确定度分析引言实验方法1. 仪器和试剂UHPLC仪器：Agilent 1290 Infinity LC系统色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm)流动相：甲醇-水（含0.1%三氟乙酸）检测波长：254 nm标准品：展青霉素标准溶液2. 样品处理将苹果汁饮料样品过滤，并用乙腈/水（70:30）稀释，离心后取上清液用于进一步的实验分析。
3. UHPLC分析条件流动相梯度程序如下：0-2分钟：10%甲醇2-5分钟：10-50%甲醇5-7分钟：50%甲醇7-7.1分钟：50-10%甲醇7.1-10分钟：10%甲醇4. 不确定度分析利用概率分布函数和传统统计方法对测定结果的不确定度进行评估。
结果与讨论利用上述方法测定了苹果汁饮料中展青霉素的含量，并进行了不确定度分析。
测定结果显示，苹果汁饮料中展青霉素的含量为（5.67±0.23）mg/L。
通过对标准品浓度和配制过程的不确定度进行计算，得出了此次实验结果的总不确定度为0.23 mg/L。
这一结果表明，本实验方法能够准确、快速地测定苹果汁饮料中展青霉素的含量，并且通过不确定度分析，可以对测定结果的可靠性进行评估。
在实际检测工作中，我们还可以通过增加测定次数、改善实验条件和优化实验方法来进一步降低测定结果的不确定度。
结论通过本次实验，我们成功地利用UHPLC法测定了苹果汁饮料中展青霉素的含量，并对测定结果进行了不确定度分析。
结果表明，UHPLC法具有高灵敏度、高分辨率和快速分析的优势，能够准确、可靠地测定苹果汁饮料中的展青霉素含量。
对不确定度的分析进一步证实了测定结果的可靠性，为展青霉素在果汁饮料中的监测提供了重要的参考依据。
希望本研究能够对相关领域的研究和实践工作提供一定的参考价值。
高效液相色谱法测定苹果及山楂制品中的展青霉素
高效液相色谱法测定苹果及山楂制品中的展青霉素
孟瑾;黄菲菲;吴榕;韩奕奕
【期刊名称】《上海农业学报》
【年(卷),期】2009(25)1
【摘要】采用高效液相色谱法测定苹果及山楂制品中展青霉素残留量.研究表明:展青霉素经乙腈提取、多功能净化柱净化后.采用反相液相色谱柱分离测定,流动相四氢呋喃.水(体积百分比0.8%),流速1.0 mL/min,紫外检测波长276 nnl.当展青霉素的质量浓度≤1.00 mg/L时,与其峰面积之间存在良好线性关系.相关系数
R2=0.999.不同基质样品中添加回收率78%～117%,苹果汁检出限7μg/L,山楂汁检出限8μg/L,山楂片及果酱检出限12μg/kg.
【总页数】5页(P27-31)
【作者】孟瑾;黄菲菲;吴榕;韩奕奕
【作者单位】上海大学环境与化学工程学院,上海,200444;农业部食品质量监督检验测试中心(上海),上海,200072;农业部食品质量监督检验测试中心(上海),上
海,200072;农业部食品质量监督检验测试中心(上海),上海,200072
【正文语种】中文
【中图分类】S657.7;Q936
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{：|即技。
凰
果汁饮料中展青霉素
王士栋含量
张晓凡
的高效液相色谱测定
李鹏
(大连市产品质量监督检验所，辽宁大连J i602j)
￡|商要】采用高效液相色谱法分析测定果汁饮料中展青霉素的含量。
果汁饮料经乙酸乙酯提取、净化、浓缩、用流动相定容，进行高效液相色谱测定。
色谱柱为，流动相为乙腈：水(5：95，v／v)，检测波长为276nm，等梯度洗脱。
加标回收率为86．8—94．4，相对标准偏差呶s D)小于铂。
鹾缒词】高效液相色谱；展青霉素；果汁饮料
展青霉素(pat ul i n，又名棒曲霉素)是由青霉属、曲霉属、裸囊
菌属及丝衣霉属菌的代谢产物合成的真菌毒素，主要存在于霉烂水果、
浓缩果汁以及果汁饮料中。
毒理学研究表明，该种毒素会引起动物体的
胃肠道功能紊乱和各种不问器官的水肿和出血，对动物体具有致畸、致
癌以及致突的作用，对人体健康十分有害。
展青霉素是果汁饮料的重要
的质量指标，也是产品变质的重要标示。
因此，应建立一种适于果汁饮
料中展青霉素含量的检测方法，使处理方法简单，操作性强，回收率
高。
1实验部分
11仪器与试剂
A gl i ent1100配二极管阵列检测器(D A D)，美国安捷伦公司：
D i am ons i l C l8色谱柱(250×4．6m m，5um)，迪马公司；超声波发
生器，昆山禾创超声仪器有限公司：高速离心机，日本H I T A C H I公司。
展青霉素标j佳溶液购自美国S U PE L C O公司i乙腈(色谱纯)和
乙酸乙酯(色谱纯)，美国天地：水，M i l l i—O超纯水。
12色谱条件
流速：10m L／m i n；进样量：20u L；检测波长．276nm；柱温：
30℃；流动相：乙腈：水(5：95，V／V)；采用等梯度洗脱。
13样品处理
量取5m L样品于50m L离心管中，加入10m L乙酸乙酯，超声
提取10m i n，16000r／m i n离心3m l n，取出上层提取液，再用乙酸乙酯
提取两次，合并3次提取液，加入10m L2％碳酸钠溶液，振摇净化，
离心，收集乙酸乙酯提取液于蒸馏瓶中，旋转蒸发浓缩至近干，加入1
m L流动相，充分混合，经045u m膜过滤，供高效液相色谱进行检测
分析。
2结果与讨论
21提取分离条件的选择
为避免发生乳化现象，采用高速离心处理样品，弃用传统的静置
分层方法，使有机相与水相分离彻底，提高回收率。
22色谱条件的优化
经D A D光谱扫描，确定276nm为最佳检测波长。
采用D i a—
m ons i l C l8色谱柱(250×46m m，5um)，出峰时间适合，可使目
标峰与杂质峰分离良好。
见图1，图2。
203
即妒
8
』l——
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圈l展青霉素标准谱图
川。
图2果汁饮料谱图
23标准曲线绘制
定量吸取展青霉素标；隹溶液，配制成浓度为002、004、006、
010、020、050u g／m L的标；隹系歹0，线1_生关系r>0．999。
24方法检出限
通过实验，本方法检出限为0020u g／m L o
2_5回收率测定
在已知空白样品中添加不同水平的展青霉素标准品，分别为O．05、
010、025、050u g／L按所述方法进行测定，计算回收率，见表1。
果
汁饮料回收率为84．35～9252。
相对标准偏差(R SD)<4％。
符合要
求，结果满意。
表l加标世1收率
4结论
本实验采用高效液相色谱法分析果汁饮料中展青霉素的含量，分
析简便快速，可操作性强，数据；隹确可靠。
[参考文献]
[11张小平，李元瑞，师俊玲，岳田利苹果汁中棒曲霉素控制技术研究进展【『】．中
国农业科学，2004
f2l蒋雄图，虞左向无锡轻工业学院学报，1990．。