化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是一种基于化学发光原理的免疫分析技术，它结合了免疫学和化学发光技术的优势，具有高灵敏度、高特异性和广泛的应用前景。
本文将从化学发光原理、免疫分析方法和应用领域等方面对化学发光免疫分析原理进行介绍。
化学发光原理。
化学发光是指在化学反应中产生的光。
化学发光反应的基本原理是两种或两种以上的物质在一定条件下发生反应，通过激发态的分子或离子产生的能量转移到基态的分子或离子上，从而产生光。
化学发光反应是一种放热反应，通常需要一种催化剂来促进反应的进行。
在化学发光免疫分析中，化学发光物质通常被标记在抗体或抗原上，当靶分子与标记的抗体或抗原结合时，激发化学发光反应，产生光信号。
免疫分析方法。
化学发光免疫分析是一种基于免疫学原理的分析方法，它利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过检测免疫复合物的形成来定量或半定量地测定样品中的靶分子。
在化学发光免疫分析中，通常使用化学发光仪器来检测化学发光信号的强度，进而确定样品中靶分子的浓度。
与传统的免疫分析方法相比，化学发光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、操作简便、快速等优点，因此在临床诊断、药物检测、环境监测等领域得到了广泛的应用。
应用领域。
化学发光免疫分析技术在临床诊断、药物检测、环境监测等领域有着广泛的应用。
在临床诊断中，化学发光免疫分析可以用于检测肿瘤标志物、感染性疾病标志物、内分泌激素等，具有高灵敏度和高特异性，可以帮助医生进行早期诊断和疾病监测。
在药物检测中，化学发光免疫分析可以用于药物代谢产物的检测和药物浓度的监测，有助于指导临床用药。
在环境监测中，化学发光免疫分析可以用于检测水质、空气质量、土壤污染等，具有快速、准确的优势。
总结。
化学发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强的免疫分析技术，具有广泛的应用前景。
通过对化学发光原理、免疫分析方法和应用领域的介绍，我们可以更好地理解化学发光免疫分析的原理和特点，为其在临床诊断、药物检测、环境监测等领域的应用提供理论基础和技术支持。
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
coip实验原理 igg
coip实验原理 igg
COIP（化学发光免疫分析）实验是一种常用的免疫分析技术，用于检测体液中的特定抗体或抗原。
在COIP实验中，常用的检测物是IgG（免疫球蛋白G），它是一种重要的抗体，参与机体的免疫应答。
COIP实验的原理是基于化学发光技术和免疫学原理。
首先，样品中的IgG被特定的抗体捕获在固相载体上，然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗（常为抗人IgG的抗体），与被捕获的IgG结合形成复合物。
接着，加入化学发光底物，辣根过氧化物酶催化底物发生化学发光反应，产生光信号。
光信号的强度与样品中的IgG浓度成正比，通过光信号的检测和分析，可以确定样品中IgG的含量。
COIP实验具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，因此在临床诊断和科研领域得到广泛应用。
通过COIP实验可以快速、准确地检测体液中的IgG水平，有助于诊断和监测某些疾病，如自身免疫性疾病、感染性疾病等。
同时，COIP实验也被用于药物研发、生物学研究等领域。
总的来说，COIP实验是一种基于化学发光技术和免疫学原理的
免疫分析方法，可用于检测体液中的特定抗体或抗原，其中IgG的检测在临床诊断和科研中具有重要意义。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第十章化学发光免疫分析技术
第十章化学发光免疫分析技术第一节概述发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。
根据形成激发态分子的能量来源不同可分为光照发光、生物发光、化学发光等。
光照发光是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。
生物发光是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素。
实际上，生物发光就是发生在生物体内的一种化学发光。
一、化学发光化学发光是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。
某些物质（发光剂）在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
化学发光与荧光的区别是形成激发态分子的激发能不同。
荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光；而化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光。
通常只有那些反应速度相当快的放能反应，才能在可见光范围内观察到化学发光现象，如氧化-还原反应。
二是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子，必须能释放出光子。
二、化学发光效率又称化学发光反应量子产率。
化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率和激发态分子的发射效率。
化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定。
第二节化学发光剂和标记技术一、化学发光剂化学发光剂必须具备下列条件：①发光的量子产率高；②它的物理、化学特性要与被标记或测定的物质相匹配；③能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物；④其化学发光常是氧化反应的结果；⑤在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。
（一）直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，可直接标记抗原或抗体。
吖啶酯是目前常用的直接标记发光剂。
1.吖啶酯：在碱性条件下被H2O2氧化时，发出波长为470nm的光，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
化学发光免疫标记分析技术(基本原理)
优化技术操作流程，降低对专业人员的依赖，提高检测的便捷性和 普及性。
开发新型标记物
研究开发更多种类的化学发光标记物，拓展该技术的应用范围，满足 更多不同检测需求。
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THANKS
放射免疫标记技术
利用放射性核素标记抗体或抗原，通 过放射性信号检测，常用的有放射免 疫分析法。
化学发光免疫标记技术
利用化学发光物质标记抗体或抗原， 通过化学发光信号检测，常用的有化 学发光免疫分析法。
免疫标记技术的原理
抗原-抗体反应
信号放大
免疫标记技术的基本原理是抗原 和抗体之间的特异性结合反应。 标记物（抗体或抗原）与待测样 本中的目标抗原或抗体结合，形 成标记的抗原-抗体复合物。
02
化学发光反应原理
化学发光反应的分类
偶合反应
01
通过两个化学反应的偶合，将化学能转变为光能。
氧化还原反应
02
通过电子的得失，将化学能转变为光能。
化学发光复合反应
03
通过化学反应将能量传递给另一物质，使其激发并发出光子。
化学发光反应的机制
激发态的形成
反应物吸收能量后跃迁至激发态。
能量传递与光子的发射
抗体标记
抗体选择
选择与目标抗原特异性结合的抗体，确保抗 体的纯度和特异性。
抗体标记技术
采用荧光染料、酶、同位素等标记抗体，以 便后续检测和信号放大。
标记效率与质量控制
对标记后的抗体进行质量评估和控制，确保 标记效率和稳定性。
免疫反应
1 2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ加样
将待测样本、标记抗体和抗原加入反应体系中， 进行免疫反应。
激发态的反应物将能量传递给另一物质，使其跃迁至激发态并释放 光子。
化学发光免疫分析技术
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多 以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英 钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
• T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。
化学发光免疫分析
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
化学发光免疫标记分析技术(基本原理 )
化学发光的检测方式
化学发光按检测方式分为： 随机处理模式：管式化学发光（磁微粒分离） 批处理模式： 板式化学发光（物理吸附）
板式化学发光
适合流行病调查、疾病预防与控制、体检中心，以及 医院血站等大样本检测项目的使用（比如HIV、TP、 HCV和乙肝两对半等）。
通常采用96孔白色不透明微孔板进行包被，不方便随到 随测和医院急诊；
发光底物（或发 光剂）
仪器检测
反应0-5分钟
鲁米诺化学发光系统
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统 O
H2O2+
NH
HRP
NH OH-
N2
NH2
O
增强剂（Enhancer）
CO2+Photon (425nm)
CO2NH2
OH
N
R
B
R
OH
OH
OH
R
S
鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物
以碱性磷酸酶系统为例
间接化学发光
间接化学发光：用参与发光反应的 酶来标记抗原或抗体，免疫反应后 ，加入发光底物，测定发光体系的 发光强度来进行抗原或抗体的检测 。
两大反应体系：
辣根过氧化物酶（HRP）系统：氧化还原反应，稳定性差
源德、科美、安图
碱性磷酸酶（AP）系统：水解反应，灵敏度较高
其它
电化学发光
直接化学发光
直接化学发光：以化学物质,如异鲁 米诺、吖啶酯等直接标记抗原或抗体 ，免疫反应后，直接引发化学发光反 应进行检测。
产品：
吖啶酯标记 : 西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000
化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析是一种常用的生物分析技术，其原理是利用化学发光反应检测目标分析物。
该技术主要应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。
化学发光免疫分析的步骤如下：
1. 样品处理：将待测样品进行处理，通常包括样品的稀释、蛋白质提取、核酸提取等步骤，以满足后续分析的要求。
2. 特异性结合：将待测样品与特异性抗体结合，这是化学发光免疫分析的关键步骤。
特异性抗体能够与目标分析物结合，形成抗原-抗体复合物。
3. 化学发光：在抗原-抗体复合物形成后，加入一种化学发光底物，底物与复合物发生化学反应，生成激发态分子或产生紫外、可见光等发光物质。
4. 光学检测：利用光学检测系统，测量发光信号的强度或荧光信号的荧光强度。
一般情况下，强度与待测样品中目标分析物的含量成正比。
化学发光免疫分析的优点是灵敏度高、特异性强，且能够同时分析多个目标分析物。
它在临床诊断中广泛应用，例如检测某些疾病标志物、药物浓度和病原微生物等。
此外，化学发光免疫分析还可用于药物研发中的蛋白质相互作用研究、基因表达分析等。
总之，化学发光免疫分析是一种重要的生物分析技术，通过特异性抗体与荧光底物的配对应用，实现对目标分析物的定量检测，具有灵敏度高、特异性强和多重分析的优势。
化学发光免疫分析法-自己整理
化学发光免疫分析法（CLIA）A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法：（竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比）一、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗值越小。
例：A为一原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B种抗原小分子，有免疫反应性。
实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU），测定尿液中A的含量。
二、仪器：1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司);2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯)4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂)6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司)三、试剂1、A标准品2、A单克隆抗体3、A-BSA结合物4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL）5、FITC标记的A单克隆抗体6、HRP标记的A7、PBST 洗涤液L PBS, 含% Tween-20)8、分析缓冲液 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH , 含%BSA、 %的水解明胶、%的Proclin-300)9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液)实验用水为二次蒸馏水四、试剂处理1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品；2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存. FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。
化学发光免疫分析技术
• 以双抗体夹心法测抗原为例： • 检测分析的磁微粒（包被抗体）与 样品在反应杯中混合，样品中待测 抗原与磁微粒上包被的抗体发生特 异性结合，反应15分钟后，磁铁将 磁微粒抗体-抗原复合物吸附在反 应杯的管壁上，未结合的物质被洗 去，加入吖啶酯标记的抗体，此时 会在磁微粒上形成抗体-抗原-吖啶 酯抗体复合物，温育10分钟，
• 1、直接参与发光反应的标记物(发 光物标记 万泰) • 这类标记物在化学结构上有产生发 光的特殊基团，在发光免疫分析中 直接参与发光反应。通常这类物质 没有本底发光，可检测微量浓度样 品。常用的标记物主要有吖啶酯类。
• 2、以催化反应或能量传递参与的 发光酶标记物（酶标记 科美） • 辣根过氧化物酶（HRP）在碱性 环境时，HRP对鲁米诺和过氧化氢 的反应起催化作用。在HRP和过氧 化氢的作用下，鲁米诺发光其强度 取决于酶标记抗原-抗体复合物量 的多少。 • 碱性磷酸酶（ALP）
化学发光免疫分析技术
检验科 于辉
• 一、定义 • 化学发光是指伴随化学反应过程中 产生光的发射现象。化学发光免疫 分析根据其所采用的标记物不同可 分为发光物标记、酶标记、元素标 记化学发光免疫分析三大类。
• 二、化学发光免疫分析中的标记物 质及类型 • 化学发光免疫分析所使用的标记物 可分为三类：直接参与发光反应的 标记物、以催化反应或能量传递参 与的发光酶标记物、以能量传递参 与氧化反应的非酶标记物。
• 3、以能量传递参与氧化反应的非 酶标记物（元素标记 罗氏） • 这类反应物作为化学发光反应的催 化剂或能量传递过程中的中间体， 不直接参与化学发光反应。这类反 应中，标记物含量与免疫反应中的 抗原-抗体复合物形成的量呈正相 关。 • 三联吡啶钌标记抗体，三丙胺参与 氧化还原反应，常用双抗体夹心法,
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析化学发光免疫分析，也称为化学发光法或发光免疫测定法，是一种高灵敏度和高特异性的生物分析技术。
它结合了免疫学、生物学和化学的原理，利用特异性抗体与其抗原（或其他生物分子）相互作用，通过化学反应使其辐射出光信号，从而定量地检测目标物质的存在和含量。
一、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析原理基于化学发光原理和免疫学原理。
化学发光原理就是将化学反应的能量通过光子的辐射转换为光的能量。
免疫学原理是利用特异性免疫反应来识别和区分不同的抗原或抗体。
化学发光免疫分析技术的基本步骤如下：1.选择特异性的抗体与目标物质的结合；2.引入辐射源激活化学发光前体（例如，过氧化物或二氧化硫酞）；3.目标物质与抗体发生结合后，释放了辐射源激活前体，使其进一步分解并产生化学发光；4.测定样品中的荧光强度，用于定量分析目标物质的存在和含量。
化学发光免疫分析发出的荧光信号对于抗原-抗体的结合非常敏感和特异。
比较常见的荧光标记物包括酶（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、荧光染料（如荧光素和荧光素衍生物）、金纳米粒子等。
二、化学发光免疫分析的应用化学发光免疫分析的应用涉及生物分子、环境污染、中药等领域。
下面将从这些不同应用领域来介绍化学发光免疫分析技术的具体应用。
1.生物分子分析生物分子分析是化学发光免疫分析技术的主要应用领域之一。
常见的生物分子包括蛋白质、核酸、糖等。
如免疫荧光分析技术可以快速、准确地分析细胞表面分子、内部生物分子和变态反应特异性IgE。
同时，化学发光免疫分析技术可以用于患者体液中的特定免疫球蛋白或蛋白质的定量检测。
2.环境污染分析环境污染分析是化学发光免疫分析技术的另一个主要应用领域。
通过测量土壤、水、空气等样品中的污染物含量，可以快速精准地确定其存在和含量。
化学发光免疫分析技术可用于检测重金属、有机污染物、致癌物等。
该技术不仅检测灵敏，而且简便易行。
3.中药分析中药分析中常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、电化学法等。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术（Chemiluminescence Immunoassay，简称CLIA）是一种用于检测物质浓度的生化分析技术。
该技术利用免疫反应，在荧光底物的作用下产生可见光发射，从而实现对物质的检测和定量分析。
化学发光免疫分析技术的基本原理是将待测物与对应的抗原或抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将荧光标记的抗体或抗原加入到体系中，与免疫复合物结合。
接下来，加入荧光底物，在适当的条件下，底物被激活，产生化学反应，释放出能量，从而形成荧光。
荧光信号可以通过荧光仪进行检测和定量分析。
荧光仪通过光电倍增管等装置将荧光信号转化为电信号，经过控制和处理，最终得到物质的浓度。
化学发光免疫分析技术的优势在于其灵敏度高。
由于发光底物的特殊性质，即使在低浓度下，也能产生明显的发光信号。
此外，化学发光免疫分析技术的特异性强，能够准确识别目标物质，避免误判。
另外，与其他传统的免疫分析方法相比，化学发光免疫分析技术反应速度快，可以在较短的时间内得到结果。
此外，操作简单，无需复杂的设备和技术，具有很高的实用性。
化学发光免疫分析技术在医学诊断中有着广泛的应用。
比如，可以用于检测血清中肿瘤标志物的浓度，从而实现早期诊断和预测疾病进展的风险。
此外，化学发光免疫分析技术还可以应用于感染性疾病的快速诊断，如艾滋病、结核病等。
此外，化学发光免疫分析技术还被广泛应用于生物制药工业中的药物分析。
在食品安全领域，也可以利用化学发光免疫分析技术检测食品中的有害物质，从而保障食品的质量安全。
总之，化学发光免疫分析技术是一种灵敏、特异、操作简单的生化分析技术。
在医学诊断、药物检测、食品安全检测等领域有着广泛的应用前景。
随着技术的不断发展和创新，化学发光免疫分析技术将进一步完善，并在更多的领域发挥重要的作用。
化学发光免疫标记分析技术
化学发光免疫标记分析技术化学发光免疫标记分析技术（Chemiluminescent immunoassay，CLA）是一种利用免疫标记物的化学发光进行生物分析的技术。
它结合了免疫学和化学发光技术的优势，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
化学发光免疫标记分析技术的原理是通过特异性抗体与待检测物（抗原、抗体等）结合，形成免疫复合物。
免疫复合物经过一系列处理步骤后，与化学发光底物反应产生化学发光信号。
这种化学发光信号可以被光学仪器检测到，并与待测物的浓度呈正相关。
1.高灵敏度：化学发光信号的强度与待测物的浓度呈正相关，灵敏度高于传统免疫学方法，可检测到非常低浓度的目标物。
2.宽线性范围：化学发光信号的强度与浓度之间具有良好的线性关系，可以在较宽的浓度范围内准确测量物质的浓度。
3.专属性强：化学发光免疫标记分析技术基于特异性抗体-抗原反应，对目标物具有高度的特异性和选择性，可以准确识别和测定目标物。
4.快速便捷：化学发光免疫标记分析技术操作简单，试验时间短，不需要复杂的操作步骤，适用于高通量分析。
5.高复现性：化学发光免疫标记分析技术具有较好的重复性和稳定性，结果可靠且一致。
1.基质干扰：复杂样品基质的存在可能影响化学发光信号的产生和检测，导致假阳性或假阴性结果。
2.试剂成本高：化学发光免疫标记分析技术中使用的免疫标记物和化学发光底物成本较高，对于大规模应用有一定的限制。
3.数据分析复杂：光学仪器读取的化学发光信号需要经过复杂的数据分析和处理，需要专业知识和经验。
总结起来，化学发光免疫标记分析技术是一种高灵敏度、高特异性的生物分析技术，具有许多优点，并且在临床诊断和药物研发等领域有广泛应用。
随着技术的进一步发展和改进，相信化学发光免疫标记分析技术将会在更多领域展现出更大的潜力。
化学发光免疫分析法-自己整理
化学发光免疫分析法（CLIA）A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法：（竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比）一、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗值越小。
例：A为一原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B种抗原小分子，有免疫反应性。
实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU），测定尿液中A的含量。
二、仪器：1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司);2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯)4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂)6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis公司)三、试剂1、A标准品2、A单克隆抗体3、A-BSA结合物4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL）5、FITC标记的A单克隆抗体6、HRP标记的A7、PBST 洗涤液(0.05mol/L PBS, 含0.05% Tween-20)8、分析缓冲液(0.05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7.4, 含2.0%BSA、0.5 %的水解明胶、0.1%的Proclin-300)9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液)实验用水为二次蒸馏水四、试剂处理1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品；2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存. FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。
化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）介绍化学发光免疫分析（CLIA）是一种测定抗原和抗体的实验方法，它是一种特殊的免疫分析，可以用来测定血清中的抗原和抗体的含量。
CLIA的原理是利用抗原和抗体之间的特异性结合，将抗原和抗体结合在一起，然后将特异性结合物添加到一种特殊的化学发光物质中，当发生反应时，特异性结合物会产生发光，并且发光的强度与抗原和抗体的含量成正比。
因此，可以根据发光的强度来测定血清中的抗原和抗体的含量。
优势CLIA的优势在于它有很高的灵敏度和特异性，可以测定血清中抗原和抗体的含量，而且结果准确可靠，可以用于诊断疾病，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。
此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，而且它还可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。
应用CLIA可以用于多种疾病的诊断，比如甲状腺机能减退症（Hypothyroidism）、甲状腺功能亢进症（Hyperthyroidism）、慢性肝病（Chronic Liver Disease）、肝炎病毒感染（Hepatitis Virus Infection）、癌症（Cancer）、HIV感染（HIV Infection）等。
此外，CLIA还可以用于检测抗生素，如青霉素、氨苄西林、头孢菌素等，以及肝素、血清素等药物的含量。
结论CLIA是一种灵敏度和特异性很高的免疫分析方法，可以用来测定血清中抗原和抗体的含量，而且可以用于多种疾病的诊断，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。
此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。
因此，CLIA可以作为一种有效的免疫分析方法，为疾病的诊断提供重要的帮助。
最新化学发光免疫分析技术
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
一、化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反 应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂) 在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能， 使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃 迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发 射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
㈠直接化学发光剂
直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的
发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶
酮是该发光反应体系的发光体。
D分子从激发态回到基态时发光，这种过
程叫间接化学发光。反应过程可表示如下：
A十B
C*
C*十D
C十D*
D*
D十h·γ
二、化学发光效率
化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学 激发效率（φCE）和激发态分子的发射效率 （φEM）。化学发光反应的发光效率、光辐射的 能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所 决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学发光 光谱和不同的化学发光效率。
1．鲁米诺及其衍生物 2．AMPPD
1．鲁米诺 鲁米诺发光原理
鲁米诺增强发光反应原理
2．AMPPD
〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕
二、发光剂的标记技术
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2．三联吡啶钌 三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+是 电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA） 在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化 反应。
三联吡啶钌
化学发光免疫分析技术
电化学发光剂反应原理
化学发光免疫分析技术
㈡ 酶促反应发光剂： 是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底 物）发光，这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂。
化学发光免疫分析技术
光照发光（photoluminescence）是指发光 剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子 吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时， 发射出较长波长的可见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物 体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为 萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP 能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时 多余的能量以光子的形式释放出来。
化学发光免疫分析技术
2. 过碘酸钠氧化法
化学发光免疫分析技术
3．重氮盐偶联法
化学发光免疫分析技术
4. N-羟基琥珀酰亚胺活化法
化学发光免疫分析技术
影响标记的因素
1．发光剂的选择 2．被标记蛋白质的性质 3．标记方法的选择 4．原料比 5．标记率 6．温度 7．纯化与保存
化学发光免疫分析技术
第三节 化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析技术
一、化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反 应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂) 在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能， 使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃 迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发 射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
1．鲁米诺及其衍生物 2．AMPPD
化学发光免疫分析技术
1．鲁米诺 鲁米诺化发学发光光免疫原分析理技术
鲁米诺增强发光反应原理
化学发光免疫分析技术
2．AMPPD
〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕
化学发光免疫分析技术
二、发光剂的标记技术
1. 碳二亚胺（EDC）缩合法
化学发光免疫分析技术
一、直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶 酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和 NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分 解、发光 。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的 光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准 曲线上计算出待测抗原的含量。
化学发光免疫分析技术
第二节 化学发光剂和标记技术
化学发光免疫分析技术
一、化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以 发射光子的形式释放能量的化合物，称为化 学发光剂或发光底物。
化学发光免疫分析技术
能作为化学发光剂的条件： ①发光的量子产率高； ②它的物理-化学特性要与被标记或测定的
物质相匹配； ③能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物； ④其化学发光常是氧化反应的结果； ⑤在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。
的分子D上，使D分子激发到电子激发态，
D分子从激发态回到基态时发光，这种过
程叫间接化学发光。反应过程可表示如下：
A十B
C*
C*十D
C十D*
D*
D十h·γ
化学发光免疫分析技术
二、化学发光效率
化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学 激发效率（φCE）和激发态分子的发射效率 （φEM）。化学发光反应的发光效率、光辐射的 能量大小以及光谱范围，完全由发光物质的性质所 决定，每一个发光反应都具有其特征性的化学发光 光谱和不同的化学发光效率。
化学发光免疫分析技术
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
化学发光免疫分析技术
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
化学发光免疫分析技术
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用
化学发光免疫分析技术
一些化学反应能释放足够
的能量把参加反应的物质激
发到能发射光的电子激发态，
若被激发的是一个反应产物
分子，则这种反应过程叫直
接化学发光。反应过程可简单地描述如下：
A十B
C*
C*
C＋ h·γ
其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。
化学发光免疫分析技术
若激发能传递到另一个未参加化学反应
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
化学发光免疫分析技术
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带丫啶酯 标记物抗
体
（1）
加入H2O2 （pH<10）
（2） 加入碱 （pH>10）
冲洗后
化学发光免疫分析技术
发光
磁微粒技术
磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结 合部分的易分离
化学发光免疫分析技术
Y
二、化学发光酶免疫分析
思考题 小结
化学发光免疫分析技术
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反 应相结合而建立起来的一种新的检测 微量抗原或抗体的新型标记免疫分析 技术。
化学发光免疫分析技术
第一节 概 述
化学发光免疫分析技术
三大经典标记技术
放
酶
发
射
免
光
免
疫
免
疫
技
疫
技
术
技
术
术
化学发光免疫分析技术
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态 （较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回 到基态，并释放光子的过程。 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为: 光照发光、生物发光、化学发光等。